CN113262081A - 三维打印的MXene复合支架及制备方法和应用 - Google Patents

三维打印的MXene复合支架及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了三维打印的MXene复合支架及制备方法和应用,属于生物材料技术领域。本发明的三维打印的MXene复合支架由包括以下重量份的原料制成:MXene1~10份,海藻酸钠15~60份,羟基磷灰石30~120份。本发明的制备方法包括以下步骤:按比例准备各原料;将各原料加水混合均匀后备用;将混合物的物料采用三维打印机打印,而后交联成型,冻干,即得所述MXene复合支架。本发明还提供了复合支架在制备骨修复材料中的应用。本发明设计科学,构思巧妙,本发明创造性地采用MXene、羟基磷灰石和海藻酸钠作为原材料,使复合支架不仅具有可观的机械强度、生物相容性,以及成骨活性,同时具有适宜的降解速度。

Description

三维打印的MXene复合支架及制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物材料技术领域,涉及口腔颌面部骨缺损的组织工程骨支架领域,具体涉及三维打印的MXene复合支架及制备方法和应用。
背景技术
颌面部骨缺损是口腔临床中常见的一种疾病,其修复的治疗方法是口腔临床治疗中的一大难题。目前,寻找一种新型安全有效,可以避免伦理问题的组织工程骨材料具有重要的医学和社会伦理学意义。三维打印构建骨组织的三维网架结构较传统方法具有难以比拟的优势,能够个性化定制组织工程骨结构形态,充分修复缺损区骨组织,最终材料完全降解被新骨取代。
MXene是一类新型的具有二维纳米结构的金属碳化物或氮化物,其生物相容性、生物可降解性和抗菌活性、亲水性、机械强度高、光热功能在骨组织工程、骨再生医学领域的具有应用前景。
发明内容
本发明的目的之一在于,提供三维打印的MXene复合支架,其具有良好的生物相容性、骨诱导性能、力学性能和可降解性。
本发明的目的之二在于,提供该复合支架的制备方法。
本发明的目的之三在于,提供该复合支架的应用。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
本发明所述的三维打印的MXene复合支架,由包括以下重量份的原料制成:MXene1~10份,海藻酸钠15~60份,羟基磷灰石30~120份。
本发明的部分实施方案中,由包括以下重量份的原料制成:MXene1~10份,海藻酸钠30份,羟基磷灰石60份;优选地,MXene为1份、5份或10份。
本发明的部分实施方案中,MXene、海藻酸钠、羟基磷灰石的粒径均为纳米级。
MXene具有良好的生物相容性、生物可降解性和抗菌活性,并且其亲水性和机械强度高等;羟基磷灰石具有的良好生物相容性,骨传导性,但不具有骨诱导性;海藻酸钠具有易代谢降解,无免疫原性等特点,但是力学性能差。本发明创造性地采用MXene、羟基磷灰石和海藻酸钠作为原材料制备复合支架,并筛选出适宜的配比,使复合支架不仅具有良好的生物相容性、骨传导性,同时有效改善了力学强度,并具有预料不到的骨诱导性,以及与骨生长相匹配的适宜的降解性能。
本发明所述的三维打印的MXene复合支架制备方法,包括以下步骤:
S1.备料:按比例准备各原料;
S2.混合:将各原料加水混合均匀后,备用;
S3.打印:将混合物的物料采用三维打印机打印,而后交联成型,冻干,即得所述MXene复合支架。
本发明的部分实施方案中,所述S2中,将各原料加水混合后,加热搅拌;
优选地,于30~50℃条件下搅拌,更优选为35~40℃,进一步优选为37℃;
搅拌时间优选为1~5小时,更优选为1.5~3小时,进一步优选为2小时。
本发明的部分实施方案中,所述S2中,加水混合后的物料中,MXene浓度为1~10mg/mL。
本发明中通过将各原料加水混,于一定温度条件下搅拌混合,使各物料能够充分混合均匀,满足后期3D打印时对材料的要求。
本发明的部分实施方案中,所述S3中,将混合后的物料装入三维打印机的料筒内,设置打印参数,逐层打印支架,
优选地,层厚度为0.25-0.45mm;更优选为0.32mm;
支架孔径优选为200-800μm,更优选为400μm。
本发明的部分实施方案中,打印针头的直径为200~600μm,优选为400μm;
或/和打印间距为0.4-1.0mm,优选为0.8mm;
或/和三维打印机的注射泵的计量压力为2.8-4.4bar;
或/和打印速度为8-18mm s-1
本发明所述的交联成型为现有技术,将打印所得支架置于交联剂溶液中,交联成型。本发明部分实施方案中,所述交联剂溶液为CaCl2溶液。
本发明所述的MXene为二维Ti3C2TX MXene,其制备方法为现有技术。
本发明提供的复合支架在制备骨修复材料中的应用。
本发明的部分实施方案中,所述骨修复材料包括颌面部骨修复材料。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明设计科学,构思巧妙,本发明创造性地采用MXene、羟基磷灰石和海藻酸钠作为原材料,使复合支架不仅具有可观的机械强度、生物相容性,以及成骨活性,同时具有适宜的降解速度。
本发明制备工艺简单,效果稳定。该支架满足组织工程骨支架的性能要求,可运用于组织工程的相关研究。
附图说明
附图1为MXene的扫描电镜图;
附图2为MXene的透射电镜图;
附图3为MXene的FITR图;
附图4为实施例3的三维打印MXene复合支架的实物图;
附图5为实施例3三维打印MXene复合支架扫描电镜图;
附图6为实施例4的三维打印MXene复合支架的实物图;
附图7为实施例4三维打印MXene复合支架扫描电镜图;
附图8为实施例5的三维打印MXene复合支架的实物图;
附图9为实施例5三维打印MXene复合支架扫描电镜图;
附图10为试验例1细胞黏附支架试验结果图;
附图11为试验例2的细胞形态检测试验结果图;
附图12为试验例3的细胞增殖情况结果图;
附图13为试验例4的碱性磷酸酶活性定量检测结果图。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
本发明实施例中所述的份,如无特殊说明,均指重量份。
本发明实施例2-5所述的MXene均为按实施例1的方法制得的纳米级的二维材料MXene;本发明实施例中所述的海藻酸钠和羟基磷灰石的粒径均为纳米级。
本发明实施例中所述的碱性磷酸酶活性检测试剂盒、CCK-8试剂盒均为市售。
实施例1
本实施例公开了本发明的MXene的制备方法,具体为:
1)将0.8g LiF加入到10ml 9M HCl中,搅拌5分钟,制得蚀刻剂;
2)将0.5g Ti3AlC2粉末(在5分钟的过程中)逐渐加入到上述蚀刻剂中,并于35℃条件下搅拌反应48小时,得到酸性混合物;
3)将步骤2所得的酸性混合物反复用水洗涤,离心,收集离心沉淀,直至上清液pH值为4-5。
4)用刮刀从步骤3所得的离心沉淀中小心收集黑色Ti3C2TX浆料,生成厚的黑色沉积物,干燥,即得纳米级的二维材料MXene。
本实施例制得的二维材料MXene的扫描电镜图如附图1所示,透射电镜图如附图2所示,FITR图如附图3所示。
由上述附图可知,成功制备了MXene。
实施例2
本实施例公开了本发明的MXene复合支架的原料成分表:
Figure BDA0003119536590000041
实施例3
本实施例公开了本发明的复合支架的制备方法:
步骤1.备料:按实施例2表1第1组处方配料;
步骤2.混合:取各原料置于同一容器中,加超纯水混匀后于37℃搅拌2小时,4℃保存备用。其中,混合溶液中MXene浓度为1mg/mL;
步骤3.打印:将混合后的物料装入3D打印机,设置打印参数,逐层绘制支架。层厚度为0.32mm;支架孔径为400μm;打印针头的直径为400μm;打印间距为0.8mm;3D打印机的注射泵的计量压力为4.4bar;打印速度为18mm s-1
步骤4.交联、干燥:将3D打印得到的支架常温置于5%CaCl2溶液中浸泡0.5小时,而后取出,-20℃冻干48h,即得本发明的MXene复合支架。
本实施例制得的复合支架实物图如附图4所示,扫描电镜图如附图5所示。由上述附图可知,成功制备了三维打印MXene复合支架。
实施例4
本实施例公开了本发明的复合支架的制备方法:
步骤1.备料:按实施例2表1第2组处方配料;
步骤2.混合:取各原料置于同一容器中,加超纯水混匀后于37℃搅拌2小时,4℃保存备用。其中,混合溶液中MXene浓度为5mg/mL;
步骤3.打印:将混合后的物料装入3D打印机,设置打印参数,逐层绘制支架。层厚度为0.25mm;支架孔径为200μm;打印针头的直径为200μm;打印间距为0.4mm;3D打印机的注射泵的计量压力为2.8bar;打印速度为8mm s-1
步骤4.交联、干燥:同实施例3。
本实施例制得的复合支架实物图如附图6所示,扫描电镜图如附图7所示。
实施例5
本实施例公开了本发明的复合支架的制备方法:
步骤1.备料:按实施例2表1第3组处方配料;
步骤2.混合:取各原料置于同一容器中,加超纯水混匀后于37℃搅拌2小时,4℃保存备用。其中,混合溶液中MXene浓度为10mg/mL;
步骤3.打印:将混合后的物料装入3D打印机,设置打印参数,逐层绘制支架。层厚度为0.45mm;支架孔径为800μm;打印针头的直径为600μm;打印间距为1.0mm;3D打印机的注射泵的计量压力为4.4bar;打印速度为18mm s-1
步骤4.交联、干燥:同实施例3。
本实施例制得的复合支架实物图如附图8所示,扫描电镜图如附图9所示。
试验例1
本试验例公开了本发明复合支架的细胞黏附试验。
1.大鼠骨髓间充质干细胞的培养
大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)在T25培养瓶中,用完全培养液(包含10%胎牛血清、100U/mL青、链霉素、α-MEM培养基)培养,置于饱和湿度、37℃、5%CO2培养箱内孵育,第三代备用。
2.细胞黏附支架试验
将BMSCs接种于三维打印MXene复合支架,在温度为37℃,5%CO2的环境下培养24小时。吸出孔板中的培养液,使用3%戊二醛固定液,4℃固定4小时后,PBS轻洗三遍,随后利用不同浓度的乙醇溶液进行梯度脱水处理,即于每孔中依次加入30%,50%,75%,85%,95%,100%体积分数的乙醇溶液,每个浓度脱水15分钟,使用PBS轻洗两遍后换下一浓度。最后将材料取出喷金90秒,并置于扫描电子显微镜下观察。
结果如图10所示。实验结果表明:本发明的复合支架具有良好的生物相容性。
试验例2
本试验例公开了接种于本发明的三维打印MXene复合支架细胞形态检测试验。
将BMSCs接种于三维打印MXene复合支架上,在温度为37℃,5%CO2的环境下培养24小时。使用异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的鬼笔环肽染色细胞骨架肌动蛋白,使用二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色细胞核,显示细胞形态及数量。根据产品说明书,避光条件下,将FITC标记的鬼笔环肽中添加1%牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA),混匀,作为染色工作液。吸出孔板中的培养液,用(4%)多聚甲醛固定10分钟,PBS轻洗三遍后,每孔加入100μl 0.5%Triton X-100通透处理5分钟,PBS轻洗三遍。每孔加入200μl染色液,室温孵育30分钟,随后每孔再加入100μl DAPI,染色5分钟,再使用PBS轻洗两遍。一小时内完成荧光显微镜下观测检测,并采集图像。
结果如图11所示,细胞形态完整,本发明的三维打印MXene复合支架具有良好的生物相容性。
试验例3
本试验例公开了采用CCK-8试剂盒检测接种于本发明三维打印MXene复合支架的细胞增殖情况。
将大鼠骨髓间充质干细胞以1×105个/ml的密度接种在三维打印MXene复合支架上,在接种后分别在第1、3、5天检测,按照CCK-8试剂盒说明书进行操作,具体为:
(1)将CCK-8试剂与培养液以1:10的比例进行混合,置于避光处。
(2)吸弃培养板中原有培养基,加入上一步配置的培养基,避光在恒温细胞培养箱中静置孵育2小时。
(3)取孔板中100μL液体加入96孔板中检测,按三维打印MXene复合支架的含量设置2个组,每组3个复本;2个组的浓度分别为0mg/m和1mg/ml;另以无细胞、仅孵育2小时的步骤(1)中的混合液作为空白对照。
(4)采用酶标仪测定450nm处的光密度(optical density,OD)值。结果如附图12所示,本发明的三维打印MXene复合支架能促进细胞增殖。
试验例4
本试验例公开了接种于本发明三维打印MXene复合支架的细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性定量检测。
将骨髓间充质干细胞(BMSCs)接种在三维打印MXene复合支架上,材料与细胞共培养4、7天后,采碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定细胞的ALP活力。本试验例中按培养液中三维打印MXene复合支架的含量设置2个组,每组3个复本;2个组的浓度分别为0mg/ml和1mg/ml。另以无细胞、三维打印MXene复合支架的培养液作为空白对照。结果如附图13所示。实验结果表明:本发明三维打印MXene复合支架具有优异的成骨活性。
本发明试验例1-4所用的三维打印MXene复合支架均为按实施例3的方法制得。
上述实施例仅为本发明较优实施例,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.三维打印的MXene复合支架,其特征在于,由包括以下重量份的原料制成:MXene1~10份,海藻酸钠15~60份,羟基磷灰石30~120份。
2.根据权利要求1所述的三维打印的MXene复合支架,其特征在于,由包括以下重量份的原料制成:MXene1~10份,海藻酸钠30份,羟基磷灰石60份;优选地,MXene为1份、5份或10份。
3.根据权利要求1或2所述的三维打印的MXene复合支架,其特征在于,MXene、海藻酸钠、羟基磷灰石的粒径均为纳米级。
4.如权利要求1~3任意一项所述的三维打印的MXene复合支架制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.备料:按比例准备各原料;
S2.混合:将各原料加水混合均匀后,备用;
S3.打印:将混合物的物料采用三维打印机打印,而后交联成型,冻干,即得所述MXene复合支架。
5.根据权利要求4所述的三维打印MXene复合支架制备方法,其特征在于,所述S2中,将各原料加水混合后,加热搅拌;
优选地,于30~50℃条件下搅拌,更优选为35~40℃,进一步优选为37℃;
搅拌时间优选为1~5小时,更优选为1.5~3小时,进一步优选为2小时。
6.根据权利要求5所述的三维打印MXene复合支架制备方法,其特征在于,所述S2中,加水混合后的物料中,MXene浓度为1~10mg/mL。
7.根据权利要求6所述的三维打印MXene复合支架制备方法,其特征在于,所述S3中,将混合后的物料装入三维打印机的料筒内,设置打印参数,逐层打印支架,
优选地,层厚度为0.25-0.45mm;更优选为0.32mm;
支架孔径优选为200-800μm,更优选为400μm。
8.根据权利要求9所述的三维打印MXene的复合支架制备方法,其特征在于,打印针头的直径为200~600μm,优选为400μm;
或/和打印间距为0.4-1.0mm,优选为0.8mm;
或/和三维打印机的注射泵的计量压力为2.8-4.4bar;
或/和打印速度为8-18mm s-1
9.权利要求1-3任意一项所述的复合支架在制备骨修复材料中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述骨修复材料包括颌面部骨修复材料。
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