CN112334466A - 化合物 - Google Patents

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H·R·拉吉亚科斯
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R·C·福伊齐克
C·F·赫姆利
M·A·卡梅里诺
Y·E·B·波齐基斯
S·R·沃克
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Abstract

一种式(I)化合物，或其药学盐：

Description

化合物
技术领域
本发明涉及充当MYST家族的赖氨酸乙酰基转移酶(KAT)抑制剂的化合物。
背景技术
MYST家族为最大KAT家族且以酵母和哺乳动物中的创始成员命名：MOZ、Ybf2/Sas3、Sas2和TIP60(Dekker 2014)。MYST蛋白介导多种生物功能，包括基因调控、DNA修复、细胞周期调控和发育(Avvakumov 2007；Voss 2009)。MYST家族的KAT蛋白在组蛋白的转译后修饰中发挥关键作用且因此对真核生物细胞核中的染色质结构具有显著影响(Avvakumov 2007)。所述家族目前包含五种哺乳动物KAT：TIP60(KAT5；HTATIP；MIM601409)、MOZ(KAT6A；MIM 601408；MYST3)、MORF(KAT6b；QKF；MYST4)、HBO(KAT8；HBO1；MYST2)和MOF(KAT8；MYST1)(Voss 2009)。MYST家族的这五种成员存在于人类中且已知MYST蛋白的功能失常与癌症相关(Avvakumov 2007)。关于MYST家族的成员最频繁使用的名称为：
普通名称 MYST名称 系统名称
MOF MYST1 KAT8
HBO MYST2 KAT7
MOZ MYST3 KAT6A
MORF MYST4 KAT6B
TIP60 KAT5
MYST功能结构域
MYST蛋白用于多亚单位蛋白复合物，包括介导DNA结合的衔接子，诸如ING蛋白(Avvakumov 2007)。例如，TIP60属NuA4多蛋白复合物(其包含超过16个成员)(Zhang2017)。然而，还存在MOZ蛋白自身的结构内的螺旋-转角-螺旋DNA-结合基序的一些报道(Holbert 2007)，所述基序表明直接结合DNA的能力。
MYST蛋白的乙酰基转移酶活性通过MYST结构域(催化结构域)实现。MYST结构域含有乙酰基-辅酶A结合基序，所述基序与其他HAT一起在结构上保守；和罕见C2HC型锌指(Voss 2009)。包括乙酰基-CoA结合基序和锌指的高度保守MYST结构域被视为这个家族的酶的定义性特征(Avvakumov 2007)。
MYST蛋白的作用
组蛋白残基的乙酰化一般与转录活化相关。然而，在一些情况下，转录抑制也已归因于MYST蛋白(Voss 2009)。已知MYST家族的个别成员参与广泛范围的重要生物化学相互作用：
HBO1经由组蛋白底物的乙酰化积极地调控DNA复制的起始(Avvakumov 2007；Aggarwal 2004；Doyon 2006；Iizuka 2006)，据推测其导致更易获得的染色质构象(Avvakumov 2007，Iizuka 2006)。还已知HBO1在乳腺癌的发病机理中通过促进癌症类干细胞的富集(Duong 2013)且通过经由泛素化使雌激素受体α(ERα)不稳定而发挥作用，所述泛素化经由HBO1的组蛋白乙酰化活性而进行(Iizuka 2013)。HBO1还已牵涉在急性骨髓白血病(AML)中(Shi 2015)。
TIP60(KAT5)为MYST家族的研究最多的成员。TIP60不仅在转录的调控中，而且在DNA损伤修复的过程中、尤其在DNA双链断裂(DSB)中发挥重要作用(Gil 2017)。TIP60可使p53、ATM和c-Myc乙酰化。TIP60和MOF在DNA损伤时特定地使p53的赖氨酸120(K120)乙酰化(Avvakumov 2007)。TIP60还涉及对于调控T细胞(Treg)生物学很重要。FOXP3为Treg的发育和功能中的主调控因子且已显示TIP60对FOXP3的乙酰化为FOXP3活性所必需(Li 2007，Xiao 2014)。强调此，小鼠中的条件性TIP60缺失导致皮屑样致命自体免疫疾病，从而模拟FOXP3基因剔除小鼠中可见的表型(Xiao 2014)。在癌症中，Treg细胞可通过抑制针对肿瘤的适应性免疫性而促进肿瘤进展。
MOF(“第一雄性缺失(males absent on the first)”)最初在果蝇中被鉴别为剂量补偿组分之一，且基于功能研究和序列分析(Su 2016)分类为MYST家族的成员。人类直系同源物展现与果蝇MOF的显著相似性；含有乙酰基-CoA-结合位点、染色质结构域(其结合组蛋白)和C2HC型锌指(Su 2016)。MOF为用于使组蛋白H4K16乙酰化的关键酶，且含MOF复合物牵涉在与癌症相关的多种必需细胞功能中(Su 2016)。除了组蛋白乙酰化的全面降低以外，哺乳动物细胞中的MOF耗尽还可导致异常基因转录，尤其引起某些肿瘤抑制因子基因或致癌基因的异常表达，表明MOF在肿瘤发生中的关键作用(Su 2016)。例如，MOF的KAT活性已显示为维持MLL-AF9白血病所需要且对于多种AML亚型可为重要的(Valerio 2017)。
KAT6B(Querkopf)首先在针对在胚胎发育期间调控增殖与分化之间的平衡的基因的突变筛选中鉴别(Thomas 2000)。关于KAT6B突变型等位基因纯合的小鼠在大脑皮质发育中具有严重缺陷，所述缺陷由特定地皮质祖细胞群体在胚胎发育期间的增殖和分化两者的严重降低引起。KAT6B为成体神经干细胞群体的维持所需要且是系统中调控干细胞分化到神经元中的部分(Merson 2006)。KAT6B还在白血病的罕见形式中发生突变(Vizmanos2003)。
MOZ基因座在所有癌症类型当中排序为第12个最常见的扩增区(Zack 2013)。MOZ在8p11-p12扩增子内，所述扩增子在多种癌症、尤其乳房和卵巢中以约10-15％的频率可见(Turner-Ivey 2014)。MOZ首先在急性骨髓白血病(AML)中在特异性染色体易位的检查期间鉴别为CREB结合蛋白(CBP)的融合伴侣(Avvakumov 2007；Borrow 1996)。MOZ KAT活性为促进MEIS1和HOXa9(典型可见到过表达在一些淋巴瘤和白血病中的蛋白质)的表达所必需。在B细胞淋巴瘤的Eμ-Myc转基因模型中可见MOZ+/-杂合子小鼠生存增加，其中单一MOZ等位基因的损失导致前B细胞中的Meis1和Hoxa9水平的生物学相关降低(Sheikh 2015)。
已知一些MYST的抑制剂。例如，据报道以下漆树酸衍生物(Ghizzoni 2012)抑制TIP60(IC50＝74μM)和MOF(IC50＝47μM)：
Figure BDA0002843625830000031
其他已知抑制剂包括(Zhang 2017)：
Figure BDA0002843625830000032
根据通常KAT且特别是MYST在诸如癌症的疾病中的确定作用，需要这些蛋白质的新抑制剂。
发明内容
本发明提供抑制MYST家族的一种或多种KAT(即，TIP60、KAT6B、MOZ、HBO1和MOF)的活性的化合物。
本发明的第一方面提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法方法中：
Figure BDA0002843625830000041
其中：
R1、R2、R3和R4独立地选自：
(i)H；
(ii)C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基；
(iii)C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代；
(iv)C3-6环烷基；
(v)卤基；
(vi)CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基；
(vii)氰基、NH2或NO2；和
(viii)苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代；
Ar为苯基、萘基或C5-10杂芳基，所述基团任选被选自以下的一个或多个基团取代：
(i)C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代；
(ii)C3-6环烷基；
(iii)羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基；
(iv)卤基；
(v)C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代；
(vi)苯氧基，其任选被氟取代；
(vii)苯基或C5-6杂芳基
(viii)SF5或SO2CH3；
(ix)-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3；或
(x)C1-4烷基酯。
第一方面还提供包含如所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本发明的第二方面提供一种癌症治疗方法，其包括向需要治疗的患者施用如本发明的第一方面中所定义的化合物或其药学上可接受的盐，或本发明的第一方面的药物组合物。本发明的第二方面还提供如本发明的第一方面中所定义的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗癌症的药剂中的用途，和用于癌症治疗的如本发明的第一方面中所定义的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
如下文所述，如第一方面中所定义的化合物可在癌症治疗中与放射疗法和/或化学疗法同时或依序施用。
本发明的第三方面提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002843625830000051
其中：
R1、R2、R3和R4独立地选自：
(i)H；
(ii)C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基；
(iii)C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代；
(iv)C3-6环烷基；
(v)卤基；
(vi)CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基；
(vii)氰基、NH2或NO2；和
(viii)苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代；
Ar为苯基、萘基或C5-10杂芳基，所述基团任选被选自以下的一个或多个基团取代：
(i)C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代；
(ii)C3-6环烷基；
(iii)羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基；
(iv)卤基；
(v)C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代；
(vi)苯氧基，其任选被氟取代；
(vii)苯基或C5-6杂芳基；
(viii)SF5或SO2CH3；
(ix)-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3；或
(x)C1-4烷基酯；
条件是：
(a)R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H，且任选R3不为CF3；或
(b)R4为OMe；或
(c)R4为Cl，且R1、R2和R3为H，或R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H；或
(d)R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
本发明的第四方面提供如本发明的第一或第三方面中所定义的化合物的合成，如下文所述。
定义
除非另外规定，否则如本文所用，术语“取代的”是指具有一个或多个取代基的亲本基团。术语“取代基”在本文中以常规含义使用且是指共价连接到或适当时融合到亲本基团的化学部分。如本文所用，短语“任选被取代”是指可未取代或可被取代的亲本基团。
C5-12杂芳基：如本文所用，术语“C5-12杂芳基”是指通过自具有5至12个环原子的芳族结构移除氢原子而获得的单价部分，所述环原子中的1至3个为环杂原子。术语“芳族结构”用于表示具有芳族特性的单环或稠环系统，且术语“环杂原子”是指氮、氧或硫原子。
在此上下文中，字首(例如，C5-12、C5-6等)表示构成芳族结构的原子的数目，或构成芳族结构的原子的数目的范围(无论碳原子或杂原子)。
C5-12杂芳基结构的实例包括但不限于衍生自以下的那些：
N1：吡咯(唑)(C5)、吡啶(吖嗪)(C6)；吡啶酮(C6)；吲哚(C9)；喹啉(C10)；
O1：呋喃(氧杂茂)(C5)；
S1：噻吩(thiophene/thiole)(C5)；
N1O1：噁唑(C5)、异噁唑(C5)、异噁嗪(C6)；
N2O1：噁二唑(呋咱)(C5)；
N1S1：噻唑(C5)、异噻唑(C5)；
N2S1：噻二唑(C5)
N2：咪唑(1,3-二唑)(C5)、吡唑(1,2-二唑)(C5)、哒嗪(1,2-二嗪)(C6)、嘧啶(1,3-二嗪)(C6)(例如，胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1,4-二嗪)(C6)；苯并咪唑(C9)
N3：三唑(C5)、三嗪(C6)。
卤基：如本文所用，术语“卤基”是指选自氟、氯、溴和碘的基团。
氰基：如本文所用，术语“氰基”是指基团-C≡N。
羟基：如本文所用，术语“羟基”是指基团-OH。
苯基：如本文所用，术语“苯基”是指通过自具有6个碳环原子的单一芳族环结构移除氢原子而获得的单价部分(-C6H5)。
苯氧基：如本文所用，术语“苯氧基”是指通过自苯酚的氧原子移除氢原子而获得的单价部分(-O-C6H5)。
C1-4烷基：如本文所用，术语“C1-4烷基”是指通过自具有1至4个碳原子的饱和烃化合物的碳原子移除氢原子而获得的单价部分。
饱和烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)和丁基(C4)。
饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)和正丁基(C4)。
饱和支链烷基的实例包括异丙基(C3)、异丁基(C4)、仲丁基(C4)和叔丁基(C4)。
C3-6环烷基：如本文所用，术语“C3-6环烷基”是指通过自具有3至6个碳原子的饱和环状烃化合物的碳原子移除氢原子而获得的单价部分。C3-6环烷基的实例包括但不限于环丙基(C3)、环丁基(C4)、环戊基(C5)和环己基(C6)。
C1-4烷氧基：如本文所用，术语“C1-4烷氧基”是指通过自具有1至4个碳原子的饱和醇化合物的氧原子移除氢原子而获得的单价部分。其可表示为-O-C1-4烷基。C1-4烷氧基的实例包括但不限于甲氧基(C1)、乙氧基(C2)、丙氧基(C3)和丁氧基(C4)。
C1-4烷基氨基甲酰基：-NHC(＝O)OR，其中R为如上文所定义的C1-4烷基。C1-4烷基氨基甲酰基的实例包括但不限于-N(H)C(＝O)OCH3、-N(H)C(＝O)OCH2CH3和-N(H)C(＝O)OC(CH3)3。
酰基酰胺基：-NR(C＝O)R’，其中R和R’独立地选自H和如上文所定义的C1-4烷基。R和R’也可为-(CH2)n-，其中n为3或4。酰基酰胺基的实例包括但不限于-N(H)C(＝O)CF3、N(H)C(＝O)Me，和：
Figure BDA0002843625830000081
C1-4烷基酯：如本文所用，术语“C1-4烷基酯”是指通过自具有1至5个碳原子的饱和羧酸化合物的氧原子移除氢原子而获得的单价部分。其可表示为-O-C(O)-C1-4烷基。C1-4烷基酯基的实例包括但不限于乙酰氧基(-O-C(O)-CH3)、丙酰氧基(-O-C(O)-CH2CH3)、丁酰氧基(-O-C(O)-CH2CH2CH3)和戊酰氧基(-O-C(O)-CH2CH2CH2CH3)。
包括其他形式
除非另外规定，否则上文中包括这些取代基的熟知离子、盐、溶剂合物和受保护形式。例如，对于羧酸(-COOH)的提及还包括其阴离子(羧酸盐)形式(-COO-)、盐或溶剂合物，以及常规受保护形式。同样，对于氨基的提及包括氨基的质子化形式(-N+HR1R2)、盐或溶剂合物(例如，盐酸盐)，以及氨基的常规受保护形式。同样，对于羟基的提及还包括其阴离子形式(-O-)、盐或溶剂合物，以及常规受保护形式。
盐
制备、纯化和/或处理所述活性化合物的相应盐(例如，药学上可接受的盐)可为便利的或需要的。药学上可接受的盐的实例论述于Berge 1977中。
例如，如果所述化合物为阴离子性的，或具有可为阴离子性的官能团(例如，-COOH可为-COO-)，则可与合适阳离子形成盐。合适无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子(诸如Na+和K+)、碱土金属阳离子(诸如Ca2+和Mg2+)和其他阳离子(诸如Al+3)。合适有机阳离子的实例包括但不限于铵离子(即，NH4 +)和取代的铵离子(例如NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)。一些合适取代的铵离子的实例为衍生自以下的那些：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苯甲胺、苯基苯甲胺、胆碱、甲葡胺和氨基丁三醇，以及氨基酸(诸如赖氨酸和精氨酸)。常见季铵离子的实例为N(CH3)4 +。
如果所述化合物为阳离子性的，或具有可为阳离子性的官能团(例如，-NH2可为-NH3 +)，则可与合适阴离子形成盐。合适无机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。
合适有机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下有机酸的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡糖庚酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟基乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲烷磺酸、粘液酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛酸、苯基乙酸、苯基磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、丁二酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸和戊酸。合适聚合物有机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下聚合物酸的那些：鞣酸、羧基甲基纤维素。
溶剂合物
制备、纯化和/或处理所述活性化合物的相应溶剂合物可为便利的或需要的。术语“溶剂合物”在本文中以常规含义用于指溶质(例如，活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂为水，则溶剂合物可便利地称作水合物，例如单水合物、二水合物、三水合物等。
异构体
本发明的某些化合物可以一种或多种特定几何、光学、对映异构体、非对映异构体、差向异构体、阻转异构体、立体异构体、互变异构体、构象或异头形式存在，包括但不限于顺-和反-形式；E-和Z-形式；c-、t-和r-形式；内切-和外切-形式；R-、S-和内消旋-形式；D-和L-形式；d-和l-形式；(+)和(-)形式；酮-、烯醇-和烯醇盐-形式；向-和背-形式；顺错-和反错-形式；α-和β-形式；轴向和赤道形式；船-、椅-、扭船-、信封-和半椅-形式；及其组合，下文中统称作“异构体”(或“异构体形式”)。
术语“手性”是指具有镜像伴侣的不可重叠特性的分子，而术语“非手性”是指在其镜像伴侣上可重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有一致化学组成但关于原子或基团在空间中的布置不同的化合物。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心且分子彼此不为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同物理特性，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。非对映异构体的混合物可根据高解析度分析工序，诸如电泳和色谱来分离。
“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，其彼此是不可重叠镜像。
本文中使用的立体化学定义和惯例一般遵循S.P.Parker编,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,NewYork,1994。本发明化合物可含有非对称或手性中心，且因此以不同立体异构体形式存在。预期本发明化合物的所有立体异构体形式形成本发明的一部分，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体，以及其混合物，诸如外消旋混合物。多种有机化合物以光学活性形式存在，即，其具有使平面-偏振光的平面旋转的能力。在描述光学活性化合物时，字首D和L或R和S用于表示所述分子绕其一个或多个手性中心的绝对构型。字首d和l或(+)和(-)用于指示所述化合物使平面-偏振光旋转的符号，其中(-)或l意指所述化合物为左旋的。字首为(+)或d的化合物为右旋的。关于给定的化学结构，这些立体异构体为一致的，只是其彼此为镜像。具体立体异构体还可称作对映异构体，且所述异构体的混合物通常称作对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称作外消旋混合物或外消旋体，其可在化学反应或过程中不具有立体选择或立体特异性的情况下存在。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映异构体物质的等摩尔浓度混合物，其缺乏光学活性。
在本发明中，与R1和Cy结合的碳原子可为立体化学中心，即，当R1不为H且R1和Cy不同时。本发明化合物可为外消旋混合物，或可为对映异构体过量或实质上对映异构体纯的。
注意，除非如下文关于互变异构体形式所论述，否则自如本文所用的术语“异构体”特定地排除结构(或构造)异构体(即，原子之间的连接不同而非仅原子在空间中的位置不同的异构体)。例如，对甲氧基-OCH3的提及不应解释为对其结构异构体羟基甲基-CH2OH的提及。同样，对邻氯苯基的提及不应解释为对其结构异构体间氯苯基的提及。然而，对一类结构的提及可充分包括属于这类的结构异构体形式(例如，C1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基；甲氧基苯基包括邻甲氧基苯基、间甲氧基苯基和对甲氧基苯基)。
上述排除不涉及互变异构体形式，例如酮-、烯醇-和烯醇盐-形式，如在例如以下互变异构体对中：酮/烯醇(说明在下文中)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮和硝基/异硝基。
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术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能障壁互变的具有不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(还称作质子移变互变异构体)包括经由质子迁移实现的互变，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体包括通过一些键结电子的重组实现的互变。
注意，术语“异构体”特定地包括具有一种或多种同位素取代的化合物。例如，H可呈任何同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可呈任何同位素形式，包括12C、13C和14C；O可呈任何同位素形式，包括16O和18O；等。
可并入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如但不限于2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。多种同位素标记的本发明化合物，例如其中并入诸如3H、13C和14C的放射性同位素的那些。所述同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术(诸如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射电脑断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或可用于患者的放射性治疗。氘标记或取代的本发明治疗性化合物可具有改进的DMPK(药物代谢和药物动力学)特性，涉及分布、代谢和排泄(ADME)。用诸如氘的较重同位素取代可提供由较大代谢稳定性引起的某些治疗优势，例如增加的活体内半衰期或降低的剂量需求。18F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。同位素标记的本发明化合物及其前药一般可通过进行公开在方案中或下文所述的实例和制备中的工序通过用可容易获得的同位素标记的试剂取代未同位素标记试剂来制备。此外，用较重同位素、尤其是氘(即，2H或D)取代可提供由较大代谢稳定性引起的某些治疗优势，例如增加的活体内半衰期或降低的剂量需求或治疗指数的改进。应理解，在此上下文中的氘被视为取代基。所述种较重同位素、特别是氘的浓度可通过同位素富集因子定义。在本发明化合物中，未特别指定为特定同位素的任何原子均意欲表示所述原子的任何稳定同位素。
除非另外规定，否则对特定化合物的提及包括所有所述异构体形式，包括(完全地或部分地)其外消旋体和其他混合物。用于所述异构体形式的制备(例如，非对称合成)和分离(例如，分级结晶和色谱手段)的方法在本领域中已知，或可容易地通过以已知方式调适本文所教示的方法或已知方法而获得。
抑制
本发明化合物抑制MYST家族的一种或多种KAT(即，TIP60、KAT6B、MOZ、HBO1和MOF)的活性。
本发明化合物的抑制活性有可能在MYST家族的KAT之间变化。
相较于MYST家族的其他KAT，本发明化合物可选择性地抑制MYST家族的一种或多种KAT的活性，即所述化合物对MYST家族的一种或多种KAT的抑制活性可高于其对MYST家族的一种或多种其他KAT的抑制活性。
本发明化合物可(选择性地)抑制MYST家族的单一KAT的活性。因此，本发明化合物可抑制TIP60、MORF、MOZ、HBO1或MOF的活性。
本发明化合物可抑制MYST家族的两种KAT(例如，MOZ和MORF)的活性。
本发明化合物可抑制MYST家族的三种KAT(例如，MOZ、MORF和HBO1)的活性。
本发明化合物可抑制MYST家族的四种KAT(例如，MOZ、MORF、HBO1和TIP60)的活性。
本发明化合物可抑制MYST家族的所有五种KAT的活性，因此所述化合物可抑制TIP60、MORF、MOZ、HBO1和MOF的活性。
本发明化合物可特别抑制MOZ和/或KAT6B和/或HBO1和/或TIP60的活性。
治疗适应症
本文所公开的化合物可在多种病症中、特别是在癌症的治疗或预防中提供治疗益处。
癌症
通过MYST家族的KAT介导的转译后赖氨酸乙酰化的抑制剂被视为有前景抗肿瘤剂且因此可为有用的治疗剂，例如用于癌症的治疗。所述剂也可用作用于展现MYST蛋白的过表达的癌症的治疗的治疗剂。
“癌症”可为任何形式的癌症。特别地讲，癌症可包括以下中的任一种或多种：白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性骨髓白血病(CML)、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、鳞状细胞癌和胃癌。
或者，所述癌症可包括肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、血癌、骨癌、脑肿瘤、女性生殖系统癌症、男性生殖系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤、宫颈癌、儿童横纹肌肉瘤、儿童肉瘤、子宫内膜癌、子宫内膜肉瘤、食道癌、眼癌、胆囊癌、胃肠道癌、毛细胞白血病、头颈部癌、肝细胞癌、下咽骨癌、卡波西氏肉瘤、肾癌、喉癌、肝癌、恶性纤维性组织细胞瘤、恶性胸腺瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓瘤、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经系统癌症、成神经细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、直肠癌、呼吸系统、视网膜母细胞瘤、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、泌尿系统癌症、子宫肉瘤、阴道癌、血管系统、华氏巨球蛋白血症和/或威尔姆氏肿瘤。
癌症可属特定类型。癌症类型的实例包括淋巴瘤、黑色素瘤、癌瘤(例如，腺癌、肝细胞癌、髓样癌、乳头状癌、鳞状细胞癌)、星形细胞瘤、神经胶质瘤、神经管母细胞瘤、骨髓瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、肉瘤(例如，血管肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤)。
所述癌症可为MYST过表达癌症。所述癌症可相对于非癌组织过表达MYST蛋白。在一些情况下，所述癌症相对于非癌组织过度产生MYST mRNA。过表达的MYST蛋白或MYSTmRNA可为MYST家族的任一KAT，即TIP60、KAT6B、MOZ、HBO1和MOF中的任一种。在一些实施方案中，所述癌症可过表达MYST家族的超过一种KAT，例如选自由TIP60、KAT6B、MOZ、HBO1和MOF组成的组中的两种或更多种。所述癌症可为例如经由肿瘤相关Treg细胞逃避免疫识别的癌症。
或者或另外，所述癌症可为溴区结构域过表达癌症：癌细胞可相对于非癌组织过表达一种或多种含溴区结构域蛋白(本文中称作“溴区结构域蛋白”)。如与非癌组织相比，其可过度产生一种或多种溴区结构域mRNA。在一些情况下，所述细胞中的溴区结构域蛋白和/或mRNA水平处于大约等于非癌细胞的水平的水平下。所述癌症可过表达选自由以下组成的组的一种或多种溴区结构域蛋白；溴区结构域蛋白(即BRD2、BRD3、BRD4、BRD7、BRD8、BRD9和BRDT)、TAF1/TAF1L、TFIID、SMARC2(也称作BRM)和SMARC4(还称作BRG1)。例如，一些结肠癌过表达BRD8。一些急性骨髓白血病细胞过表达BRD4。
作为癌症标靶的Treg细胞
Treg细胞为免疫抑制性细胞，其用于预防健康哺乳动物免疫系统中的自体免疫性。然而，一些癌症用于上调Treg活性以逃避宿主免疫系统。多种肿瘤类型中的Treg浸润与不良患者预后相关且肿瘤模型中的Treg细胞耗尽证明了增加的抗肿瘤免疫反应(Melero2015)。宿主免疫系统的肿瘤相关Treg抑制已报道在肺癌(Joshi 2015),(Tso2012)、乳腺癌(Gobert 2009；Yan 2011)、前列腺癌(Miller 2006)和胰腺癌(Wang X 2016)中。FOXP3被视为Treg细胞的Treg分化、发育和功能的主调控因子。
数项研究已证明，FOXP3的乙酰化在FOXP3蛋白的稳定性中且在调控其接近DNA的能力中发挥关键作用；且FOXP3乙酰化通过KAT介导(Dhuban 2017)。TIP60介导的FOXP3乙酰化的减少已显示减弱Treg发育，表明可以使用MYST蛋白的乙酰化活性的抑制作用来干预诸如癌症的疾病的另外机制。
组合疗法
本文所述的剂可用于与其他抗癌疗法组合。其可与化学疗法或放射疗法，和/或与靶向疗法(包括但不限于FGFR1抑制剂和靶向核激素受体的疗法)协同地起作用。例如，本文所述的剂可用于与溴区结构域靶向药物(包括BET抑制剂)组合。BET抑制剂可逆地结合BET蛋白BRD2、BRD3、BRD4和BRDT的溴区结构域。
抑制MYST家族的KAT蛋白以降低组蛋白(和本文所述的其他核蛋白)的赖氨酸乙酰化程度将有可能通过减弱DNA损伤修复(例如，DNA双链断裂(DSB)的修复)的过程而使肿瘤细胞对化学疗法和放射疗法敏感，因此增加化学疗法和放射疗法诱导的癌细胞死亡的频率。因此，抑制MYST家族的KAT蛋白将有可能用低剂量的化学疗法或放射疗法充分地协同加强。
因此，在一些情况下，本文所公开的MYST蛋白拮抗剂可联合放射治疗或化学治疗方案施用。其与放射疗法和/或化学疗法同时或依序施用。合适化学治疗剂和放射疗法协定将被熟练人员容易地理解。特别地讲，本文所述的化合物可与低剂量的化学疗法或放射疗法组合。用于“低剂量”的化学疗法或放射疗法的适当剂量将被熟练从业者容易地理解。
特别地讲，在本申请的化合物用于消除Treg抑制的情况下，这些化合物可与免疫检查点抑制剂组合(Melero 2015，Wang L 2016)。此外，在消除Treg抑制的本发明化合物可与放射疗法组合使用的情况下，以降低肿瘤中的Treg功能的耗尽(Persa 2015，Jeong2016)
治疗方法
本发明化合物可用于疗法方法中。还提供一种治疗方法，所述方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的本发明化合物。术语“治疗有效量”为足以显示出对患者的益处的量。所述益处可为至少改善至少一种症状。所施用的实际量和施用速率和时程将取决于正治疗的疾病的性质和严重程度。治疗处方(例如，关于剂量的决定)在一般从业者和其他医生的职责内。
如上文所述，本文所定义的抗癌治疗可作为唯一疗法应用，或除了本发明化合物以外，还可涉及常规手术或放射疗法或化学疗法。所述化学疗法可包括抗肿瘤剂的以下分类中的一种或多种：
(i)如用于医学肿瘤学的其他抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，诸如烷基化剂(例如，顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺和亚硝基脲)；抗代谢物(例如，吉西他滨和抗叶酸盐(诸如氟嘧啶，如5氟尿嘧啶)和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、胞嘧啶阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如，长春花生物碱(如长春新碱、长春花碱、长春地辛和长春瑞滨)和紫杉烷类(如紫杉醇和多西他赛(Taxotere))和马球激酶(polokinase)抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康和喜树碱)；
(ii)细胞抑制剂，诸如抗雌激素(例如，他莫昔芬、氟维司琼、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和艾多昔芬)、抗雄激素(例如，比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和乙酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH促效剂(例如，戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如，乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如，阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5*-还原酶抑制剂(诸如非那雄胺)；
(iii)抗侵袭剂(例如c-Src激酶家族抑制剂，如4-(6-氯-2,3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530；国际专利申请WO 01/94341)、N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(达沙替尼，BMS-354825；J.Med.Chem.,2004,47,6658-6661和4-((2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)喹啉-3-甲腈(伯舒替尼，SKI-606；Cancer research(2003),63(2),375-81)，和金属蛋白酶抑制剂(如马立马司他(marimastat))、尿激酶血纤维蛋白溶酶原活化剂受体功能抑制剂或肝素酶抗体)；
(iv)生长因子功能抑制剂：例如，所述抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如，抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinT]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗[Erbitux，C225]和由Stern 2005公开的任何生长因子或生长因子受体抗体；所述抑制剂还包括酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼，OSI774)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)；erbB2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼；肝细胞生长因子家族的抑制剂；血小板源性生长因子家族的抑制剂，诸如伊马替尼；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂，诸如法呢基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY 43-9006))；通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导的抑制剂；肝细胞生长因子家族的抑制剂；c-kit抑制剂；abl激酶抑制剂；IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光激酶抑制剂(例如，AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)；和细胞周期素依赖性激酶抑制剂，诸如CDK2和/或CDK4抑制剂；
(v)抗血管生成和抗淋巴管生成剂，诸如抑制血管内皮生长因子的效应的那些[例如，抗血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)抗体贝伐珠单抗(AvastinT)、抗血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)抗体雷珠单抗、抗VEGF适体培加他尼、抗血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)抗体IMC-3C5、抗血管内皮细胞生长因子C(VEGFC)抗体VGX-100、抗血管内皮细胞生长因子D(VEGFD)抗体VGX-200、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的可溶性形式VGX-300和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(凡德他尼；ZD6474；WO 01/32651内的实施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(西地尼布；AZD2171；WO 00/47212内的实施例240)、瓦他拉尼(PTK787；WO 98/35985)、帕唑帕尼(GW786034)、阿西替尼(AG013736)、索拉非尼和舒尼替尼(SU11248；WO 01/60814)、诸如国际专利申请WO97/22596、WO 97/30035、WO97/32856和WO 98/13354中所公开的那些化合物的化合物和通过其他机制起作用的化合物(例如，利诺胺、整合素avb3功能抑制剂和血管生成抑素)]；
(vi)血管损伤剂，诸如考布他汀A4和公开在国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中的化合物；
(vii)反义疗法，例如针对上文所列出的标靶的那些，诸如ISIS 2503(抗ras反义)；
(viii)基因疗法方法，包括例如置换诸如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的异常基因的方法、GDEPT(基因导向酶前药疗法)方法(诸如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些)和增加患者对化学疗法或放射疗法的耐受性的方法(诸如多重抗药性基因疗法)；和
(ix)免疫疗法方法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内方法(诸如用诸如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子转染)、减少T细胞无反应性的方法、使用诸如细胞因子转染的树突状细胞的转染免疫细胞的方法、使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗个体基因型抗体的方法
施用
所述活性化合物或包含所述活性化合物的药物组合物可通过任何便利施用途径(全身性/外周性或在所需作用位点处)施用到受试者，包括但不限于经口(例如，通过摄取)；表面(包括例如经皮、鼻内、眼、颊和舌下)；肺(例如，通过使用例如气雾剂的吸入或吹入疗法，例如经口或鼻)；直肠；阴道；肠胃外，例如通过注射，包括皮下、皮内、肌肉内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊椎内、囊内、囊下、眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下、玻璃体内和胸骨内；通过储槽植入，例如经皮下、玻璃体内或经肌肉内。所述受试者可为真核生物、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如，小鼠)、犬科动物(例如，犬)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、灵长类动物、猿猴(例如，猴或猿)、猴(例如，狨猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人类。
制剂
虽然所述活性化合物有可能单独施用，但其优选作为药物组合物(例如，制剂)呈现，所述药物组合物包含如上文所定义的至少一种活性化合物，连同一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员熟知的其他材料，和任选的其他治疗或预防剂。
因此，本发明还提供如上文所定义的药物组合物，和制造药物组合物的方法，所述方法包括混合如上文所定义的至少一种活性化合物，连同一种或多种如本文所述的药学上可接受的载剂、赋形剂、缓冲剂、佐剂、稳定剂或其他材料。
如本文所用，术语“药学上可接受”是指在合理医学判断的范围内适合与受试者(例如，人类)组织接触使用而无过量毒性、刺激、过敏性反应或其他问题或并发症，与合理效益/风险比率相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。每种载剂、赋形剂等在与所述制剂的其他成分可相容的意义上也必须为“可接受的”。
合适载剂、赋形剂等可见于标准药学文本，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990中。
所述制剂可便利地以单位剂型呈现且可通过药学技术中熟知的任何方法制备。所述方法包括使所述活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载剂缔合的步骤。一般来讲，所述制剂通过使所述活性化合物与液体载剂或精细分散的固体载剂或两者均匀地且紧密地缔合，然后必要时使产物成型来制备。
制剂可呈液体、溶液、悬浮液、乳液、酏剂、糖浆、片剂、口含锭、颗粒、粉剂、胶囊、药囊、丸剂、安瓿、栓剂、子宫托、软膏、凝胶、糊剂、乳膏、喷雾剂、薄雾、发泡剂、洗剂、油、大丸剂、糖饵剂或气雾剂的形式。
适合经口施用(例如，通过摄取)的制剂可作为诸如胶囊、药囊或片剂的离散单位，各自含有预定量的所述活性化合物；作为粉剂或颗粒；作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳液或油包水液体乳液；作为大丸剂；作为糖饵剂；或作为糊剂呈现。
片剂可通过常规手段，例如任选与一种或多种辅助成分一起压缩或模制而制得。压缩片剂可通过在合适机器中压缩呈自由流动形式的所述活性化合物(诸如粉末或颗粒)来制备，所述活性化合物任选与一种或多种粘合剂(例如，聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨糖醇、黄蓍胶、羟基丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(例如，乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石、二氧化硅)；崩解剂(例如，乙醇酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧基甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或湿润剂(例如，月桂基硫酸钠)；和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)混合。模制片剂可通过在合适机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物而制得。所述片剂可任选包衣或刻痕且可使用例如呈变化比例以提供所需释放特性的羟基丙基甲基纤维素配制以便提供其中活性化合物的缓慢或控制释放。片剂可任选地具备肠溶包衣，以提供除胃以外的肠道部分中的释放。
适合表面施用(例如，经皮、鼻内、眼、颊和舌下)的制剂可配制为软膏、乳膏、悬浮液、洗剂、粉剂、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油。或者，制剂可包含浸渍有活性化合物和任选一种或多种赋形剂或稀释剂的贴片或敷料，诸如绷带或橡皮膏。
适合口中的表面施用的制剂包括口含锭，其包含在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的所述活性化合物；丸粒，其包含在诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶的惰性基质中的所述活性化合物；和漱口水，其包含在合适液体载剂中的所述活性化合物。
适合表面施用到眼睛的制剂还包括滴眼剂，其中所述活性化合物溶解或悬浮于合适载剂、尤其用于所述活性化合物的水性溶剂中。
适合鼻施用的制剂(其中所述载剂为固体)包括具有例如在约20微米至约500微米范围内的特定大小的粗粉，其以其中采取鼻吸的方式施用，即通过经由鼻道自保持紧密接近鼻子的粉末容器快速吸入。用于作为例如鼻喷雾剂、滴鼻剂或通过利用喷雾器进行气雾剂施用来施用的合适制剂(其中所述载剂为液体)包括所述活性化合物的水性或油性溶液。
适合通过吸入施用的制剂包括作为来自加压包装的气雾剂喷雾呈现的那些，使用合适推进剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体。
适合经由皮肤进行表面施用的制剂包括软膏、乳膏和乳液。当在软膏中配制时，所述活性化合物可任选使用石蜡或水可混溶性软膏基质。或者，所述活性化合物可在乳膏中用水包油乳膏基质配制。必要时，所述乳膏基质的水相可包括例如至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或更多个羟基的醇，诸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。所述表面制剂可合乎需要地包含增强所述活性化合物通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。所述皮肤渗透增强剂的实例包括二甲亚砜和相关类似物。
当作为表面乳液配制时，油相可任选仅包含乳化剂(在其他情况下称作利泄剂)，或其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂与充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。还优选的是包括油和脂肪两者。合起来看，具有或不具有稳定剂的乳化剂构成所谓的乳化蜡，且所述蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，所述基质形成乳膏制剂的油性分散相。
合适利泄剂和乳液稳定剂包括Tween 60、Span 80、鲸蜡硬脂醇、肉豆寇醇、甘油单硬脂酸酯和月桂基硫酸钠。用于所述制剂的合适油或脂肪的选择基于实现所需的化妆品特性，因为所述活性化合物在有可能用于药学乳液制剂中的大多数油中的溶解度可极低。因此，所述乳膏应优选地为不油腻、非染色且可洗涤的产品，其具有合适稠度以避免自管或其他容器泄漏。可使用直链或支链、一元或二元烷基酯，诸如二-异己二酸酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或称作Crodamol CAP的支链酯的共混物，后三者为优选的酯。其可单独或组合使用，这取决于所需特性。
或者，可使用高熔点脂质(诸如白色软石蜡)和/或液体石蜡或其他矿物油。
适合直肠施用的制剂可作为具有包含例如可可脂或水杨酸盐的合适基质的栓剂呈现。
适合阴道施用的制剂可作为除所述活性化合物以外还含有如本领域中已知适当的载剂的子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、发泡剂或喷雾制剂呈现。
适合肠胃外施用(例如，通过注射，包括皮肤、皮下、肌肉内、静脉内和皮内)的制剂包括水性和非水性等张、无热原质、无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂和使得所述制剂与预期接受者的血液等张的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，其可包括悬浮剂和增稠剂和设计成使所述化合物靶向血液组分或一个或多个器官的脂质体或其他微粒系统。用于所述制剂中的合适等张媒介物的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸林格氏注射液。典型地，所述活性化合物在所述溶液中的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10ng/ml至约1μg/mL。所述制剂可在单位剂量或多剂量密封容器(例如，安瓿和小瓶)中呈现，且可储存在仅需要在使用之前即刻添加无菌液体载剂(例如，注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。临时注射溶液和悬浮液可自无菌粉剂、颗粒和片剂制备。制剂可呈设计成使所述活性化合物靶向血液组分或一个或多个器官的脂质体或其他微粒系统的形式。
剂量
本领域技术人员应理解，所述化合物和包含所述化合物的组合物的适当剂量可在患者之间变化。确定最佳剂量一般将涉及使治疗益处的水平与任何风险或有害负效应保持平衡。所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于特定化合物的活性、施用途径、施用时间、所述化合物的排泄速率、治疗持续时间、组合使用的其他药物、化合物和/或材料、病状的严重程度和患者的物种、性别、年龄、体重、状况、总体健康状况和先前病史。化合物的量和施用途径最终将在医师、兽医或临床医师的判断下，不过一般来讲，将选择所述剂量以在作用位点处实现局部浓度，所述局部浓度实现所需效应而不会引起实质有害负效应。
施用可在治疗过程中持续地或间歇地(例如，以适当时间间隔分次给药)以一种剂量实现。确定施用的最有效手段和剂量的方法为本领域技术人员所熟知且将随用于疗法的制剂、疗法目的、正治疗的标靶细胞和正治疗的受试者变化。单一或多次施用可以通过治疗医师、兽医或临床医师选择的剂量水平和模式进行。
一般来讲，所述活性化合物的合适剂量在约100ng至约25mg(更典型地，约1μg至约10mg)/每公斤受试者体重/天范围内。在所述活性化合物为盐、酯、酰胺、前药等的情况下，所施用的量基于亲本化合物来计算且因此，待使用的实际重量成比例地增加。
在一个实施方案中，所述活性化合物根据以下剂量方案施用到人类患者：约100mg，每天3次。
在一个实施方案中，所述活性化合物根据以下剂量方案施用到人类患者：约150mg，每天2次。
在一个实施方案中，所述活性化合物根据以下剂量方案施用到人类患者：约200mg，每天2次。
然而，在一个实施方案中，所述活性化合物根据以下剂量方案施用到人类患者：约50mg或约75mg，每天3次或4次。
在一个实施方案中，所述活性化合物根据以下剂量方案施用到人类患者：约100mg或约125mg，每天2次。
治疗
如本文在治疗病状的上下文中所用，术语“治疗”通常是指治疗和疗法，而无论人类或动物(例如，在兽医应用中)，其中实现一些所需治疗效应(例如，所述病状的进展的抑制)，且包括进展速率的降低、进展速率的停止、所述病状的衰退、所述病状的改善和所述病状的治愈。还包括作为预防措施的治疗(即，预防(prophylaxis/prevention))。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指活性化合物或包含活性化合物的材料、组合物或剂型的量，当根据所需治疗方案施用时，所述量有效用于产生一些所需治疗效应，与合理效益/风险比率相称。
同样，如本文所用，术语“预防有效量”是指活性化合物或包含活性化合物的材料、组合物或剂型的量，当根据所需治疗方案施用时，所述量有效用于产生一些所需预防效应，与合理效益/风险比率相称。
受试者/患者
所述受试者/患者可为动物、哺乳动物、有胎盘哺乳动物、有袋动物(例如，袋鼠、袋熊)、单孔类动物(例如，鸭嘴兽)、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如，小鼠)、兔类动物(例如，兔)、禽(例如，鸟)、犬科动物(例如，犬)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、猪(例如，猪)、绵羊(例如，绵羊)、牛(例如，母牛)、灵长类动物、猿猴(例如，猴或猿)、猴(例如，狨猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人类。
此外，所述受试者/患者可为其发育形式中的任一种，例如胎儿。在一个优选实施方案中，所述受试者/患者为人类。
一般合成方法
本发明化合物可通过使用以下一般方法且使用关于实施例详细描述的工序来制备。所提及的反应条件为说明性且非限制性的，例如，本领域技术人员可使用广泛范围的合成方法来合成所需化合物，诸如但不限于文献(例如但不限于March's Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第7版或Larock’s ComprehensiveOrganic Transformations:Comprehensive Organic Transformations:A Guide toFunctional Group Preparations)中描述的方法。
如上文所述的式(l)化合物可通过下文概述的合成策略来制备，其中以上定义适用。
一般合成1
方案1A说明通过使结构G2的相关磺酰氯化合物与伯胺或仲胺(诸如苯并异噁唑胺G3)偶合来形成磺酰胺键以形成具有结构I的化合物。
Figure BDA0002843625830000211
方案1A
形成所述磺酰胺的方法对于本领域技术人员将是显而易知的，但包括例如使用合适的碱(诸如但不限于吡啶、LiHMDS、n-BuLi或NaH)和使用磺酸的活化形式(诸如相应磺酰基卤)。自结构G1的相应酸形成结构G2的磺酰氯可通过例如使用亚硫酰氯或氰尿酰氯来实现。
或者，磺酸的活化形式(诸如但不限于具有结构G5的五氟苯基磺酸酯或三氯苯基磺酸酯)可与相关伯胺或仲胺(诸如苯并异噁唑胺G3)偶合(方案1B)。
Figure BDA0002843625830000212
方案1B
自相应磺酰氯G2和相关酚(R5可为例如五氟苯基或三氯苯基)形成G5中的磺酸酯可使用合适碱(诸如但不限于吡啶或三乙胺)来实现。形成I中的磺酰胺的方法对于本领域技术人员将是显而易知的，但包括例如使用合适碱(诸如但不限于LiHMDS)。
一般合成2
方案2A说明形成磺酰氯(诸如G2)，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分。
Figure BDA0002843625830000221
方案2A
这可通过使具有结构G6的相关芳基化合物与例如但不限于氯磺酸反应来实现。或者，芳基化合物G6可依序用碱(诸如但不限于n-BuLi)和二氧化硫处理以提供芳基亚磺酸锂，所述芳基亚磺酸锂进一步由例如磺酰氯氧化以生成G2中的所需磺酰氯。产物G2可通过本领域技术人员已知的方法分离，或可当场形成且立即用于后续步骤。
另外，G2中的磺酰氯可自方案2B中说明的结构G8中的芳基硫醇形成。
Figure BDA0002843625830000222
方案2B
形成G2的方法包括例如在氯化物来源(诸如但不限于氯三甲基硅烷或亚硫酰氯)存在下使用合适氧化剂(诸如但不限于过氧化氢和硝酸钾)。结构G8的硫醇可通过本领域技术人员已知的方法(包括但不限于在过渡金属存在或不存在下的亲核置换)，自结构G7的化合物(其中(X)可为卤素)合成。
或者，芳基化合物(诸如G6)的磺酰化可生成结构G1的相应磺酸。这可通过本领域技术人员已知的任何合适试剂(例如三氧化硫或硫酸)来实现。
Figure BDA0002843625830000223
方案2C
磺酸G1可通过一般合成1方案1A中概述的方法转化为磺酰氯G2。
一般合成3
方案3A说明自具有邻位取代基X的芳基腈(诸如结构G9)形成苯并异噁唑胺(诸如G3)。基团(X)可为但不限于卤素，诸如氯或氟基，且经选择以适合所用反应。
Figure BDA0002843625830000224
方案3A
例如，起始材料G9可与肟(诸如但不限于丙酮肟)或与例如乙酰氧肟酸在合适碱(诸如但不限于叔丁醇钾)存在下反应，以形成苯并异噁唑胺G3。
一般合成4
Figure BDA0002843625830000231
方案4A
方案4A说明R7基团加成到结构G10的化合物(其中R6表示H或合适保护基，包括但不限于2,4-二甲氧基苯甲基(DMB)；用于移除所述保护基的方法对于本领域技术人员将是已知的(例如，Greene's Protective Groups in Organic Synthesis,第4版))，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分。这可使用本领域技术人员已知的任何合适偶合反应(例如，铃木偶合)来实现。选择基团R7B1和X以适合所用的偶合反应。例如，在铃木偶合反应的情况下，(X)可为卤素、三氟磺酸酯基或其他合适基团且B1表示合适硼化合物，包括但不限于硼酸或硼酸酯。
可用于铃木偶合的B1的实例包括但不限于下文所示的那些。
Figure BDA0002843625830000232
可用于铃木偶合的R7B1化合物的类型包括但不限于下文所示的那些。
Figure BDA0002843625830000233
除了方案4A以外，(X)和(B1)的位置也可如下文在方案4B中所示逆转，以生成相同最终化合物G11。类似于方案2A，选择由R7X和B1表示的基团以适合所用的偶合反应。例如，在铃木偶合反应的情况下，(X)可为卤素、三氟磺酸酯基或其他合适基团且B1表示合适硼化合物，包括但不限于硼酸或硼酸酯。
Figure BDA0002843625830000234
方案4B
除铃木偶合以外，可使用多种偶合反应来引入R7基团，诸如过渡金属催化的偶合反应或例如锡(Stille型反应)和锌(Negishi型反应)化合物。另外，当基团(X)为例如但不限于酚(O-H)或伯胺或仲胺(R’R”N-H)时，可使用Chan-Lam型偶合。
方案4A和4B中所述的转变也可用结构G13中的苯并异噁唑部分上的取代基R1、R2、R3或R4进行，由下文方案4C表示。
Figure BDA0002843625830000241
方案4C
另外，在一般合成3方案3D中，可在腈前体G9上的磺酰胺和苯并异噁唑形成(当R1或R2或R3或R4＝X或B1时)之前引入取代基R7。
一般合成5
方案5A说明加成氮连接的R8基团，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分或在苯并异噁唑部分上以生成结构G16的化合物。这可使用本领域技术人员已知的任何合适偶合反应(例如，通过SnAr置换或Buchwald偶合)来实现。由(X)表示的基团可为但不限于卤素且经选择以适合所用的偶合反应。
Figure BDA0002843625830000242
方案5A
或者，为了合成醚连接的化合物，可如方案5B中所示使用相似策略。这可使用本领域技术人员已知的任何合适偶合反应(例如，通过SnAr或Ullman型偶合)来实现以生成具有结构G17的化合物。
Figure BDA0002843625830000251
方案5B
以上偶合均也可逆转，使得加成的基团为R8-X。
另外，在一般合成3方案3D中，可在腈前体G9上的磺酰胺和苯并异噁唑形成(当R1或R2或R3或R4＝X时)之前引入取代基OR8或NHR8。
一般合成6
Figure BDA0002843625830000252
方案6A
方案6A说明加成胺(HNR10R11)以形成相应酰胺，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分或在苯并异噁唑部分上以生成结构G19的化合物。这可通过使相关羧酸与伯胺或仲胺NHR10R11偶合来实现。形成所述酰胺的方法对于本领域技术人员将是显而易知的，但包括例如使用诸如HATU、HBTU、T3P和EDCI/HOBt的试剂，和使用羧酸的活化形式，诸如相应酰基卤、混合酐或N-羟基丁二酰亚胺酯。酰胺G19还可直接地自酯化合物(当R12＝Alk，诸如但不限于甲基或乙基时)合成。自相应酯形成羧酸(当R12＝H时)可通过例如用碱(诸如碱金属氢氧化物)或酸(例如盐酸水溶液)水解来实现。
可自酰胺化合物G19进行进一步转化，诸如但不限于还原所述酰胺以形成胺或使所述酰胺脱水以形成腈。执行所述转化的方法对于本领域技术人员将是已知的。
另外，在一般合成3方案3D中，可在腈前体G9上的磺酰胺和苯并异噁唑形成(当R1或R2或R3或R4＝CO2R12，R12＝Alk或H时)之前引入酰胺CONR10R11。
一般合成7
方案7A中的结构G20中的(X)转化为结构G18(R12＝烷基，诸如甲基或乙基)中的酯对于本领域技术人员将是显而易知的，但包括例如糖基化反应，其可在诸如但不限于PdCl2dppf.DCM的过渡金属催化剂；和诸如但不限于甲醇或乙醇的醇溶剂存在下通过使用一氧化碳来实现。形成结构G18中的羧酸(R＝H)可通过例如用碱(诸如碱金属氢氧化物)或酸(例如盐酸水溶液)水解来实现。
Figure BDA0002843625830000261
方案7A
可将方案7A中的酯或酸G18还原为羟基化合物，诸如结构G21。用于所述转化的方法对于本领域技术人员将是已知的，但包括例如使用还原剂，诸如氢化锂铝(关于酯和羧酸)和硼烷(关于羧酸)。
可自羟基化合物G21进行进一步转化，诸如但不限于光延或亲核取代反应。执行所述转化的方法对于本领域技术人员将是已知的。
另外，在一般合成3方案3D中，可在腈前体G9上的磺酰胺和苯并异噁唑形成(当R1或R2或R3或R4＝X时)之前引入酯基。
一般合成8
方案8A说明还原结构G22中的硝基以形成结构G23中的相应胺，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分或在苯并异噁唑部分上。
Figure BDA0002843625830000262
方案8A
将硝基还原为伯胺G23对于本领域技术人员将是显而易知的且包括但不限于使用还原条件，诸如在HCl存在下的过渡金属(Fe、In、Zn)、在过渡金属或过渡金属催化剂存在下的氢化。
可自胺化合物G23进行进一步转化，诸如但不限于酰胺键形成。执行所述转化的方法将类似于一般合成6中所述的那些。
另外，在一般合成3方案3D中，可在腈前体G9(当R1或R2或R3或R4＝NO2时)上的磺酰胺和苯并异噁唑形成之前引入氨基。
一般合成9
方案9A说明引入结构G25中的腈基，作为取代基，所述取代基为Ar的一部分或在苯并异噁唑部分上。
Figure BDA0002843625830000271
方案9A
用于所述转化的方法对于本领域技术人员将是显而易见的且包括但不限于SnAr置换或过渡金属催化的与合适氰化物试剂偶合。由结构G24中的(X)表示的基团可为但不限于卤素、三氟甲磺酸酯基或甲磺酸酯基且经选择以适合所用反应。
进一步优选选择
以下优选选择可适合如上所述的本发明的所有方面，或可涉及单一方面。所述优选选择可以任何组合组合在一起。
R1、R2、R3和R4
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为H。在这些实施方案中的一些中，R1、R2、R3和R4中的一个为H。在这些实施方案中的其他中，R1、R2、R3和R4中的两个为H。在这些实施方案中的其他中，R1、R2、R3和R4中的三个为H。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基。
在这些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为C1-3烷基。此外，在这些实施方案中，所述C1-3烷基可为甲基、乙基或丙基。这些基团可未取代。这些基团可被一个或多个氟基取代，且可被全氟化，例如CF3、C2F5。这些基团可被一个、两个、三个、四个或五个氟基取代。在一些实施方案中，这些基团可被一个；一个或两个；或一个、两个或三个氟基取代。
如果所述烷基被取代，则取代基可选自：
(i)羟基；或
(ii)未取代的C1-2烷氧基，即甲氧基、乙氧基；或被一个或多个氟基取代的C1-2烷氧基，例如-OCH2F、-OCH2CF3；或
(iii)NH2；或
(iv)苯基；或
(v)C5-6杂芳基，例如N-吡唑基；或
(vi)C1-4烷基氨基甲酰基，例如NHC(O)Me；或
(vii)酰基酰胺基，例如NHCO2Me。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代。在这些实施方案中，所述C1-3烷氧基可为甲氧基、乙氧基或丙氧基。这些基团可未取代。这些基团可被一个或多个氟基取代，且可被全氟化，例如OCF3、OC2F5。这些基团可被一个、两个、三个、四个或五个氟基取代。在一些实施方案中，这些基团可被一个；一个或两个；或一个、两个或三个氟基取代。所述烷氧基可被C3-6环烷基(例如，环丙基)取代。因此，总体基团可为OCH2(环丙基)。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为C3-6环烷基。在这些实施方案中，所述C3-6环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。具体地讲，所述C3-6环烷基可为环丙基。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为卤基。在这些实施方案中，所述卤基可为氟、氯、溴或碘。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基。在这些实施方案中，所述基团可选自C(O)NH2、C(O)NHCH3和C(O)N(CH3)2。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为氰基、NH2、NO2。在这些实施方案中的一些中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为氰基。在这些实施方案中的其他中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为NH2。在这些实施方案中的其他中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为NO2。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为苯基或C5-6杂芳基，所述基团任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代。在这些实施方案中的一些中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为苯基。在这些实施方案中的其他中，R1、R2、R3和R4中的至少一个可为C5-6杂芳基，例如噁唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基和嘧啶基。所述苯基或C5-6杂芳基可未取代。在某些实施方案中，所述苯基可被甲基、氰基或甲氧基取代。在某些实施方案中，所述C5-6杂芳基可被一个或多个甲基取代，使得总体基团为例如二甲基吡唑基或N-甲基吡唑基。
在一些实施方案中，R4为甲氧基。
在一些实施方案中，R4为甲氧基，R2为CH2OCH3或CH2OCH2CH3且R1和R3为H。
在一些实施方案中，R4为甲氧基，R2为任选被甲基或甲氧基取代的苯基，且R1和R3为H。
在一些实施方案中，R4为甲氧基，R2为任选被甲基取代的C5-6杂芳基。
在一些实施方案中，R4为甲氧基且R1、R2和R3为H。
在一些实施方案中，R4为氯，R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H。
在一些实施方案中，R4为氯且R1、R2和R4为H。
在一些实施方案中，R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
Ar
Ar选自苯基、萘基和C5-10杂芳基，其可未取代或被取代。
在一些实施方案中，Ar为苯基。
在一些实施方案中，Ar为萘基。
在一些实施方案中，Ar为C5-10杂芳基。所述C5-10杂芳基可选自：喹啉基、苯并噻唑基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并呋喃和苯并三唑基。在这些实施方案中的某些中，Ar为喹啉基或苯并噻唑基。
在一些实施方案中，Ar为基团：
Figure BDA0002843625830000291
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或一个或多个氟基取代。在这些实施方案中，所述C1-4烷基可为甲基、乙基、丙基或丁基。这些基团可未取代。这些基团可被一个或多个氟基取代，且可为全氟化的，例如CF3、C2F5。如果所述烷基被取代，则取代基可选自：
(i)羟基；或
(ii)C1-2烷氧基，即甲氧基、乙氧基；或
(iii)NH2；或
(iv)C1-4烷基氨基甲酰基，例如NHC(O)CH3。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为C3-6环烷基。在这些实施方案中，所述C3-6环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。具体地讲，所述C3-6环烷基可为环己基。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基。在这些实施方案中的一些中，所述取代基可为羟基。在这些实施方案中的其他中，所述取代基可为氰基。在这些实施方案中的其他中，所述取代基可为NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基，因此，所述取代基可为NH2、NHCH3或N(CH3)2。在这些实施方案中的其他中，所述取代基可为酰基酰胺基，诸如NHCO2CH3。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为卤基。在这些实施方案中，所述卤基可为氟、氯、溴或碘。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代。在这些实施方案中，所述C1-3烷氧基可为甲氧基、乙氧基或丙氧基。这些基团可未取代。这些基团可被一个或多个氟基取代，且可被全氟化，例如OCF3、OC2F5。所述烷氧基可被羟基取代，使得总体基团为例如OC2H4OH。所述烷氧基可被C(O)NH2取代，使得总体基团为例如OCH2C(O)NH2。所述烷氧基可被C3-6环烷基(例如，环丙基)取代，使得总体基团可为例如OCH2(环丙基)。所述烷氧基可被苯基取代，使得总体基团为例如苯甲氧基。所述烷氧基可被C5-6杂芳基(例如，吡啶基、吡唑基)取代，使得总体基团为例如OCH2(N-甲基吡唑基)或OCH2(甲氧基吡啶基)。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为苯氧基，其任选被氟取代。在这些实施方案中的一些中，所述取代基可为苯氧基。在这些实施方案中的其他中，所述取代基可为OC6H4F。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为苯基或C5-6杂芳基。在这些实施方案中的一些中，所述取代基为苯基。在这些实施方案中的其他中，所述取代基可为C5-6杂芳基，诸如噁唑基或N-吡唑基。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为SF5或SO2CH3。在这些实施方案中的一些中，所述取代基为SF5。在这些实施方案中的其他中，所述取代基为SO2Me。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3。所述取代基在Ar为苯基时为尤其相关的，且与苯基形成部分不饱和的稠环。因此，Ar可为四氢化萘基(即稠合环己烷)、茚满基(即稠合环戊烷)、色满基(即稠合四氢吡喃)或二氢苯并呋喃基。
在一些实施方案中，关于Ar的取代基为C1-4烷基酯。在这些实施方案中的一些中，所述取代基为C(O)OCH3。在这些实施方案中的其他中，所述取代基为C(O)OC(CH3)3。
Ar的某些实施方案可由式(Ar-1)表示：
Figure BDA0002843625830000311
其中Y为N或C-RA4，且Z为N或C-RA5；且
RA1、RA2、RA3、RA4(如果存在的话)和RA5(如果存在的话)独立地选自H和关于Ar的任选取代基。
在一些实施方案中，RA2为乙基。
在一些实施方案中，RA3选自环烷基；苯氧基；苯基；C5-6杂芳基；SF5；和SO2CH3。
在一些实施方案中，Ar为5-乙基-2-甲氧基苯基。
在一些实施方案中，Ar为5-CF3-2-甲氧基苯基。
在一些实施方案中，Ar为2,6-二甲氧基苯基。
在一些实施方案中，Ar为喹啉基。这些化合物可显示针对HBO1的选择性活性。
在一些实施方案中，R4为甲氧基，R2选自CH2O CH3、CH2O CH2CH3和任选取代的苯基，且Ar为2,6-二甲氧基苯。这些化合物可显示针对MOZ和MORF的特定活性。其中R2选自CH2OCH3和CH2OCH2CH3的化合物可显示针对MOZ和MORF的选择性活性。
在一些实施方案中，关于其中R1、R2、R3和R4为H的化合物，则Ar不为4-氨基苯基。
在一些实施方案中，关于其中R1、R2、R3和R4为H的化合物，则Ar不为2,4,6-三甲基苯基。
在一些实施方案中，关于其中R1、R2和R4为H且R3为CF3的化合物，则Ar不为2-(二氟甲氧基)苯基。
在一些实施方案中，关于其中R1、R2、R3和R4为H的化合物，则Ar不为4-氟-3-甲基-苯基。
在一些实施方案中，关于其中R1、R2和R3为H且R4为甲氧基的化合物，则Ar不为未取代的萘基。
特定关注的化合物包括实施例的那些。
具体实施方式
实施例
提供以下实施例以仅说明本发明且不意欲限制如本文所述的本发明的范围。
首字母缩略词
为方便起见，多种化学部分使用熟知缩写来表示，包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、N-丙基(nPr)、异丙基(iPr)、N-丁基(nBu)、叔丁基(tBu)、苯基(Ph)、苯甲基(Bn)、甲氧基(MeO)、乙氧基(EtO)、三甲基硅烷基(TMS)和乙酰基(Ac)。
为方便起见，多种化合物使用熟知缩写来表示，包括但不限于甲醇(MeOH)、氘化甲醇(甲醇-d4)、乙醇(EtOH)、异丙醇(i-PrOH)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸(AcOH)、乙腈(MeCN或ACN)、二氯甲烷(dichloromethane/methylene chloride，DCM)、三氟乙酸(TFA)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、氘化丙酮(丙酮-d6)、氘化氯仿(CDCl3)、氘化二甲亚砜(DMSO-d6)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、三乙胺(Et3N或TEA)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA或DIEA)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯钯(II)(PdCl2(dppf))、反-二氯双(三苯膦)钯(II)(PdCl2(PPh3)2)、三(二亚苯甲基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)、四(三苯膦)钯(0)(Pd(PPh3)4)、2,4-二甲氧基苯甲基(DMB)、石油醚(Pet.醚)、双(三甲基硅烷基)氨基化锂(LHMDS或LiHMDS)、双(三甲基硅烷基)氨基化钾(KHMDS)、双(三甲基硅烷基)氨基化钠(NaHMDS)、正丁基锂(n-BuLi)、N-溴丁二酰亚胺(NBS)、N-氯丁二酰亚胺(NCS)、对甲苯磺酸吡啶(PPTS)、偶氮双异丁腈(AIBN)、四甲基乙二胺(TMEDA)、氯化叔丁基二甲基硅烷(TBSCl)、四-正丁基氟化铵(TBAF)和偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)。
另外，TLC是指薄层色谱法。
其他缩写：保持时间(rt或Rt)、分钟(min)、小时(h)、室温(RT)、浓(conc.)、大气压(atm)、水性(aq.)、饱和(sat.)、当量(eq.)。
一般实验细节
除非另外规定，否则以下一般化适用。1H NMR光谱记录在Bruker UltrashieldPlus(400MHz)或Bruker AVANCE III(400MHz)上。信号的多重性由以下缩写指定：s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；p，五重峰；dd，双重峰的双重峰；dt，三重峰的双重峰；tt，三重峰的三重峰；br，宽峰；m，多重峰。所有观察到的偶合常数J均以赫兹(Hz)报道。始终未观察到可交换的质子。
LCMS数据使用Agilent 6100系列单一四极(LCMS-A)、Agilent 1260 Infinity系列UPLC/MS(LCMS-B)、Agilent 1200(LCMS-C和LCMS-D)、Waters 2695 alliance(LCMS-E)、Agilent 6120单一四极(LCMS-F)或质量导向HPLC-MS产生。氯同位素被报道为35Cl，溴同位素被报道为79Br或81Br或79Br/81Br两者。
LCMS方法A(LCMS-A)：
仪器：Agilent 6100系列单一四极LC/MS
Agilent 1200系列HPLC
泵：1200系列G1311A四元泵
自动取样器：1200系列G1329A热固定自动取样器
检测器：1200系列G1314B可变波长检测器
LC条件：
反相HPLC分析
管柱：Luna C8(2)5μm 50×4.6mm
Figure BDA0002843625830000331
管柱温度：30℃
注射体积：5μL
溶剂A：水0.1％甲酸
溶剂B：MeCN 0.1％甲酸
梯度：历经10分钟5-100％溶剂B
检测：254nm或214nm
MS条件：
离子源：四极
离子模式：多模-ES
干燥气体温度：300℃
汽化器温度：200℃
毛细管电压(V)：2000(正)
毛细管电压(V)：4000(负)
扫描范围：100-1000
步长：0.1秒
采集时间：10分钟
LCMS方法B(LCMS-B)：
仪器：Agilent 1260 Infinity系列UPLC/MS
泵：1260 Infinity G1312B二元泵
自动取样器：1260 Infinity G1367E 1260 HiP ALS
检测器：1290 Infinity G4212A 1290 DAD
LC条件：
反相HPLC分析
管柱：Poroshell 120 EC-C18 2.7μm 50×3.0mm
管柱温度：35℃
注射体积：1μL
溶剂A：水0.1％甲酸
溶剂B：MeCN 0.1％甲酸
梯度：历经3.8分钟5-100％溶剂B
检测：在254nm和214nm下监测
MS条件：
离子源：四极
离子模式：API-ES
干燥气体温度：350℃
毛细管电压(V)：3000(正)
毛细管电压(V)：3000(负)
扫描范围：100-1000
步长：0.1秒
采集时间：5分钟
LCMS方法C(LCMS-C)：
LC模型：Agilent 1200
(泵类型：二元泵，检测器类型：DAD)
MS模型：Agilent G6110A四极
LC条件：
管柱：Xbridge-C18，2.5μm，2.1×30mm
管柱温度：30℃
波长采集：214nm、254nm
流动相：A：0.07％HCOOH水溶液，B：MeOH
MS条件：
MS：离子源：ES+(或ES-)MS范围：50-900m/z
裂解电压：60 干燥气流：10升/分钟
喷雾器压力：35psi 干燥气体温度：350℃
Vcap：3.5kV
梯度表：
Figure BDA0002843625830000351
样品制备：
样品以约0.11-1mg/mL浓度溶解在甲醇中，然后经由具有0.22μm的注射器过滤器过滤。(注射体积：1-10μL)
LCMS方法D(LCMS-D)：
LC模型：Agilent 1200
(泵类型：二元泵，检测器类型：DAD)
MS模型：Agilent G6110A四极
LCMS条件：
LC：管柱：Xbridge-C18，2.5μm，2.1×30mm
管柱温度：30℃
波长采集：214nm、254nm
流动相：A：0.07％HCOOH水溶液，B：MeOH
MS条件：
MS：离子源：ES+(或ES-)MS范围：50-900m/z
裂解电压：60 干燥气流：10升/分钟
喷雾器压力：35psi 干燥气体温度：350℃
Vcap：3.5kV
梯度表：
Figure BDA0002843625830000361
样品制备：
样品以约0.11-1mg/mL浓度溶解在甲醇中，然后经由具有0.22μm的注射器过滤器过滤。(注射体积：1-10μL)
LCMS方法E(LCMS-E)：
设备信息：
LC模型：Waters 2695 alliance
(泵类型：四元泵，检测器：2996光电二极管阵列检测器)
MS模型：Micromass ZQ
LC条件：
LC：管柱：Xbridge-C18，3.5μm，2.1×50mm
管柱温度：30℃
波长采集：214nm、254nm
流动相：A：0.07％HCOOH水溶液，B：MeOH
MS条件：
MS：离子源：ES+(或ES-)MS范围：50-900m/z
毛细管：3kV锥孔：3V提取器：3V
干燥气流：600升/小时锥孔：50升/小时
去溶剂化温度：300℃
源温度：100℃
梯度表：
Figure BDA0002843625830000371
样品制备：
样品以约0.11-1mg/mL浓度溶解在甲醇中，然后经由具有0.22μm的注射器过滤器过滤。(注射体积：1-10μL)
LCMS方法F(LCMS-F)
仪器：Agilent 6120系列单一四极LC/MS
Agilent 1200系列HPLC
泵：1200系列G1311A四元泵
自动取样器：1200系列G1329A热固定自动取样器
检测器：1200系列G1314B可变波长检测器
LC条件：
反相HPLC分析
管柱：Luna C8(2)5μm 50×4.6mm
Figure BDA0002843625830000372
管柱温度：30℃
注射体积：1-10μL
溶剂A：水0.1％甲酸
溶剂B：MeCN 0.1％甲酸
梯度：历经10分钟0-95％溶剂B
检测：254nm或214nm
MS条件：
离子源：四极
离子模式：多模-ES和APCI
干燥气体温度：250℃
汽化器温度：200℃
毛细管电压(V)：4000(正)
毛细管电压(V)：4000(负)
扫描范围：100-1000
步长：0.1秒
采集时间：10分钟
制备型质量导向HPLC
仪器：
Waters ZQ 3100-质量检测器
Waters 2545-泵
Waters SFO系统流体整理器
Waters 2996二极管阵列检测器
Waters 2767样品管理器
LC条件：
反相HPLC分析
管柱：XBridge TM C18 5μm 19×50mm
注射体积500μL
溶剂A：水0.1％甲酸
溶剂B：乙腈0.1％甲酸
梯度：历经10分钟25-100％B
流动速率：19毫升/分钟
检测：100-600nm
MS条件：
离子源：单一-四极
离子模式：ES正
源温度：150℃
去溶剂化温度：350℃
检测：离子计数
毛细管(KV)-3.00
锥孔(V)：30
提取器(V)：3
RF透镜(V)：0.1
扫描范围：100-1000Amu
扫描时间：0.5秒
采集时间：10分钟
气流
去溶剂化升/小时-650
锥孔升/小时-100
制备型HPLC(prep.HPLC)：
仪器类型：Varian 940-LC系列；
泵类型：四元泵；
检测器类型：二极管阵列检测器
HPLC条件：
Waters Sunfire prep C18 OBD，5μm 19×100mm管柱，用含0.07％TFA的水中的MeOH的梯度以15毫升/分钟的流动速率洗脱。采集波长214nm、254nm。
在Merck硅胶60F254覆铝板上执行分析型薄层色谱法，所述板使用在UV光下的荧光淬灭或基础KMnO4浸渍液或Ninhydrin浸渍液肉眼观察。
执行制备型薄层色谱法(制备型TLC或prep.TLC)，其中使用Tklst(China)，主要级别：(HPTLC)：8±2μm>80％；(TLC)：10-40μm。类型：GF254。通过UV(254nm)肉眼观察化合物。
使用Biotage Isolera纯化系统执行柱色谱法，所述纯化系统使用Grace或
Figure BDA0002843625830000393
二氧化硅筒或具有Tklst(China)，主要级别，100-200目硅胶。
使用CEM Explorer SP微波反应器实现微波照射。
必要时，无水溶剂购自Sigma-Aldrich或使用常规方法干燥。
除非另外规定，否则用浓HCl或HCl水溶液进行酸化。
所用的额外筒如下：
相分离器：
制造商：Biotage
产品：
Figure BDA0002843625830000392
相分离器(3mL，除非另外规定)
Si-胺筒：
制造商：Biotage
产品：
Figure BDA0002843625830000391
NH2，1g/6mL
或
制造商：Silicycle
产品：Si-胺500mg或1g
合成中间体
i)6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I4
Figure BDA0002843625830000401
a)4-氰基-5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯I1
将4-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈(3.5g，16.4mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(668mg，0.82mmol)和Et3N(5.0g，49.1mmol)在MeOH(80mL)中的混合物在100℃下在CO气氛(0.2MPa)下加热过夜。添加额外Pd(dppf)Cl2·DCM(340mg，0.4mmol)且继续在CO气氛(0.2MPa)下加热过夜。通过过滤移除催化剂，用MeOH洗涤且在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至10/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.4g，74％)。LCMS-D：Rt 2.48min；m/z 216.1[M+Na]+。
b)2-氟-4-(羟基甲基)-5-甲基苯甲腈I2
在室温下在N2下向4-氰基-5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯I1(2.4g，12.4mmol)在无水THF(20mL)中的溶液中逐滴添加LiBH4(THF中的2.0M溶液，12.4mL，24.8mmol)且将混合物在回流下加热持续2小时。将反应用水(80mL)淬灭且将混合物用EtOAc(90mL×3)提取。将组合的有机提取物用水(100mL×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至10/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.6g，79％)。LCMS-D：Rt 1.43min；m/z 166.1[M+H]+，188.1[M+Na]+。
c)2-氟-4-(甲氧基甲基)-5-甲基苯甲腈I3
在0℃下向2-氟-4-(羟基甲基)-5-甲基苯甲腈I2(800mg，8.8mmol)和碘甲烷(3.4g，24.2mmol)在DMF(12mL)中的溶液中添加NaH(油中的60％w/w分散液，379mg，9.7mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续30分钟。添加水且将混合物用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至10/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(660mg，76％)。LCMS-D：Rt 2.44min；m/z 180.1[M+H]+，202.1.1[M+Na]+。
d)6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I4
在0℃下向乙酰氧肟酸(792mg，10.6mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(1.2g，10.6mmol)且将混合物在室温下搅拌持续2小时。然后添加2-氟-4-(甲氧基甲基)-5-甲基苯甲腈I3(630mg，3.5mmol)且将混合物在60℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc(80mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1至10/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.0g，77％)。LCMS-D：Rt 1.75min；m/z 193.1[M+H]+。
ii)4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9
Figure BDA0002843625830000411
a)4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5
向4-溴-2,6-二氟苯甲腈(6.0g，27.5mmol)在THF(100mL)中的溶液中添加甲醇钠(1.5g，55.0mmol)且将混合物在室温下搅拌持续48小时。添加水且将混合物用EtOAc(150mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝300/1至200/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.3g，68％)。LCMS-D：Rt 2.53min；m/z251.8/253.8[M+Na]+。
b)4-氰基-3-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯I6
将4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(4.3g，18.7mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(768mg，0.94mmol)和Et3N(5.7g，56.1mmol)在MeOH(50mL)中的混合物在100℃下在CO气氛(0.2MPa)下加热过夜。通过过滤移除催化剂，用MeOH洗涤且在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝200/1至50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(2.9g，74％)。LCMS-D：Rt 2.41min；m/z 210.0[M+H]+，232.0[M+Na]+。
c)2-氟-4-(羟基甲基)-6-甲氧基苯甲腈I7
在室温下在N2下向LiBH4(THF中的2.0M溶液，13.9mL，27.8mmol)在无水THF(60mL)中的溶液中逐滴添加4-氰基-3-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯I6(2.9g，13.9mmol)在无水THF(10mL)中的溶液且将混合物在回流下加热持续1小时。将反应用1M HCl水溶液淬灭且用EtOAc(100mL×3)提取。将组合的有机提取物用水(100mL×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(2.5g，100％)。LCMS-D：Rt 2.31min；m/z182.1[M+H]+，204.1[M+Na]+。
d)2-氟-6-甲氧基-4-(甲氧基甲基)苯甲腈I8
在0℃下分成小份向2-氟-4-(羟基甲基)-6-甲氧基苯甲腈I7(2.7g，14.9mmol)和碘甲烷(10.6g，74.5mmol)在DMF(100mL)中的溶液中添加NaH(油中的60％w/w分散液，1.2g，29.8mmol)且将混合物在室温下搅拌持续30分钟。添加水且将混合物用EtOAc(100mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.2g，76％)。LCMS-D：Rt 2.22min；m/z 218.0[M+Na]+。
e)4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9
在室温下向乙酰氧肟酸(2.3g，30.8mmol)在无水DMF(1500mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(3.5g，30.8mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-6-甲氧基-4-(甲氧基甲基)苯甲腈I8(2.0g，10.3mmol)且在室温下继续搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1至10/1至3/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(580mg，27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.92(d,J＝0.8Hz,1H),6.65(s,1H),5.91(s,2H),4.48(s,2H),3.90(s,3H),3.32(s,3H,被水峰遮蔽)。LCMS-D：Rt 1.33min；m/z 209.0[M+H]+。
iii)4-硝基苯并[d]异噁唑-3-胺I10
Figure BDA0002843625830000421
向2-氟-6-硝基苯甲腈(1.0g，6.17mmol)在DMF/H2O(32mL/32mL)中的溶液中添加乙酰氧肟酸(2.78g，37.0mmol)和K2CO3(10.23g，74.0mmol)且将混合物在70℃下加热持续19小时。添加水(200mL)且将混合物用EtOAc(100mL×3)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝30/1至1/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(380mg，35％)。LCMS-D：Rt 2.82min；m/z180.1[M+H]+。
iv)4-甲氧基-6-(1-甲氧基乙基)苯并[d]异噁唑-3-胺I15
Figure BDA0002843625830000431
a)4-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I11
向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(2.0g，8.7mmol)在THF(40mL)中的溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(3.4g，9.6mmol)、Pd(PPh3)4(201mg，0.174mmol)和LiCl(1.15g，27.0mmol)且将混合物在回流下在N2下加热持续48小时。将所述混合物用EtOAc稀释且用水、5％氢氧化铵水溶液和盐水连续地洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝200/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(1.6g，84％)。LCMS-C：Rt 2.41min；m/z 222.0[M+H]+。
b)4-乙酰基-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I12
向4-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I11(1.0g，4.5mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加2M HCl水溶液(6.0mL)且将混合物在室温下搅拌持续3小时。将所述混合物用乙醚稀释且用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(710mg，81％)。LCMS-C：Rt 1.42min；m/z 194.0[M+H]+。
c)2-氟-4-(1-羟基乙基)-6-甲氧基苯甲腈I13
向4-乙酰基-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I12(700mg，3.6mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加硼氢化钠(206mg，5.4mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈无色油状的标题化合物(675mg，95％)。LCMS-C：Rt 0.98min；m/z 196.0[M+H]+。
d)2-氟-6-甲氧基-4-(1-甲氧基乙基)苯甲腈I14
在0℃下分成小份向2-氟-4-(1-羟基乙基)-6-甲氧基苯甲腈I13(670mg，3.4mmol)和碘甲烷(1.5g，10.3mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加NaH(油中的60％w/w分散液，274mg，6.8mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续2小时。添加水且将混合物用EtOAc(40mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(650mg，90％)。LCMS-C：Rt 1.95min；m/z 210.0[M+H]+。
e)4-甲氧基-6-(1-甲氧基乙基)苯并[d]异噁唑-3-胺I15
在0℃下向乙酰氧肟酸(698mg，9.3mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(1.04g，9.3mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后逐滴添加2-氟-6-甲氧基-4-(1-甲氧基乙基)苯甲腈I14(650mg，3.1mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝300/1至200/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(130mg，19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90(s,1H),6.64(s,1H),5.92(s,2H),4.39(q,J＝6.4Hz,1H),3.90(s,3H),3.15(s,3H),1.36(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS-C：Rt 0.73min；m/z 223.0[M+H]+。
v)4-甲氧基-6-苯基苯并[d]异噁唑-3-胺I17
Figure BDA0002843625830000441
a)3-氟-5-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-甲腈I16
在N2下向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(6.0g，26.1mmol)和苯基硼酸(6.36g，52.2mmol)在1,4-二噁烷(200mL)和水(50mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(2.99g，2.66mmol)和Na2CO3(8.29g，78.2mmol)且将混合物在100℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至50/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(5.45g，93％)。LCMS-C：Rt 2.48min；m/z 228.0[M+H]+。
b)4-甲氧基-6-苯基苯并[d]异噁唑-3-胺I17
在0℃下向乙酰氧肟酸(8.15g，23.98mmol)在无水DMF(200mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(5.5g，24.0mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加3-氟-5-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-甲腈I16(5.45g，7.99mmol)且将混合物在60℃下加热持续4小时。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至8/1至6/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.2g，38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79–7.74(m,2H),7.52–7.46(m,2H),7.45–7.39(m,1H),7.26(d,J＝1.1Hz,1H),6.95(s,1H),5.97(s,2H),4.00(s,3H)。LCMS-C：Rt 2.15min；m/z 241.0[M+H]+
vi)3-(3-氨基-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-6-基)苯酚I19
Figure BDA0002843625830000451
a)3-氟-3'-羟基-5-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-甲腈I18
在N2下向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(650mg，2.8mmol)和(3-羟基苯基)硼酸(1.2g，5.6mmol)在1,4-二噁烷(40mL)和水(10mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(327mg，0.28mmol)和Na2CO3(899mg，8.5mmol)且将混合物在100℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(687mg，94％)。LCMS-C：Rt 2.07min；m/z 244.0[M+H]+。
b)3-(3-氨基-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-6-基)苯酚I19
在0℃下向乙酰氧肟酸(636mg，8.5mmol)在无水DMF(60mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(952mg，8.5mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加3-氟-3'-羟基-5-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-甲腈I18(687mg，2.8mmol)且将混合物在60℃下加热持续4小时。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(282mg，39％)。LCMS-C：Rt 2.3min；m/z 257.0[M+H]+。
vii)6-(乙氧基甲基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I21
Figure BDA0002843625830000452
a)4-(乙氧基甲基)-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I20
在0℃下分成小份向2-氟-4-(羟基甲基)-6-甲氧基苯甲腈I7(1.15g，6.4mmol)和碘乙烷(5.0g，31.7mmol)在DMF(40mL)中的溶液中添加NaH(油中的60％w/w分散液，508mg，12.7mmol)且将混合物在室温下搅拌持续30分钟。添加水且将混合物用EtOAc(100mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.0g，79％)。LCMS-C：Rt 2.15min；m/z 210.0[M+H]+。
b)6-(乙氧基甲基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I21
在室温下向乙酰氧肟酸(1.1g，14.3mmol)在无水DMF(50mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(1.6g，14.3mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加4-(乙氧基甲基)-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I20(1.0g，4.8mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1至10/1至3/1)纯化以生成呈黄色油状的标题化合物(650mg，61％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.92(s,1H),6.65(s,1H),5.91(s,2H),4.53(s,2H),3.89(s,3H),3.51(q,J＝7.0Hz,2H),1.17(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS-C：Rt 0.82min；m/z 223.0[M+H]+。
viii)6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I22
Figure BDA0002843625830000461
在室温下向乙酰氧肟酸(2.0g，26.1mmol)在无水DMF(100mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(2.9g，26.1mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(2.0g，8.7mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(296mg，14％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32(d,J＝1.2Hz,1H),6.90(d,J＝1.2Hz,1H),6.04(s,2H),3.92(s,3H)。LCMS-C：Rt1.4min；m/z 244.0[M+H]+。
ix)7-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I26
Figure BDA0002843625830000462
a)2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I23
将3-溴-2-氟苯甲腈(3.0g，15.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼戊环)(11.4g，45mmol)、乙酸钾(5.9g，60.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(2.2g，3.0mmol)在DMSO(45mL)和1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在105℃下在N2下加热持续3小时。将所述混合物用EtOAc(30mL)稀释且用水(30mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.9g，>100％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)2-氟-3-羟基苯甲腈I24
在N2下向2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I23(1.9g，7.6mol)在AcOH(19mL)中的溶液中逐滴添加H2O2(30％水溶液，1.9mL)且将混合物在室温下搅拌持续2小时，然后倾入EtOAc和过量Na2SO3水溶液的混合物中。然后分离各层且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈灰白色蜡状固体的标题化合物(650mg，62％)。LCMS-D：Rt 0.93min；m/z 138.1[M+H]+。
c)3-乙氧基-2-氟苯甲腈I25
向2-氟-3-羟基苯甲腈I24(360mg，2.6mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(4.3g，13.1mmol)和碘乙烷(1.0g，6.6mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用EtOAc(80mL)稀释且用水(50mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(220mg，51％)。LCMS-D：Rt 2.31min；m/z 166.1[M+H]+。
d)7-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I26
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(300mg，4.0mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(450mg，4.0mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。添加3-乙氧基-2-氟苯甲腈I25(220mg，1.3mmol)在DMF(10mL)中的溶液且将混合物在30℃下加热过夜。添加EtOAc(80mL)且将混合物用水(50mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(170mg，70％)。LCMS-D：Rt 1.68min；m/z 179.1[M+H]+。
x)7-(环丙基甲氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I28
Figure BDA0002843625830000471
a)3-(环丙基甲氧基)-2-氟苯甲腈I27
向2-氟-3-羟基苯甲腈I24(360mg，2.6mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(4.3g，13.1mmol)、KI(87mg，0.5mmol)和(溴甲基)环丙烷(880mg，6.6mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc(80mL)且将混合物用水(50mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈红色固体状的标题化合物(150mg，30％)。LCMS-D：Rt2.54min；m/z 192.1[M+H]+。
b)7-(环丙基甲氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I28
根据关于7-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I26步骤d所述的工序，自3-(环丙基甲氧基)-2-氟苯甲腈I27制备。LCMS-D：Rt 2.23min；m/z 205.1[M+H]+。
xi)6-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I32
Figure BDA0002843625830000481
a)2-氟-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯甲腈I29
在N2下向2-氟-4-羟基苯甲腈(20g，145.9mmol)和PPTS(733mg，2.9mmol)在DCM(500mL)中的溶液中添加3,4-二氢-2H-吡喃(24.5g，292mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/0至100/2)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(27g，83％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I30
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(13.7g，182.3mmol)在DMF(60mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(20.4g，182.3mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯甲腈I29(13.4g，60.8mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc(500mL)且将混合物用水(100mL×5)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(12.1g，85％)。LCMS-D：Rt 2.31min；m/z 235.1[M+H]+。
c)3-氨基苯并[d]异噁唑-6-醇I31
向6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I30(3.5g，15mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加2M HCl水溶液(20mL)且将混合物在室温下搅拌持续3小时。将所述混合物用EtOAc(300mL)稀释且用水(×2)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(2.1g，94％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
d)6-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I32
将3-氨基苯并[d]异噁唑-6-醇I31(300mg，2mmol)、Cs2CO3(2.0g，6mmol)、KI(66mg，0.4mmol)和溴乙烷(436mg，4mmol)在DMF(30mL)中的混合物在50℃下在N2下加热过夜。将混合物用EtOAc(300mL)稀释且用水(100mL×5)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(270mg，76％)。LCMS-D：Rt 0.37min；m/z 179.0[M+H]+。
xii)6-(环丙基甲氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I33
Figure BDA0002843625830000491
根据关于6-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I32步骤d所述的工序，自3-氨基苯并[d]异噁唑-6-醇I31制备(395mg，97％)。LCMS-D：Rt 2.27min；m/z 205.1[M+H]+。
xiii)6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I36
Figure BDA0002843625830000492
a)4-叠氮基-2-氟苯甲腈I34
将4-氨基-2-氟苯甲腈(2.0g，14.7mmol)在水(4mL)、ACN(32mL)和浓HCl(10mL)中的混合物在室温下在N2下搅拌过夜。然后逐份添加NaNO2(2.0g，29.4mmol)且在室温下继续搅拌持续2小时。将混合物冷却到0℃，逐份添加NaN3(1.9g，29.4mmol)且在室温下继续搅拌持续2小时。添加水(50mL)且在减压下移除大多数有机溶剂。然后将剩余水性混合物用DCM(50mL×4)提取且将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/0至20/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.5g，62％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯甲腈I35
将4-叠氮基-2-氟苯甲腈I34(500mg，3.1mmol)、乙炔基三甲基硅烷(454mg，4.6mmol)和CuI(704mg，3.7mmol)在THF(50mL)中的混合物在50℃下在N2下加热持续24小时。添加额外乙炔基三甲基硅烷(454mg，4.6mmol)且将混合物在50℃下再加热持续24小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至10/1)纯化以生成2-氟-4-(5-(三甲基硅烷基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯甲腈(410mg)，将其溶解在TBAF在THF(50mL)中的1M溶液中且在45℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(200mg，34％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I36
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(239mg，3.16mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(357mg，3.18mmol)且将混合物在室温下搅拌持续2小时。然后添加2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯甲腈I35(200mg，1.06mmol)在DMF(15mL)中的溶液且在室温下继续搅拌过夜。添加EtOAc(100mL)且将混合物用水(×5)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(150mg，70％)。LCMS-D：Rt 0.47min；m/z 202.1[M+H]+。
xiv)6-(嘧啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I39
Figure BDA0002843625830000501
a)2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I37
将4-溴-2-氟苯甲腈(1.0g，5.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼戊环)(1.3g，5.0mmol)、乙酸钾(5.9g，20.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(2.0g，1.0mmol)在DMSO(50mL)和1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在105℃下在N2下加热持续3小时。将混合物用EtOAc(200mL)稀释且用水(100mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/0至50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.1g，89％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)2-氟-4-(嘧啶-2-基)苯甲腈I38
在N2下向2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I37(464mg，2mmol)和2-溴嘧啶(736mg，4mmol)在水(40mL)、甲苯(40mL)和i-PrOH(10mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(146mg，0.2mmol)和K3PO4·3H2O(1.33g，5.0mmol)且将混合物在85℃下加热持续4小时。将所述混合物用EtOAc(200mL)稀释且用水(50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(270mg，68％)。LCMS-D：Rt 2.38min；m/z 200.1[M+H]+。
c)6-(嘧啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I39
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(306mg，4.07mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(457mg，4.07mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。然后添加2-氟-4-(嘧啶-2-基)苯甲腈I38(270mg，1.36mmol)在DMF(10mL)中的溶液且在30℃下继续加热过夜。将混合物用EtOAc(100mL)稀释且用水(50mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(200mg，69％)。LCMS-D：Rt 0.38min；m/z 213.1[M+H]+，235.1[M+Na]+。
xv)5-溴苯并[d]异噁唑-3-胺I40
Figure BDA0002843625830000511
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(23.7g，0.315mol)在DMF(800mL)中的溶液中添加t-BuOK(35.4g，0.315mol)且将混合物在15℃下搅拌持续2小时。然后添加5-溴-2-氟苯甲腈(21.0g，0.105mol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用EtOAc(1.5L)稀释且用水(400mL×4)洗涤。将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(19g，86％)。LCMS-D：Rt 2.13min；m/z 212.9/214.9[M+H]+。
xvi)4-溴苯并[d]异噁唑-3-胺I41
Figure BDA0002843625830000512
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(11.25g，0.15mol)在DMF(220mL)中的溶液中添加t-BuOK(16.8g，0.15mol)且将混合物在25℃下搅拌持续1小时。然后逐滴添加2-溴-6-氟苯甲腈(10.0g，0.05mol)在DMF(80mL)中的溶液且在25℃下继续搅拌过夜。将混合物用水(200mL)稀释且用EtOAc(400mL)提取。将有机提取物用水(400mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈浅红色固体状的标题化合物(7.0g，66％)。LCMS-D：Rt2.05min；m/z 212.9/214.9[M+H]+。
xvii)4-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I42
Figure BDA0002843625830000521
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(2.25g，30mmol)在DMF(80mL)中的溶液中添加t-BuOK(3.37g，30mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。然后添加2-氟-6-(三氟甲基)苯甲腈(1.89g，10mmol)在DMF(20mL)中的溶液且在30℃下继续加热过夜。将混合物分配在EtOAc(300mL)与水(100mL)之间，分离各层且将有机层用水(100mL×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至1/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.3g，64％)LCMS-D：Rt 2.19min；m/z 203.0[M+H]+。
xviii)5-溴-4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺I44
Figure BDA0002843625830000522
a)3-溴-2-氯-6-氟苯甲腈I43
在0℃下在N2下向2-氯-6-氟苯甲腈(1.0g，6.4mmol)在三氟甲烷磺酸(10mL)中的溶液中添加NBS(1.1g，6.4mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物倾于冰上且用EtOAc(30mL×2)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝200/1至100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(705mg，47％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-溴-4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺I44
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(5.1g，67.8mmol)在DMF(150mL)中的溶液中添加t-BuOK(7.6g，6.4mmol)且将混合物在室温下搅拌持续2小时。然后添加3-溴-2-氯-6-氟苯甲腈I43(5.3g，22.6mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用EtOAc(500mL)稀释且用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.1g，52％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
xix)5-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I48
Figure BDA0002843625830000531
a)3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲酸I45
在-78℃下在N2下向二异丙胺(5.4g，53.7mmol)在THF(150mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，23.4mL，58.5mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续1小时。将所得混合物在-78℃下逐滴添加到1-溴-4-氟-2-甲氧基苯(10.0g，48.8mmol)在THF(50mL)中的溶液中且继续搅拌持续90分钟。CO2在-78℃下在搅拌下鼓泡通过所述混合物持续20分钟，然后使其温至室温且搅拌持续15分钟。将混合物用HCl调节到pH＝1且将所述混合物用水稀释且用DCM(500mL)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1至30/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(8.0g，66％)。LCMS-D：Rt 2.12min；m/z 248.9/250.9[M+H]+。
b)3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲酰胺I46
将3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲酸I45(8.0g，32.1mmol)和SOCl2(30mL)的混合物在85℃下加热持续3小时。将所述混合物在减压下浓缩且将残余物溶解在DCM(5mL)中且在0℃下逐滴添加到浓NH4OH(20mL)中。使混合物温至室温，搅拌持续20分钟，然后用DCM(50mL×3)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至1/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(6.8g，80％)。LCMS-E：Rt 2.24min；m/z 247.8/249.8[M+H]+
c)3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲腈I47
将3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲酰胺I46(6.8g，25.6mmol)和SOCl2(30mL)的混合物在80℃下加热过夜，然后在减压下浓缩。将残余物分配在水与EtOAc之间，分离各相且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至20/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(3.5g，55％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
d)5-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I48
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(3.4g，45.7mmol)在DMF(150mL)中的溶液中添加t-BuOK(5.1g，45.7mmol)且将混合物在室温下搅拌持续90分钟。然后添加3-溴-6-氟-2-甲氧基苯甲腈I47(3.5g，15.2mmol)在DMF(30mL)中的溶液且将混合物在70℃下加热过夜。将所述混合物用EtOAc(1000mL)稀释且用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.2g，86％)。LCMS-D：Rt 2.24min；m/z 243.0/244.9[M+H]+。
xx)4-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I51
Figure BDA0002843625830000541
a)2-(溴甲基)-6-氯苯甲腈I49
将2-氯-6-甲基苯甲腈(2.0g，13.2mmol)、NBS(2.5g，13.8mmol)和AIBN(660mg，4.0mmol)在CCl4(60mL)中的混合物在85℃下在N2下加热持续过夜。将所述混合物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.7g，37％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)2-氯-6-(甲氧基甲基)苯甲腈I50
将钠金属(115mg，4.8mmol)溶解在MeOH(5mL)和THF(5mL)中且将混合物在室温下搅拌持续20分钟。然后添加2-(溴甲基)-6-氯苯甲腈I49(560mg，2.4mmol)且将混合物在室温下搅拌持续5小时。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(340mg，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75–7.70(m,3H),4.82(s,2H),3.35(s,3H)。
c)4-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I51
在-78℃下在N2下向乙酰氧肟酸(422mg，5.6mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加t-BuOK(630mg，5.6mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后添加2-氯-6-(甲氧基甲基)苯甲腈I50(340mg，1.9mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，然后在85℃下加热过夜。将所述混合物用水(70mL)稀释且用EtOAc(100mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(200mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOA＝5/1至3/1)纯化以生成呈浅黄色油状的标题化合物(105mg，31％)。LCMS-D：Rt 1.57min；m/z 179.1[M+H]+。
xxi)4-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I53
Figure BDA0002843625830000551
a)2-乙氧基-6-氟苯甲腈I52
将2-氯-6-羟基苯甲腈(2.0g，14.6mmol)、K2CO3(6.04g，43.8mmol)和溴乙烷(2.38g，21.9mmol)在DMF(4mL)中的混合物在室温下在N2下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(300mL)稀释，用水(100mL×5)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.6g，67％)。LCMS-E：Rt 5.24min；m/z 166.1[M+H]+。
b)4-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I53
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(2.18g，29mmol)在DMF(40mL)中的溶液中添加t-BuOK(3.26g，29mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-乙氧基-6-氟苯甲腈I52(1.6g，9.7mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用DCM(80mL)稀释，用水(60mL×4)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(240mg，15％)。LCMS-E：Rt 5.05min；m/z179.0[M+H]+。
xxii)5-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I54
Figure BDA0002843625830000552
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(1.49mg，19.8mmol)在DMF(35mL)中的溶液中添加t-BuOK(2.23mg，19.8mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。然后添加2-氟-5-甲氧基苯甲腈(1.0g，6.6mmol)在DMF(5mL)中的溶液且将混合物在30℃下加热过夜。将所述混合物用水(70mL)稀释且用EtOAc(100mL×3)提取。将组合的有机提取物用水(200mL×3)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(110mg，11％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
xxiii)5-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I57
Figure BDA0002843625830000553
a)2-氟-5-羟基苯甲腈I55
将2-氟-5-甲氧基苯甲腈(1.7g，1.2mmol)和吡啶·HCl(17g)的混合物在80℃下在N2下加热持续5小时，然后用DCM(40mL)稀释且用2M HCl水溶液(8mL)和水(2×40mL)洗涤。将有机层用K2CO3水溶液(50mL×2)提取且将组合的水性提取物用DCM(70mL×2)洗涤，然后用2M HCl水溶液调节到pH 3-4且用DCM(80mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈灰白色固体状的标题化合物(430mg，28％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙氧基-2-氟苯甲腈I56
向2-氟-5-羟基苯甲腈I55(430mg，3.1mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加K2CO3(1.3g，9.4mmol)且将混合物在室温下在N2下搅拌持续30分钟。然后添加溴乙烷(512mg，4.7mmol)且在室温下继续搅拌过夜。将混合物用水(70mL)稀释且用EtOAc(100mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(200mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝30/1至20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(480mg，92％)。LCMS-D：Rt 2.44min；m/z 166.0[M+H]+188.0[M+Na]+。
c)5-乙氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I57
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(645mg，8.7mmol)在DMF(35mL)中的溶液中添加t-BuOK(978mg，8.7mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。然后添加5-乙氧基-2-氟苯甲腈I56(480mg，2.9mmol)在DMF(5mL)中的溶液且将混合物在30℃下加热过夜。将所述混合物用水(60mL)稀释且用EtOAc(80mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(150mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(400mg，77％)。LCMS-D：Rt 2.02min；m/z 179.1[M+H]+。
xxiv)6-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I59
Figure BDA0002843625830000561
a)2-氯-4-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯甲腈I58
将3,5-二甲基-1H-吡唑(5g，0.052mol)、NaH(油中的60％分散液，2.6g，0.065mol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氯-4-氟苯甲腈(6.74g，0.043mol)在DMF(50mL)中的溶液且在室温下继续搅拌持续1小时。将反应用水淬灭且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(11.0g，92％)。LCMS-D：Rt 2.58min；m/z 232.1[M+H]+。
b)6-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I59
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(972mg，12.9mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加t-BuOK(1.45g，12.9mmol)且将混合物在30℃下加热持续1小时。然后添加2-氯-4-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯甲腈I58(1g，4.3mmol)且将混合物在60℃下加热持续5小时。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(MeOH/DCM＝1/20)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(150mg，15％)。LCMS-D：Rt 2.22min；m/z 229.1[M+H]+。
xxv)5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I60
Figure BDA0002843625830000571
向乙酰氧肟酸(8.33g，0.11mol)在DMF(200mL)中的溶液中添加t-BuOK(12.5g，0.11mol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-5-甲基苯甲腈(5g，0.37mol)且将混合物在60℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩且残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝200/1至50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.0g，55％)。LCMS-D：Rt 1.75min，m/z 149.0[M+H]+。
xxvi)6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I62
Figure BDA0002843625830000572
a)2-氟-4-(甲氧基甲基)苯甲腈I61
将MeI(2.0g，13.2mmol)和NaH(油中的60％分散液，790mg，19.8mmol)在THF(50mL)中的混合物在0℃下搅拌持续10分钟，然后添加2-氟-4-(羟基甲基)苯甲腈(2.0g，13.2mmol)且将混合物在室温下搅拌持续2小时。将反应用水淬灭且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.7g，78％)。LCMS-D：Rt 2.01min；m/z166.0[M+H]+187.9[M+Na]+。
b)6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I62
向乙酰氧肟酸(1.5g，9.1mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加t-BuOK(3.06g，27.2mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-4-(甲氧基甲基)苯甲腈I61(1.5g，9.1mmol)且将混合物在40℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至10/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1g，62％)。LCMS-D：Rt 0.95min，m/z 179.0[M+H]+。
xxvii)5-(三氟甲氧基)苯并[d]异噁唑-3-胺I63
Figure BDA0002843625830000581
向乙酰氧肟酸(2.2g，0.029mol)在DMF(50mL)中的溶液中添加t-BuOK(3.28g，0.029mol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲腈(2g，9.75mmol)且将混合物在60℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.6g，75％)。LCMS-D：Rt2.43min；m/z 219.0[M+H]+。
xxviii)5-甲基-6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I65
Figure BDA0002843625830000582
a)2-氟-5-甲基-4-(噁唑-2-基)苯甲腈I64
在-70℃下在N2下向噁唑(90mg，1.31mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，1.1mL，2.66mmol)且将混合物搅拌持续10分钟。添加固体ZnCl2(380mg，2.79mmol)且使混合物温至室温。添加4-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈(200mg，0.93mmol)且将混合物在60℃下加热过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc 10/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(50mg，27％)。LCMS-D：Rt 2.51min；m/z 203.0[M+H]+。
b)5-甲基-6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I65
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(189mg，2.52mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加t-BuOK(377mg，3.26mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-5-甲基-4-(噁唑-2-基)苯甲腈I64(170mg，0.84mmol)且将混合物在50℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(90mg，50％)。LCMS-D：Rt2.10min；m/z 216.0[M+H]+。
xxix)7-溴苯并[d]异噁唑-3-胺I66
Figure BDA0002843625830000591
在0℃下向乙酰氧肟酸(3.75g，0.05mol)在DMF(60mL)中的溶液中添加t-BuOK(5.6g，0.05mol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后逐滴添加3-溴-2-氟苯甲腈(5.0g，0.025mol)在DMF(90mL)中的溶液且在室温下继续搅拌过夜。将混合物用DCM(300mL)稀释，用水(250mL×4)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(4.0g，63％)。LCMS-D：Rt 2.09min，m/z 213.0/215.0[M+H]+。
xxx)7-(嘧啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I68
Figure BDA0002843625830000592
a)2-氟-3-(嘧啶-2-基)苯甲腈I67
将2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I23(1.5g，6.1mmol)、2-溴嘧啶(1.9g，12.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.3g，1.8mmol)和K3PO4(6.5g，24.2mmol)在水(60mL)、甲苯(60mL)和i-PrOH(15mL)中的混合物在85℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物用EtOAc(50mL)稀释且用水(80mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝4/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(450mg，38％)。LCMS-E：Rt 4.82min；m/z 199.9[M+H]+。
b)7-(嘧啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I68
在0℃下在N2下向乙酰氧肟酸(243mg，3.2mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加t-BuOK(363mg，3.2mmol)且将混合物搅拌持续1小时。然后逐滴添加2-氟-3-(嘧啶-2-基)苯甲腈I67(400mg，1.6mmol)在DMF(5mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用EtOAc(80mL)稀释且用水(60mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(230mg，67％)。LCMS-D：Rt 0.80min，m/z 213.1[M+H]+。
xxxi)6-(1H-吡唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I70
Figure BDA0002843625830000601
a)2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲腈I69
将4-溴-2-氟苯甲腈(400mg，2.0mmol)、1H-吡唑(177mg，2.6mmol)、CuI(381mg，2.0mmol)、K3PO4(849mg，4.0mmol)和(1S,2S)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(28mg，0.2mmol)在DMF(20mL)中的混合物在微波中在100℃下加热持续1小时。将所述混合物分配在EtOAc(200mL)与水(100mL)之间，分离各层且将有机层用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(120mg，32％)。LCMS-D：Rt 2.20min，m/z 188.1[M+H]+。
b)6-(1H-吡唑-1-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I70
在0℃下向乙酰氧肟酸(215mg，2.9mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加t-BuOK(322mg，2.9mmol)且将混合物在30℃下加热持续2小时。然后添加2-氟-4-(1H-吡唑-1-基)苯甲腈I69(120mg，0.64mmol)且将混合物在30℃下加热过夜。将所述混合物分配在EtOAc(100mL)与水(50mL)之间，分离各层且将有机层用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(72mg，57％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
xxxii)6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I72
Figure BDA0002843625830000602
a)2-氯-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯甲腈I71
将2H-1,2,3-三唑(553mg，8.0mmol)和NaH(油中的60％分散液，192mg，4.8mmol)在DMF(20mL)中的混合物在0℃下搅拌持续30分钟，然后添加2-氯-4-氟苯甲腈(622mg，4.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌持续2小时，然后使其温至室温且搅拌持续2小时。将所述混合物分配在EtOAc(300mL)与水(100mL)之间，分离各层且将有机层用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(200mg，24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31–8.28(m,3H),8.19–8.14(m2H)。
b)6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I72
在0℃下向乙酰氧肟酸(221mg，2.9mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加t-BuOK(330mg，2.9mmol)且将混合物在30℃下加热持续2小时。然后添加2-氯-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯甲腈I71(200mg，0.98mmol)且将混合物在30℃下加热过夜。将所述混合物分配在EtOAc(100mL)与水(50mL)之间，分离各层且有机层用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(90mg，46％)。LCMS-D：Rt 1.93min，m/z 202.1[M+H]+。
xxxiii)6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I74
Figure BDA0002843625830000611
a)2-氟-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I73
将2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I37(494mg，2.0mmol)、2-溴吡啶(948mg，6.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(293mg，0.4mmol)和K3PO4·3H2O(2.66g，10.0mmol)在H2O(40mL)、甲苯(40mL)和i-PrOH(10mL)中的混合物在85℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物分配在EtOAc(200mL)与水(30mL)之间，分离各层且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝30/1至10/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(190mg，48％)。LCMS-D：Rt2.32min，m/z 199.1[M+H]+。
b)6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I74
在0℃下向乙酰氧肟酸(216mg，2.88mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加t-BuOK(323mg，2.88mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I73(190mg，0.96mmol)在DMF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物分配在EtOAc(200mL)与水(50mL)之间，分离各层且将有机层用水(50mL×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/0至100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(105mg，52％)。LCMS-D：Rt 0.83min，m/z212.1[M+H]+。
xxxiv)6-溴苯并[d]异噁唑-3-胺I75
Figure BDA0002843625830000621
在0℃下向乙酰氧肟酸(13.7g，182mmol)在DMF(60mL)中的溶液中添加t-BuOK(20.5g，182mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后添加4-溴-2-氟苯甲腈(12.2g，60.8mmol)在DMF(30mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物分配在EtOAc(500mL)与水(200mL)之间，分离各层且将有机层用水(×2)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(8.1g，63％)。LCMS-D：Rt 2.34min；m/z 213.0/215.0[M+H]+。
xxxv)4-甲氧基-6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I77
Figure BDA0002843625830000622
a)2-氟-6-甲氧基-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I76
将4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(244mg，1.06mmol)、吡啶-2-基硼酸(195mg，1.59mmol)、CuCl(105mg，1.06mmol)、Pd(OAc)2(24mg，0.106mmol)、XPhos(100mg，0.212mmol)和Cs2CO3(1.38g，4.24mmol)在DMF(10.6mL)中的混合物在100℃下在20mL密封管中在氮气气氛下加热持续16小时。将所述反应以相同规模再重复三次且四次反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭，组合且用EtOAc(80mL×3)提取。将组合的有机提取物用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(190mg，20％)。LCMS-C：Rt 2.13min；m/z 229.0[M+H]+。
b)4-甲氧基-6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I77
在0℃下向乙酰氧肟酸(178mg，2.37mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(266mg，2.37mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-6-甲氧基-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I76(180mg，0.79mmol)且将混合物在40℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝200/1至100/1至60/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(70mg，37％)。LCMS-C：Rt 0.52min；m/z 242.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73–8.68(m,1H),8.14–8.09(m,1H),7.95–7.88(m,1H),7.70(d,J＝1.0Hz,1H),7.46(s,1H),7.44–7.38(m,1H),6.01(s,2H),4.01(s,3H)。
xxxvi)4-甲氧基-7-苯基苯并[d]异噁唑-3-胺I80
Figure BDA0002843625830000631
a)3-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I78
将Br2(507mg，3.2mmol)在CCl4(4.0mL)中的溶液在-10℃下经30分钟的时间添加到2-氟-6-甲氧基苯甲腈(480mg，3.2mmol)和Fe(8.0mg，0.1mmol)在CCl4(4.0mL)中的溶液中，然后使混合物温至室温且搅拌过夜。将所述混合物分配在水与EtOAc之间，分离各层且将有机层用饱和Na2SO3水溶液(×2)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(580mg，80％)。LCMS-C：Rt 2.12min；m/z 229.9[M+H]+。
b)2-氟-4-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-甲腈I79
在N2下向3-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I78(600mg，2.6mmol)、苯基硼酸(636mg，5.2mmol)和Na2CO3(829mg，7.8mmol)在1,4-二噁烷(40mL)和水(10mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(300mg，0.26mmol)且将混合物在100℃下加热过夜。将所述混合物分配在水与EtOAc之间，分离各层且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(538mg，90％)。LCMS-C：Rt 2.43min；m/z 228.0[M+H]+。
c)4-甲氧基-7-苯基苯并[d]异噁唑-3-胺I80
在室温下向乙酰氧肟酸(533mg，7.11mmol)在无水DMF(30mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(797mg，7.11mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-4-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-甲腈I79(538mg，2.37mmol)且将混合物在60℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至5/1)纯化以生成呈橙色固体状的标题化合物(413mg，72％)。LCMS-C：Rt 1.33min；m/z 209.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84–7.79(m,2H),7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.7Hz,2H),7.38–7.32(m,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),4.00(s,3H)。
xxxvii)4-甲氧基-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I82
Figure BDA0002843625830000641
a)2-氟-6-甲氧基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈I81
在N2下向3-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I78(720mg，3.31mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(1.30g，6.26mmol)和Na2CO3(995mg，9.39mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(10mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(358mg，0.30mmol)且将混合物在100℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(485mg，63％)。LCMS-C：Rt 1.26min；m/z 232.0[M+H]+。
b)4-甲氧基-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I82
在室温下向乙酰氧肟酸(474mg，6.24mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(700mg，6.24mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-6-甲氧基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈I81(485mg，2.04mmol)且将混合物在60℃下加热过夜。添加水且将混合物用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝50/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(225mg，45％)。LCMS-C：Rt 0.46min；m/z 245.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),6.74(d,J＝8.2Hz,1H),6.00(s,2H),3.91(s,3H),3.90(s,3H)。
xxxviii)5-氯-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I83
Figure BDA0002843625830000642
向4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(300mg，1.4mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NCS(192mg，1.4mmol)且将混合物在50℃下加热持续2小时。将所述混合物用EtOAc(100mL)稀释且用H2O(40mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝7/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(190mg，54％)。LCMS-C：Rt 1.21min；m/z 242.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32(s,1H),6.19(s,2H),4.55(s,2H),3.93(s,3H),3.41(s,3H)。
xxxix)4-甲氧基-6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I86
Figure BDA0002843625830000651
a)2-(三丁基锡烷基)噁唑I84
在-78℃下在N2下向噁唑(500mg，7.25mmol)在THF(15mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，2.9mL，7.32mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续30分钟。然后添加三丁基氯锡烷(1.96mL，7.25mmol)且使混合物温至室温且搅拌持续1小时。在减压下移除溶剂且将残余物溶解在己烷(50mL)中。所得沉淀物通过过滤移除且将滤液在减压下浓缩以生成呈无色油状的标题化合物(2.0g，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),7.20(s,1H),1.59–1.49(m,6H),1.31–1.26(m,6H),1.16–1.10(m,6H),0.83(t,J＝7.3Hz,9H)。
b)2-氟-6-甲氧基-4-(噁唑-2-基)苯甲腈I85
向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I5(305mg，1.33mmol)在1,4-二噁烷(25mL)中的溶液中添加2-(三丁基锡烷基)噁唑I84(1.43g，3.98mmol)和Pd(PPh3)4(154mg，0.133mmol)且将混合物在90℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝8/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(370mg，96％)。LCMS-C：Rt 1.86min；m/z 218.9[M+H]+。
c)4-甲氧基-6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I86
在0℃下向乙酰氧肟酸(382mg，5.09mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(570mg，5.09mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-6-甲氧基-4-(噁唑-2-基)苯甲腈I85(370mg，1.7mmol)且将混合物在60℃下加热持续2小时。将所述混合物用EtOAc稀释且用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(100mg，26％)。LCMS-C：Rt 0.57min；m/z 232.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),7.56(s,1H),7.47–7.42(m,1H),7.27(s,1H),6.09(s,2H),4.00(s,3H)。
xl)6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I90
Figure BDA0002843625830000661
a)4-氰基-3-氟苯甲酰氯I87
在0℃下向4-氰基-3-氟苯甲酸(1.0g，6.1mmol)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加DMF(0.1mL)和草酰氯(1.86g，12.1mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除溶剂以生成呈白色固体状的标题化合物(1.2g)，其无需进一步纯化直接地用于下一步骤中。
b)4-氰基-N-(2,2-二甲氧基乙基)-3-氟苯甲酰胺I88
在0℃下向4-氰基-3-氟苯甲酰氯I87(1.1g，6.06mmol)和Et3N(1.84g，18mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加2,2-二甲氧基乙胺(955mg，9.1mmol)且将混合物搅拌持续2小时。将所述混合物倾入水中且用EtOAc提取。将有机提取物用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1，v/v)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.2g，78％)。LCMS-D：Rt 1.55min，m/z 274.9[M+Na]+。
c)3-氨基-N-(2,2-二甲氧基乙基)苯并[d]异噁唑-6-甲酰胺I89
在0℃下向乙酰氧肟酸(448mg，5.95mmol)在DMF(30mL)中的溶液中逐份添加t-BuOK(889mg，7.92mmol)且将混合物搅拌持续1小时。然后添加4-氰基-N-(2,2-二甲氧基乙基)-3-氟苯甲酰胺I88(500mg，1.98mmol)且将混合物在40℃下加热过夜。将所述混合物倾入水中且用EtOAc提取。将有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1，v/v)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(380mg，72％)。LCMS-D：Rt 0.59min，m/z 287.9[M+Na]+。
d)6-(噁唑-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I90
将3-氨基-N-(2,2-二甲氧基乙基)苯并[d]异噁唑-6-甲酰胺I89(240mg，0.9mmol)和P2O5(193mg，1.36mmol)在甲烷磺酸(10mL)中的混合物在微波照射下在150℃下加热持续30分钟。将所述混合物倾入水中，用KOH水溶液制成碱性且用EtOAc提取。将有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1，v/v)纯化以生成呈固体状的标题化合物(50mg，28％)。LCMS-D：Rt 1.57min，m/z 201.9[M+H]+。
xli)5-乙基-1-甲基-2-氧代基-1,2-二氢吡啶-3-磺酰氯I94
Figure BDA0002843625830000671
a)5-乙基-2-甲氧基吡啶I91
在-78℃下在N2下向5-溴-2-甲氧基吡啶(10.2g，54.25mmol)在THF(200mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，24.0mL，60.0mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续1.5小时。然后逐滴添加碘乙烷(12.7g，81.4mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续20分钟，然后温至室温且搅拌持续30分钟。将反应用水(5mL)淬灭且在减压下移除溶剂。将残余物溶解在DCM中，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(2.8g，38％)。LCMS-D：Rt 1.80min；m/z 138.1[M+H]+。
b)5-乙基吡啶-2(1H)-酮I92
将5-乙基-2-甲氧基吡啶I91(1.6g，11.66mmol)在浓HCl(30mL)中的溶液在100℃下加热过夜。将混合物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(800mg，56％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)5-乙基-1-甲基吡啶-2(1H)-酮I93
将5-乙基吡啶-2(1H)-酮I92(800mg，6.5mmol)、K2CO3(1.8g，13mmol)和碘乙烷(1.85g，13mmol)在MeOH(20mL)中的混合物在50℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(500mg，56％)。LCMS-D：Rt 0.68min；m/z 138.1[M+H]+。
d)5-乙基-1-甲基-2-氧代基-1,2-二氢吡啶-3-磺酰氯I94
将氯磺酸(6mL)和5-乙基-1-甲基吡啶-2(1H)-酮I93(0.6g，4.37mmol)的混合物在150℃下在N2下加热持续3小时，然后使其冷却到室温且倾于冰(100g)上。将混合物用DCM(50mL×3)提取且将组合的有机提取物用冰冷水洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1至20/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(200mg，12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87–7.84(m,1H),7.71(s,1H),3.47(s,3H),2.39(q,J＝7.6Hz,2H),1.09(t,J＝7.5Hz,3H)。LCMS-D：Rt 1.58min；m/z 236.0[M+H]+。
xlii)5-溴-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰氯I95
Figure BDA0002843625830000681
将5-溴-2,3-二氢苯并呋喃(2.0g，10mmol)在-5℃下缓慢地添加到氯磺酸(6mL)中且将混合物在-5℃下搅拌持续30分钟。将所述混合物倾入冰冷水(100mL)中且用EtOAc(180mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(250mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝15/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.45g，48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80–7.76(m,1H),7.63–7.58(m,1H),4.91(m,2H),3.35(m,2H)。LCMS-D：Rt 2.74min；m/z 318.8/320.8[M+Na]+。
xliii)4,6-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-5-磺酰氯I98
Figure BDA0002843625830000682
a)5,7-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮I96
将3-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸(5g，23.8mmol)和甲烷磺酸(24mL)的混合物在90℃下加热持续10分钟，然后使其冷却到室温且倾入水中。将混合物用10M KOH水溶液调节到pH9且用EtOAc(×5)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(3.5g，76％)。LCMS-D：Rt 1.76min；m/z193.1[M+H]+。
b)4,6-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚I97
将5,7-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮I96(3.0g，15.6mmol)和三乙基硅烷(7.3g，62.4mmol)在TFA(20mL)中的混合物在室温下在N2下搅拌持续11小时。将混合物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(2.0g，72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42(s,1H),6.29(d,J＝2.0Hz,1H),3.81(s,3H),3.80(s,3H),2.89(t,J＝7.5Hz,2H),2.80(t,J＝7.3Hz,2H),2.13–2.02(m,2H)。
c)4,6-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-5-磺酰氯I98
在-70℃下向4,6-二甲氧基-2,3-二氢-1H-茚I97(1g，5.6mmol)和TMEDA(0.72g，6.17mmol)在正己烷(20mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M，2.5mL，6.17mmol)且使混合物温至0℃且搅拌持续2小时。然后将所述混合物再冷却到-65℃，用SO2气体鼓泡持续20分钟，然后使其缓慢地温至10℃。所得沉淀物通过过滤收集且用无水乙醚洗涤。将固体悬浮在正己烷(20mL)中，冷却到0℃且逐滴添加SO2Cl2(0.83g，6.2mmol)。将混合物在0℃下在N2下搅拌持续1小时，然后过滤。将滤饼溶解在乙醚中且用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(550mg，35％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.72(s,1H),3.95(s,3H),3.94(s,3H),2.96(q,J＝7.6Hz,4H),2.18–2.08(m,2H)。
xliv)2-甲氧基-5-苯氧基苯磺酰氯I100
Figure BDA0002843625830000691
a)2-甲氧基-5-苯氧基苯磺酸I99
在0℃下向1-甲氧基-4-苯氧基苯(2g，10mmol)在DCM(15mL)中的溶液中逐滴添加氯磺酸(0.35mL)在DCM(10mL)中的溶液且将混合物在0℃下搅拌持续15分钟。将所述混合物缓慢地倾入冰冷水(100mL)中，然后在减压下浓缩。残余物用DCM(100mL×2)冲洗且干燥以生成呈灰白色固体状的标题化合物(560mg，40％)。LCMS-D：Rt 0.62min；m/z 281.0[M+H]+。
b)2-甲氧基-5-苯氧基苯磺酰氯I100
将2-甲氧基-5-苯氧基苯磺酸I99(250mg，0.9mmol)和PCl5(284mg，1.3mmol)在POCl3(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续1小时。然后将所述混合物缓慢地添加到冰冷水(20mL)中且用DCM(15mL×2)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈黄色油状的标题化合物(51mg，18％)。LCMS-D：Rt2.72min；m/z 295.0[M-Cl+OCH3]+，317.0[M-Cl+OCH3+Na]+。
xlv)2,6-二甲氧基-3-(三氟甲基)苯磺酰氯I102
Figure BDA0002843625830000692
a)2,4-二甲氧基-1-(三氟甲基)苯I101
在0℃下向(2,4-二甲氧基苯基)硼酸(3.0g，16.5mmol)、CF3SO2Na(18.0g，115.4mmol)、Cu(OAc)2(748mg，4.1mmol)、咪唑(281mg，4.1mmol)、2,4,6-三甲基吡啶(3.0g，33.0mmol)和NH4Cl(11.3g，206.0mmol)在水(16.5mL)和DCM(100mL)中的混合物中逐滴添加t-BuOOH(3.6mL，4.1mmol)且将混合物在室温下搅拌持续16小时。然后分离各层且将水层用DCM提取。将组合的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚)纯化以生成呈油状的标题化合物(900mg，27％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42–7.36(m,1H),6.45–6.37(m,2H),3.79(s,3H),3.76(s,3H)。
b)2,6-二甲氧基-3-(三氟甲基)苯磺酰氯I102
在-78℃下在N2下向2,4-二甲氧基-1-(三氟甲基)苯I101(1.5g，7.3mmol)和TMEDA(0.93g，8.0mmol)在正己烷(30mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M，3.2mL，8.0mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后将SO2气体在-78℃下鼓泡通过所述混合物持续20分钟，然后使其温至0℃且搅拌持续1小时。将所得沉淀物通过过滤收集且用己烷洗涤。将滤饼悬浮在正己烷(30mL)中，冷却到0℃且逐滴添加SO2Cl2(1.1g，8.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌持续1小时且通过过滤收集固体且用冷正己烷洗涤。将滤饼溶解在乙醚中且用水洗涤。将水相用乙醚提取且将组合的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(1.5g，68％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90–7.84(m,1H),6.98–6.92(m,1H),4.09(s,3H),4.04(s,3H)。
xlvi)3-乙基-2,6-二甲氧基苯磺酰氯I106
Figure BDA0002843625830000701
a)2,4-二甲氧基-1-乙烯基苯I103
将1-溴-2,4-二甲氧基苯(4.0g，18.4mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(3.4g，22.1mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(753mg，0.92mmol)和K2CO3(7.6g，55.2mmol)在1,4-二噁烷(40mL)和水(10mL)中的悬浮液在90℃下在N2下加热过夜。将混合物经硅藻土垫过滤且用EtOAc冲洗。将滤液用水稀释且用EtOAc(60mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚)纯化以生成呈黄色油状的标题化合物(2.6g，86％)。LCMS-D：Rt 2.28min；m/z 165.0[M+H]+。
b)乙基-2,4-二甲氧基苯I104
向2,4-二甲氧基-1-乙烯基苯I103(2.6g，15.8mmol)在EtOAc(50mL)中的溶液中添加10％Pd/C(300mg)且将混合物在室温下在H2气氛下搅拌过夜。催化剂通过经硅藻土过滤移除且用EtOAc冲洗。将滤液在减压下浓缩以生成呈黄色油状的标题化合物(2.0g，83％)。LCMS-D：Rt 2.39min；m/z 167.1[M+H]+。
c)3-乙基-2,6-二甲氧基苯磺酸I105
根据关于2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111所述的工序，自乙基-2,4-二甲氧基苯I104制备。发现所获得的产物主要为3-乙基-2,6-二甲氧基苯磺酸。LCMS-D：Rt 2.36min；m/z247.0[M+H]+。
d)3-乙基-2,6-二甲氧基苯磺酰氯I106
将3-乙基-2,6-二甲氧基苯磺酸I105(300mg，1.22mmol)和亚硫酰氯(6mL)的混合物在95℃下加热持续3小时，然后在减压下浓缩以生成呈棕色油状的标题化合物(322mg，100％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
xlvii)7-甲氧基喹啉-8-磺酰氯I107
Figure BDA0002843625830000711
将氯磺酸(1.8g，15.7mmol)在0℃下逐滴添加到7-甲氧基喹啉(500mg，3.14mmol)中且将混合物在100℃下加热持续1小时。将所述混合物冷却到室温，倾于冰上，然后用饱和NaHCO3水溶液中和。将混合物用EtOAc(30mL×3)提取且将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(280mg，34％)。LCMS-D：Rt 0.27min；m/z 239.9[M-Cl+H2O]+
xlviii)6-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-5-磺酰氯I108
Figure BDA0002843625830000712
在-5℃下在N2下向5-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚(3.1g，20.9mmol)在DCM(40mL)中的溶液中逐滴添加氯磺酸(6.5g，62.8mmol)且将混合物在-5℃下搅拌持续40分钟。将反应用冰水(20mL)淬灭且将混合物用EtOAc(30mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(50mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.1g，60％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(d,J＝1.1Hz,1H),6.98(s,1H),4.02(s,3H),2.99(t,J＝7.5Hz,2H),2.91(t,J＝7.4Hz,2H),2.19–2.10(m,2H)。
xlix)3-甲氧基-5,6,7,8-四氢萘-2-磺酰氯I109
Figure BDA0002843625830000713
根据关于6-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-5-磺酰氯I108所述的工序，自6-甲氧基-1,2,3,4-四氢萘和氯磺酸制备且无需纯化直接地用于下一步骤。
l)4-溴-2-甲氧基苯磺酰氯I110
Figure BDA0002843625830000721
将1-溴-3-甲氧基苯(15.0g，80mmol)在-5℃下缓慢地添加到氯磺酸(16mL)中且将混合物在-5℃下搅拌持续5分钟。将所述混合物倾入冰冷水(50mL)中且用EtOAc(80mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(150mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.6g，17％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
li)2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111
Figure BDA0002843625830000722
在0℃下在N2下向1,3-二甲氧基苯(5.0g，36mmol)和TMEDA(4.6g，39.8mmol)在正己烷(100mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，16.0mL，39.8mmol)，同时保持内部反应温度低于5℃。将混合物在0℃下搅拌持续20分钟，然后冷却到-78℃且用SO2气体鼓泡持续20分钟。然后使所述混合物缓慢地温至10℃且将所得沉淀物通过过滤收集且用无水乙醚洗涤。将固体悬浮在正己烷(100mL)中，冷却到0℃且逐滴添加SO2Cl2(4.9g，36mmol)在正己烷(20mL)中的溶液，同时保持内部温度低于3℃。然后将混合物在0℃下搅拌持续1小时且通过过滤收集固体且用冷正己烷洗涤。然后将所述固体分配在乙醚与水之间，分离各层且水层进一步用乙醚提取。组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(4.0g，47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(t,J＝8.4Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,2H),3.97(s,6H)。
lii)5-乙基-2-甲氧基苯磺酰氯I112
Figure BDA0002843625830000723
将1-乙基-4-甲氧基苯(5.0g，37mmol)在0℃下逐滴添加到氯磺酸(20mL)中且将混合物在室温下搅拌持续2小时，然后倾于冰上且用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.6g，53％)。LCMS-D：Rt 2.70min；m/z256.9[M+Na]+。
liii)2,4-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-磺酰氯I114
Figure BDA0002843625830000731
a)2,4-二甲氧基-1,1'-联苯I113
将1-溴-2,4-二甲氧基苯(5.0g，23.0mmol)、苯基硼酸(3.4g，27.6mmol)、Pd(PPh3)4(1.3g，1.15mmol)和碳酸钾(7.3g，69.0mmol)在1,4-二噁烷(30mL)和水(6mL)中的悬浮液在90℃下在N2下加热持续16小时。将混合物经硅藻土垫过滤且用EtOAc洗涤。将滤液用水稀释且用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至10/1)纯化以生成呈黄色油状的标题化合物(2.8g，57％)。LCMS-D：Rt 2.46min；m/z 215.0[M+H]+。
b)2,4-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-磺酰氯I114
在0℃下在N2下向2,4-二甲氧基-1,1'-联苯I113(1.0g，4.70mmol)和TMEDA(601mg，5.20mmol)在正己烷(40mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，2.1mL，5.20mmol)，同时保持内部反应温度低于5℃。将混合物在0℃下搅拌持续20分钟，然后冷却到-70℃且用SO2气体鼓泡持续20分钟。然后使所述混合物缓慢地温至10℃且所得沉淀物通过过滤收集且用无水乙醚洗涤。将固体悬浮在正己烷(40mL)中，冷却到0℃且逐滴添加SO2Cl2(634mg，4.7mmol)在正己烷(5mL)中的溶液，同时保持内部温度低于3℃。然后将混合物在0℃下搅拌持续1小时且通过过滤收集固体且用冷正己烷洗涤。然后将所述固体分配在乙醚与水之间，分离各层且将水层进一步用乙醚提取。将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(590mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48–7.35(m,4H),7.34–7.21(m,2H),6.87(m,1H),3.76(s,3H),3.29(s,3H)。
liv)3,5-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-磺酰氯I116
Figure BDA0002843625830000741
a)3,5-二甲氧基-1,1'-联苯I115
将1-溴-3,5-二甲氧基苯(5.0g，23.0mmol)、苯基硼酸(2.8g，23.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.57g，0.69mmol)和碳酸钾(4.8g，34.6mmol)在1,4-二噁烷(80mL)和水(20mL)中的悬浮液在90℃下在N2下加热持续4小时。将混合物用水稀释，用EtOAc提取且将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝500/1至200/1至100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(5.2g，100％)。LCMS-C：Rt2.47min；m/z 215.0[M+H]+。
b)3,5-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-磺酰氯I116
根据关于2,4-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-磺酰氯I114所述的工序，自3,5-二甲氧基-1,1'-联苯I115制备。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62–7.55(m,2H),7.54–7.44(m,3H),6.81(s,2H),4.04(s,6H)。
lv)4-甲氧基-6-((2,2,2-三氟乙氧基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I118
Figure BDA0002843625830000742
a)2-氟-6-甲氧基-4-((2,2,2-三氟乙氧基)甲基)苯甲腈I117
在0℃下在N2下向2-氟-4-(羟基甲基)-6-甲氧基苯甲腈I7(500mg，2.76mmol)在无水THF(50mL)中的溶液中相继添加NaH(油中的60％w/w分散液，331mg，8.28mmol)、三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(1.9g，8.28mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时，然后使其温至室温且搅拌过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。反应使用2-氟-4-(羟基甲基)-6-甲氧基苯甲腈I7(100mg，0.55mmol)重复两次且将三个批次组合且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(577mg，57％)。LCMS-C：Rt 2.43min；m/z 263.9[M+H]+。
b)4-甲氧基-6-((2,2,2-三氟乙氧基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I118
将乙酰氧肟酸(86mg，1.14mmol)和t-BuOK(128mg，1.14mmol)在无水DMF(10mL)中的悬浮液在室温下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-6-甲氧基-4-((2,2,2-三氟乙氧基)甲基)苯甲腈I117(100mg，0.38mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。反应使用2-氟-6-甲氧基-4-((2,2,2-三氟乙氧基)甲基)苯甲腈I117(400mg，1.52mmol)相应地按比例增加且将两个批次组合且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题产物(350mg，67％)。LCMS-C：Rt 2.08min；m/z 277.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.96(s,1H),6.68(s,1H),5.94(s,2H),4.74(s,2H),4.13(q,J＝9.4Hz,2H),3.90(s,3H)。
lvi)6-(二氟甲氧基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I121
Figure BDA0002843625830000751
a)4-(二氟甲氧基)-2,6-二氟苯甲腈I119
在-20℃下向KOH(22.0g，392mmol)在乙腈(30mL)和水(30mL)中的悬浮液中逐份添加2,6-二氟-4-羟基苯甲腈(3.1g，20.0mmol)，随后添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(10.0g，37.4mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈无色油状的标题化合物(4.0g，97％)。LCMS-C：Rt 2.11min；m/z 205.9[M+H]+。
b)4-(二氟甲氧基)-2-氟-6-甲氧基苯甲腈I120
向4-(二氟甲氧基)-2,6-二氟苯甲腈I119(2.52g，12.3mmol)在无水THF(30mL)中的溶液中逐份添加NaOMe(1.32g，24.57mmol)且将混合物在40℃下加温过夜。添加水且将混合物用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(663mg，25％)。LCMS-C：Rt 2.11min；m/z 217.9[M+H]+。
c)6-(二氟甲氧基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I121
将乙酰氧肟酸(680mg，9.15mmol)和t-BuOK(1.03g，9.15mmol)在无水DMF(50mL)中的悬浮液在室温下搅拌持续1小时。然后添加5-(二氟甲氧基)-1-氟-2-异氰基-3-甲氧基苯I120(663mg，3.05mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至8/1)纯化以生成呈浅橙色固体状的标题化合物(186mg，26％)。LCMS-C：Rt 1.14min；m/z 231.0[M+H]+。
lviii)5-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I124
Figure BDA0002843625830000761
a)2-氟-5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I122
将4-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈(500mg，2.34mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼戊环)(1.78g，2.34mmol)、乙酸钾(918mg，9.36mmol)和Pd(dppf)Cl2(188mg，0.23mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在回流下在N2下加热持续3小时。将所述混合物用水洗涤，用EtOAc(300mL)提取且将有机层用水(50mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成标题化合物(1.56g，88％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS-C：Rt 2.75min；m/z 262.0[M+H]+。
b)2-氟-5-甲基-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I123
在N2下向2-氟-5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈I122(1.32g，5.1mmol)和2-溴吡啶(1.69g，7.65mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(10mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(589mg，0.5mmol)和Na2CO3(2.16g，20.4mmol)且将混合物在100℃下加热持续3小时。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝8/1至3/1)纯化以生成呈红色固体状的标题化合物(440mg，88％)。LCMS-C：Rt 1.09min；m/z 213.0[M+H]+。
c)5-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并[d]异噁唑-3-胺I124
将乙酰氧肟酸(255mg，3.39mmol)和t-BuOK(381mg，3.39mmol)在无水DMF(30mL)中的悬浮液在0℃下搅拌持续1小时。然后添加2-氟-5-甲基-4-(吡啶-2-基)苯甲腈I123(240mg，1.13mmol)且使混合物温至室温且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝8/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(180mg，73％)。LCMS-C：Rt 0.50min；m/z 226.0[M+H]+。
lix)7-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I129
Figure BDA0002843625830000771
a)3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酸I125
在-78℃下在N2下向2-溴-1-氟-4-甲基苯(10.0g，53mmol)和二异丙胺(5.9g，58mmol)在无水THF(200mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，25.6mL，64.0mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续1小时。添加过量固体CO2(干冰)且在-78℃下继续搅拌持续3小时。将混合物用水(500mL)稀释且用EtOAc(500mL)提取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈棕色固体状的标题化合物(12.3g，100％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS-C：Rt 2.03min；m/z 232.8[M+H]+。
b)3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酰氯I126
在室温下在N2下向3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酸I125(12.3g，53mmol)和DMF(4滴)在DCM(100mL)中的溶液中逐滴添加草酰氯(13.0g，106mmol)且将混合物搅拌持续2小时。将所述混合物在减压下浓缩以生成呈棕色固体状的标题化合物(14.0g，100％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。
c)3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酰胺I127
将3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酰氯I126(14.0g，53mmol)在DCM(100mL)中的溶液逐滴添加到30％氢氧化铵水溶液(100mL)中且将混合物搅拌持续2小时。将所述混合物用EtOAc(200mL)稀释，用水(200mL×3)、盐水洗涤且将有机层经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈棕色固体状的标题化合物(12.0g，97％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS-C：Rt 1.01min；m/z 231.9[M+H]+。
d)3-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈I128
将3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酰胺I127(10.0g，43.0mmol)和亚硫酰氯(15.4g，129mmol)在DMF(100mL)中的溶液在100℃下加热持续3小时。将混合物用EtOAc(200mL)稀释且用水(400mL×5)、盐水洗涤且将有机层经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈棕色固体状的标题化合物(5.0g，54％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS-C：Rt 2.50min；m/z 213.9[M+H]+。
e)7-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I129
将乙酰氧肟酸(5.27g，70.2mmol)和t-BuOK(7.88g，70.2mmol)在无水DMF(200mL)中的悬浮液在0℃下搅拌持续1小时。然后添加3-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈I128(5.0g，23.4mmol)且使混合物温至室温且搅拌过夜。将所述混合物用EtOAc(300mL)稀释，用水(600mL×4)、盐水洗涤且将有机层经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.8g，52％)。LCMS-C：Rt0.50min；m/z 226.9[M+H]+。
合成实施例
实施例1-45(表A)：
Figure BDA0002843625830000781
方法AA
将LiHMDS(THF中的1M，445μL，0.445mmol)添加到4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.297mmol)在THF(3mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(0.445mmol)且将反应物在室温下搅拌持续16小时。挥发物减至大约1mL，然后添加DCM(3mL)和水(3mL)且将混合物搅拌持续10分钟。使所述混合物穿过相分离器，然后将有机部分装载到1g Si-胺筒(Biotage)上且将所述筒用MeOH(6mL)洗涤，然后将产物用HCl溶液(2M，1:1甲醇:1,4-二噁烷6mL)洗脱。然后将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成所需产物。
方法AB
将LiHMDS(THF中的1M，445μL，0.445mmol)添加到4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.297mmol)在THF(3mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(0.445mmol)且将反应物在室温下搅拌持续16小时。挥发物减至大约1mL，然后添加DCM(3mL)和水(3mL)且将混合物搅拌持续10分钟。使所述混合物穿过相分离器，然后将有机部分装载到1g Si-胺筒(Biotage)上且将所述筒用MeOH(6mL)洗涤，然后将产物用HCl溶液(2M，1:1甲醇:1,4-二噁烷6mL)洗脱。然后将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成粗产物，将所述粗产物装载到硅胶上且通过硅胶柱色谱法(Biotage Isolera，SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成所需产物。
方法AC
将LiHMDS(THF中的1M，445μL，0.445mmol)添加到4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.297mmol)在THF(3mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(0.445mmol)且将反应物在室温下搅拌持续16小时。挥发物减至大约1mL，然后添加DCM(3mL)和水(3mL)且将混合物搅拌持续10分钟。使所述混合物穿过相分离器，然后将有机部分装载到1g Si-胺筒(Biotage)上且将所述筒用MeOH(10mL)洗涤，然后将产物用甲醇HCl溶液(约1.25M，10mL)洗脱。然后将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成所需产物。
方法AD
将4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.298mmol)和磺酰氯(2当量，0.595mmol)在吡啶(1.5mL)中的溶液在微波中在100℃下照射持续2小时。在冷却后，将反应混合物装载到硅胶上且使用硅胶柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成所需产物。
方法AE
将磺酰氯(2当量，1.19mmol)和4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(100mg，0.593mmol)在吡啶(1.5mL)中的悬浮液在微波中在100℃下照射持续2小时。在冷却后，将混合物装载到硅胶上且使用硅胶柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃，然后0-40％MeOH/EtOAc)纯化以生成所需产物。
方法AF
将磺酰氯(2当量，1.19mmol)和4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(100mg，0.593mmol)在吡啶(1mL)中的悬浮液在微波中在80℃下照射持续1小时。在冷却，将混合物装载到硅胶上且使用硅胶柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成所需产物。
表A
Figure BDA0002843625830000791
Figure BDA0002843625830000801
Figure BDA0002843625830000811
Figure BDA0002843625830000821
Figure BDA0002843625830000831
Figure BDA0002843625830000841
Figure BDA0002843625830000851
实施例46-71(表D)：
Figure BDA0002843625830000861
方法BA
将苯并[d]异噁唑-3-胺和磺酰氯在吡啶(1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤或DCM提取(2×1mL)收集且使用硅胶柱色谱法(EtOAc/石油精40-60℃梯度)或制备型质量导向HPLC纯化以生成所需产物。关于反应组分和所用的量以及纯化条件，参见表B。
方法BB
将苯并[d]异噁唑-3-胺和磺酰氯在吡啶(0.5mL)中的混合物在室温下搅拌持续64小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且一部分的粗材料(50mg或更少)通过制备型质量导向HPLC纯化以生成所需产物。关于反应组分和所用的量，参见表B。
方法BC
将苯并[d]异噁唑-3-胺和磺酰氯在吡啶(0.5mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且一部分的粗材料(50mg或更少)通过质量导向制备型HPLC纯化以生成所需产物。关于反应组分和所用的量，参见表B。
表B
Figure BDA0002843625830000862
Figure BDA0002843625830000871
Figure BDA0002843625830000881
Figure BDA0002843625830000891
方法CA
将苯并[d]异噁唑-3-胺和磺酰氯在吡啶(1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时，此时添加第二部分苯磺酰氯且再搅拌持续64小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且通过制备型质量导向HPLC(至多50mg粗材料)或通过硅胶柱色谱法(0-40％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成所需产物。关于反应组分和所用的量以及纯化条件，参见表C。
表C
Figure BDA0002843625830000901
表D
Figure BDA0002843625830000902
Figure BDA0002843625830000911
Figure BDA0002843625830000921
Figure BDA0002843625830000931
Figure BDA0002843625830000941
Figure BDA0002843625830000951
Figure BDA0002843625830000961
Figure BDA0002843625830000971
实施例72-88(表E)：
Figure BDA0002843625830000981
方法EA
将NaH(矿物油中的60％，49mg，1.22mmol)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.305mmol)在THF(3.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.305mmol)且将反应物搅拌持续16小时。挥发物减至大约1mL，然后添加DCM(3mL)和水(3mL)且将混合物搅拌持续10分钟。使所述混合物穿过相分离器，然后将有机部分装载到1gSi-胺筒(Biotage)上且将所述筒用MeOH(6mL)洗涤，然后将产物用HCl溶液(甲醇中的1.25M，6mL)洗脱。将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成所需产物。
方法EB
将NaH(矿物油中的60％，61mg，1.52mmol)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.305mmol)在DMF(3.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.305mmol)且将反应物搅拌持续16小时。将所得混合物装载到硅胶上且通过柱色谱法(0-100％石油精40-60℃，然后0-60％MeOH/EtOAc)纯化以生成所需产物。
方法EC
将NaH(矿物油中的60％，22mg，0.914mmol)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.305mmol)在DMF(5mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.305mmol)且将反应物搅拌持续16小时。将所得混合物用水(3mL)淬灭，在室温下搅拌持续10分钟，然后装载到硅胶上且通过柱色谱法(0-100％石油精40-60℃，然后0-60％MeOH/EtOAc)纯化以生成所需产物。
方法ED
将NaH(矿物油中的60％，5或10当量)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(100mg，0.609mmol)在THF(5.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.609mmol)且将反应物搅拌持续16小时。将所得混合物装载到硅胶上且通过柱色谱法(0-100％石油精40-60℃，然后0-60％MeOH/EtOAc)纯化以生成所需产物。
方法EF
将NaH(矿物油中的60％，122mg，3.05mmol)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(100mg，0.609mmol)在THF(5.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.609mmol)且将反应物搅拌持续16小时。将所得混合物装载到硅胶上且通过柱色谱法(0-100％石油精40-60℃，然后0-60％MeOH/EtOAc)纯化且将分离的固体在MeOH(1mL)中声波处理且通过过滤收集以生成所需产物。
方法EG
将NaH(矿物油中的60％，122mg，3.05mmol)添加到4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(100mg，0.609mmol)在THF(5.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌持续10分钟。添加磺酰氯(1当量，0.609mmol)且将反应物在室温下搅拌持续16小时。挥发物减至大约1mL，然后小心地添加DCM(3mL)和水(3mL)且搅拌持续10分钟。使混合物穿过相分离器，然后将有机部分装载到1g Si-胺筒(Biotage)上且将所述筒用MeOH(6mL)洗涤，然后将产物用HCl溶液(2M，1:1甲醇:1,4-二噁烷，6mL)洗脱。然后将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成所需产物。
方法EH
将4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(48mg，0.29mmol)和NaH(矿物油中的60％，0.117mg，2.93mmol)在DMF(10mL)中的悬浮液在室温下搅拌持续10分钟，然后冷却到-78℃。向所述冷却的混合物中添加磺酰氯(1.5当量，0.439mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续1小时，然后温至室温且搅拌持续16小时。将反应混合物装载到硅胶上且通过柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃，然后0-40％MeOH/EtOAc)纯化以生成固体，将所述固体悬浮在乙醚(25mL)中且声波处理持续5分钟。所述固体通过过滤收集且空气干燥以生成所需产物。
方法EI
将4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(0.035g，0.21mmol)和磺酰氯(1.05当量，0.22mmol)在吡啶(1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。用DCM(2×1mL)提取且使用硅胶柱色谱法(0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化生成所需产物。
方法EJ
向4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(1当量)在THF(3mL)中的溶液中添加LiHMDS(THF中的1M，1.5当量)。搅拌10分钟之后，添加磺酰氯(1.5当量)且将反应物搅拌持续17小时，在空气中敞开。在真空中移除THF，然后添加DCM(3mL)和水(3mL)且搅拌持续10分钟。分离各层之后，将有机部分装载到1g Si-胺筒(Biotage)上。将所述筒用MeOH(6mL)洗涤，然后用MeOH(6mL)中的1.25M HCl汽提。然后将HCl洗涤物在真空中蒸发以生成所需产物。
表E
Figure BDA0002843625830001001
Figure BDA0002843625830001011
Figure BDA0002843625830001021
Figure BDA0002843625830001031
实施例89-147(表F)
方法FA
Figure BDA0002843625830001032
在-78℃下在N2下向胺(0.5mmol，1.0当量)在无水THF(10mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(THF中的1M溶液，3当量)且将混合物在-78℃下搅拌持续30分钟。然后逐滴添加磺酰氯(1.5当量)在无水THF(2.0mL)中的溶液且使混合物温至室温且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法或制备型TLC纯化以生成标题化合物。上述条件的变化已注释在表F中。
方法FB
Figure BDA0002843625830001033
在N2下向胺(0.3mmol，1.0当量)在吡啶(5mL)中的溶液中添加磺酰氯(2.0当量)且将混合物在100℃下加热过夜。将反应用1M HCl水溶液淬灭，然后添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，无水Na2SO4，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法或制备型TLC纯化以生成标题化合物。上述条件的变化已注释在表F中。
方法FC
Figure BDA0002843625830001041
在-20℃下在N2下向胺(0.5mmol，1.0当量)在无水THF(10mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(己烷中的2.5M，1.5当量)且将混合物在-20℃下搅拌持续1小时。然后逐滴添加磺酰氯(1.5当量)在无水THF(2.0mL)中的溶液且使混合物温至室温且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化以生成标题化合物。
方法FD
Figure BDA0002843625830001042
在-78℃下在N2下向胺(0.5mmol，1.0当量)在无水THF(10mL)中的溶液中逐滴添加KHMDS(THF中的1M溶液，规定在表F中的当量)且将混合物在-78℃或0℃下搅拌持续30分钟至1小时(规定在表F中)。然后逐滴添加磺酰氯(规定在表F中的当量)在无水THF(2.0mL)中的溶液且使混合物温至室温且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法或制备型TLC纯化以生成标题化合物。
表F
Figure BDA0002843625830001051
Figure BDA0002843625830001061
Figure BDA0002843625830001071
Figure BDA0002843625830001081
Figure BDA0002843625830001091
Figure BDA0002843625830001101
Figure BDA0002843625830001111
Figure BDA0002843625830001121
Figure BDA0002843625830001131
Figure BDA0002843625830001141
Figure BDA0002843625830001151
Figure BDA0002843625830001161
Figure BDA0002843625830001171
Figure BDA0002843625830001181
Figure BDA0002843625830001191
Figure BDA0002843625830001201
Figure BDA0002843625830001211
Figure BDA0002843625830001221
Figure BDA0002843625830001231
Figure BDA0002843625830001241
Figure BDA0002843625830001251
Figure BDA0002843625830001261
实施例148：N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺148
Figure BDA0002843625830001262
将2,4-二甲氧基苯磺酰氯(0.18g，0.75mmol)和苯并[d]异噁唑-3-胺(0.10g，0.75mmol)在吡啶(1mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将所得混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(4g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃，然后4g SiO2筒，0-35％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成两个批次(78mg和5mg)的呈白色固体状的标题化合物(总质量83mg，33％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11(d,J＝8.05Hz,1H),7.79(s,1H),7.70(d,J＝8.81Hz,1H),7.57–7.50(m,1H),7.47–7.40(m,1H),7.37–7.29(m,1H),6.50(d,J＝2.27Hz,1H),6.42(dd,J＝2.25,8.81Hz,1H),3.98(s,3H),3.81(s,3H)。LCMS-B：rt3.20min，m/z＝356.8[M+Na]+，334.8[M+H]+。
实施例149：N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺149
Figure BDA0002843625830001271
将2,6-二甲氧基苯-1-磺酰氯I111(0.088g，0.37mmol)和苯并[d]异噁唑-3-胺(0.050g，0.37mmol)在吡啶(1mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时，然后在120℃下照射持续2小时。将反应混合物装载到二氧化硅上且通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-35％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(3.9mg，3.1％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),8.17(dt,J＝1.04,8.15Hz,1H),7.55–7.47(m,1H),7.47–7.34(m,2H),7.34–7.28(m,1H),6.60(d,J＝8.52Hz,2H),3.91(s,6H)。LCMS-B：rt3.13min，m/z 334.8[M+H]+。
实施例150：N-(5-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺150
Figure BDA0002843625830001272
a)5-氯苯并[d]异噁唑-3-胺A1
将叔丁醇钾(793mg，7.07mmol)添加到乙酰氧肟酸(531mg，7.07mmol)在DMF(10mL)中的悬浮液中且在室温下搅拌持续30分钟。添加5-氯-2-氟苯甲腈(1.00g，6.43mmol)且将反应物加热到50℃持续1小时。在冷却后，将反应混合物用饱和NaCl水溶液(15mL)稀释，用EtOAc(3×100mL)提取水层，组合有机物，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中移除挥发物。将残余物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(Biotage Isolera，40g SiO2筒，0-40％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(507mg，47％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.94(dd,J＝2.1,0.6,1H),7.59–7.48(m,1H),6.51(s,1H)。
b)N-(5-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺150
将5-乙基-2-甲氧基苯-1-磺酰氯(150mg，0.639mmol)和5-氯苯并[d]异噁唑-3-胺A1(108mg，0.639mmol)在吡啶(1.5mL)中的悬浮液在微波中在110℃下照射持续2小时。添加10M KOH水溶液(1mL)且将所得混合物在室温下搅拌持续4小时。将所述反应混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(53mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.11(t,J＝1.4,1H),7.71(d,J＝2.3,1H),7.68(d,J＝1.4,2H),7.48(dd,J＝8.5,2.3,1H),7.10(d,J＝8.6,1H),3.72(s,3H),2.62(q,J＝7.6,2H),1.16(t,J＝7.6,3H)。LCMS-A：rt 6.637min；m/z 367.0[M+H]+。
实施例151：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺151
Figure BDA0002843625830001281
a)N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺A2
将4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(50mg，0.298mmol)和苯磺酰氯(2当量，0.595mmol)在吡啶(1.5mL)中的溶液在微波中在100℃下照射持续2小时。在冷却后，将反应混合物装载到硅胶上且使用硅胶柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.97(d,J＝8.6,1H),7.90–7.77(m,6H),7.71–7.64(m,7H),7.57(d,J＝7.7,1H)。
b)N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺151
将N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺A2(50mg，0.11mmol)在THF(10mL)和10M KOH水溶液(1mL)中的悬浮液在室温下搅拌持续16小时。将反应混合物用水(25mL)稀释且用EtOAc(3×50mL)提取水层，将组合的有机物用盐水(25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且在减压下浓缩。将所得胶状物溶解在最少量的丙酮中，然后添加石油精40-60℃(50mL)且将沉淀物过滤且空气干燥以生成呈褐色固体状的标题化合物(10mg，29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.89–7.80(m,2H),7.41–7.30(m,4H),7.26(dd,J＝8.3,0.8,1H),7.10(dd,J＝7.5,0.8,1H)。LCMS-A：rt 6.334min，m/z 307.0[M-H]-。
实施例152：5-乙基-N-(7-氟苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺152
Figure BDA0002843625830001282
a)7-氟苯并[d]异噁唑-3-胺A3
将叔丁醇钾(887mg，7.91mmol)添加到乙酰氧肟酸(594mg，7.91mmol)在DMF(10mL)中的悬浮液中且将反应物在室温下搅拌持续30分钟。添加2,3-二氟苯甲腈(1.00g，7.19mmol)且将反应物加热到50℃持续1小时。在冷却后，将反应混合物用饱和NaCl水溶液(15mL)稀释，用EtOAc(3×100mL)提取水层，组合有机物，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中移除挥发物。将所得胶状物装载到硅胶上且通过柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(303mg，27％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.33(dd,J＝7.6,1.3,1H),7.30–7.26(m,1H),7.26–7.19(m,1H),4.45(s,2H)。LCMS-B：rt 3.371min，m/z 153.2[M+H]+。
b)5-乙基-N-(7-氟苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺152
将7-氟苯并[d]异噁唑-3-胺A3(100mg，0.657mmol)和2-甲氧基-5-乙基磺酰氯I112(154mg，0.657mmol)在吡啶(2mL)中的溶液在微波中在100℃下照射持续2小时。在冷却后，将反应混合物装载到硅胶上且通过柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(127mg，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.91(dd,J＝8.1,0.8,1H),7.73(d,J＝2.3,1H),7.57(dd,J＝11.9,8.0,1H),7.48(dd,J＝8.5,2.3,1H),7.38(td,J＝8.0,4.1,1H),7.10(d,J＝8.6,1H),3.73(s,3H),2.63(q,J＝7.6,2H),1.16(t,J＝7.6,3H)。LCMS-A：rt 6.429min，m/z 351.1[M+H]+。
实施例153：N-(4-氯-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺153
Figure BDA0002843625830001291
a)4-氯-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺A4
将叔丁醇钾(728mg，6.49mmol)添加到乙酰氧肟酸(487mg，6.49mmol)在DMF(10mL)中的悬浮液中且在室温下搅拌持续30分钟。添加2-氯-6-氟-3-甲基苯甲腈(1.00g，5.90mmol)且将反应物加热到50℃持续1小时。在冷却后，将反应混合物用饱和NaCl水溶液(15mL)稀释，用EtOAc(3×100mL)提取水层，组合有机物，干燥(Na2SO4)，过滤且在真空中移除挥发物。将所得固体在丙酮(10mL)中声波处理，然后添加石油精40-60℃(50mL)，沉淀物通过过滤收集且空气干燥以生成呈白色固体状的产物(524mg，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.51(d,J＝8.5,1H),7.38(d,J＝8.5,1H),6.15(s,2H),2.38(s,3H)。LCMS-B：rt 3.562min，m/z 183.1[M+H]+。
b)N-(4-氯-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺153
将4-氯-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺A4(100mg，0.548mmol)和2-甲氧基-5-乙基磺酰氯I112(129mg，0.548mmol)在吡啶(2mL)中的溶液在微波中在100℃下照射持续2小时。在冷却后，将反应混合物添加到水中，通过过滤移除沉淀物且将滤液装载到硅胶上且通过柱色谱法(Biotage Isolera，24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(33mg，16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.48(s,1H),7.69–7.57(m,3H),7.48(dd,J＝8.5,2.3,1H),7.15(d,J＝8.5,1H),3.68(s,3H),2.60(q,J＝7.5,2H),2.42(s,3H),1.15(t,J＝7.6,3H)。LCMS-A：rt 6.665min，m/z 381.1[M+H]+。
实施例154：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺154
Figure BDA0002843625830001301
将5-乙基-2-甲氧基苯磺酰氯I112(0.414g，1.77mmol)和4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(0.225g，1.34mmol)在吡啶(2.0mL)中的混合物在氮气气氛下在30℃下搅拌持续40小时。将反应物浓缩，然后用HCl水溶液(5％)进行声波处理持续2小时且收集所得沉淀物。所述沉淀物使用硅胶柱色谱法(0-100％乙酸乙酯/石油精40-60℃)纯化以生成呈两个部分(A和B)的标题化合物，具有0.060g组合产量，12％产率。
部分A：产量0.038g。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.88(br s,1H),7.75(d,J＝2.3Hz,1H),7.66(dd,J＝8.5,7.6Hz,1H),7.57(dd,J＝8.5,0.6Hz,1H),7.49(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.42(dd,J＝7.6,0.6Hz,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,1H),3.91(s,3H),2.66(q,J＝7.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H)。LCMS-B：rt 3.766min；m/z 367.1/369.1[M+H]+。
部分B：产量0.021g。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.88(br s,1H),7.75(d,J＝2.3Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,7.6Hz,1H),7.59–7.55(m,1H),7.49(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.44–7.40(m,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,1H),3.90(s,3H),2.66(q,J＝7.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H)。LCMS-B：rt 3.755min；m/z 367.1/369.1[M+H]+
实施例155：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺155
Figure BDA0002843625830001302
将4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(0.034g，0.200mmol)和2-甲氧基苯磺酰氯(0.092g，0.450mmol)在吡啶(1.0mL)和三乙胺(0.1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且使用制备型质量导向HPLC纯化以生成标题化合物。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ7.94–7.91(dd,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.69–7.63(m,2H),7.60–7.57(dd,J＝8.5,0.7Hz,1H),7.44–7.42(dd,J＝7.6,0.7Hz,1H),7.25–7.22(m,1H),7.16–7.11(m,1H),3.94–3.94(s,3H)。HPLC-MS：rt 6.02min；m/z 339.16/341.18[M+H]+。
实施例156：N-(4-氟苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺156
Figure BDA0002843625830001311
将4-氟苯并[d]异噁唑-3-胺(0.032g，0.21mmol)和2-甲氧基苯磺酰氯(0.109g，0.529mmol)在吡啶(1.0mL)和三乙胺(0.1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且使用制备型质量导向HPLC纯化以生成标题化合物。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.73–9.45(br s,1H),7.92–7.88(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.70–7.61(m,2H),7.44–7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.25–7.21(d,J＝8.3Hz,1H),7.13–7.07(m,2H),3.95–3.91(s,3H)。HPLC-MS：rt5.72min；m/z 323.16[M+H]+。
实施例157：N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺157
Figure BDA0002843625830001312
将6-溴苯并[d]异噁唑-3-胺I75(0.039g，0.180mmol)和2-甲氧基苯磺酰氯(0.101g，0.490mmol)在吡啶(1.0mL)和三乙胺(0.1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且使用制备型质量导向HPLC纯化以生成标题化合物。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.06–8.02(dd,J＝8.6,0.5Hz,1H),7.90–7.87(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.85–7.83(dd,J＝1.6,0.5Hz,1H),7.64–7.59(ddd,J＝8.4,7.4,1.8Hz,1H),7.58–7.54(dd,J＝8.6,1.6Hz,1H),7.21–7.18(dd,J＝8.4,0.8Hz,1H),7.10–7.05(m,1H),3.88–3.85(s,3H)。HPLC-MS：rt6.32min；m/z 383.1/385.2[M+H]+。
实施例158：N-(6-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺158
Figure BDA0002843625830001313
将6-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(0.033g，0.200mmol)和2-甲氧基苯磺酰氯(0.095g，0.460mmol)在吡啶(1.0mL)和三乙胺(0.1mL)中的混合物在室温下搅拌持续16小时。将反应物浓缩且用5％HCl水溶液(1mL)稀释且声波处理持续最少30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且使用质量导向制备型HPLC纯化以生成标题化合物。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ8.12–8.07(dd,J＝8.6,0.5Hz,1H),7.91–7.87(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.68–7.65(dd,J＝1.7,0.5Hz,1H),7.64–7.58(ddd,J＝8.4,7.4,1.8Hz,1H),7.44–7.39(dd,J＝8.6,1.7Hz,1H),7.21–7.17(m,1H),7.10–7.05(m,1H),3.88–3.86(s,3H)。HPLC-MS：rt 6.26min；m/z339.16/341.18[M+H]+。
实施例159：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)异喹啉-8-磺酰胺159
Figure BDA0002843625830001321
将4-氯苯并[d]异噁唑-3-胺(0.050g，0.30mmol)在无水THF(2mL)中的溶液在氮气气氛下冷却到-78℃。小心地添加双(三甲基硅烷基)氨基化锂(THF中的1.0M，0.59mL，0.59mmol)，然后将混合物在0℃下搅拌持续1小时。将所述混合物冷却到-78℃，添加8-异喹啉磺酰氯(0.068g，0.30mmol)在无水THF(1mL)中的溶液且使混合物温至室温。搅拌持续3小时之后，TLC指示仅存在起始材料。将所述混合物冷却到-78℃，添加氢化钠(矿物油中的60％分散液，0.059g，1.5mmol)且使混合物回到室温且搅拌过夜。添加水(10mL)且pH用HCl水溶液(2M)调节到约3。用DCM(3×20mL)提取水相，组合有机物，干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。固体残余物通过柱色谱法(Biotage Isolera，12g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃，然后0-40％MeOH/EtOAc)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.026g，24％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),8.53(d,J＝5.8Hz,1H),8.28–8.21(m,1H),8.09(d,J＝8.2Hz,1H),7.92(d,J＝5.7Hz,1H),7.89–7.82(m,1H),7.39(t,J＝7.9Hz,1H),7.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H)。LCMS-A：rt 5.43min；m/z 360.1[M+H]+。
实施例160：N-(7-碘-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺160
Figure BDA0002843625830001322
a)7-碘-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺A5
将一部分的4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(0.121g，0.581mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，然后添加N-碘丁二酰亚胺(0.131g，0.581mmol)。在添加完成时，将反应混合物在50℃下加热持续2小时。在此时期结束时，将所述反应混合物倾于冰上，然后用EtOAc(15mL)稀释。将所得混合物用H2O(3×8mL)和盐水(8mL)洗涤，经Na2SO4干燥且过滤。在减压下移除挥发物且残余物通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-35％EtOAc/石油精40-60℃，然后12g SiO2筒，0-25％EtOAc/石油精40-60℃)纯化两次以生成呈灰白色固体状的标题化合物(0.038g，20％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.78(s,1H),4.73(s,2H),4.54(s,2H),3.96(s,3H),3.50(s,3H)。LCMS-A：rt 3.26min，m/z334.7[M+H]+。
b)N-(7-碘-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺160
将7-碘-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺A5(0.024g，0.099mmol)和2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(0.023g，0.099mmol)在吡啶(0.5mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将反应混合物冷却到室温且湿式装载到二氧化硅筒上。残余物通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-70％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.032g，53％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(t,J＝8.5Hz,1H),6.86(s,1H),6.58(d,J＝8.5Hz,2H),4.52(s,2H),4.04(s,3H),3.88(s,6H),3.51(s,3H)。LCMS-A：rt5.86min，m/z 534.6[M+H]+。
实施例161：N-(7-氯-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺161
Figure BDA0002843625830001331
a)7-氯-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺A6
将4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(0.150g，0.720mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，然后添加N-氯丁二酰亚胺(96mg，0.72mmol)。在添加完成时，将反应混合物在50℃下加热持续2小时。在此时期结束时，将所述反应混合物倾于冰上，然后用EtOAc(15mL)稀释。将所得混合物用H2O(3×8mL)和盐水(8mL)洗涤，经Na2SO4干燥且过滤。在减压下移除挥发物且残余物通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-40％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.0240g，14％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.77(s,1H),4.63(d,J＝0.6Hz,2H),3.97(s,3H),3.49(s,3H)。
b)N-(7-氯-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯-磺酰胺161
将7-氯-4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺A6(0.024g，0.099mmol)和2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(0.023g，0.099mmol)在吡啶(0.5mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将反应混合物冷却到室温且湿式装载到二氧化硅筒上。残余物通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.0094g，21％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.39(t,J＝8.5Hz,1H),6.85(s,1H),6.59(d,J＝8.5Hz,2H),4.61(d,J＝0.6Hz,2H),4.04(s,3H),3.88(s,6H),3.49(s,3H)。LCMS-F：rt 6.39min，m/z 442.8[M+H]+。
实施例162：5-甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)喹啉-8-磺酰胺162
Figure BDA0002843625830001341
将4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(0.0500g，0.240mmol)和5-甲氧基喹啉-8-磺酰氯(0.0619g，0.240mmol)在吡啶(0.500mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将反应物冷却到室温且添加到DCM(10mL)中。用0.5M HCl(10mL)洗涤有机层且通过相分离筒分离各层。在真空中干燥收集的有机层且残余物通过柱色谱法(12gSiO2筒，0-80％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈灰白色固体状的标题化合物(0.0110g，11％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(dd,J＝4.3,1.8Hz,1H),8.64–8.53(m,2H),7.45(dd,J＝8.5,4.3Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.87(d,J＝0.9Hz,1H),6.54(s,1H),4.44(s,2H),4.05(s,3H),4.03(s,3H),3.36(s,3H)。LCMS-B：rt 3.49min，m/z 429.8[M+H]+。
实施例163：2-羟基-6-甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺163
Figure BDA0002843625830001342
将4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(0.0440g，0.211mmol)和2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(0.0500g，0.211mmol)在吡啶(0.500mL)中的溶液在微波中在120℃下照射持续2小时，然后在120℃下照射持续1小时。将反应物冷却到室温且添加到DCM(10mL)中。将有机物用1M HCl(2×10mL)洗涤，然后经MgSO4干燥。粗材料通过硅胶色谱法(24g SiO2筒，0-85％EtOAc/石油精40-60℃，然后12g SiO2筒，0-75％EtOAc/石油精40-60℃)纯化两次以生成标题化合物(1.5mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.62(s,1H),8.14(s,1H),7.33(t,J＝8.4Hz,1H),6.99(q,J＝0.9Hz,1H),6.70–6.61(m,2H),6.37(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),4.51(s,1H),4.03(s,3H),3.87(s,3H),3.42(s,3H)。LCMS-A：rt 3.54min，m/z 394.8[M+H]+
实施例164：6-甲氧基-N-(6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)吡啶-3-磺酰胺164
Figure BDA0002843625830001351
将6-甲氧基吡啶-3-磺酰氯(0.0540g，0.260mmol)和6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I4(0.050g，0.26mmol)在吡啶(0.500mL)中的溶液在微波中在120℃下照射持续2小时。将反应物冷却到室温，然后溶解在DCM中且用1M HCl洗涤(×2)。将有机层在真空中干燥，然后湿式装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(24g SiO2筒，0-80％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(15.6mg，17％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(dd,J＝0.71,2.62Hz,1H),7.99–7.89(m,2H),7.72(s,1H),7.55(s,1H),6.75(dd,J＝0.71,8.94Hz,1H),4.54(s,2H),3.95(s,3H),3.50(s,3H),2.39(s,3H)。LCMS-F：rt6.39min，m/z 348.1[M+H]+。
实施例165：N-(6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)吡啶-3-磺酰胺165
Figure BDA0002843625830001352
将吡啶-3-磺酰氯(0.0462g，0.260mmol)和6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I4(0.050g，0.26mmol)在吡啶(0.500mL)中的溶液在微波中在120℃下照射持续2小时。将反应物冷却到室温，然后湿式装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(24g SiO2筒，0-80％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(0.0220g，25％产率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.09(s,1H),8.83(s,1H),8.18(d,J＝8.09Hz,1H),7.70(s,1H),7.57(s,1H),7.46(s,1H),4.54(s,2H),3.50(s,3H),2.40(s,3H)。LCMS-F：rt 6.12min m/z334.1[M+H]+，332.0[M-H]-。
实施例166：2,4-二甲氧基-N-(6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺166
Figure BDA0002843625830001361
将2,4-甲氧基苯磺酰氯(0.052g，0.22mmol)和6-(甲氧基甲基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I4(0.042g，0.22mmol)在吡啶(0.500mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将所得混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(4g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.0413g，48％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(s,1H),7.83(s,1H),7.71(d,J＝8.33Hz,1H),7.47(s,1H),6.48(d,J＝1.82Hz,1H),6.42(d,J＝8.36Hz,1H),4.50(s,2H),3.95(s,3H),3.80(s,3H),3.47(s,3H),2.37(s,3H)。LCMS-A：rt 5.78min，m/z＝392.8[M+H]+，414.7[M+Na]+。
实施例167：N-(6-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺167
Figure BDA0002843625830001362
a)3-氨基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A9
向乙烷氧肟酸(0.629g，8.37mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-甲基丙-2-醇钾(0.94g，8.4mmol)且将反应物搅拌持续30分钟。相继添加4-氰基-3-氟苯甲酸甲酯(1.0g，5.6mmol)、DMF(2mL)且将反应物在室温下再搅拌持续2小时。将反应物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释，用乙酸乙酯提取水层且将组合的有机层用水洗涤，干燥，过滤且浓缩。粗材料通过硅胶色谱法(12g SiO2筒，0-50％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.55g，51％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(d,J＝1.02Hz,1H),7.96(dd,J＝1.24,8.29Hz,1H),7.59(dd,J＝0.77,8.25Hz,1H),3.98(s,3H)。LCMS：rt 2.97min，m/z 193.0[M+H]+。
b)3-((2,4-二甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A10
将2,4-二甲氧基苯-1-磺酰氯(0.67g，2.8mmol)和3-氨基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A9(0.55g，2.8mmol)在吡啶(4mL)中的溶液在微波中在130℃下照射持续3小时。将反应物冷却到室温，然后用DCM(40mL)稀释。将有机物用1M HCl(40mL)洗涤且将水层用DCM(2×40mL)反提取。在真空中干燥组合的有机层且残余物通过柱色谱法(24g SiO2筒，0-35％EtOAc/石油精40-60℃)纯化两次以生成两个批次的呈白色固体状的标题化合物(0.369g，不纯和0.0310g，2.8％产率，>95％纯度)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.13–8.06(m,2H),7.97(dd,J＝1.25,8.47Hz,1H),7.86–7.80(m,1H),6.58(dq,J＝2.29,4.60Hz,2H),3.95(s,3H),3.83(s,3H),3.79(s,3H)。LCMS：rt 3.26min，m/z 392.8[M+H]+，415.8[M+Na]+。
c)N-(6-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺167
在氮气下向氢化锂铝粉末(0.0758g，2.00mmol)在无水THF(4mL)中的悬浮液中添加3-((2,4-二甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A10(不纯，0.392g，0.500mmol)在THF(8mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应物在氮气下通过逐滴添加湿THF、随后用1mL水淬灭。在气体逸出停止之后，添加0.5M HCl水溶液且用乙酸乙酯(3×20mL)提取水层。将组合的有机层用水、盐水洗涤，经MgSO4干燥且在真空中移除溶剂。粗残余物通过柱色谱法(24g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.191g，100％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(dd,J＝0.78,8.30Hz,1H),7.77(s,1H),7.69(d,J＝8.82Hz,1H),7.47(t,J＝1.03Hz,1H),7.30(dd,J＝1.34,8.29Hz,1H),6.49(d,J＝2.26Hz,1H),6.42(dd,J＝2.30,8.79Hz,1H),4.84(s,2H),3.98(s,3H),3.80(s,3H)。LCMS-B：rt 3.02min，m/z 364.8[M+H]+，386.8[M+Na]+。
实施例168：3-((5-甲氧基喹啉)-8-磺酰胺基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酰胺168
Figure BDA0002843625830001371
a)3-氨基-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A11
向乙烷氧肟酸(0.126g，1.69mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加2-甲基丙-2-醇钾(0.19g，1.7mmol)且将反应物搅拌持续30分钟。相继添加4-氰基-5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(0.22g，1.1mmol)、DMF(3mL)且将反应物在40℃下再搅拌持续2小时。将反应物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。用乙酸乙酯提取水层且将组合的有机层用水洗涤，干燥，过滤且浓缩。粗材料通过硅胶色谱法(12g SiO2筒，0-50％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.11g，48％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.85(s,1H),7.64(t,J＝0.79Hz,1H),3.92(s,3H),2.62(d,J＝0.85Hz,3H)。LCMS：rt3.02min，m/z 207.0[M+H]+。
b)3-((5-甲氧基喹啉)-8-磺酰胺基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯盐酸盐A12
将5-甲氧基喹啉-8-磺酰氯(0.12g，0.48mmol)和3-氨基-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯A11(0.10g，0.48mmol)在吡啶(3mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将反应物在微波中在110℃下再照射持续1.5小时。将所得混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(4g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃)纯化。所述产物进一步通过固相提取(1g，Si-胺，3空隙体积的MeOH、随后4空隙体积的甲醇HCl)纯化。收集酸性洗脱物且在真空中干燥以生成呈淡黄色固体状的标题化合物(17.7mg，7.9％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.40–9.33(m,2H),8.77(d,J＝8.66Hz,1H),8.14–8.05(m,1H),7.91(s,1H),7.80–7.73(m,1H),7.47(d,J＝8.73Hz,1H),4.23(s,3H),3.91(s,3H),2.62(s,3H)。LCMS：rt3.35min，m/z 427.8[M+H]+。
c)3-((5-甲氧基喹啉)-8-磺酰胺基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酰胺168
在氮气下向配备有磁性搅拌棒的15mL厚壁压力管中添加3-((5-甲氧基喹啉)-8-磺酰胺基)-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲酸甲酯盐酸盐A12(15.0mg，0.0323mmol)、氨水溶液(甲醇中的2.0M，0.50mL，1.0mmol)和二氯化钙(3.59mg，0.0323mmol)。密封反应容器且在80℃下加热持续3天。在空气流下移除溶剂且添加氨水溶液(甲醇中的7.0M，0.50mL，3.5mmol)和二氯化钙(3.6mg，0.032mmol)。密封所述反应容器且在80℃下加热持续24小时。将反应物冷却到室温且在真空中移除溶剂。化合物通过柱色谱法(4g SiO2筒，0-100％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.00180g，13％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.01(dd,J＝1.78,4.24Hz,1H),8.65(dd,J＝1.78,8.52Hz,1H),8.43(d,J＝8.47Hz,1H),7.73(d,J＝12.46Hz,2H),7.57(dd,J＝4.28,8.54Hz,1H),7.08(d,J＝8.50Hz,1H),4.09(s,3H),2.57(s,3H)。LCMS-B：rt 3.15min，m/z 413.8[M+H]+。
实施例169：N-(6-氰基-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺169
Figure BDA0002843625830001381
a)3-氨基-5-甲基苯并[d]异噁唑-6-甲腈A13
向乙烷氧肟酸(0.176g，2.34mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-甲基丙-2-醇钾(0.26g，2.3mmol)且将反应物搅拌持续30分钟。相继添加2-氟-5-甲基-对苯二甲腈(0.25g，1.6mmol)、DMF(3mL)且将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释，用乙酸乙酯提取水层且将组合的有机层用水洗涤，干燥，过滤且浓缩。粗材料通过硅胶色谱法(12g SiO2筒，0-50％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈灰白色固体状的标题化合物(0.16g，59％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),7.47(t,J＝0.86Hz,1H),2.65(d,J＝0.86Hz,3H)。LCMS-B：rt 2.90min，m/z 174.0[M+H]+。
b)N-(6-氰基-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺169
将2,4-二甲氧基苯-1-磺酰氯(0.22g，0.92mmol)和3-氨基-5-甲基-1,2-苯并噁唑-6-甲腈A13(0.16g，0.92mmol)在吡啶(2.5mL)中的溶液在微波中在130℃下照射持续2小时。将反应物置于室温下持续50分钟，然后在微波中在130℃下再照射持续2小时。将反应物冷却到室温，然后用DCM(40mL)稀释。将有机物用1M HCl(40mL)洗涤且水层用DCM(2×40mL)反提取两次。将组合的有机层在真空中干燥且将残余物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(24g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成黄色固体。将所述固体溶解在温MeOH和DCM中且通过固相提取(1g Si-胺，3空隙体积的MeOH、随后3空隙体积的约1.25M甲醇氨)纯化。在真空中干燥酸性洗脱物以生成白色固体。将固体溶解在MeOH中且在真空中移除MeOH(重复3次)。残余物通过柱色谱法(24g SiO2筒，45％EtOAc/石油精40-60℃)再纯化以生成两个批次的呈灰白色固体状的标题化合物(22mg和78mg，总质量100mg，29％产率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),7.82(s,1H),7.72(s,1H),7.66(d,J＝8.80Hz,1H),6.52(d,J＝2.25Hz,1H),6.44(dd,J＝2.24,8.85Hz,1H),3.98(s,3H),3.82(s,3H),2.67(s,3H)。LCMS-B：rt 3.30min，m/z＝373.8[M+H]+，371.9[M-H]-。
实施例170：2,4-二甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺170
Figure BDA0002843625830001391
将2,4-二甲氧基苯-1-磺酰氯(0.0799g，0.337mmol)和5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺I60(0.050g，0.34mmol)在吡啶(1mL)中的溶液在微波中在110℃下照射持续2小时。将所得混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(12g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(55.0mg，42％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.86–7.82(m,1H),7.72(d,J＝8.81Hz,1H),7.37–7.28(m,2H),6.49(d,J＝2.26Hz,1H),6.43(dd,J＝2.29,8.82Hz,1H),3.96(s,3H),3.80(s,3H),2.47(s,3H)。LCMS-A：rt 5.66min，m/z348.8[M+H]+，347.1[M-H]-。
实施例171：N-(6-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺171
Figure BDA0002843625830001401
a)6-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺A14
向乙烷氧肟酸(0.263g，3.50mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加t-BuOK(393mg，3.50mmol)且将反应物搅拌持续30分钟。将4-溴-2-氟-5-甲基苯甲腈(0.50g，2.3mmol)添加到反应物中，将反应物在室温下再搅拌持续2小时。将反应物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释，用乙酸乙酯提取水层且将组合的有机层用水洗涤，干燥，过滤且浓缩。粗材料通过硅胶色谱法(12g SiO2筒，0-50％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(0.30g，56％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(s,1H),7.37(s,1H),4.35(br s,2H),2.49(s,3H)。LCMS-B：rt 3.18min，m/z 229.8[M+H]+。
b)N-(6-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺171
将2,4-二甲氧基苯磺酰氯(0.052g，0.22mmol)和6-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺A14(0.050g，0.22mmol)在吡啶(1mL)中的溶液在微波中在110℃下两次照射持续2小时，然后在130℃下照射持续2小时。将所得混合物装载到硅胶上且产物通过柱色谱法(4g SiO2筒，0-45％EtOAc/石油精40-60℃)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(102mg，定量产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98–7.94(m,1H),7.70–7.65(m,2H),6.50(d,J＝2.24Hz,1H),6.43(dd,J＝2.26,8.82Hz,1H),3.97(s,3H),3.81(s,3H),2.51(d,J＝0.87Hz,4H)。LCMS-A：rt 6.08min，m/z 426.9[M+H]+。
实施例172：N-(6-(乙氧基甲基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺172
Figure BDA0002843625830001402
在-78℃下在N2下向6-(乙氧基甲基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺I21(250mg，1.13mmol)在无水THF(25mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(THF中的1M，4.5mL，4.5mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续2小时。然后逐滴添加2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(400mg，1.69mmol)在无水THF(2mL)中的溶液且使混合物温至室温且搅拌过夜。将所述混合物用2MHCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(170mg，96％纯度)。通过制备型HPLC进一步纯化产生标题化合物(60mg，100％纯度，13％产率)。LCMS-C：Rt 2.08min；m/z 423.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),7.51(t,J＝8.4Hz,1H),7.09(s,1H),6.78-6.76(m,3H),4.55(s,2H),3.91(s,3H),3.77(s,6H),3.54(q,J＝6.8Hz,2H),1.19(t,J＝6.8Hz,3H)。
实施例173：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺173
Figure BDA0002843625830001411
在-78℃下在N2下向4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(3.0g，14.4mmol)在无水THF(200mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(THF中的1M溶液，43.2mL，43.2mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续2小时。然后逐滴添加2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(5.1g，21.6mmol)在无水THF(10mL)中的溶液且使混合物温至室温且搅拌过夜。将所述混合物用2M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。反应物使用150mL THF中的4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺I9(2.0g，9.6mmol)重复且将两个批次组合且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝8/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.1g，42％)。LCMS-C：Rt 1.96min；m/z 409.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(s,1H),7.52(t,J＝8.4Hz,1H),7.09(s,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),6.76(s,1H),4.51(s,2H),3.91(s,3H),3.77(s,6H),3.33(s,3H)。
实施例174：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-苯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺174
Figure BDA0002843625830001412
在-78℃下在N2下向4-甲氧基-6-苯基苯并[d]异噁唑-3-胺I17(2.5g，10.4mmol)在无水THF(60mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(THF中的1M溶液，31.0mL，31.0mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续2小时。然后逐滴添加2,6-二甲氧基苯磺酰氯I111(3.7g，15.6mmol)在无水THF(20mL)中的溶液且使混合物温至0℃且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(50mL×2)洗涤。将水层用1M HCl水溶液酸化到pH 3且用EtOAc(50mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝300/1)纯化且进一步通过柱色谱法(DCM/MeOH＝200/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.5g，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),7.80(d,J＝7.2Hz,2H),7.50–7.44(m,5H),7.09(s,1H),6.80(d,J＝8.8Hz,2H),4.02(s,3H),3.79(s,6H)；LCMS-C:Rt 2.46min；m/z 441.0[M+H]+。
实施例175：3-氯-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺175
Figure BDA0002843625830001421
向2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(甲氧基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺173(50mg，0.123mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NCS(14mg，0.123mmol)且将混合物在50℃下加热持续2小时。然后将所述混合物用EtOAc(150mL)稀释且用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝120/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(15mg，27％)。LCMS-C：Rt 2.21min；m/z441.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.56(d,J＝9.1Hz,1H),7.01(s,1H),6.91(d,J＝9.1Hz,1H),6.76(s,1H),4.55(s,2H),3.99(s,6H),3.76(s,3H),3.41(s,3H)。
实施例176：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(2-甲氧基苯基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺176
Figure BDA0002843625830001422
将N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(30mg，0.068mmol)、(2-甲氧基苯基)硼酸(21mg，0.135mmol)、Pd(PPh3)4(9mg，0.007mmol)和Na2CO3(22mg，0.203mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(1mL)中的混合物在100℃下在N2下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1/2)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(10mg，31％)。LCMS-C：Rt 2.36min，m/z 471.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.60(s,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.44–7.37(m,2H),7.22(s,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,1H),7.05(t,J＝7.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.81(s,6H),3.79(s,3H)。
实施例177：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(3-甲氧基苯基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺177
Figure BDA0002843625830001431
将N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)、(3-甲氧基苯基)硼酸(35mg，0.226mmol)、Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)和Na2CO3(36mg，0.339mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的混合物在100℃下在N2下加热过夜。将所述混合物冷却到室温，调节到pH 4-5，然后用水稀释且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(8mg，15％)。LCMS-C：Rt2.35min；m/z 471.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.46(d,J＝1.0Hz,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,1H),7.37–7.29(m,2H),7.07(s,1H),7.03–6.98(m,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.02(s,3H),3.84(s,3H),3.79(s,6H)。
实施例178：5-乙基-2-甲氧基-N-(7-苯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺178
Figure BDA0002843625830001432
将N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺137(100mg，0.24mmol)、苯基硼酸(60mg，0.48mmol)、Pd(dppf)Cl2(18mg，0.024mmol)和K3PO4·3H2O(260mg，0.97mmol)在甲苯(5mL)、异丙醇(2mL)和水(5mL)中的悬浮液在100℃下在N2下加热持续2小时。将混合物冷却到室温，用EtOAc稀释且用水(25mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(55mg，55％)。LCMS-D：Rt 3.06min；m/z 409.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.08–8.02(m,1H),7.89–7.78(m,3H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.55–7.40(m,5H),7.13–7.08(m,1H),3.75(s,3H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),1.15(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例179：5-乙基-2-甲氧基-N-(6-苯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺179
Figure BDA0002843625830001441
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺138(120mg，0.3mmol)、Pd(dppf)Cl2(45mg，0.06mmol)、苯基硼酸(150mg，1.2mmol)和K3PO4·3H2O(399mg，1.5mmol)在水(10mL)、甲苯(10mL)和异丙醇(5mL)中的混合物在85℃下在N2下加热持续4小时。将混合物冷却到室温，用水(200mL)稀释且用乙醚(200mL×3)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(60mg，50％)。LCMS-D：Rt 3.10min；m/z 409.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),8.14–8.08(m,1H),7.87(s,1H),7.79–7.74(m,2H),7.73–7.67(m,2H),7.54–7.39(m,4H),7.12–7.07(m,1H),3.74(s,3H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例180：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰胺180
Figure BDA0002843625830001442
向5-溴-N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰胺127(100mg，0.23mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(20mg)和KOAc(20mg，0.28mmol)且将混合物在40℃下在H2气氛下搅拌持续2小时，然后在室温下搅拌过夜。过滤混合物且在减压下浓缩滤液。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(22mg，27％)。LCMS-D：Rt 2.32min；m/z 351.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.9(s,1H),7.76–7.62(m,2H),7.53–7.43(m,3H),6.96(t,J＝7.7Hz,1H),4.50(t,J＝8.8Hz,2H),3.22(t,J＝8.8Hz,2H)。
实施例181：N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2,3-二氢苯并呋喃-7-苯磺酰胺181
Figure BDA0002843625830001451
a)N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-苯磺酰胺A15
向5-溴-N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰胺127(200mg，0.47mmol)在1,4-二噁烷(20mL)、EtOH(10mL)和H2O(10mL)中的溶液中添加K2CO3(206mg，1.86mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(140mg，0.93mmol)和Pd(PPh3)4(54mg，0.047mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物分配在DCM(50mL)、水(45mL)与2M HCl水溶液(5mL)之间。分离各层且将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(120mg70％)。LCMS-D：Rt 0.40min；m/z 377.0[M+H]+。
b)N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰胺181
向N-(4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-7-磺酰胺A15(120mg，0.32mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加10％Pd/C(24mg)且将混合物在室温下在H2气氛下搅拌过夜。过滤所述混合物且在减压下浓缩滤液。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(33mg，27％)。LCMS-D：Rt 2.59min；m/z 379.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.8(s,1H),7.75–7.70(m,1H),7.69–7.63(m,1H),7.47–7.43(m,1H),7.37(s,1H),7.29(s,1H),4.46(t,J＝8.7Hz,2H),3.18(t,J＝8.7Hz,2H),2.56(q,J＝7.6Hz,2H),1.13(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例182：N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-4-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺182
Figure BDA0002843625830001452
a)N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基-4-乙烯基苯磺酰胺A16
向N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-4-溴-2-甲基苯磺酰胺141(200mg，0.52mmol)在甲苯(16mL)、水(8mL)和异丙醇(8mL)中的溶液中添加K2CO3(288mg，2.09mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(160mg，1.04mmol)和Pd(PPh3)4(60mg，0.052mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热持续2小时。将所述混合物用水(50mL)和2M HCl水溶液(20mL)稀释且用EtOAc(80mL×2)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(150mg，76％)。LCMS-D：Rt 2.47min；m/z 331.0[M+H]+，353.0[M+Na]+。
b)N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-4-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺182
向N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基-4-乙烯基苯磺酰胺A16(80mg，0.24mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(16mg)且将混合物在25℃下在H2气氛下搅拌过夜。过滤所述混合物且在减压下浓缩滤液。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(20mg，25％)。LCMS-D：Rt 2.55min；m/z 333.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.66–7.55(m,2H),7.44–7.31(m,1H),7.01(s,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),3.76(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.17(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例183：N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-磺酰胺183
Figure BDA0002843625830001461
向N-(苯并[d]异噁唑-3-基)-4-溴-2-甲基苯磺酰胺141(100mg，0.26mmol)在甲苯(7mL)、水(7mL)和异丙醇(2.5mL)中的溶液中添加K2CO3(144mg，10mmol)、苯基硼酸(64mg，0.52mmol)和Pd(PPh3)4(30mg，0.026mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热持续2小时。将所述混合物用水(50mL)和2M HCl水溶液(10mL)稀释且用EtOAc(70mL×2)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(55mg，46％)。LCMS-D：Rt 2.79min；m/z 381.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.79–7.72(m,2H),7.66–7.58(m,2H),7.54–7.35(m,6H),3.89(s,3H)。
实施例184：3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N-甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺184
Figure BDA0002843625830001471
a)N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17
在0℃下在N2下向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺137(2.3g，5.5mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲醇(1.4g，8.4mmol)和PPh3(3.6g，14.2mmol)在THF(400mL)中的溶液中添加DIAD(3.3g，16.4mmol)且将混合物历经周末在室温下搅拌。将混合物在减压下浓缩且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈浅蓝色固体状的标题化合物(1.0g，32％)。LCMS-D：Rt 3.35min；m/z 583.1/585.1[M+Na]+。
b)3-(N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸甲酯A18
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17(250mg，1.34mmol)在MeOH(5mL)和DMF(45mL)中的溶液中添加Et3N(675mg，6.68mmol)和Pd(dppf)Cl2(98mg，0.13mmol)且将混合物在80℃下在CO气氛下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物用EtOAc(50mL)稀释，用水(50mL×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝4/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(210mg，31％)。LCMS-D：Rt 3.10min；m/z 541.2[M+H]+。
c)3-(N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N-甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺A19
将3-(N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸甲酯A18(20mg，0.037mmol)和CH3NH2(EtOH中的33％溶液，4mL)的混合物在密封管中在100℃下加热持续30分钟。在减压下移除溶剂以生成标题化合物(20mg，100％)，所述标题化合物无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS-D：Rt 2.86min；m/z 540.2[M+H]+。
d)3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N-甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺184
将3-(N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N-甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺A19(40mg，0.07mmol)和TFA(2mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(18mg，64％)。LCMS-D：Rt 2.35min；m/z 390.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.31–8.11(m,2H),8.00–7.90(m,1H),7.72(s,1H),7.52–7.41(m,2H),7.14–7.04(m,1H),3.73(s,3H),2.81(s,3H),2.62(q,J＝8.0,7.6Hz,2H),1.15(t,J＝7.9Hz,3H)。
实施例185：3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N,N-二甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺185
Figure BDA0002843625830001481
a)3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸甲酯A20
将3-(N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸甲酯A18(150mg，0.28mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(80mg，74％)。LCMS-D：Rt 2.63min；m/z 391.1[M+H]+，413.1[M+Na]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.39–8.32(m,1H),8.19–8.12(m,1H),7.72(d,J＝2.2Hz,1H),7.56–7.44(m,2H),7.12–7.05(m,1H),3.89(s,3H),3.71(s,3H),2.62(q,J＝7.5Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
b)3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸A21
向3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸甲酯A20(200mg，0.5mmol)在MeOH(10mL)和THF(10mL)中的悬浮液中添加2M NaOH水溶液(1.28mL)且将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除溶剂且将残余物用水稀释且调节到pH2-3。所得沉淀物通过过滤收集以生成呈灰白色固体状的标题化合物(144mg，75％)。LCMS-D：Rt 2.43min；m/z 377.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.5(s,1H),11.8(s,1H),8.35–8.29(m,1H),8.15–8.09(m,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.53–7.44(m,2H),7.12–7.05(m,1H),3.71(s,3H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
c)3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-碳酰氯A22
将3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸A21(30mg，0.08mmol)和SOCl2(5mL)的混合物在85℃下在N2气氛下加热持续3小时，然后在减压下浓缩以生成标题化合物(31mg，100％)，所述标题化合物无需进一步纯化直接地用于下一步骤。
d)3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)-N,N-二甲基苯并[d]异噁唑-7-甲酰胺185
向3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-碳酰氯A22(31mg，0.08mmol)在THF(1mL)中的溶液中逐滴添加二甲胺(水中的40％溶液，2mL)且将混合物在室温下搅拌持续1小时。所述混合物在减压下浓缩且将残余物用水稀释，调节到pH 2-3且用DCM(30mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(18mg，56％)。LCMS-D：Rt 2.36min；m/z 404.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.21–8.06(m,1H),7.78–7.56(m,2H),7.45(s,2H),7.17–6.97(m,1H),3.71(s,3H),3.01(s,3H),2.80(s,3H),2.61(m,2H),1.15(m,3H)。
实施例186：5-乙基-N-(7-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺186
Figure BDA0002843625830001491
将3-(5-乙基-2-甲氧基苯基磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-7-甲酸A21(30mg，0.08mmol)和BH3·THF(THF中的1M溶液，3mL，3mmol)的混合物在室温下在N2气氛下搅拌持续5小时。将反应物用水淬灭且在减压下移除大部分THF。将残余物调节到pH 2-3且用DCM(15mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈浅红色固体状的标题化合物(20mg，71％)。LCMS-D：Rt 2.35min；m/z 363.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.96–7.89(m,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.61–7.55(m,1H),7.46(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.34(t,J＝7.6Hz,1H),7.12–7.05(m,1H),5.39(t,J＝5.7Hz,1H),4.70(d,J＝5.4Hz,2H),3.73(s,3H),2.61(q,J＝7.2Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例187：5-乙基-2-甲氧基-N-(7-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺187
Figure BDA0002843625830001501
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺137(150mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(18mL)和水(4.5mL)中的悬浮液中添加K2CO3(150mg，1.09mmol)、甲基硼酸(45mg，0.73mmol)和Pd(dppf)Cl2(27mg，0.036mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热持续4小时。将所述混合物在减压下浓缩且将残余物分配在EtOAc(50mL)、水(40mL)与1M HCl水溶液(15mL)之间。分离各层且将有机层用0.5M HCl水溶液(40mL×2)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(20mg，16％)。LCMS-D：Rt 2.25min；m/z 347.1[M+H]+，369.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.89–7.82(m,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.50–7.38(m,2H),7.25(t,J＝7.6Hz,1H),7.12–7.04(m,1H),3.73(s,3H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),2.39(s,3H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例188：5-乙基-N-(7-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺188
Figure BDA0002843625830001502
a)N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(7-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A23
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17(200mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的悬浮液中添加4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(110mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热持续4小时。将所述混合物在减压下浓缩且将残余物用EtOAc(30mL)稀释且用水(25mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(95mg，52％)。LCMS-D：Rt 3.28min；m/z 509.0[M+H]+。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(7-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A24
将N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(7-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A23(95mg，0.18mmol)和TFA(4mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(40mg，61％)。LCMS-D：Rt 2.78min；m/z 359.1[M+H]+
c)5-乙基-N-(7-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺188
向5-乙基-2-甲氧基-N-(7-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A24(35mg，0.098mmol)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加10％Pd/C(7mg)且将混合物在室温下在H2气氛下搅拌过夜。过滤所述混合物，浓缩滤液且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc 4/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，85％)。LCMS-D：Rt 2.83min；m/z 361.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.90–7.83(m,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.50–7.40(m,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,1H),7.12–7.05(m,1H),3.73(s,3H),2.80(q,J＝7.5Hz,2H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),1.22(t,J＝7.5Hz,3H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例189：N-(7-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺189
Figure BDA0002843625830001511
a)N-(7-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A25
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二乙基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17(200mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的悬浮液中添加环丙基硼酸(61mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热持续4小时。将所述混合物在减压下浓缩且将残余物用EtOAc(30mL)稀释且用水(25mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(140mg，75％)。LCMS-D：Rt 3.34min；m/z 523.2[M+H]+。
b)N-(7-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺189
将N-(7-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A25(140mg，0.27mmol)和TFA(6mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(80mg，81％)。LCMS-D：Rt 2.86min；m/z 373.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.81(dd,J＝7.0,2.1Hz,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.50–7.43(m,1H),7.27–7.19(m,2H),7.12–7.06(m,1H),3.73(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),2.17–2.10(m,1H),1.15(t,J＝7.5Hz,3H),1.04–0.97(m,2H),0.90–0.84(m,2H)。
实施例190：N-(7-环己基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺190
Figure BDA0002843625830001521
a)N-(7-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A26
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17(200mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的悬浮液中添加环己-1-烯-1-基硼酸(90mg，0.71mmol)、Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)和K2CO3(148mg，1.07mmol)且将混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物在减压下浓缩且将残余物用EtOAc(30mL)稀释且用水(25mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(150mg，75％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)N-(7-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A27
将N-(7-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A26(150mg，0.26mmol)和TFA(7mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(65mg，60％)。LCMS-D：Rt 3.64min；m/z 413[M+H]+。
c)N-(7-环己基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺190
将N-(7-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A27(65mg，0.15mmol)和10％Pd/C(13mg)在EtOAc(10mL)中的混合物在室温下在H2气氛下搅拌持续3小时。过滤所述混合物且将滤液在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(40mg，61％)。LCMS-D：Rt 3.34min；m/z 415.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.87–7.82(m,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,1H),7.12–7.06(m,1H),3.72(s,3H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),1.85–1.75(m,4H),1.75–1.67(m,1H),1.61–1.48(m,2H),1.44–1.20(m,4H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例191：5-乙基-2-甲氧基-N-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺191
Figure BDA0002843625830001531
a)N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A29
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A17(150mg，0.27mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物中添加K2CO3(110mg，0.80mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(67mg，0.33mmol)和Pd(dppf)Cl2(20mg，0.027mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用0.5M HCl水溶液(30mL)稀释且在减压下移除大部分有机溶剂。将剩余水性混合物用DCM(40mL×3)提取且将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(80mg，53％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺191
将N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A29(80mg，0.14mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝80/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(50mg，86％)。LCMS-D：Rt 2.59min；m/z 413.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.34(s,1H),8.06(s,1H),7.91–7.84(m,2H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.50–7.43(m,1H),7.41–7.32(m,1H),7.13–7.06(m,1H),3.90(s,3H),3.74(s,3H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例192：5-乙基-2-甲氧基-N-(7-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺192
Figure BDA0002843625830001532
向N-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺137(200mg，0.49mmol)在甲苯(16mL)、水(8mL)和异丙醇(8mL)中的悬浮液中添加嘧啶-5-基硼酸(181mg，1.46mmol)、K3PO4(518mg，1.95mmol)和Pd(dppf)Cl2(36mg，0.049mmol)且将混合物在90℃下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物调节到pH 5-6且用EtOAc(20mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈棕色固体状的标题化合物(18mg，9％)。LCMS-D：Rt 2.49min；m/z411.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),9.34–9.18(m,2H),8.17(d,J＝8.1Hz,1H),8.06(d,J＝7.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.62–7.42(m,3H),7.17–7.06(m,1H),3.75(s,3H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例193：5-乙基-2-甲氧基-N-(6-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺193
Figure BDA0002843625830001541
a)N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A30
在0℃下在N2下向N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺138(4.1g，10.0mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲醇(2.5g，15.0mmol)和PPh3(6.6g，25.0mmol)在THF(100mL)中的溶液中添加DIAD(4.0g，20.0mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物在减压下浓缩且残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.0g，71％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(6-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A31
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A30(120mg，0.214mmol)、CH3B(OH)2(64mg，1.07mmol)、Pd(dppf)Cl2(31mg，0.428mmol)和K2CO3(148mg，1.07mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(72mg，68％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)5-乙基--2-甲氧基-N-(6-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺193
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(6-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A31(72mg，0.145mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(45mg，90％)。LCMS-D：Rt 2.76min；m/z 347.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.6(s,1H),7.94–7.87(m,1H),7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.49–7.42(m,1H),7.39(s,1H),7.23–7.16(m,1H),7.13–7.05(m,1H),3.72(s,3H),2.60(q,J＝7.5Hz,2H),2.43(s,3H),1.14(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例194：5-乙基-N-(6-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺194
Figure BDA0002843625830001551
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(6-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A32
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A30(200mg，0.356mmol)、乙基硼酸(132mg，1.78mmol)、Pd(dppf)Cl2(52mg，0.071mmol)和K2CO3(246mg，1.78mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物分配在DCM(200mL)与水(50mL)之间。分离各层且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(120mg，67％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙基-N-(6-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺194
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(6-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A32(120mg，0.24mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(80mg，94％)。LCMS-D：Rt 2.84min；m/z 361.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.6(s,1H),7.97–7.90(m,1H),7.69(d,J＝2.3Hz,1H),7.49–7.37(m,2H),7.26–7.19(m,1H),7.11–7.04(m,1H),3.72(s,3H),2.73(q,J＝7.6Hz,2H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),1.20(t,J＝7.6Hz,3H),1.14(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例195：N-(6-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺195
Figure BDA0002843625830001552
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺138(206mg，0.5mmol)、环丙基硼酸(215mg，2.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(73mg，0.1mmol)和K2CO3(345mg，2.5mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(80mg，43％)。LCMS-D：Rt 2.86min；m/z 373.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.6(s,1H),7.91–7.85(m,1H),7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.48–7.42(m,1H),7.27(s,1H),7.12–7.04(m,2H),3.72(s,3H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),2.10–2.00(m,1H),1.14(t,J＝7.5Hz,3H),1.07–0.99(m,2H),0.83–0.75(m,2H)。
实施例196：5-乙基-2-甲氧基-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺196
Figure BDA0002843625830001561
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A33
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A30(120mg，0.214mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(54mg，0.428mmol)、Pd(dppf)Cl2(31mg，0.043mmol)和K2CO3(148mg，1.07mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物分配在DCM(150mL)与水(50mL)之间。分离各层且将有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至5/1)纯化以生成呈棕色固体状的标题化合物(90mg，75％)。LCMS-D：Rt 3.05min；m/z 563.0[M+H]+。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺196
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A33(90mg，0.16mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至5/1)纯化以生成呈棕色固体状的标题化合物(30mg，46％)。LCMS-D：Rt 2.57min；m/z 413.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.6(s,1H),8.29(s,1H),8.06–7.95(m,2H),7.78(s,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.64–7.56(m,1H),7.50–7.42(m,1H),7.13–7.05(m,1H),3.87(s,3H),3.71(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),1.15(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例197：5-乙基-2-甲氧基-N-(6-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺197
Figure BDA0002843625830001571
将N-(6-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺138(100mg，0.24mmol)、嘧啶-5-基硼酸(45mg，0.36mmol)、Pd(PPh3)4(28mg，0.024mmol)和K2CO3(166mg，1.2mmol)在甲苯(8mL)、水(8mL)和异丙醇(2mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。添加2M NaOH水溶液(15mL)且将混合物在室温下搅拌持续20分钟。将所述混合物用EtOAc(20mL×2)洗涤，然后用浓HCl调节到pH 2且用DCM(50mL×2)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(15mg，15％)。LCMS-D：Rt 2.97min；m/z 411.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),9.24(s,3H),8.21–8.15(m,1H),8.11(s,1H),7.85–7.78(m,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.49–7.42(m,1H),7.13–7.05(m,1H),3.73(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例198：5-乙基-2-甲氧基-N-(4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺198
Figure BDA0002843625830001572
a)N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34
在0℃下在N2下向N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺129(2.1g，5.1mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲醇(1.3g，7.7mmol)和PPh3(3.35g，12.8mmol)在THF(200mL)中的溶液中添加DIAD(3.1g，15.3mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时，然后使其温至室温且搅拌过夜。将所述混合物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(1.2g，42％)。LCMS-D：Rt 3.40min；m/z 583.0[M+H]+。
b)N((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A35
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、甲基硼酸(43mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物调节到pH 2-3且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水(10mL)稀释且用DCM(25mL×3)提取。将组合的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EA＝5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(125mg，71％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)5-乙基-2-甲氧基-N-(4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺198
将N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A35(125mg，0.26mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后用DCM(100mL)稀释，用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(85mg，92％)。LCMS-D：Rt 2.69min m/z 347.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.6(s,1H),7.58-7.56(m,1H),7.52-7.46(m,3H),7.18-7.14(m,2H),3.73(s,3H),2.62-2.56(m,5H),1.14(t,J＝7.6Hz,3H)
实施例199：5-乙基-N-(4-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺199
Figure BDA0002843625830001581
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(4-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A36
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、乙基硼酸(53mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物调节到pH 2-3且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水(15mL)稀释且用DCM(20mL×3)提取。将组合的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(120mg，66％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙基-N-(4-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺199
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(4-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A36(120mg，0.23mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下在N2下搅拌持续3小时，然后用DCM(100mL)稀释，用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(75mg，89％)。LCMS-D：Rt2.80min 361.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.5(s,1H),7.60-7.49(m,4H),7.22-7.18(m,2H),3.81(s,3H),8.09(q,J＝7.6Hz,2H),2.59(q,J＝7.6Hz,2H),1.25(t,J＝7.6Hz,3H),1.14(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例200：N-(4-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺200
Figure BDA0002843625830001591
a)N-(4-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A37
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、环丙基硼酸(61mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。将所述混合物调节到pH 2-3且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水(15mL)稀释且用DCM(20mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(120mg，66％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)N-(4-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺200
将N-(4-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A37(130mg，0.25mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下在N2下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(85mg，92％)。LCMS-D：Rt 2.81min，373.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.6(s,1H),7.58-7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.53-7.42(m,3H),7.18-7.16(m,1H),6.86-6.84(m,1H),3.74(s,3H),2.72(m,1H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),1.14(t,J＝7.6Hz,3H),1.02-0.98(m,2H),0.82-0.78(m,2H)。
实施例201：N-(4-环己基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺201
Figure BDA0002843625830001601
a)N-(4-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A38
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、环己-1-烯-1-基硼酸(90mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。在减压下移除大部分溶剂，将残余物用水(30mL)稀释，调节到pH 1-2且用DCM(35mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(150mg，75％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)N-(4-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A39
将N-(4-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A38(150mg，0.27mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下在N2下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(80mg，73％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)N-(4-环己基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺201
将N-(4-(环己-1-烯-1-基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A39(80mg，0.19mmol)和10％Pd/C(16mg)在EtOAc(10mL)中的混合物在室温下在H2气氛下搅拌持续3小时。过滤所述混合物且将滤液在减压下浓缩以生成呈白色固体状的标题化合物(75mg，94％)。LCMS-D：Rt 3.24min，415.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.5(s,1H),7.58-7.48(m,4H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.62-3.56(m,1H),2.59(q,J＝7.6Hz,2H),1.91-1.71(m,5H),1.45-1.23(m,5H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例202：5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺202
Figure BDA0002843625830001611
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A40
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(90mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。在减压下移除大部分溶剂，将残余物用水(30mL)稀释，调节到pH 1-2且用DCM(35mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(105mg，53％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺202
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A40(105mg，0.19mmol)和TFA(2mL)的混合物在室温下在N2下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝80/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(60mg，79％)。LCMS-D：Rt 2.587min，m/z 413.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.2(s,1H),8.12(s,1H),7.90(s,1H),7.66-7.45(m,4H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),3.88(s,3H),3.75(s,3H),2.58(q,J＝7.6Hz,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例203：5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺203
Figure BDA0002843625830001612
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A41
将N-(4-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-((2,4-二甲氧基苯甲基)氧基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A34(200mg，0.36mmol)、嘧啶-5-基硼酸(43mg，0.71mmol)、K2CO3(148mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26mg，0.036mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和H2O(3mL)中的混合物在90℃下在N2下加热持续4小时。在减压下移除大部分溶剂，将残余物用水(30mL)稀释，调节到pH 1-2且用DCM(35mL×3)提取。将组合的有机提取物经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝60/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(95mg，47％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺203
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(4-(嘧啶-5-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A41(95mg，0.17mmol)和TFA(2mL)的混合物在室温下在N2下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈红色固体状的标题化合物(45mg，65％)。LCMS-D：Rt 2.50min，m/z 411.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.5(s,1H),9.24(s,1H),8.97(s,2H),7.86-7.79(m,2H),7.53-7.38(m,3H),7.13-7.11(m,1H),3.75(s,3H),2.55(t,J＝7.6Hz,2H),1.11(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例204：N-(5-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲氧基-5,6,7,8-四氢萘-2-磺酰胺204
Figure BDA0002843625830001621
将N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲氧基-5,6,7,8-四氢萘-2-磺酰胺113(219mg，0.5mmol)、乙基硼酸(185mg，2.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(73mg，0.1mmol)和K2CO3(345mg，2.5mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(20mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。然后将混合物调节到pH 1且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水(50mL)稀释且用DCM(100mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至2/1)、随后制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(52mg，27％)。LCMS-D：Rt 3.06min，m/z 387.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.4(s,1H),7.83(s,1H),7.54(s,1H),7.51–7.43(m,2H),6.84(s,1H),3.71(s,3H),2.77–2.65(m,6H),1.75–1.66(m,4H),1.24(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例205：N-(5-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲氧基-5,6,7,8-四氢萘-2-磺酰胺205
Figure BDA0002843625830001631
将N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲氧基-5,6,7,8-四氢萘-2-磺酰胺113(219mg，0.5mmol)、环丙基硼酸(215mg，2.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(73mg，0.1mmol)和K2CO3(345mg，2.5mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。然后将所述混合物用浓HCl调节到pH 1且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水(30mL)稀释且用DCM(100mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1至2/1)、随后制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(50mg，25％)。LCMS-D：Rt 3.07min，m/z399.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.4(s,1H),7.68(s,1H),7.54(s,1H),7.47–7.43(m,1H),7.40–7.35(m,1H),6.84(s,1H),3.71(s,3H),2.77–2.65(m,4H),2.08–2.00(m,1H),1.74–1.66(m,4H),1.04–0.96(m,2H),0.68–0.61(m,2H)。
实施例206：N-(4-氯-5-乙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺206
Figure BDA0002843625830001632
将N-(5-溴-4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺128(200mg，0.449mmol)、乙基硼酸(166mg，2.244mmol)、Pd(dppf)Cl2(66mg，0.09mmol)和K2CO3(310mg，2.244mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。然后将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 2且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水稀释且用DCM提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至2/1)、随后制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(15mg，9％)。LCMS-D：Rt 2.89min，m/z 395.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.4(s,1H),7.64(s,2H),7.61–7.57(m,1H),7.49–7.44(m,1H),7.15–7.10(m,1H),3.66(s,3H),2.80(q,J＝7.6Hz,2H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),1.21–1.11(m,6H)。
实施例207：N-(4-氯-5-环丙基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺207
Figure BDA0002843625830001641
将N-(5-溴-4-氯苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺128(200mg，0.449mmol)、环丙基硼酸(193mg，2.244mmol)、Pd(dppf)Cl2(66mg，0.09mmol)和K2CO3(310mg，2.244mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。然后将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 2且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水稀释且用DCM提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)、随后制备型TLC(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(20mg，11％)。LCMS-D：Rt 2.91min，m/z 407.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.4(s,1H),7.64–7.56(m,2H),7.52–7.44(m,1H),7.34–7.27(m,1H),7.17–7.11(m,1H),3.67(s,3H),2.60(q,J＝7.6Hz,2H),2.27–2.17(m,1H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H),1.08–1.00(m,2H),0.78–0.70(m,2H)。
实施例208：N-(5-环丙基-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺208
Figure BDA0002843625830001642
将N-(5-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺108(100mg，0.227mmol)、环丙基硼酸(97mg，1.133mmol)、Pd(dppf)Cl2(33mg，0.046mmol)和K2CO3(156mg，1.133mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)中的混合物在90℃下在N2下加热过夜。然后将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 2且在减压下移除大部分溶剂。将残余物用水稀释且用DCM提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1至3/1)、随后制备型TLC(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，33％)。LCMS-D：Rt 2.87min；m/z403.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.4(s,1H),7.63(d,J＝2.3Hz,1H),7.50–7.45(m,1H),7.32–7.26(m,1H),7.19–7.12(m,2H),3.92(s,3H),3.81(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),2.22-2.15(m,1H),1.15(t,J＝7.5Hz,3H),1.03–0.94(m,2H),0.76–0.64(m,2H)。
实施例209、210和211
Figure BDA0002843625830001651
a)叔丁基((3,5-二甲氧基苯甲基)氧基)二甲基硅烷A42
在室温下向(3,5-二甲氧基苯基)甲醇(10g，0.059mol)和咪唑(6.07g，0.089mol)在DMF(100mL)中的溶液中添加TBSCl(9.86g，0.065mol)且将混合物搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物用水洗涤，在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至10/1)纯化以生成呈无色油状的标题化合物(13g，77％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基苯亚磺酸锂A43
在-70℃下向叔丁基((3,5-二甲氧基苯甲基)氧基)二甲基硅烷A42(5g，0.018mol)和TMEDA(2.26g，0.020mol)在正己烷(100mL)中的溶液中添加n-BuLi(己烷中的2.5M溶液，7.8mL，0.020mol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。然后将所述混合物再冷却到-60℃且用SO2气体鼓泡持续30分钟。所得沉淀物通过过滤收集且用正己烷洗涤以生成标题化合物(6.2g，100％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基苯磺酰氯A44
在0℃下向4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基苯亚磺酸锂A43(6.2g，0.018mol)在正己烷(100mL)中的混合物中添加SO2Cl2(2.39g，0.018mol)且将混合物在0℃下搅拌持续1小时。固体通过过滤收集，用正己烷洗涤，然后溶解在EtOAc中且用水洗涤。将有机层在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1至5/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(2.4g，36％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
d)4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A45
在-78℃下向4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(819mg，4.99mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加LiHMDS(THF中的1M溶液，5.98mL，5.98mmol)且将混合物在0℃下搅拌持续30分钟，然后冷却到-60℃。添加4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基苯磺酰氯A44(1.9g，4.99mmol)在THF(20mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 5且用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至20/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(170mg，7％)。LCMS-D：Rt 3.33min，m/z 509.0[M+H]+。
e)4-(羟基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺209
向4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A45(170mg，0.334mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加TBAF(175mg，0.668mmol)且将混合物在室温下搅拌持续3小时。将反应用1M HCl水溶液淬灭且将混合物用EtOAc提取。将有机提取物在减压下浓缩且残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝100/1至50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，23％)。LCMS-D：Rt 1.93min，m/z394.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(s,1H),7.55(t,J＝8.2Hz,1H),7.18–7.12(m,1H),6.89–6.82(m,1H),6.72(s,2H),5.39(t,J＝5.8Hz,1H),4.49(d,J＝5.8Hz,2H),3.95(s,3H),3.77(s,6H)。
f)4-(溴甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A46
将4-(羟基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺209(1.0g，2.53mmol)、CBr4(2.52g，7.60mmol)和PPh3(1.99g，7.60mmol)在DCM(20mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩且残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝50/1至10:1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(600mg，52％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
g)4-(叠氮基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A47
将4-(溴甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A46(200mg，0.44mmol)和NaN3(85mg，1.31mmol)在DMF(5mL)中的溶液在50℃下加热持续3小时。将混合物倾入水中且通过过滤收集沉淀物。将滤饼用水洗涤且干燥以生成呈灰色固体状的标题化合物(100mg，54％)。LCMS-D：Rt 2.45min，m/z 420.1[M+H]+。
h)4-(氨基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺盐酸盐210
将4-(叠氮基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A47(300mg，0.716mmol)和PPh3(207mg，0.788mmol)在THF(8mL)和EtOH(6mL)中的溶液在室温下搅拌持续3小时。添加水(2mL)和浓HCl(2mL)且将混合物在55℃下加热持续3小时。在减压下移除大多数有机溶剂且将水性残余物用DCM洗涤。将水相在减压下浓缩以生成呈黄色固体状的标题化合物(150mg，53％)。LCMS-D：Rt 0.38min，m/z 394.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.54(t,J＝8.2Hz,1H),7.06–7.01(m,1H),6.87(s,2H),6.86–6.82(m,1H),4.12(s,2H),4.07(s,3H),3.89(s,6H)。
i)N-(3,5-二甲氧基-4-(N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基磺酰基)苯甲基)乙酰胺211
将4-(氨基甲基)-2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺盐酸盐210(130mg，0.33mmol)、NaHCO3(83mg，0.99mmol)和乙酸酐(101mg，0.99mmol)在THF(5mL)中的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(50mg，34％)。LCMS-D：Rt 1.93min，m/z 436.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.36(t,J＝5.8Hz,1H),7.55(m,1H),7.18–7.12(m,1H),6.89–6.81(m,1H),6.66(s,2H),4.24(d,J＝5.9Hz,2H),3.94(s,3H),3.76(s,6H),1.88(s,3H)。
实施例212：2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212
Figure BDA0002843625830001671
a)2,6-二氟-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A48
在-78℃下在氮气下向4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-胺(4.0g，24.0mmol)在THF(200mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(THF中的1M溶液，31.2mL，31.2mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续3小时。然后逐滴添加2,6-二氟苯基磺酰氯(10.2g，48mmol)在THF(20mL)中的溶液且使混合物缓慢地温至室温且搅拌过夜。添加水且将混合物用EtOAc(200mL×3)提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝6/1至2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(2.9g，35％)。LCMS-D：Rt 1.94min，m/z 341.1[M+H]+。
b)2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212
将2,6-二氟-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A48(450mg，1.32mmol)和NaOMe(428mg，7.92mmol)在MeOH(6mL)中的混合物在120℃下加热过夜，然后使其冷却到室温且过滤。将滤液在减压下浓缩且残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝50/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(100mg，21％)。LCMS-D：Rt 2.22min，m/z 353.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.6(s,1H),7.62(m,1H),7.56(t,J＝8.3Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.04(d,J＝8.5Hz,1H),7.00–6.92(m,1H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.80(s,3H)。
实施例213：2-羟基-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺213
Figure BDA0002843625830001681
将2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212(20mg，0.06mmol)、(6-甲氧基吡啶-3-基)甲醇(50.1mg，0.36mmol)和t-BuOK(20.2mg，0.18mmol)在NMP(1mL)中的混合物在120℃下加热持续16小时。LCMS分析指示仅已形成F水解产物。将混合物用HCl水溶液调节到pH<4，用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。所述工序用另一批2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212(52mg，0.15mmol)重复，将两种粗产物组合且通过制备型TLC(EtOAc/石油醚＝1/13，然后DCM/MeOH＝50/1至100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(135mg，19％)。LCMS-D：Rt 2.39min；m/z 350.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.2(s,1H),7.57(t,J＝8.4Hz,1H),7.41(t,J＝8.4Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.60-6.56(m,2H),3.91(s,3H),3.75(s,3H)。
实施例214：2-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-6-(甲基氨基)苯磺酰胺214
Figure BDA0002843625830001682
将2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212(30mg，0.085mmol)、甲胺盐酸盐(23mg，0.34mmol)和Et3N(52mg，0.51mmol)在乙醇(3mL)中的溶液在密封管中在120℃下加热过夜。将混合物在减压下浓缩且残余物通过制备型TLC(DCM)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(4mg，13％)。LCMS-D：Rt 2.49min；m/z 364.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(t,J＝8.0Hz,1H),7.30(t,J＝8.0Hz,1H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.33(d,J＝8.0Hz,1H),6.24(d,J＝8.0Hz,1H),3.94(s,3H),3.70(s,3H),2.79(s,3H)。
实施例215：2-(环丙基甲氧基)-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺215
Figure BDA0002843625830001691
向2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212(30mg，0.08mmol)在THF(4mL)中的溶液中相继添加t-BuOK(27mg，0.24mmol)、环丙基甲醇(17mg，0.24mmol)且将混合物在50℃下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc(20mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化以生成呈灰色固体状的标题化合物(4.4mg，13％)。LCMS-D：Rt 2.54min，m/z 405.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),7.57(t,J＝8.0Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.77-6.75(m,2H),3.91(s,3H),3.89(d,J＝6.8Hz,2H),3.77(s,3H),0.86-0.83(m,1H),0.43-0.24(m,4H)。
实施例216：2-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-6-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲氧基)苯磺酰胺216
Figure BDA0002843625830001692
向2-氟-6-甲氧基-N-(4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺212(30mg，0.08mmol)在NMP(3mL)中的溶液中相继添加t-BuOK(48mg，0.43mmol)、(2-甲氧基吡啶-4-基)甲醇(118mg，0.85mmol)且将混合物在室温下搅拌持续6小时。将所述混合物用水稀释，用1M HCl水溶液调节到pH 5-6且用EtOAc(20mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(5mg，12％)。LCMS-D：Rt 2.43min，m/z 472.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.65(s,1H),8.07(d,J＝5.2Hz,1H),7.51-7.39(m,2H),7.07-6.98(m,3H),6.79-6.75(m,3H),5.22(s,2H),3.84(s,3H),3.83(s,3H),3.81(s,3H)。
实施例217-222(表G)
表G.以下实施例根据关于215或216所述的方法合成。条件的变化已注释在表中。
Figure BDA0002843625830001701
Figure BDA0002843625830001711
实施例223：2,6-二甲氧基-N-(4-硝基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺223
Figure BDA0002843625830001721
在-78℃下在氮气下向4-硝基苯并[d]异噁唑-3-胺I10(478mg，2.63mmol)在THF(9mL)中的溶液中添加LiHMDS(THF中的1M溶液，5.30mL，5.30mmol)且将混合物在-78℃下搅拌持续3小时。然后添加2,6-二甲氧基磺酰氯I111(1.25g，5.27mmol)且将混合物温至室温且搅拌过夜。将反应用水淬灭且将混合物用EtOAc(80mL×3)提取。将组合的有机提取物用水(100mL×3)、盐水(50mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝1/0至50/1)纯化以生成呈黄色固体状的标题化合物(108mg，11％)。LCMS-D：Rt 2.23min；m/z 380.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.2(s,1H),8.19(d,J＝8.4Hz,2H),7.92(t,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,2H),3.71(s,6H)。
实施例224：N-(4-氨基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺224
Figure BDA0002843625830001722
向2,6-二甲氧基-N-(4-硝基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺223(70.0mg，0.18mmol)在EtOAc(30mL)中的溶液中添加10％Pd/C(40.0mg)且将混合物在室温下在氢气气氛下搅拌过夜。通过过滤移除催化剂，用EtOAc冲洗且在减压下浓缩滤液。对另一批2,6-二甲氧基-N-(4-硝基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺223(30mg，0.079mmol)重复所述工序且将粗产物组合且通过制备型TLC(DCM/MeOH＝50/1)纯化两次且通过制备型HPLC纯化两次以生成呈白色固体状的标题化合物(2.5mg，3％)。LCMS-D：Rt 2.25min；m/z 350.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,FDMSO-d6)δ7.52(t,J＝8.4Hz,1H),7.25(t,J＝8.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.4Hz,2H),6.66(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(d,J＝8.0Hz,1H),3.78(s,6H)。
实施例225：N-(5-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺225
Figure BDA0002843625830001731
a)N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A49
在0℃下在氮气下向N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺135(8.2g，19.9mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲醇(5.03g，29.9mmol)和PPh3(13.1g，49.9mmol)在THF(400mL)中的溶液中缓慢地逐滴添加DIAD(8.06g，39.9mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除溶剂且残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至5/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.7g，42％)。LCMS-D：Rt 3.39min，m/z 583.1[M+Na]+
b)3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A50
将N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A49(1.5g，2.67mmol)、Et3N(10mL)和Pd(dppf)Cl2(732mg，1mmol)在MeOH(150mL)中的混合物在120℃下在一氧化碳气氛(20巴)下加热持续7小时。将反应用1.7g N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A49和1.5g N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A49重复且将混合物组合且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1至3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(2.2g，49％)。LCMS-D：Rt 3.17min，m/z 563.1[M+Na]+
c)3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸A51
向3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A50(2.2g，4.07mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加3M NaOH水溶液(20mL)且将混合物在室温下搅拌过夜。将所述混合物用HCl水溶液调节到pH 1且在减压下移除溶剂。将残余物用水(100mL)稀释且用DCM(200mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(1.9g，89％)。LCMS-D：Rt 2.99min，m/z 549.1[M+Na]+。
d)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(5-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A52
在0℃下在氮气下向3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸(800mg，1.52mmol)A51在THF(5mL)中的溶液中缓慢地逐滴添加BH3·THF(THF中的1M溶液，10mL，10mmol)且将混合物温至室温且搅拌持续2小时。将所述混合物冷却到0℃且反应通过缓慢添加甲醇(20mL)来淬灭。在减压下移除溶剂且将残余物用水稀释且用DCM(200mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/0至40/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(700mg，90％)。LCMS-D：Rt 2.99min，m/z 513.1[M+H]+。
e)N-(5-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A53
在0℃下在氮气下向N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-N-(5-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺A52(200mg，0.39mmol)和Et3N(197mg，1.95mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加甲烷磺酰氯(89mg，0.78mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1.5h，然后无需处理和分离直接地用于下一步骤。
在0℃下在氮气下向吡唑(133mg，1.95mmol)在DMF(20mL)中的溶液中逐份添加t-BuOK(219mg，1.95mmol)且将混合物在室温下搅拌持续1.5小时。然后缓慢地添加含有甲烷磺酸(3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲酯(假定0.39mmol)的反应混合物且所得混合物在室温下搅拌持续30分钟。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将有机提取物用水(×3)、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(60mg，27％)。LCMS-D：Rt 3.01min，m/z 563.2[M+H]+。
f)N-(5-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺225
将N-(5-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A53(60mg，0.107mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，68％)。LCMS-D：Rt 6.03min，m/z 412.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),7.89(s,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.68(d,J＝2.0Hz,1H),7.58-7.49(m,3H),7.46(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,1H),6.31(t,J＝2.0Hz,1H),5.54(s,2H),3.68(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例226：N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺三氟乙酸酯226
Figure BDA0002843625830001751
a)3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺A54
将3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸A51(600mg，1.14mmol)和亚硫酰氯(5mL)的混合物在85℃下加热持续1.5小时，然后在减压下浓缩。将残余物溶解在DCM(3mL)中且在0℃下逐滴添加到浓NH4OH(10mL)中且将混合物在室温下搅拌持续30分钟。在减压下移除大部分溶剂且将残余物用水(20mL)稀释。所得沉淀物通过过滤收集，用水洗涤两次且干燥以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(400mg，67％)。LCMS-D：Rt 2.86min，m/z 526.2[M+H]+。
b)N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A55
将3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺A54(400mg，0.76mmol)和BH3·THF(THF中的1M溶液，20mL)的混合物在75℃下在氮气下加热过夜。然后将混合物冷却到0℃且反应通过缓慢添加甲醇(10mL)来淬灭。在减压下移除溶剂且将残余物用水稀释且用DCM(100mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1至10/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(150mg，39％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
c)N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺三氟乙酸酯226
将N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A55(50mg，0.098mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，86％)。LCMS-D：Rt 1.93min，m/z 362.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(br s,1H),8.53(br s,3H),8.11(s,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.70-7.68(m,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),4.13(s,2H),3.71(s,3H),2.64(q,J＝7.6Hz,2H),1.17(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例227：((3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氨基甲酸甲酯227
Figure BDA0002843625830001761
a)((3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氨基甲酸甲酯A56
在0℃下向N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A55(70mg，0.137mmol)和Et3N(69mg，0.685mmol)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(39mg，0.411mmol)且将混合物在室温下搅拌持续20分钟。在减压下移除溶剂且将残余物用水稀释且用DCM提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝100/0至40/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，43％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)((3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氨基甲酸甲酯227
将((3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氨基甲酸甲酯A56(30mg，0.0558mmol)和TFA(3mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(15mg，64％)。LCMS-D：Rt 2.45min，m/z 420.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),7.91(s,1H),7.79(t,J＝5.6Hz,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.55-7.43(m,3H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),4.29(d,J＝6.0Hz,2H),3.73(s,3H),3.58(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例228：N-((3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)乙酰胺228
Figure BDA0002843625830001771
a)N-((3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)乙酰胺A57
在0℃下在氮气下向N-(5-(氨基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A55(100mg，0.195mmol)和Et3N(98mg，0.975mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加乙酰氯(31mg，0.391mmol)且将混合物在室温下搅拌持续30分钟。将所述混合物用水稀释且用DCM提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(60mg，56％)，所述标题化合物直接地用于下一步骤。
b)N-((3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)乙酰胺228
将N-((3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)乙酰胺A57(60mg，0.108mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，68％)。LCMS-D：Rt 2.35min，m/z 404.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.7(br s,1H),8.55(br s,1H),7.85(s,1H),7.69(s,1H),7.47-7.39(m,3H),7.06(d,J＝7.2Hz,1H),4.33(d,J＝3.6Hz,2H),3.72(s,3H),2.60(q,J＝6.8Hz,2H),1.91(s,3H),1.17(t,J＝6.8Hz,3H)。
实施例229：5-乙基-N-(5-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺229
Figure BDA0002843625830001772
a)3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A58
将3-((N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A50(435mg，0.8mmol)和TFA(9mL)的混合物在室温下搅拌持续3小时，然后在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(200mg，89％)。LCMS-D：Rt 2.69min，m/z 391.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9(br s,1H),8.82(s,1H),8.18(dd,J＝9.2,1.6Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),7.48(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),3.90(s,3H),3.71(s,3H),2.64(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
b)3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸A59
向3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A58(220mg，0.56mmol)在THF/MeOH(10mL/10mL)中的溶液中添加2M NaOH水溶液(1.4mL，2.8mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除溶剂且将残余物溶解在水(10mL)中且将溶液调节到pH 2-3。所得沉淀物通过过滤收集以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(180mg，85％)。LCMS-D：Rt 2.51min，m/z 377.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.2(s,1H),11.86(s,1H),8.78(s,1H),8.16(dd,J＝8.8,1.2Hz,1H),7.71-7.66(m,2H),7.47(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),3.70(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
c)5-乙基-N-(5-(羟基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-2-甲氧基苯磺酰胺229
将3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸A59(50mg，0.13mmol)和BH3·THF(THF中的1M溶液，5mL，5mmol)的混合物在室温下在氮气下搅拌持续5小时。将反应用水(10mL)淬灭且在减压下移除大部分THF。将水性残余物调节到pH2-3且用DCM(15mL×3)提取。将组合的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(30mg，62％)。LCMS-D：Rt2.46min，m/z 363.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.6(s,1H),7.98(s,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(s,2H),7.46(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),5.35(t,J＝5.6Hz,1H),4.59(d,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例230：3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)-N-甲基苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺230
Figure BDA0002843625830001781
将3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸甲酯A58(50mg，0.13mmol)和甲胺(EtOH中的33％溶液，5mL)的混合物在密封管中在90℃下加热持续80分钟。在减压下移除溶剂且残余物通过制备型TLC纯化以生成呈浅黄色固体状的所需产物(18mg，36％)。LCMS-D：Rt 2.39min，m/z 390.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.53-8.51(m,2H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),3.69(s,3H),2.81(d,J＝4.4Hz,3H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例231：3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)-N,N-二甲基苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺231
Figure BDA0002843625830001791
将3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酸A59(70mg，0.19mmol)在亚硫酰氯(10mL)中的溶液在85℃下在氮气下加热持续3小时。然后将混合物在减压下浓缩以生成3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-碳酰氯，将其溶解在THF(2.5mL)中且用二甲胺(水中的40％溶液，5mL)处理。将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下移除大部分THF且将水性残余物调节到pH 2-3。沉淀物通过过滤收集以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(60mg，80％)。LCMS-D：Rt 2.40min，m/z 404.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H),7.71-7.63(m,3H),7.48(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),3.70(s,3H),3.01(s,3H),2.96(s,3H),2.63(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例232：3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺232
Figure BDA0002843625830001792
向根据关于3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)-N,N-二甲基苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺231所述的工序制备的3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-碳酰氯(63mg，0.16mmol)在THF(2.5mL)中的溶液中添加浓NH4OH(5mL)且将混合物历经周末在室温下搅拌。在减压下移除大部分THF且将水性残余物调节到pH 2-3。所得沉淀物通过过滤收集以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(37mg，62％)。LCMS-D：Rt 2.33min，m/z 376.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.49(s,1H),8.04(d,J＝7.6Hz,2H),7.69(d,J＝2.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝6.8Hz,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),3.68(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例233：N-(5-氰基苯并[d]异噁唑-3-基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺233
Figure BDA0002843625830001801
将3-((5-乙基-2-甲氧基苯基)磺酰胺基)苯并[d]异噁唑-5-甲酰胺232(22mg，0.058mmol)在POCl3中的溶液在110℃下在氮气下加热过夜。将反应用冰水(25mL)淬灭且将混合物用DCM(35mL×2)提取。将组合的有机提取物用水(50mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩以生成呈浅黄色固体状的标题化合物(19.8mg，90％)。LCMS-D：Rt2.61min，m/z 358.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.54(s,1H),8.07(d,J＝8.8,1.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.49(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),3.70(s,3H),2.65(q,J＝7.6Hz,2H),1.17(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例234：5-乙基-2-甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺234
Figure BDA0002843625830001802
a)N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A60
将N-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基苯磺酰胺A49(112mg，0.2mmol)、甲基硼酸(60mg，1mmol)、Pd(dppf)Cl2(29mg，0.04mmol)和K2CO3(138mg，1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物在90℃下在氮气下加热过夜。在减压下移除溶剂且将残余物用水(30mL)稀释且用EtOAc(100mL)提取。将有机提取物用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(60mg，61％)。LCMS-D：Rt 2.72min，m/z 347.2[M-DMB]+。
b)5-乙基-2-甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺234
将N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-乙基-2-甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺A60(60mg，0.12mmol)和TFA(5mL)的混合物在室温下搅拌持续4小时，然后在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(30mg，71％)。LCMS-D：Rt 2.72min，m/z 347.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78(s,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.49–7.44(m,3H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),3.72(s,3H),2.61(q,J＝7.6Hz,2H),2.40(s,3H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例235-238(表H)
表H.以下标靶根据关于5-乙基-2-甲氧基-N-(5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺234所述的工序制备
Figure BDA0002843625830001811
Figure BDA0002843625830001821
实施例239-242(表I)
方法IA：
Figure BDA0002843625830001822
向胺(0.2mmol，1.0当量)在吡啶(2mL)中的溶液中添加磺酰氯(1.5当量)且将混合物在微波照射下在120℃下加热持续2小时。将所述混合物分配在水与EtOAc之间，分离各层且将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC纯化以生成标题化合物。上述条件的变化已注释在表I中。
表I.以下实施例根据方法IA合成。条件的变化已注释在表中。
Figure BDA0002843625830001831
Figure BDA0002843625830001841
实施例243：N-(6-(3-氰基苯基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺243
Figure BDA0002843625830001851
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加(3-氰基苯基)硼酸(34mg，0.226mmol)、Na2CO3(36mg，0.339mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝100/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(24mg，46％)。LCMS-C：Rt2.44min，m/z 466.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.70(s,1H),8.34(s,1H),8.16(d,J＝7.5Hz,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.57(s,1H),7.51(t,J＝8.4Hz,1H),7.19(s,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.03(s,3H),3.78(s,6H)。
实施例244：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺244
Figure BDA0002843625830001852
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加甲基硼酸(14mg，0.226mmol)、Na2CO3(36mg，0.339mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(8mg，19％)。LCMS-C：Rt 2.18min，m/z 379.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),7.49(t,J＝8.5Hz,1H),6.97(s,1H),6.77(d,J＝8.5Hz,2H),6.70(s,1H),3.91(s,3H),3.77(s,6H),2.42(s,3H)。
实施例245：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(吡啶-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺245
Figure BDA0002843625830001853
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加吡啶-4-基硼酸(28mg，0.226mmol)、Na2CO3(36mg，0.339mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(22mg，44％)。LCMS-C：Rt0.58min，m/z 442.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),8.69(d,J＝5.3Hz,2H),7.84(d,J＝5.3Hz,2H),7.63(s,1H),7.50(t,J＝8.4Hz,1H),7.20(s,1H),6.78(d,J＝8.5Hz,2H),4.03(s,3H),3.78(s,6H)。
实施例246：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(吡啶-3-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺246
Figure BDA0002843625830001861
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶(47mg，0.226mmol)、Na2CO3(36mg，0.339mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(9mg，18％)。LCMS-C：Rt 0.77min，m/z 442.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,1H),9.02(d,J＝2.5Hz,1H),8.63(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.21(dt,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.54–7.48(m,2H),7.17(s,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.03(s,3H),3.79(s,6H)。
实施例247：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺247
Figure BDA0002843625830001862
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.113mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加(6-甲氧基吡啶-3-基)硼酸(35mg，0.226mmol)、Na2CO3(36mg，0.339mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝60/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(45mg，85％)。LCMS-C：Rt2.33min，m/z 472.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),8.63(d,J＝2.6Hz,1H),8.15(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.47(s,1H),7.10(s,1H),6.94(d,J＝8.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.02(s,3H),3.91(s,3H),3.79(s,6H)。
实施例248：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(3-甲氧基-5-甲基苯基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺248
Figure BDA0002843625830001871
a)2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环A61
将1-溴-3-甲氧基-5-甲基苯(500mg，2.49mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼戊环)(1.9g，7.49mmol)、乙酸钾(977mg，9.96mmol)和Pd(dppf)Cl2(196mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在回流下在N2下加热持续3小时。将所述混合物用EtOAc(300mL)稀释，用水(50mL×3)洗涤且将有机层经Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(300mg，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.08(s,1H),6.94(d,J＝2.6Hz,1H),6.87(s,1H),3.73(s,3H),2.30–2.25(m,3H),1.28(s,12H)。
b)2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(3-甲氧基-5-甲基苯基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺248
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.11mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环A61(55mg，0.22mmol)、K2CO3(61mg，0.44mmol)和Pd(PPh3)4(13mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用1M HCl水溶液调节到pH 4-5且用EtOAc提取。将组合的有机提取物用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(4.3mg，8％)。LCMS-C：Rt 2.56min，m/z 485.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(s,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.43(s,1H),7.18(s,1H),7.10(s,1H),7.05(s,1H),6.83(s,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.02(s,3H),3.81(s,3H),3.79(s,6H),2.36(s,3H)。
实施例249：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺249
Figure BDA0002843625830001881
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.11mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(1mL)中的溶液中添加(2-甲氧基吡啶-4-基)硼酸(33mg，0.22mmol)、Na2CO3(35mg，0.33mmol)和Pd(PPh3)4(13mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物倾入水中且用DCM提取。将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(5mg，10％)。LCMS-C：Rt 2.29min，m/z 472.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(br s,1H),8.26(d,J＝5.4Hz,1H),7.59(s,1H),7.50(t,J＝8.5Hz,1H),7.42(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.16(s,1H),6.78(d,J＝8.5Hz,2H),4.02(s,3H),3.90(s,3H),3.78(s,6H)。
实施例250：2,6-二甲氧基-N-(4-甲氧基-6-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺250
Figure BDA0002843625830001882
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(50mg，0.11mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(1mL)中的溶液中添加3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶(52mg，0.22mmol)、Na2CO3(35mg，0.33mmol)和Pd(PPh3)4(13mg，0.011mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物倾入水中且用DCM提取。将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(5mg，10％)。LCMS-C：Rt 2.25min，m/z 472.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,1H),8.63(s,1H),8.38(d,J＝2.7Hz,1H),7.81–7.79(m,1H),7.59(s,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.18(s,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.04(s,3H),3.94(s,3H),3.79(s,6H)。
实施例251：N-(6-(3-氰基-5-甲氧基苯基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺251
Figure BDA0002843625830001891
a)3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈A62
将3-溴-5-甲氧基苯甲腈(500mg，2.35mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼戊环)(1.8g，7.07mmol)、乙酸钾(923mg，9.4mmol)和Pd(dppf)Cl2·DCM(196mg，0.24mmol)的混合物在回流下在N2下加热持续4小时。添加水且将混合物用EtOAc(20mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(EtOAc/石油醚＝1/5)纯化以生成呈黄色油状的标题化合物(600mg，98％)。LCMS-C：Rt 2.66min；m/z 260.0[M+H]+。
b)N-(6-(3-氰基-5-甲氧基苯基)-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺251
向N-(6-溴-4-甲氧基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺89(415mg，0.94mmol)在1,4-二噁烷(80mL)和水(20mL)中的溶液中添加3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲腈A62(500mg，2.82mmol)、Na2CO3(399mg，3.77mmol)和Pd(PPh3)4(116mg，0.1mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc提取。将组合的有机提取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(40mg，8.6％)。LCMS-C：Rt 2.48min，m/z 495.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.69(br s,1H),7.89(s,1H),7.67(s,1H),7.57(m,1H),7.49(s,2H),7.15(s,1H),6.77(d,J＝8.5Hz,2H),4.02(s,3H),3.90(s,3H),3.77(s,6H)。
实例252：2,6-二甲氧基-N-(5-甲基-7-苯基苯并[d]异噁唑-3-基)苯磺酰胺252
Figure BDA0002843625830001892
向N-(7-溴-5-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)-2,6-二甲氧基苯磺酰胺239(50mg，0.117mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加苯基硼酸(22mg，0.176mmol)、Na2CO3(50mg，0.468mmol)和Pd(PPh3)4(14mg，0.012mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜。将所述混合物用水稀释且用EtOAc(30mL×3)提取。将组合的有机提取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化以生成呈白色固体状的标题化合物(40mg，80％)。LCMS-C：Rt2.49min；m/z 425.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87–7.80(m,2H),7.67–7.55(m,2H),7.48(t,J＝7.7Hz,2H),7.42–7.32(m,2H),6.69(d,J＝8.4Hz,2H),3.70(s,6H),2.45(s,3H)。
测定
蛋白质制备
KAT5
分子生物学：编码人类KAT5同工型的氨基酸残基2至461(Uniprot Q92993-2)的密码子优化的DNA序列(用于大肠杆菌中的表达)由GenScript USA Inc(Piscataway,NewJersey,USA)合成。此序列接合到设计成编码N-端六组氨酸标签、随后烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)裂解位点和随后KAT5序列的修饰的pET43a大肠杆菌表达载体中。所得蛋白质序列列于下文。
Figure BDA0002843625830001901
蛋白质表达：为了产生重组KAT5蛋白，将表达质粒转型到大肠杆菌BL21 DE3菌株中且在37℃下在补充有100μg/mL安比西林和50μM锌的1L体积超级肉汤(TB)中在振荡下生长，直至达到OD600 0.8。将培养物转换到18℃且通过添加异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷达0.5mM最终浓度来诱导蛋白质表达且将培养物再振荡过夜持续16小时。在表达之后，将细胞培养物在5000x g下离心持续20分钟且将细胞团块冷冻储存在-20℃下。
蛋白质纯化：蛋白质纯化通过使用6mL缓冲液/1g细胞的比率在溶解缓冲液(50mMHepes pH 7.4、500mM NaCl、5mM咪唑、5％[v/v]甘油、0.1％[w/v]CHAPS、2mM 2-巯基乙醇、3mM MgCl2、0.5mg/mL溶菌酶、全能核酸酶核酸内切酶[EMD Millipore]、1mM PMSF、无EDTA的完全蛋白酶抑制剂片剂[Roche])中解冻细胞团块(25g湿重)起始。细胞进一步通过使用Misonix液体处理器(6×30秒脉冲，振幅60[70瓦特])进行声波处理而溶解，然后在4℃下在48,000x g下离心。上清液(细胞溶解产物)与以Q缓冲液(20mM Hepes pH 7.4、1M NaCl)预平衡的20mL Q-Sepharose FF树脂(GE Healthcare)混合。然后将来自Q-Sepharose FF的未结合部分用以IMAC洗涤缓冲液(20mM hepes pH 7.4、500mM NaCl、35mM咪唑)预平衡的5mLcOmplete His-标签纯化树脂(Roche)孵育。将树脂用IMAC洗涤缓冲液洗涤，且结合的KAT5用IMAC洗脱缓冲液(20mM hepes pH 7.4、500mM NaCl、300mM咪唑)洗脱。将IMAC洗脱的蛋白质立即使用2 x HiPrep 26/10脱盐管柱(GE Healthcare)串联地脱盐到储存缓冲液(50mM柠檬酸钠pH 6.5、500mM NaCl、5％[v/v]甘油)中。脱盐的蛋白质进一步通过穿过在储存缓冲液中预平衡的HiLoad 26/60 Superdex 75管柱纯化。最后，KAT5蛋白使用Amicon Ultra离心过滤器单元(Utra-15 MWCO 10kDa)浓缩到1.5mg/mL，在液氮中速冻且储存在-70℃冷冻器中。
KAT6A
分子生物学：编码人类KAT6A的氨基酸残基507至778(Uniprot Q92794-1)的DNA序列通过PCR扩增，且接合到设计成编码NusA溶解性标签、随后六组氨酸标签和烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)裂解位点和随后KAT6A序列的修饰的pET大肠杆菌表达载体中。所得蛋白质序列列于下文。
Figure BDA0002843625830001911
蛋白质表达：为了产生重组KAT6A蛋白，将表达质粒转型到大肠杆菌BL21 DE3菌株中且在37℃下在补充有100μg/mL安比西林的1L体积超级肉汤(TB)中在振荡下生长，直至达到OD600 0.8。将培养物转换到18℃且通过添加异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷达0.5mM最终浓度来诱导蛋白质表达且将培养物再振荡过夜持续16小时。在表达之后，将细胞培养物在5000x g下离心持续20分钟且将细胞团块冷冻储存在-20℃下。
蛋白质纯化：蛋白质纯化通过使用5mL缓冲液/1g细胞的比率在溶解缓冲液(25mMTris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、5mM DTT、0.01％[v/v]Triton-X 100、5％[v/v]甘油、2mMMgCl2、10mM咪唑、0.5mg/mL溶菌酶、全能核酸酶核酸内切酶[EMD Millipore]、1mM PMSF、无EDTA的完全蛋白酶抑制剂片剂[Roche])中解冻细胞团块(40g湿重)起始。细胞进一步通过3次经过(在15000psi下)冰冷却的Avestin C5细胞压碎器而溶解，然后在4℃下在48,000x g下离心。上清液(细胞溶解产物)经由5μm过滤器过滤且使用Profinia亲和力色谱纯化系统(Bio-Rad)应用到以IMAC洗涤缓冲液(25mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、5mM DTT、0.01％[v/v]Triton-X 100、5％[v/v]甘油、20mM咪唑)预平衡的5mL HiTrap IMACSepharose FF管柱(GE Healthcare)上。然后将IMAC管柱用IMAC洗涤缓冲液洗涤，且将结合的KAT6A蛋白用IMAC洗脱缓冲液(25mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、5％[v/v]甘油、5mMDTT、250mM咪唑)洗脱。IMAC洗脱的蛋白质进一步通过穿过在储存缓冲液(25mM Tris-HClpH 7.8、500mM NaCl、5mM DTT、5％[v/v]甘油)中预平衡的HiLoad 26/60Superdex 200管柱纯化。最后，KAT6A蛋白使用Amicon Ultra离心过滤器单元(Utra-15 MWCO 10kDa)浓缩到≤1mg/mL，在液氮中速冻且储存在-70℃冷冻器中。
KAT6B获自SignalChem，目录号：K315-381BG
KAT7
分子生物学：编码人类KAT7的氨基酸残基325至611(Uniprot O95251-1)的密码子优化的DNA序列由GenScript USA Inc(Piscataway,New Jersey,USA)合成。此序列接合到设计成编码N-端六组氨酸标签、随后烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)裂解位点和随后KAT7序列的修饰的pET43a大肠杆菌表达载体中。所得蛋白质序列列于下文。
Figure BDA0002843625830001921
蛋白质表达：为了产生重组KAT7蛋白，将表达质粒转型到大肠杆菌BL21 DE3 RIL菌株中且在37℃下在补充有100μg/mL安比西林和50μM锌的1L体积超级肉汤(TB)中在振荡下生长，直至达到OD600 0.8。将培养物转换到18℃且通过添加异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷达0.5mM最终浓度来诱导蛋白质表达且将培养物再振荡过夜持续16小时。在表达之后，将细胞培养物在5000x g下离心持续20分钟且将细胞团块冷冻储存在-20℃下。
蛋白质纯化：蛋白质纯化通过使用10mL缓冲液/1g细胞的比率在溶解缓冲液(50mMHepes pH 7.5、300mM NaCl、5mM咪唑、0.05％[v/v]Brij 35、10％[v/v]甘油、3mM MgCl2、0.5mg/mL溶菌酶、全能核酸酶核酸内切酶[EMD Millipore]、1mM PMSF、无EDTA的完全蛋白酶抑制剂片剂[Roche])中解冻细胞团块(10g湿重)起始。细胞进一步通过使用Misonix液体处理器(6×30秒脉冲，振幅60[70瓦特])进行声波处理而溶解，然后在4℃下在48,000x g下离心。将上清液(细胞溶解产物)用以IMAC洗涤缓冲液1(25mM Hepes pH 7.5、800mM NaCl、5mM咪唑、10％[v/v]甘油、5mM DTT、0.01％[v/v]Brij35、50mM精氨酸、50mM谷氨酸)预平衡的1mL cOmplete His-标签纯化树脂(Roche)孵育。将所述树脂依序用IMAC洗涤缓冲液1和IMAC洗涤缓冲液2(25mM hepes pH7.5、300mM NaCl、20mM咪唑、10％[v/v]甘油、5mM DTT、0.01％[v/v]Brij 35、50mM精氨酸、50mM谷氨酸)洗涤。将结合KAT7蛋白用IMAC洗脱缓冲液(25mM hepes pH 7.5、200mM NaCl、500mM咪唑、10％[v/v]甘油、5mM DTT 0.01％[v/v]Brij35、50mM精氨酸、50mM谷氨酸)洗脱。将洗脱的蛋白直接地收集到4体积脱盐缓冲液(50mM柠檬酸钠pH 6.5、200mM NaCl、0.01％[v/v]Brij 35、10％[v/v]甘油、5mM DTT)中以使最终咪唑浓度达到100mM。IMAC洗脱的蛋白质立即使用2x HiPrep 26/10脱盐管柱(GEHealthcare)串联地脱盐到脱盐缓冲液中。脱盐的蛋白质进一步通过穿过在储存缓冲液(50mM柠檬酸钠pH 6.5、200mM NaCl、10％[v/v]甘油、5mM DTT)中预平衡的HiLoad 26/60Superdex 75管柱纯化。最后，KAT7蛋白使用Amicon Ultra离心过滤器单元(Utra-15MWCO10kDa)浓缩到3.5mg/mL，在液氮中速冻且储存在-70℃冷冻器中。
KAT8
分子生物学：编码人类KAT8的氨基酸残基177至447(Uniprot Q9H7Z6-1)的密码子优化的DNA序列(用于大肠杆菌中的表达)由Thermo Fisher Scientific GENEART GmbH(Regensberg,Germany)合成。此序列接合到设计成编码N-端六组氨酸标签、随后烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)裂解位点和随后KAT8序列的pPROEX Hta大肠杆菌表达载体中。所得蛋白质序列列于下文。
Figure BDA0002843625830001931
蛋白质表达：为了产生重组KAT8蛋白，将表达质粒转型到大肠杆菌BL21 DE3菌株中且在37℃下在补充有100μg/mL安比西林的1L体积超级肉汤(TB)中在振荡下生长，直至达到OD600 0.8。将培养物转换到18℃且通过添加异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷达0.5mM最终浓度来诱导蛋白质表达且将培养物再振荡过夜持续16小时。在表达之后，将细胞培养物在5000x g下离心持续20分钟且将细胞团块冷冻储存在-20℃下。
蛋白质纯化：蛋白质纯化通过使用3mL缓冲液/1g细胞的比率在溶解缓冲液(20mMHepes pH 7.5、500mM NaCl、5mM咪唑、5％[v/v]甘油、0.01％[v/v]Triton-X 100、5mM 2-巯基乙醇、2mM MgCl2、0.5mg/mL溶菌酶、全能核酸酶核酸内切酶[EMD Millipore]、1mM PMSF、无EDTA的完全蛋白酶抑制剂片剂[Roche])中解冻细胞团块(34g湿重)起始。细胞进一步通过3次穿过(在15000psi下)冰冷却的Avestin C5细胞压碎器而溶解，然后在4℃下在48,000x g下离心。将上清液(细胞溶解产物)经由0.2μm过滤器过滤且使用Profinia亲和力色谱纯化系统(Bio-Rad)应用到以IMAC洗涤缓冲液1(20mM Hepes pH 7.5、500mM NaCl、0.5mMTCEP、5mM咪唑)预平衡的5mL HiTrap IMAC Sepharose FF管柱(GE Healthcare)上。然后将IMAC管柱依序用IMAC洗涤缓冲液1和IMAC洗涤缓冲液2(20mM Hepes pH 7.5、500mM NaCl、0.5mM TCEP、10mM咪唑)洗涤且将结合的KAT8蛋白用IMAC洗脱缓冲液(20mM Hepes pH 7.5、500mM NaCl、0.5mM TCEP、500mM咪唑)洗脱。IMAC洗脱的蛋白质进一步通过穿过在储存缓冲液(20mM Hepes pH 7.5、500mM NaCl、1mM TCEP)中预平衡的HiLoad 26/60Superdex 200管柱纯化。最后，KAT8蛋白使用Amicon Ultra离心过滤器单元(Utra-15 MWCO 10kDa)浓缩到≤0.2mg/mL，在液氮中速冻且储存在-70℃冷冻器中。
乙酰基转移酶生物化学测定
为了测定测试化合物对KAT酶活性的抑制作用，在384孔低体积测定板中以8μL体积进行测定反应。所述反应在测定缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.8、15mM NaCl、1mM EDTA、0.01％Tween-20、1mM二硫苏糖醇和0.01％m/v鸡蛋白蛋白)中执行。
反应用1μM乙酰基辅酶A、100nM通过有限生物素化标记的全长重组组蛋白(KAT6A、KAT6B、KAT7：H3.1，KAT5、KAT8：H4)、分别10/5/8/40/20nM KAT5/KAT6A/KAT6B/KAT7/KAT8酶和乙酰基-赖氨酸特异性抗体(H3.1：Cell Signaling Technology，H4：Abcam)建立。在DMSO中制备测试化合物的11点稀释系列；使用针工具将100nL体积转移到含有底物的测定板中，然后添加酶以开始反应。阳性(无化合物，仅DMSO)和阴性(省略AcCoA)对照反应包括在同一板上且接受与化合物处理过的孔相同的量的DMSO。在添加所有试剂之后，将板用粘性密封件密封且在室温下孵育持续90分钟。然后添加额外4μL含有
Figure BDA0002843625830001941
蛋白A受体珠粒和链霉亲和素供体珠粒(PerkinElmer,Waltham,MA)的测定缓冲液达8μg/mL的最终浓度。在孵育持续2小时之后，所述板使用EnVision 2103多标记板式读取器(PerkinElmer)以HTS
Figure BDA0002843625830001942
模式读数。通过计算在同一板上相对于对照物关于各反应的百分比抑制(％I)(％I＝(I-CN)/(CP-CN)，其中CN/CP分别为阴性/阳性反应的平均值)，然后使％I数据对化合物浓度[I]拟合为％I＝(A+((B-A)/(1+((C/[I])^D))))，其中A为下渐近线，B为上渐近线，C为IC50值，且D为斜率，自原始读数获得IC50值。
结果显示于下表1至5中：
表1(TIP60-KAT5)
Figure BDA0002843625830001951
Figure BDA0002843625830001961
表2(MOZ-KAT6A)
Figure BDA0002843625830001971
Figure BDA0002843625830001981
表3(HBO-KAT7)
Figure BDA0002843625830001991
Figure BDA0002843625830002001
表4(MOF-KAT8)
Figure BDA0002843625830002002
表5(QKF-KAT6B)
Figure BDA0002843625830002011
组蛋白H3赖氨酸23乙酰化生物标记物测定
化合物在以下测定中针对其抑制组蛋白H3K23标记物的乙酰化的能力测试：
将细胞系U2OS在RPMI培养基和10％胎牛血清中以9,000个细胞/孔的密度接种在96孔光学质量组织培养板中，且使其在标准培养条件(摄氏37度，5％CO2)下粘附持续24小时。在此时期结束时，吸出培养基。将在DMSO中制备的化合物稀释液添加到培养基中，其中预留阴性对照孔以仅用DMSO处理且100％抑制阳性对照物接受10μM浓度的有效抑制剂化合物(例如，cas 2055397-28-7、苯甲酸、3-氟-5-(2-吡啶基)-、2-[(2-氟苯基)磺酰基]酰肼)(Baell,J.,Nguyen,H.N.,Leaver,D.J.,Cleary,B.L.,Lagiakos,H.R.,Sheikh,B.N.,Thomas.T.J.,Aryl sulfonohydrazides,WO2016198507A1,2016)，且将200μL转移到细胞中。在孵育持续24小时之后，将细胞在室温下用PBS中的3.7％甲醛固定持续20分钟，用含有0.1％Tween 20的磷酸盐缓冲生理盐水洗涤(5×5分钟)且用含有0.1％TritonX100的Odyssey阻断缓冲液(LI-COR,Lincoln,NE)阻断。添加在含有0.1％Tween20的Odyssey阻断缓冲液中的抗H3K23ac特异性抗体(Abcam ab177275)且在摄氏4度下孵育持续16小时。在洗涤(如上)之后，添加用Alexa647染料(LifeTechnologies)和Hoechst33342(1μg/mL，SigmaAldrich)标记的二抗用于1小时孵育。如先前洗涤板且在PerkinElmer Phenix高含量成像平台上读数。使用Columbus图像分析管线，通过Hoechst 33342染色定位个别细胞核且自相同区域中的Alexa647相关强度计算乙酰化水平。所得平均强度/细胞相对于同一板上的对照物直接地转化为百分比抑制且数据针对四参数逻辑模型进行拟合以确定50％抑制浓度(IC50)。
结果显示于下表6中：
表6
Figure BDA0002843625830002012
组蛋白H3赖氨酸14乙酰化生物标记物测定
化合物在以下测定中针对其抑制组蛋白H3赖氨酸14标记物的乙酰化的能力测试：
将细胞系U2OS在补充有10％胎牛血清和10mM Hepes的RPMI培养基中以3,000个细胞/孔的密度接种在384孔光学质量组织培养板中。使细胞在标准培养条件(摄氏37度，5％CO2)下粘附持续24小时。在此时期结束时，将细胞用无血清培养基洗涤。将在DMSO中制备的化合物稀释液添加到无血清培养基中，其中预留阴性对照孔以仅用DMSO处理且100％抑制阳性对照物接受10μM浓度的有效抑制剂化合物(例如，(Z)-4-氟-N-((3-羟基苯基)磺酰基)-5-甲基-[1,1'-联苯基]-3-甲酸肼)。在孵育持续24小时之后，将细胞在室温下用PBS中的4％甲醛固定持续15分钟，用磷酸盐缓冲生理盐水洗涤且用含有0.2％TritonX100和2％BSA的阻断缓冲液阻断。添加在阻断缓冲液中的抗H3K14ac特异性抗体(Cell SignallingTechnologies)且在摄氏4度下孵育过夜。在洗涤之后，在室温下添加用AlexaFluor 488染料(ThermoFisher)和Hoechst 33342(1μg/mL，Life Technologies)标记的二抗用于2小时孵育。洗涤板且在PerkinElmer Opera HCS高含量成像平台上读数。使用Columbus图像分析管线，通过Hoechst 33342染色定位个别细胞核且自相同区域中的AlexaFluor 488相关强度计算乙酰化水平。所得平均强度/细胞相对于同一板上的对照物转化为百分比抑制且数据针对四参数逻辑模型进行拟合以确定50％抑制浓度(IC50)。
结果显示于下表7中：
表7
Figure BDA0002843625830002021
H2A.Z赖氨酸7乙酰化生物标记物测定
化合物在以下测定中针对其抑制组蛋白H2A.Z赖氨酸7乙酰化标记物的能力测试：
将细胞系U2OS在补充有10％胎牛血清和10mM Hepes的RPMI培养基中以3,000个细胞/孔的密度接种在384孔光学质量组织培养板中。使细胞在标准培养条件(摄氏37度，5％CO2)下粘附持续24小时。在此时期结束时，将细胞用无血清培养基洗涤。将在DMSO中制备的化合物稀释液添加到无血清培养基中，其中预留阴性对照孔以仅用DMSO处理且100％抑制阳性对照物接受30μM浓度的有效抑制剂化合物对映异构体17-碘-N-(2-(噁唑-2-基)-2-苯基乙基)-2H-苯并[e][1,2,4]噻二嗪-3-甲酰胺1,1-二氧化物，其为2018年8月31日提交的同在申请中的申请GB1713962.7的化合物146。在孵育持续24小时之后，将细胞在室温下用PBS中的4％甲醛固定持续15分钟，用磷酸盐缓冲生理盐水洗涤且用含有0.2％TritonX100和2％BSA的阻断缓冲液阻断。添加在阻断缓冲液中的抗H2A.ZK7ac特异性抗体(Abcam)且在摄氏4度下孵育过夜。在洗涤之后，在室温下添加用AlexaFluor 488染料(ThermoFisher)和Hoechst 33342(1μg/mL，Life Technologies)标记的二抗用于2小时孵育。洗涤板且在PerkinElmer Opera HCS高含量成像平台上读数。使用Columbus图像分析管线，通过Hoechst 33342染色定位个别细胞核且自相同区域中的AlexaFluor 488相关强度计算乙酰化水平。将所得平均强度/细胞相对于同一板上的对照物转化为百分比抑制且数据针对四参数逻辑模型进行拟合以确定50％抑制浓度(IC50)。
结果显示于下表8中：
表8
Figure BDA0002843625830002031
发明陈述
1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法方法中：
Figure BDA0002843625830002032
其中R1、R2、R3和R4独立地选自：
(i)H；
(ii)C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基；
(iii)C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代；
(iv)C3-6环烷基；
(v)卤基；
(vi)CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基；
(vii)氰基、NH2或NO2；和
(viii)苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代；
Ar为苯基、萘基或C5-10杂芳基，所述基团任选被选自以下的一个或多个基团取代：
(i)C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代；
(ii)C3-6环烷基；
(iii)羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基；(iv)卤基；
(v)C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代；
(vi)苯氧基，其任选被氟取代；
(vii)苯基或C5-6杂芳基；
(viii)SF5或SO2CH3；
(ix)-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3；或
(x)C1-4烷基酯。
2.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为H。
3.根据陈述1或陈述2所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的一个为H。
4.根据陈述1或陈述2所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的两个为H。
5.根据陈述1或陈述2所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的三个为H。
6.根据陈述1或陈述2所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H。
7.根据陈述1至6中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基。
8.根据陈述7所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷基是未取代的。
9.根据陈述7所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷基是全氟化的。
10.根据陈述7所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷基被选自以下的基团取代：
(i)羟基；
(ii)C1-2烷氧基：
(iii)NH2；
(iv)苯基；
(v)C5-6杂芳基；
(vi)C1-4烷基氨基甲酰基；和
(vii)酰基酰胺基。
11.根据陈述1至10中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代。
12.根据陈述11所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基是未取代的。
13.根据陈述11所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基是全氟化的。
14.根据陈述11所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被C3-6环烷基取代。
15.根据陈述1至14中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C3-6环烷基。
16.根据陈述15所述的供使用的化合物，其中所述C3-6环烷基为环丙基。
17.根据陈述1至16中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为卤基。
18.根据陈述1至17中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基。
19.根据陈述1至18中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个选自氰基、NH2和NO2。
20.根据陈述19所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为氰基。
21.根据陈述19所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为NH2。
22.根据陈述19所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为NO2。
23.根据陈述1至22中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代。
24.根据陈述23所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为苯基，其任选被甲基或甲氧基取代。
25.根据陈述23所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C5-6杂芳基，其任选被一个或多个甲基取代。
26.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为甲氧基，R2为CH2OCH3或CH2OCH2CH3且R1和R3为H。
27.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为甲氧基，R2为任选被甲基或甲氧基取代的苯基，且R1和R3为H。
28.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为甲氧基，R2为任选被甲基取代的C5-6杂芳基。
29.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为甲氧基，R2为任选被甲基取代的C6杂芳基。
30.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为甲氧基且R1、R2和R3为H。
31.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为氯，R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H。
32.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R4为氯且R1、R2和R4为H。
33.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
34.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为苯基，其可未取代或被取代。
35.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为萘基，其可未取代或被取代。
36.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为被取代的苯基。
37.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为C5-10杂芳基，其可未取代或被取代。
38.根据陈述37所述的供使用的化合物，其中所述C5-10杂芳基选自：喹啉基、苯并噻唑基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并呋喃和苯并三唑基。
39.根据陈述37所述的供使用的化合物，其中所述C5-10杂芳基为喹啉基或苯并噻唑基。
40.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为基团：
Figure BDA0002843625830002071
41.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被C1-4烷基取代，所述C1-4烷基任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代。
42.根据陈述41所述的供使用的化合物，其中所述C1-4烷基是未取代的。
43.根据陈述41所述的供使用的化合物，其中所述C1-4烷基是全氟化的。
44.根据陈述41所述的供使用的化合物，其中所述C1-4烷基被选自以下的基团取代：
(i)羟基；
(ii)C1-2烷氧基：
(iii)NH2；和
(iv)C1-4烷基氨基甲酰基。
45.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被C3-6环烷基取代。
46.根据陈述45所述的供使用的化合物，其中所述C3-6环烷基为环己基。
47.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基取代。
48.根据陈述47所述的供使用的化合物，其中所述取代基为羟基。
49.根据陈述47所述的供使用的化合物，其中所述取代基为氰基。
50.根据陈述47所述的供使用的化合物，其中所述取代基为NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基。
51.根据陈述47所述的供使用的化合物，其中所述取代基为酰基酰胺基。
52.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被卤基取代。
53.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被C1-3烷氧基取代，所述C1-3烷氧基任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代。
54.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基是未取代的。
55.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基是全氟化的。
56.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被羟基取代。
57.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被C(O)NH2取代。
58.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被C3-6环烷基取代。
59.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被苯基取代。
60.根据陈述53所述的供使用的化合物，其中所述C1-3烷氧基被C5-6杂芳基取代。
61.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被任选被氟取代的苯氧基取代。
62.根据陈述61所述的供使用的化合物，其中Ar被苯氧基取代。
63.根据陈述61所述的供使用的化合物，其中Ar被OC6H4F取代。
64.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被苯基或C5-6杂芳基取代。
65.根据陈述64所述的供使用的化合物，其中Ar被苯基取代。
66.根据陈述64所述的供使用的化合物，其中Ar被C5-6杂芳基取代。
67.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被SF5或SO2CH3取代。
68.根据陈述67所述的供使用的化合物，其中Ar被SF5取代。
69.根据陈述67所述的供使用的化合物，其中Ar被SO2CH3取代。
70.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被-(CH2)n-Y-取代，其中Y为O或CH2，且n为2或3。
71.根据陈述70所述的供使用的化合物，其中Ar为苯基。
72.根据陈述33至39中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar被C1-4烷基酯取代。
73.根据陈述72所述的供使用的化合物，其中Ar被C(O)OCH3取代。
74.根据陈述72所述的供使用的化合物，其中Ar被C(O)OC(CH3)3取代。
75.根据陈述1至33和41至74中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar由式(Ar-1)表示：
Figure BDA0002843625830002081
其中Y为N或C-RA4，且Z为N或C-RA5；且
RA1、RA2、RA3、RA4(如果存在的话)和RA5(如果存在的话)独立地选自H和关于Ar的任选取代基。
76.根据陈述75所述的供使用的化合物，其中RA2为乙基。
77.根据陈述75所述的供使用的化合物，其中RA3选自环烷基；苯氧基；苯基；C5-6杂芳基；SF5；和SO2CH3。
78.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为5-乙基-2-甲氧基苯基。
79.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为5-CF3-2-甲氧基苯基。
80.根据陈述1至33中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为2,6-二甲氧基苯基。
81.根据陈述1所述的供使用的化合物，条件是当：
R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氨基苯基。
82.一种药物组合物，其包含根据陈述1至81中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
83.一种癌症治疗方法，其包括向需要治疗的患者施用根据陈述1至81中任一项所述的化合物或根据陈述82所述的药物组合物。
84.根据陈述83所述的方法，其中所述化合物与放射疗法和/或化学疗法同时或依序施用。
85.一种根据陈述1至81中任一项所述的化合物用于制造用于治疗癌症的药剂的用途。
86.根据陈述1至81中任一项所述的化合物或根据陈述82所述的药物组合物，其用于癌症治疗。
87.根据陈述86所述的化合物或药物组合物，其中所述治疗用于与放射疗法和/或化学疗法同时或依序施用。
88.根据陈述1至81中任一项所述的化合物或其药学盐。
89.根据陈述88所述的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H。
90.根据陈述89所述的化合物，其中R3不为CF3。
91.根据陈述89所述的化合物，其中R3不为取代的C1-3烷基。
92.根据陈述89所述的化合物，其中R3为乙基或丙基。
93.根据陈述89所述的化合物，其中R3不为任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、苯基、C5-6杂芳基、C1-4烷基氨基甲酰基、酰基酰胺基或被一个或多个氟基取代的C1-3烷基。
94.根据陈述88所述的化合物，其中R4为甲氧基。
95.根据陈述88所述的化合物，其中R4为Cl，且R1、R2和R3为H。
96.根据陈述88所述的化合物，其中R4为Cl，且R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H。
97.根据陈述88所述的化合物，其中R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
98.根据陈述88所述的化合物，条件是当：
R1、R2和R3为H，且R4为甲氧基时，
Ar不为未取代的萘基。
99.根据陈述88所述的化合物，条件是当：
R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为2,4,6-三甲基苯基。
100.根据陈述88所述的化合物，条件是当：
R1、R2和R4为H，且R3为CF3时，
Ar不为2-(二氟甲氧基)苯基。
101.根据陈述88所述的化合物，条件是当：
R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氟-3-甲基-苯基。
102.根据陈述88所述的供使用的化合物，条件是当：
R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氨基苯基。
103.一种根据陈述88至102中任一项所述的化合物的合成方法。
104.根据陈述1所述的供使用的化合物，其中：
R1、R2、R3和R4独立地选自：
(i)H；
(ii)C1-3烷基，其任选被以下取代：羟基、C1-2烷氧基、NH2、苯基、C5-6杂芳基、C1-4烷基氨基甲酰基、酰基酰胺基或一个或多个氟基；
(iii)C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代；
(iv)C3-6环烷基；
(v)卤基；
(vi)CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基；
(vii)氰基、NH2、NO2；
(viii)苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、羟基或甲氧基取代；Ar为苯基、萘基或C5-10杂芳基，所述基团任选被选自以下的一个或多个基团取代：
(i)C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代；
(ii)C3-6环烷基；
(iii)羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；酰基酰胺基；
(iv)卤基；
(v)C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代；
(vi)苯氧基，其任选被氟取代；
(vii)苯基、C5-6杂芳基
(viii)SF5、SO2CH3；
(ix)-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3；
105.根据陈述104所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H。
106.根据陈述104或105所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷基，其任选被以下取代：羟基、C1-2烷氧基、NH2、苯基、C5-6杂芳基、C1-4烷基氨基甲酰基、酰基酰胺基或一个或多个氟基。
107.根据陈述104至106中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代。
108.根据陈述104至107中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C3-6环烷基。
109.根据陈述104至108中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为卤基。
110.根据陈述104至109中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基。
111.根据陈述104至110中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个选自氰基、NH2和NO2。
112.根据陈述104至111中任一项所述的供使用的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、羟基或甲氧基取代。
113.根据陈述104所述的供使用的化合物，其中：
(a)R4为甲氧基，R2为CH2OCH3或CH2OCH2CH3且R1和R3为H；
(b)R4为甲氧基，R2为任选被甲基或甲氧基取代的苯基，且R1和R3为H；
(c)R4为甲氧基，R2为任选被甲基取代的C5-6杂芳基；
(d)R4为甲氧基且R1、R2和R3为H；
(e)R4为氯，R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H；
(f)R4为氯且R1、R2和R4为H；或
(g)R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
114.根据陈述104至113中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为：
(a)苯基，其可未取代或被取代；
(b)萘基，其可未取代或被取代；或
(c)C5-10杂芳基，其可未取代或被取代。
115.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被C1-4烷基取代，所述C1-4烷基任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代。
116.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被C3-6环烷基取代。
117.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基取代。
118.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被卤基取代。
119.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被C1-3烷氧基取代，所述C1-3烷氧基任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代。
120.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被任选被氟取代的苯氧基取代。
121.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被苯基或C5-6杂芳基取代。
122.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被SF5或SO2CH3取代。
123.根据陈述114所述的供使用的化合物，其中Ar被-(CH2)n-Y-取代，其中Y为O或CH2，且n为2或3。
124.根据陈述104至113中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar由式(Ar-1)表示：
Figure BDA0002843625830002121
其中Y为N或C-RA4，且Z为N或C-RA5；且
RA1、RA2、RA3、RA4(如果存在的话)和RA5(如果存在的话)独立地选自H和关于Ar的任选取代基。
125.根据陈述124所述的供使用的化合物，其中：
(a)RA2为乙基；或
(b)RA3选自环烷基；苯氧基；苯基；C5-6杂芳基；SF5；和SO2CH3。
126.根据陈述104至113中任一项所述的供使用的化合物，其中Ar为：
(a)5-乙基-2-甲氧基苯基；
(b)5-CF3-2-甲氧基苯基；或
(c)2,6-二甲氧基苯基。
127.根据陈述104至126中任一项所述的化合物或其药学盐。
128.根据陈述127所述的化合物，其中：
(a)R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H；
(b)R3不为CF3；
(c)R3不为取代的C1-3烷基；
(d)R3为乙基或丙基；
(e)R3不为任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、苯基、C5-6杂芳基、C1-4烷基氨基甲酰基、酰基酰胺基或被一个或多个氟基取代的C1-3烷基；
(f)R4为甲氧基；
(g)R4为Cl，且R1、R2和R3为H；
(h)R4为Cl，且R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H；或
(i)R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
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Claims (28)

1.一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，其用于疗法方法中：
Figure FDA0002843625820000011
其中：
R1、R2、R3和R4独立地选自：
(i)H；
(ii)C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基；
(iii)C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或被一个或多个氟基取代；
(iv)C3-6环烷基；
(v)卤基；
(vi)CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基；
(vii)氰基、NH2或NO2；和
(viii)苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代；
Ar为苯基、萘基或C5-10杂芳基，所述基团任选被选自以下的一个或多个基团取代：
(i)C1-4烷基，其任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或被一个或多个氟基取代；
(ii)C3-6环烷基；
(iii)羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基；
(iv)卤基；
(v)C1-3烷氧基，其任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或被一个或多个氟基取代；
(vi)苯氧基，其任选被氟取代；
(vii)苯基或C5-6杂芳基；
(viii)SF5或SO2CH3；
(ix)-(CH2)n-Y-，其中Y为O或CH2，且n为2或3；或
(x)C1-4烷基酯。
2.根据权利要求1所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷基，其任选被以下取代：
羟基，
C1-2烷氧基，其任选被一个或多个氟基取代，
NH2，
苯基，
C5-6杂芳基，
C1-4烷基氨基甲酰基，
酰基酰胺基，或
一个或多个氟基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C1-3烷氧基，其任选被C3-6环烷基或一个或多个氟基取代。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为C3-6环烷基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为卤基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为CORC，其中RC选自NRN1RN2，其中RN1和RN2独立地选自H和甲基。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为氰基、NH2或NO2。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中R1、R2、R3和R4中的至少一个为苯基或C5-6杂芳基，其任选被甲基、氰基、羟基或甲氧基取代。
10.根据权利要求1所述的供使用的化合物或盐，其中：
(a)R4为甲氧基，R2为CH2OCH3或CH2OCH2CH3，且R1和R3为H；
(b)R4为甲氧基，R2为任选被甲基或甲氧基取代的苯基，且R1和R3为H；
(c)R4为甲氧基，R2为任选被甲基取代的C5-6杂芳基；
(d)R4为甲氧基且R1、R2和R3为H；
(e)R4为氯，R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H；
(f)R4为氯且R1、R2和R4为H；或
(g)R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中Ar为：
(a)苯基，其可任选被取代；
(b)萘基，其可任选被取代；或
(c)C5-10杂芳基，其可任选被取代。
12.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被C1-4烷基取代，所述C1-4烷基任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、C1-4烷基氨基甲酰基或一个或多个氟基取代。
13.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被C3-6环烷基取代。
14.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被羟基；氰基；NRN3RN4，其中RN3和RN4独立地选自H和甲基；或酰基酰胺基取代。
15.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被卤基取代。
16.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被C1-3烷氧基取代，所述C1-3烷氧基任选被羟基、C(O)NH2、C3-6环烷基、苯基、C5-6杂芳基或一个或多个氟基取代。
17.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被任选被氟取代的苯氧基取代。
18.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被苯基或C5-6杂芳基取代。
19.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被SF5或SO2CH3取代。
20.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被-(CH2)n-Y-取代，其中Y为O或CH2，且n为2或3。
21.根据权利要求11所述的供使用的化合物或盐，其中Ar被C1-4烷基酯取代。
22.根据权利要求1至10中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中Ar由式(Ar-1)表示：
Figure FDA0002843625820000041
其中Y为N或C-RA4，且Z为N或C-RA5；且
RA1、RA2、RA3、RA4(如果存在的话)和RA5(如果存在的话)独立地选自H和关于Ar的任选取代基。
23.根据权利要求22所述的供使用的化合物或盐，其中：
(a)RA2为乙基；或
(b)RA3选自环烷基；苯氧基；苯基；C5-6杂芳基；SF5；和SO2CH3。
24.根据权利要求1至10中任一项所述的供使用的化合物或盐，其中Ar为：
(a)5-乙基-2-甲氧基苯基；
(b)5-CF3-2-甲氧基苯基；或
(c)2,6-二甲氧基苯基。
25.根据权利要求1所述的供使用的化合物或盐，条件是当：
R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氨基苯基。
26.一种式(I)化合物，或其药学盐：
Figure FDA0002843625820000051
其中R1、R2、R3、R4和Ar如权利要求1至25中任一项所定义。
27.根据权利要求26所述的化合物，其中：
(a)R1、R2、R3和R4中的至少一个不为H；
(b)R3不为CF3；
(c)R3不为被取代的C1-3烷基；
(d)R3为乙基或丙基；
(e)R3不为任选被羟基、C1-2烷氧基、NH2、苯基、C5-6杂芳基、C1-4烷基氨基甲酰基、酰基酰胺基或被一个或多个氟基取代的C1-3烷基；
(f)R4为甲氧基；
(g)R4为Cl，且R1、R2和R3为H；
(h)R4为Cl，且R2为C1-3烷基或溴，且R1和R3为H；或
(i)R3为C1-3烷基且R1、R2和R4为H。
28.根据权利要求26所述的化合物，条件是当：
(a)R1、R2和R3为H，且R4为甲氧基时，
Ar不为未取代的萘基；
(b)R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为2,4,6-三甲基苯基；
(c)R1、R2和R4为H，且R3为CF3时，
Ar不为2-(二氟甲氧基)苯基；
(d)R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氟-3-甲基-苯基；或
(e)R1、R2、R3和R4为H时，
Ar不为4-氨基苯基。
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