CN112618427B - 奇异果发酵汁液以及其用于改善肌肤状况的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种奇异果的发酵汁液，是借由一包含下列步骤的制备方法制得：将奇异果果实与水混合以得到培养液，以及将培养液及多个菌种进行发酵1‑4日以得到奇异果发酵汁液。本发明另提供一种将奇异果发酵汁液用于改善肌肤状态的用途。

Description

奇异果发酵汁液以及其用于改善肌肤状况的用途
技术领域
本发明关于一种木瓜发酵汁液，特别是关于一种以多个菌种进行发酵所得的木瓜发酵汁液。
背景技术
自有机及天然成分肌肤保养品概念兴起后，生技公司及保养品相关业者积极投入关于天然植物的相关产品的研发。为使植物类相关产品对身体健康助益有科学验证的基础，植物的成分分析及功效评估成为产品开发的重点项目。
奇异果（Kiwifruit，学名为Actinidia deliciosa），又名猕猴桃，是猕猴桃属多种木质攀缘植物的可食用浆果，是新西兰、澳大利亚、智利、法国、意大利、希腊等国家的商业作物，近年来成为研究开发的天然植物之一。
发明内容
有鉴于此，研究或开发一种天然植物成分的能改善肌肤状况的组合物来有效提升生物体的肌肤状态是有其需求的。
本发明的一目的在于提供一种奇异果发酵汁液，是借由一包含下列步骤的制备方法制得：（a）将葡萄糖、奇异果果实与水混合以得到一培养液，其中水的重量为奇异果果实总重的3-6倍；以及（b）将培养液及多个菌种进行发酵1-4日以得到奇异果发酵汁液，其中多个菌种由相对于培养液为0.01-0.5 wt%的酵母菌以及相对于培养液为0.01-0.25 wt%的乳酸菌组成。
在一些实施例中，于（a）得到培养液的步骤中，葡萄糖的添加量为奇异果果实与水总重的8-10 wt%。
在一些实施例中，于（b）将培养液及多个菌种进行发酵以得到奇异果发酵汁液的步骤由下列步骤组成：（b1）于培养液中加入酵母菌进行发酵0.5-2日后形成一初发酵汁液；（b2）于初发酵汁液中加入乳酸菌进行发酵0.5-2日后形成奇异果发酵汁液。
在一些实施例中，酵母菌为啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae），所述乳酸菌为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液的pH值为3.2-3.8，且糖度为4.0以下。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液的多酚含量大于200 ug/mL。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液的总多酚含量/培养液的总多酚含量的比值为6-8。
根据一些实施例，本发明提供一种将奇异果发酵汁液用于制备改善肌肤状况的组合物的用途。
在一些实施例中，组合物是具有以下所述功能的至少其中两种：提升肌肤保湿、提升肌肤弹力以及减少肌肤皱纹。
在一些实施例中，组合物含有1.0 vol%的奇异果发酵汁液。
综上，根据任一实施例的木瓜发酵汁液，可用以改善改善肌肤状况。在一实施例中，在发酵过程中分次依序加入多个菌种并且控制使用各菌种的发酵时间，以使得菌种能有最佳的生长，并且进一步提升木瓜发酵汁液中有效成分浓度。
以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。
附图说明
[图1] 是肌肤含水量的测试结果数据图。
[图2] 是肌肤弹力的测试结果数据图。
[图3] 是肌肤皱纹的测试结果数据图。
图式中「*」代表p值小于0.05，「**」代表p值小于0.01，以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时，代表统计上的差异越显著。
具体实施方式
以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下，本案尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。
本案使用Excel软体进行统计分析。数据以平均值±标准差（SD）表示，各组之间的差异以学生t检验（student's t-test）进行分析。
本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在正负10%的范围内，最佳为在正负5%的范围内。
本文中所用的用语「糖度」所指为白利糖度（Degrees Brix，符号°Bx），是测量糖度的单位，代表在20°C情况下，每100克水溶液中溶解的蔗糖克数，可用于判断发酵过程中糖份被转换的程度。
本文中所用的用语「肌肤」所指为人类或非人的哺乳动物的皮肤。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液中为使用奇异果的果实进行发酵，其中奇异果学名为Actinidia deliciosa，俗名kiwifruit，又名猕猴桃，是猕猴桃属多种木质攀缘植物的可食用浆果，大小约为一颗大型鸡蛋，长度为5-8公分，直径为4.5-5.5公分。奇异果的果皮呈纤维状、颜色为暗绿色或棕色，而果肉是鲜绿色或金色，是新西兰、澳大利亚、智利、法国、意大利、希腊等国家的商业作物。本发明使用的来自中国台湾高雄地区的奇异果果实，但可使用的奇异果产地并不做限制。
本案所述「奇异果果实」可以包括其果肉/果实、含有果皮的果肉/果实、或含有籽的果肉/果实。
本案所述的奇异果发酵汁液，如同前述，在一些实施例中是指以水浸提含奇异果果实得到奇异果培养液后，再将此奇异果培养液经过特定发酵程序，形成奇异果发酵汁液。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液可经由其他合适的处理步骤，得到奇异果发酵汁液中所含有的奇异果发酵物。举例而言，「奇异果发酵物」可为由奇异果发酵汁液经干燥而得的粉末。
在一些实施例中，奇异果发酵汁液借由一包含下列步骤的制备方法制得：（a）将葡萄糖以及奇异果果实与水混合以得到培养液，其中水的重量为奇异果果实总重的3-6倍；以及（b）将培养液及多个菌种进行发酵1-4日以得到奇异果发酵汁液。
在一些实施例中，葡萄糖的添加量为奇异果果实与水总重的8-10 wt%。借由添加葡萄糖，使培养液中具有足够的糖度以确保发酵时菌种可以有足够的养份，让后续发酵可顺利进行。
在一些实施例中，先将奇异果果实与水混合，于80-100℃下浸泡0.5-1.5小时以进行浸提，得到一奇异果的浸提液；再将葡萄糖加入至奇异果的水萃液中得到培养液。
而在另一些实施例中，可先将葡萄糖、奇异果果实与水一起混合，形成混合液；再将混合液于80-100℃下浸提0.5-1.5小时以得到培养液。借由将葡萄糖与奇异果果实同时混合来进行浸提程序，由于不需再开启浸提设备添加葡萄糖、且加入的葡萄糖可再经过高温环境处理，有助于葡萄糖的溶解且可降低原料受污染风险。
在获得培养液后，可将培养液及多个菌种进行发酵1-4日以得到奇异果发酵汁液。其中，多个菌种包括相对于培养液为0.01-0.5 wt%的酵母菌及相对于培养液为0.01-0.25wt%的乳酸菌。在一些实施例中，培养液不另滤除其内部的固形物（浸提后的奇异果果实）而直接于其中加入菌种进行发酵（此时培养液的总重为固形物与液态的重量），借以利用菌种进一步提取固形物中的活性成分。在另一些实施例中，可先滤除培养液内部的固形物，再添加菌种进行发酵（此时培养液的总重为液态的重量），借此可避免当后续发酵反应过度时，产生其他较复杂且非所欲的成分而可较佳地控制浸提物品质。
在一些实施例中，将培养液及多个菌种进行发酵以得到奇异果发酵汁液的步骤中，酵母菌以及乳酸菌可以同时加入至培养液中。
在一些实施例中，将培养液及多个菌种进行发酵以得到奇异果发酵汁液的步骤中，是将酵母菌以及乳酸菌以此特定顺序进行分批发酵。举例而言，在一些实施例中，先于培养液中加入酵母菌进行发酵0.5-2日后形成初发酵汁液；再于初发酵汁液中加入乳酸菌进行发酵0.5-2日后形成奇异果发酵汁液。
借由先于培养液中添加酵母菌，可先将培养液中的糖份（例如葡萄糖）经发酵转化为乙醇，而乙醇有助于浸提奇异果内的有效成分。而后，于初发酵汁液中加入乳酸菌，可使初发酵汁液内尚未反应的糖份经发酵而转化为乳酸，以进一步消耗其中的糖份，进而降低初发酵汁液所含糖度。由于在初发酵汁液中产生了乳酸，其将会进一步改变整体反应环境（例如使初发酵汁液的pH值下降），对于浸提奇异果内的有效成分亦有影响与助益（使溶于酸性溶液的有效成分更易浸提出），糖度进一步降低。在一些实施例中，奇异果发酵汁液的糖度为4.0以下，以确保发酵反应完全。在一些实施例中，奇异果发酵汁液的pH值约为3.2-4.5，糖度约为3.0-4.0°Bx。
在一些实施例中，酵母菌以及乳酸菌可于25-40℃下进行发酵反应。若温度超过40℃，则将会使菌种失去活性；若温度低于25℃，则发酵反应的速率将过低、甚至无法进行发酵反应，不利于奇异果发酵汁液的取得。在一些实施例中，酵母菌以及乳酸菌可于28-32℃下进行发酵反应。
在一些实施例中，所使用的酵母菌可以是市售的啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）。举例而言，可为向财团法人食品工作发展研究所采购的寄存编号BCRC20271（国际寄存ATCC26602）菌株的啤酒酵母。
在一些实施例中，所使用的乳酸菌可以是为市售的瑞士乳酸菌（Streptococcusthermophilus）、嗜热链球菌（Lactobacillus plantarum）、嗜热链球菌（Streptococcusthermophiles）或植物乳杆菌。举例而言，也可采用瑞士乳酸菌TCI357（财团法人食品工作发展研究所寄存编号BCRC910846、国际寄存编号DSM33107）、寄存编号BCRC910805（国际寄存DSM33108）菌株的嗜热链球菌TCI028、寄存编号BCRT910760（国际寄存DSM32451）菌株的嗜热链球菌TCI378、或寄存编号BCRC910636（国际寄存DSM28121）菌株的嗜热链球菌TCI633。
在一些实施例中，当培养液完成所有菌种的发酵步骤后，将先得到奇异果发酵原液。而后，将此奇异果发酵原液经过滤，再得到奇异果发酵汁液。举例而言，在一些实施例中，可将培养液及多个菌种进行发酵1-5日后所得到奇异果发酵原液，经适当孔洞大小的滤网（例如200-400目筛网）过滤，以得到奇异果发酵汁液。
将此奇异果培养液经过特定发酵程序后所形成的奇异果发酵汁液可具有较高的总多酚含量。举例而言，在一些实施例中，奇异果发酵汁液的总多酚含量为200-220µg/ml，而奇异果培养液的总多酚含量为20-40 µg/ml。据此可知，借由本案发酵方式所得的奇异果发酵汁液，其总多酚含量可被大幅提升6-8倍，故本案的发酵方式确实可有效改变奇异果水萃液中的所含成分，有效提升活性成分。在一些实施例中，此总多酚含量亦可作为奇异果发酵汁液的检验基准，此外，在一些实施例中，奇异果发酵汁液的总多酚含量/该培养液的总多酚含量的比值为6-8，在一较佳实施例中，奇异果发酵汁液的总多酚含量/该培养液的总多酚含量的比值为7.26。
根据本案的一些实施例，以水浸提奇异果果实所得到的奇异果培养液，在经过特定发酵程序后所形成的奇异果发酵汁液，可改善肌肤状况。故此奇异果发酵汁液可用于制备改善肌肤状况组合物的用途。
在一些实施例中，前述的各组合物可为医药组合物、保养品组合物、食品组合物、保健食品组合物。
医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠道地（enterally）、非经肠道地（parenterally）或局部地（topically）投药的剂型。例如可为：注射品（injection）[例如，无菌的水性溶液（sterile aqueous solution）或分散液（dispersion）]、无菌的粉末（sterile powder）、外部制剂（external preparation）或其他类似物。
医药组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂（pharmaceutically acceptable carrier）。例如，医药上可接受的载剂可包含下列一种或多种载剂：乳化剂（emulsifier）、悬浮剂（suspending agent）、分解剂（decomposer）、崩解剂（disintegrating agent）、分散剂（dispersing agent）、粘结剂（binding agent）、赋形剂（excipient）、安定剂（stabilizing agent）、螯合剂（chelating agent）、稀释剂（diluent）、胶凝剂（gelling agent）、防腐剂（preservative）、润湿剂（wetting agent）、润滑剂（lubricant）、吸收延迟剂（absorption delaying agent）、脂质体（liposome）以及类似之物。有关这些载剂的选用与数量是熟习此项技术人员可视情况进行选择的。
在一些实施例中，医药上可接受的载剂可包含下列一种溶剂：水、生理盐水（normal saline）、磷酸盐缓冲生理盐水（phosphate buffered saline，PBS）、含有醇的水性溶液（alcohol containing aqueous solution）以及其他任何合适的溶剂。
在一些实施例中，该医药组合物可由下列所述的任一种非经肠道途径（parenteral routes）来投药：皮下注射（subcutaneous injection）、表皮内注射（intraepidermal injection）、皮内注射（intradermal injection）以及病灶内注射（intralesional injection）。
在一些实施例中，医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部施用于皮肤上的外部制剂（external preparation）。举例而言，其可为下列所述的任一种，但不限于此：乳剂（emulsion）、凝胶（gel）、软膏（ointment）、乳霜（cream）、贴片（patch）、擦剂（liniment）、粉末（powder）、气溶胶（aerosol）、喷雾（spray）、乳液（lotion）、乳浆（serum）、糊剂（paste）、泡沫（foam）、滴剂（drop）、悬浮液（suspension）、油膏（salve）以及绷带（bandage）。
在一些实施例中，外部制剂是借由将医药组合物与一为熟习此项技艺者所详知的基底（base）相混合而制成。
在一些实施例中，该基底可包含下列一种或多种的添加剂（additives）：水、醇（alcohols）、甘醇（glycol）、碳氢化合物（hydrocarbons）[诸如石油胶（petroleum, jelly）以及白凡士林（white petrolatum,）]、蜡（wax）[诸如石蜡（paraffin）以及黄蜡（yellowwax）]、保存剂（preserving agents）、抗氧化剂（antioxidants）、界面活性剂（surfactants）、吸收增强剂（absorption enhancers）、安定剂（stabilizing agents）、胶凝剂（gelling agents）[诸如卡波普®974P （carbopol®974P）、微结晶纤维素（microcrystalline cellulose）以及羧基甲基纤维素（carboxymethylcellulose）]、活性剂（active agents）、保湿剂（humectants）、气味吸收剂（odor absorbers）、香料（fragrances）、pH调整剂（pH adjusting agents）、螯合剂（chelating agents）、乳化剂（emulsifiers）、闭塞剂（occlusive agents）、软化剂（emollients）、增稠剂（thickeners）、助溶剂（solubilizing agents）、渗透增强剂（penetration enhancers）、抗刺激剂（anti-irritants）、着色剂（colorants）以及推进剂（propellants）等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
在一些实施例中，保养品中可包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂（acceptable adjuvant）。例如，该可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂（screening agent）、螯合剂、界面活性剂、染色试剂（coloring agent）、增稠剂（thickening agent）、填料（filler）、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。
在一些实施例中，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤（skincare）或化妆（makeup）的形式，其可为下列中的任一种，但不限于此：水性溶液（aqueous solution）、水-醇溶液（aqueous-alcohol solution）或油性溶液（oilysolution）、呈水包油型（oil-in-water type）、油包水型（water-in-oil type）或复合型之乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜（mask）、贴片、贴布（pack）、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯（mousse）、防晒油（sunblock）、化妆水（tonic water）、粉底（foundation）、卸妆产品（makeup remover products）、肥皂（soap）以及其他身体清洁产品（body cleansing products）等。
在一些实施例中，保养品亦可与下列中的已知活性的外用剂（external useagents）的一种或多种一起合并使用：美白剂（whitening agents）[诸如维生素A酸（tretinoin）、儿茶素（catechin）、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、杀菌剂（bactericides）、紫外线吸收剂（ultraviolet absorbers）、植物萃取物（plant extracts）[诸如芦荟萃取物（aloe extract）]、皮肤营养剂（skin nutrients）、麻醉剂（anesthetics）、抗痘剂（anti-acne agents）、止痒剂（antipruritics）、止痛剂（analgesics）、抗皮肤炎剂（antidermatitis agents）、抗过角化剂（antihyperkeratolytic agents）、抗干皮肤剂（anti-dry skin agents）、抗汗剂（antipsoriatic agents）、抗老化剂（antiaging agents）、抗皱剂（antiwrinkle agents）、抗皮脂溢出剂（antiseborrheic agents）、伤口治疗剂（wound-healing agents）、皮质类固醇（corticosteroids）以及激素（hormones）。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
在一些实施例中，医药组合物可被当作食品添加物（food additive），借由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。
在一些实施例中，食品的种类可为但不限于：饮料（beverages）、发酵食品（fermented foods）、烘培产品（bakery products）、健康食品（health foods）以及膳食补充品（dietary supplements）。
下列范例中的实验步骤若无特别叙明，即在室温（25±5℃）、常压（1 atm）下进行。
[例1]奇异果发酵汁液的制备例1
首先将奇异果（Actinidia deliciosa）彻底清洗，将其全果实打碎成粒径12mm以下的奇异果颗粒。将奇异果颗粒与水以1:3-6的比例混合均匀以得到原料混合液，其中一较佳实施例为将奇异果颗粒与水以1:5的比例混合均匀以得到原料混合液。然后，根据原料混合液的总重，添加7.5 wt%（重量百分比）的葡萄糖于奇异果的原料混合液中，将原料混合液在80℃-100℃下浸提0.5~1小时，其中一较佳实施例为将原料混合液在95℃下浸提0.5小时，得到奇异果培养液，培养液此时的糖度值为8.0°Bx。
待培养液冷却至室温后，进行发酵程序，先添加相对于培养液0.1 wt%的啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）（购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心（BCRC），寄存编号BCRC20271）于培养液中，进行发酵0.5-2天以形成初发酵汁液，再添加相对于培养液为0.05 wt%的嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）（购自BCRC，寄存编号BCRC910636）于初发酵汁液内，进行发酵0.5-2天以得到奇异果发酵汁液，其中一较佳实施例中。前述各发酵阶段皆于30℃下进行，且殖菌后皆需搅拌均匀。奇异果发酵汁液设定的规格为pH值为3.5±0.3，糖度值为小于4.0°Bx，如检验符合该些规格，则判定发酵完成并得到奇异果发酵汁液，显示大部分的糖份皆已反应。再另一较佳实施例中，奇异果发酵汁液会以200目筛网过滤进行过滤，去除发酵汁液的果粒残渣。
在本发明的一实施例中，发酵程序可为先添加啤酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae），再添加嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），也可将啤酒酵母菌及嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）一并添加共同发酵，本发明并不以此为限。
在本发明的一实施例中，在发酵中所采用的菌种也可为啤酒酵母菌之外的其他同属不同种的酵母菌菌种，以及嗜热链球菌之外的其他同属不同种的链球菌菌种，本发明并不以此为限。
[例2]奇异果发酵汁液的制备例2
在此实施例中，描述奇异果发酵汁液的另一种制备方式，其中制备奇异果培养液的方式以及发酵完成后的规格及步骤大致如例1所述，本段落不再赘述，差异仅在于发酵程序中所使用的菌种以及发酵时间有所不同，详细来说，先添加相对于培养液0.1 wt%的啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）（购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心（BCRC），寄存编号BCRC20271）于培养液中，进行发酵0.5-2天以形成初发酵汁液，接着加入0.01-0.25 wt%乳酸杆菌 (Lactobacillus plantarum TCI028，专利寄存于生物资源保存与研究中心，中国台湾，编号为 BCRC910805)发酵1-3天，最后再加入3-10 wt%醋酸杆菌(Acetobacter aceti，购买于生物资源保存与研究中心，中国台湾，编号为BCRC11688)发酵3-10天，以得到奇异果发酵汁液。
[例3]经过不同发酵制程所得奇异果发酵汁液的总多酚含量测试
标准曲线绘制：
首先，将10mg的没食子酸（gallic acid，GA）（购自Sigma，料号：G7384）溶于水中，并添加10mL的体积至量瓶中，得到1000μg/mL浓度的没食子酸溶液后，将该溶液储存于-20℃作为储备溶液。之后，将储备溶液稀释10倍至100μg/mL的浓度，而未使用完的液体则储存于-20℃的环境。接着，于玻璃试管中分别配制0μg/mL、20μg/mL、40 μg/mL、60μg/mL、80μg/mL及100μg/mL的没食子酸标准溶液，配制方式显示如下表一：
表一：没食子酸标准溶液配置方法
浓度（μg/mL） 0 20 40 60 80 100
GA 1,000ppm 0 μl 20 μl 40 μl 60 μl 80 μl 100 μl
ddH<sub>2</sub>O 100 μl 80 μl 60 μl 40 μl 20 μl 0 μl
之后，添加500μL的佛萧酚试剂（Folin-Ciocalteu’s phenol reagent）（购自Merck，料号：1.09001.0100）、混合均匀并静置3分钟，接而添加400μL的7.5%碳酸钠（sodiumcarbonate）（Sigma 31432，溶于水中）、混合均匀并反应30分钟。接着，经由涡旋（vortex）确保无气泡后取200μL的标准溶液于750nm下测量吸光值，并绘制标准曲线。
样品总多酚定量实验：
另外，将例1所得的A组奇异果发酵汁液以及例2所得的B组奇异果发酵汁液为样本，并以例1所得的C组奇异果培养液（未发酵）为比较组。将各组分别以水稀释20倍至1200μL并取100μL的体积至玻璃试管中，每组样品需三重复。之后，添加500μL的佛萧酚试剂、混合均匀并静置3分钟。
接而添加400μL的7.5%碳酸钠、混合均匀并反应30分钟~1小时。再经由涡旋确保无气泡后取200μL的各组反应溶液于750nm下测量吸光值，并以内差法算出浓度后再回乘稀释倍数以取得原浓度。
表二是本发明奇异果发酵汁液的总多酚含量检测数据图。由表二可见，C组（比较组，未经过发酵的奇异果培养液）的总多酚含量为30 ug/mL，B组（奇异果发酵汁液，有经过例2所述的三种菌种发酵步骤）的总多酚含量为176 ug/mL，A组（奇异果发酵汁液，有经过例1所述的二种菌种发酵步骤）的总多酚含量为218 ug/mL；与比较组（C组）相较之下，A组的总多酚含量显著的提升7.26倍，且明显高于B组经过三种菌种发酵所得的奇异果发酵汁液。本实施例的结果显示，经过例1所述的二种菌种发酵步骤，本发明的奇异果发酵汁液大量释出总多酚。由于A组奇异果发酵汁液的总多酚含量最高，因此以该组的制备方式所得的奇异果发酵汁液进行后续肌肤状态的人体实验。
表二
组别 总多酚含量（ug/mL）
A组奇异果发酵汁液 218 ug/mL
B组奇异果发酵汁液 176 ug/mL
C组奇异果培养液 30 ug/mL
[例4]肌肤状态人体实验-以外用方式使用奇异果发酵汁液
为探讨本发明的奇异果发酵汁液对于人体肌肤状态的影响，因此以外用方式检测受试者使用奇异果发酵汁液的各项肌肤数值变化。
使用样品：含奇异果发酵汁液的面膜（以面膜布浸泡于含有奇异果发酵汁液的精华液中，使其充分吸收后制得）以及安慰剂面膜（以相同型号的面膜布浸泡于与前述精华液中，但其中的奇异果发酵汁液替换成等重的水），再使其充分吸收后制得。于此实施例中，各面膜是含20mL的对应精华液。
含有奇异果发酵汁液的精华液成分：馨鲜酮（Hydroxyacetophenone，又名SymSave） 0.6wt%、1,3-丁二醇 （1,3-Butylene Glycol）5wt%、己二醇（1,2-Hexanediol）0.6wt%、奇异果发酵汁液 1.0wt%，其余为水。其中，此奇异果发酵汁液是由例1的制备方式而得。
受试者人数：8位25-60岁的受试者。
测试时长：共四周，每天早晚共使用两次。
实验方式：受试者将全脸清洁后，依据不同检测项目，使用对应的仪器及测量方式，纪录左右半脸于使用面膜前的数值（使用前数据）。而后，受试者在每日早晨及晚间睡前洗完脸后，分别将奇异果发酵汁液面膜以及安慰剂面膜贴敷于受试者的右半脸及左半脸上，经15分钟后取下，每日两次，为期4周，再以对应的仪器及测量方式，进行测量（使用后数据），再与自身原左半脸、或右半脸的数值进行对照（使用前与使用后欲进行检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对皮肤所造成的影响）。
检测项目：将分别对肌肤进行肌肤含水量、皮肤弹力、肌肤皱纹含量的检测。
1.肌肤含水量
使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤含水量检测探头Corneometer® CM825 (C+K Multi Probe Adapter System, Germany) 对同一受试者在使用面膜前与后的面部肌肤进行检测。该检测探头是基于电容的原理进行测量。当水分含量发生变化时，皮肤的电容值亦发生变化，故可通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面的含水量。
请参阅图1，该图是受试者在使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜4周后的肌肤（上脸颊处）含水量改善情况，具体而言，将使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜前的肌肤含水量视为1（即100%），使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜（测试组）后，受试者肌肤含水量平均显著提升9.7%，而使用安慰剂面膜（安慰组）的使用前及使用后的肌肤含水量未有显著差异。
由此可见，本发明的奇异果发酵汁液能提升肌肤含水量，因此具提升肌肤保湿的效果。
2.皮肤弹力（Elasticity）
使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤弹力检测探头Cutometer® MPA580 (C+K Multi Probe Adapter System, Germany) 对同一受试者在测试前与测试后的面部肌肤进行检测。测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个测试探头内，透过光学测试系统检测皮肤被吸进探头内的深度，并以内建软体分析计算皮肤弹力。
请参阅图2，该图是受试者在使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜4周后的肌肤毛孔状态改善情况，具体而言，将使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜前的肌肤皮肤弹力视为1（即100%），使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜后，受试者肌肤皮肤弹力平均显著增加10.8%，而使用安慰剂面膜的使用前及使用后的肌肤皮肤弹力未有显著差异。
由此可见，本发明的奇异果发酵汁液具提升皮肤弹力的效果。
3.肌肤皱纹
使用美国Canfield公司所贩售的VISIA高阶数位肤质检测仪进行检测，透过高解析度的相机镜头对同一受试者在测试前与测试后的面部肌肤进行拍摄，借由标准白光照射、侦测皮肤阴影的变化，即可侦测纹理位置并得到数值，可代表皮肤的皱纹程度。
请参阅图3，该图是受试者在使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜4周后的肌肤皱纹数量改善情况，具体而言，将使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜前的肌肤皱纹数量视为1（即100%），使用含本案奇异果发酵汁液的精华液的面膜后，受试者肌肤皱纹数量减少10.7%，而使用安慰剂面膜的使用前及使用后的肌肤皱纹数量则只有减少1.6%。
由此可见，本发明的奇异果发酵汁液具减少肌肤油脂的效果。
综合以上，透过例3的实验数据可知，经过发酵步骤，本发明的奇异果发酵汁液大量释出总多酚，总多酚数值含量明显高于未经过发酵的奇异果发酵汁液，更进一步得知，依序以啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）及嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus）进行发酵所得的奇异果发酵汁液的总多酚含量明显高于依序以啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）及乳酸杆菌 (Lactobacillus plantarum)及醋酸杆菌(Acetobacter aceti) 进行发酵所得的奇异果发酵汁液的总多酚含量。透过例4所述的人体实验可知，本发明的奇异果发酵汁液能提升肌肤含水量、提升肌肤弹力以及减少肌肤皱纹数量。
虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神所作些许的更动与润饰，皆应涵盖于本发明的范畴内，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种奇异果发酵汁液，其特征在于，是借由一包含下列步骤的制备方法制得：
（a）将葡萄糖、奇异果果实与水混合在80℃-100℃下浸提0.5~1小时以得到一培养液，其中所述水的重量为所述奇异果果实总重的3-6倍；以及
（b）将所述培养液添加啤酒酵母菌进行发酵0.5-2天以形成初发酵汁液，再添加嗜热链球菌于所述初发酵汁液内，进行发酵0.5-2天以得到所述奇异果发酵汁液，其中所述啤酒酵母菌相对于所述培养液为0.01-0.5 wt%，所述嗜热链球菌相对于所述培养液为0.01-0.25wt%。
2.如权利要求1所述的奇异果发酵汁液，其特征在于，所述（a）步骤的得到所述培养液的步骤中，葡萄糖的添加量为奇异果果实与水总重的8-10 wt%。
3.如权利要求1所述的奇异果发酵汁液，其特征在于，所述奇异果发酵汁液的pH值为3.2-3.8，且糖度为4.0 ˚Bx以下。
4.如权利要求1所述的奇异果发酵汁液，其特征在于，所述奇异果发酵汁液的多酚含量大于200 µg/mL。
5.如权利要求1所述的奇异果发酵汁液，其特征在于，所述奇异果发酵汁液的总多酚含量/所述培养液的总多酚含量的比值为6-8。
6.一种将如权利要求1至5中任一项所述的奇异果发酵汁液用于制备改善肌肤状况的组合物的用途，其中所述组合物是局部施用于皮肤上的外部制剂，所述改善肌肤状况为以下所述功能的至少其中两种：提升肌肤保湿、提升肌肤弹力以及减少肌肤皱纹。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述组合物含有1.0 vol%的所述奇异果发酵汁液。
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