CN112067803A

CN112067803A - 磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒

Info

Publication number: CN112067803A
Application number: CN202010832648.0A
Authority: CN
Inventors: 崔大祥; 梁辉; 田静
Original assignee: Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Current assignee: Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Priority date: 2020-08-18
Filing date: 2020-08-18
Publication date: 2020-12-11

Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒。所述的检测试剂盒含有使用磁性纳米颗粒标记的免疫层析法检测新型冠状病毒的试剂；所述的检测新型冠状病毒的试剂包括：免疫磁珠，所述的免疫磁珠是偶联抗体的磁珠，所述的抗体是人IgM或者IgG的抗体；识别抗新型冠状病毒抗体的物质。本发明还提供了磁性纳米颗粒标记的免疫层析法检测新冠病毒抗体的方法及相关的试剂、试剂盒。结果显示，本发明的试纸条的检测准确率90%以上，最快5分钟内就可以判断结果。

Description

磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒病(COVID-19) 的暴发和在全球迅速蔓延。虽然病毒(SARS-CoV-2)核酸RT-PCR检测已成为诊断SARS-CoV-2感染的标准方法，但这些实时PCR检测试剂盒有很多局限性，假阴性率过高，迫切需要一种准确、快速的检测方法，快速发现大量感染患者和无症状携带者，防止病毒传播，确保患者得到及时治疗。

目前从分子层面上诊断SARS-COV-2包括有核酸的检测方法和抗原/抗体的免疫检测方法，基于核酸的检测方法包括病毒核酸特异基因检测和病毒基因组测序。目前已批准在临床上使用的核酸检测试剂盒，存在操作繁琐、耗时长、需要集中送检和专业设备和人员等限制，有很高的技术门槛，大大的限制了核酸检测方法的使用和便捷性，同时目前临床上发现假阴性率偏高。

发明内容

本发明目的在于：提供一种磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒，以便准确、快速的检测、快速发现新冠病毒的抗体。

本发明的再一目的在于：提供上述试剂盒的制备方法。

本发明的又一目的在于：提供一种使用上述试剂盒中含有的磁性纳米颗粒和试剂制备的试纸。

为了达到上述目的，本发明研究了可以使用的检测手段。除了检测病毒的核酸外，还有病毒病原检测法和抗体检测法。抗体检测方法主要是针对抗体IgG和IgM快速诊断试剂盒（胶体金法），以新型冠状病毒的S蛋白作为包被抗原和标记抗原，利用双抗原夹心原理，检测临床样本中针对病毒核蛋白的特异性抗体，该方法可以在15分钟内定性检测结果，同时无需复杂设备，适合初级医院的初筛，该方法适合定性筛查，可以在短期内大规模的筛查人群。基于病毒抗原的检测是制备特异性抗体，检测样本中特异性的病毒抗原，该方法既可以开发成应用于一线的快速定性检测方法，也可以开发成定量检测的检测方法。

磁性纳米颗粒是一种处于纳米级（1-100nm）的磁性材料，其所具有的表面效应、量子效应、小尺寸效应和宏观量子隧道效应等特性赋予了他们独特的光学、磁学、电学、热学、力学及化学活性。Fe₃O₄纳米磁珠具有独特的光、磁、电、热性能，可用于产生不同类型的检测信号、放大检测信号的强度及简化检测过程等，因此基于纳米材料的体外诊断技术具有广阔的应用前景。目前存在几种常见的磁性纳米颗粒，如氧化钴、氧化镍和氧化铁等。其中，氧化铁纳米颗粒由于其良好的生物相容性、生物可降解性和超顺磁性等，在生物医学领域得到了广泛的研究。本发明在上述研究基础上完成。

本发明目的通过下述方案实现：一种磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒，含有使用磁性纳米颗粒标记的免疫层析法检测新型冠状病毒的试剂，其中，包括：

免疫磁珠，所述的免疫磁珠是偶联抗体的磁珠，所述的抗体是人IgM或者IgG的抗体；

识别抗新型冠状病毒抗体的物质。

较好的，所述的免疫磁珠是Fe₃O₄纳米磁珠。

较好的，所述的免疫磁珠中，所述的抗体与磁珠的质量比例为（1-16）：40。可以是（1至16任一自然数）：40，例如，所述的抗体与磁珠的质量比例为1:40、1：20、1：10、1：8、1：5、1：4、1：3、2：5等。

所述的识别抗新型冠状病毒抗体的物质可以是新型冠状病毒S蛋白或者N蛋白，或者它们的活性片段。

2019-nCoV（SARS-CoV2）冠状病毒的结构基因组29883bp，基因组中包括了14个ORF框，较大的蛋白分子包括以下蛋白的区域， N：核衣壳蛋白；S：Spike蛋白；M：膜蛋白；HE：血凝素酯酶；E：包膜蛋白。感染细胞的主要是通过在S蛋白与细胞表明的ACE2结合进入细胞。所述的新型冠状病毒S蛋白或者N蛋白与我国卫生健康委员会的报道一致。

另一方面，本发明提供了一种检测试纸，所述的检测试纸包括上样垫、结合垫、吸收垫、反应膜。

所述的上样垫，作为待测样品加入的部位，与结合垫和反应膜连通；

所述的结合垫，含有上述结合人源免疫球抗体的免疫磁珠；

所述的反应膜，连接新冠病毒抗原，新冠病毒抗原识别新冠病毒抗体；

所述的吸收垫，吸收未与结合垫或者反应膜结合而留存的液体所含物质。

较好的，所述的检测试纸还包括背板，用于安置上述的上样垫、结合垫、吸收垫、反应膜。

较好的，所述的背板可以采用不易变形的材质，例如塑料、金属或者纺织物。在本发明的一个优选实施例中，所述的背板（背衬）采用PVC材质。

较好的，所述的反应膜能够与抗原等物质结合、不易脱落，但是在特定条件下，能够使用一定方法使抗原等物质与反应膜脱离。在本发明的一个优选实施例中，所述的反应膜采用硝酸纤维素材质，即NC膜。

较好的，结合垫上均匀分布含有二抗（人IgM/IgG）的磁珠。硝酸纤维膜（微孔膜）上设置有T线和C线。硝酸纤维膜（微孔膜）的T线部位连接有新冠病毒抗体相关的抗原。C线部位偶联识别并结合二抗的物质，例如，抗二抗的抗体。

测试结果判定方法如下：

1、阴性结果：20分钟内仅在对照线C区处出现一条棕色条带，检测线T区无色，为正常；

2、阳性结果：20分钟内出现两条棕色条带，即对照线C区和检测线T区各出现一条棕色条带，表明新冠病毒抗体检测为阳性；

3、无效结果：当对照线C区未出现有色条带，表明测试失败或试剂失效，需进行重复检测。

其中，IgM抗体阳性表示近期感染，IgG抗体阳性表示感染时间较长或既往感染。

计算测试灵敏度。灵敏度指的是实际为阳性的样本中，检测判断为阳性的样本比例，其计算公式为：灵敏度(%)= 100x[真阳性/(真阳性+假阴性)]。

本发明还包括上述检测试剂盒的制备方法，所述的制备方法包括：

将抗人IgM或者IgG的抗体与磁珠偶联，制备免疫磁珠；

使用新型冠状病毒S蛋白或者N蛋白，或者其活性片段，制备识别抗新型冠状病毒抗体的物质。

所述的免疫磁珠的制备方法包括活化、偶联、封闭等步骤。

1）活化：使用EDC和/或NHS活化磁珠表面的羧基；

2）偶联：将活化后的磁珠与羊抗人IgG和/或羊抗人IgM 抗体的活性片段偶联，所述的抗体与磁珠的比例为（1-16）：40，质量比；

3）封闭：对2）所得的免疫磁珠表面没有完全反应的活化基团进行封闭。

所述的活化是指，使用活化剂活化磁珠表面的羧基，形成衍生物。

较好的，使用EDC活化磁珠表面的羧基。由于其生成的衍生物很容易在溶液中水解，因此加入NHS，生成稳定的NHS酯，达到活化羧基的目的，所得到的活化磁珠与抗体的氨基反应生成免疫磁珠。

较好的，所述的免疫磁珠是Fe₃O₄纳米磁珠。

较好的，所述的免疫磁珠中，所述的抗体与磁珠的比例为（1-16）：40，质量比。

所述偶联用试剂可以是磷酸缓冲液PBS或者硼酸盐吐温溶液BS。

较好的，所述的偶联试剂的酸碱度为中性偏碱，例如,6.5-9.0。较好的，所述的偶联试剂的pH值为6.8、7.0、7.2、7.5、8.0、8.3、8.5、8.8，等等。

较好的，所述的偶联试剂可以采用0.005mol/L-0.030mol/L的浓度。例如，0.008M、0.012M、0.016M、0.021M、0.024M、0.026M、0.028M，等等。

较好的，还包括保存步骤。例如，放入低温，冷藏备用。

再一方面，本发明提供了上述的检测试剂盒的应用，所述的检测试剂盒用于识别或者检测新冠病毒的抗体。

所述的应用可以包括以下步骤：

将待测样品与上述免疫磁珠孵育；

将待测样品与上述的识别抗新型冠状病毒抗体的物质孵育；

根据待测样品与所述的磁珠和/或所述的识别新型冠状病毒抗体的物质反应的结果判断样品中是否含有抗新冠病毒的抗体。

较好的，所述的根据待测样品与所述的磁珠和/或所述的识别抗冠状病毒抗体的物质反应的结果判断样品中是否含有抗新冠病毒的抗体包括：

样本与所述的磁珠反应结果阳性但是与识别抗冠状病毒抗体的物质反应结果阴性，表明样本中不含有抗新型冠状病毒抗体；

样本与所述的磁珠反应结果阳性并且与识别抗冠状病毒抗体的物质反应结果阳性，表明样本中含有抗新型冠状病毒抗体；

样本与所述的磁珠反应结果阴性，表明测试失败或试剂失效，需进行重复检测。

再一方面，本发明提供了一种检测新冠病毒抗体的方法，使用上述检测试剂盒检测新冠病毒抗体。

较好的，所述的方法包括以下步骤：

将Fe₃O₄纳米磁珠与抗人IgG/M抗体进行偶联；

利用双抗原夹心原理，将新型冠状病毒的S蛋白或者N蛋白作为包被抗原捕获针对抗新型冠状病毒抗体；检测待测样本中新型冠状病毒的的存在。

本发明利用Fe₃O₄纳米磁珠具有独特的光、磁、电、热性能，可用于产生不同类型的检测信号、放大检测信号的强度及简化检测过程，将Fe₃O₄纳米磁珠与特异性抗体进行偶联，利用双抗原夹心原理，将新型冠状病毒的S蛋白作为包被抗原来捕获针对新冠的特异性抗体，检测临床样本中针对病毒核蛋白的特异性抗体，开发出了一套简易通过颜色变化就可以判断结果的的试纸条检测方法。该方法可以在15分钟内定性的检测结果，与传统方法相比，Fe₃O₄纳米磁珠的检测试纸条显色速度快，灵敏度高。

本发明中采用免疫层析的原理，利用超顺磁性Fe₃O₄纳米磁珠的高灵敏性和显色能力，开发了可以定性和定量分析检测血清中针对新型冠状病毒（2019-nCoV）的特异性抗体（IgG和IgM）的检测试纸条， IgM抗体阳性表示近期感染，IgG抗体阳性表示感染时间较长或既往感染，临床检测的结果显示，本发明试纸的检测准确率90%以上，最快5分钟内就可以判断结果。

附图说明

图1是BCA检测蛋白浓度标准曲线；

图2是试纸条模式图；

图3是检测结果示例。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，以下列举本发明的优选实施例。应当指出，下列实施例并非对本发明任何形式上和实质上的限制。对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

实施例1

免疫磁珠的偶联

免疫磁珠按下面方法制备，EDC能活化磁珠表面的羧基，形成衍生物，由于其生成的衍生物很容易在溶液中水解，因此加入NHS，生成稳定的NHS酯，达到活化羧基的目的，所得到的活化磁珠与抗体的氨基反应生成免疫磁珠。整个制备过程包括活化、偶联、封闭与保存四个步骤。

1）活化：以pH6.0，0.01M的MES溶液作为活化缓冲溶液，取10mg羧基磁珠于2ml离心管中，加入1000ul活化缓冲液，在漩涡振荡器上混合均匀，再将离心管放置于磁分离架上，待磁珠完全被吸附，将上清液除去；加入1000μl活化缓冲液重新洗涤磁珠两遍后，向磁珠中分别加入5mg/ml的EDC5mg/ml NHS 各200ul，在漩涡振荡器上混合均匀，37℃活化10mg磁珠表面的羧基30分钟。活化后，用MES溶液+0.05%TWEEN（吐温）20洗涤除去未反应的活化剂，再更换离心管，并用MES溶液+0.05%TWEEN20洗涤磁珠两遍。

2）偶联：以1000μl，pH9.0，0.02M的硼酸盐吐温缓冲液（0.05%Tween-20）溶液作偶联缓冲液，用1000μl的偶联缓冲液洗涤磁珠两遍；加995μl偶联缓冲液重悬洗涤后的磁珠，再加入5μl的20ug/ul的goat-anti-human IgG Fc和goat-anti-human IgM mu chain抗体，使得磁珠表面活化的羧基与goat-anti-human IgG Fc和goat-anti-human IgM mu chain抗体的氨基37℃反应3小时，然后室温震荡反应过夜，将抗体偶联于磁珠表面，得到免疫磁珠。偶联完成后收集反应上清液用BCA试剂盒检测偶联蛋白量。

3）封闭：加入1000μl的1%BSA对免疫磁珠表面没有完全反应的活化基团进行封闭，以降低在以后试验中可能发生的非特异性吸附,室温下封闭反应30分钟。

4）保存：用BST洗涤封闭后的免疫磁珠四次（最后将磁珠重悬在1000μl保存液,置于4度冰箱保存中。

实施例2

抗体偶联体系的优化

1)抗体浓度的检测

按照以上偶联步骤对磁珠和抗体进行偶联，在不同浓度下在偶联后不同的磁珠出现了不同的聚沉现象，静止后观察溶液的均匀程度，同时将偶联后的抗体点到试纸条测试，根据选择的深浅来判断抗体和磁珠偶联的最近浓度。结果显示，20ug抗体对应0.1mg的磁珠比例显色最佳。

2）不同偶联缓冲液对偶联的影响

按照以上偶联步骤对磁珠和抗体进行偶联，在不同的缓冲液中磁珠和抗体的偶联效率和稳定性不同，在PBS缓冲液中偶联后会出现大量的聚沉现象，而0.01M BS（PH=8.7）缓冲液中偶联后的抗体非常稳定，在4℃保存2-3周均不会出现沉淀的现象。该方法中推荐采用0.01M BS（PH=8.7）缓冲液为偶联缓冲液。

实施例3

免疫磁珠的表征

磁珠偶联率的对比：

将标准品用 PBS稀释至终浓度为 0.5mg/ml，分别取 0μl、1μl、2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl 标准液于酶反应孔中，每个标准溶液做一个平行重复，每孔加PBS补足到总体积为20μl，再向所有加了标准液或上清液的酶反应孔中加入 200μl BCA 反应液，在60℃情况下轻微混匀后反应 30 分钟；用酶标仪检测各孔的吸光度值。根据标准液的浓度与吸光值做出标准曲线，再根据上清液的吸光值得到上清液中抗体的量，从而得出磁珠表面抗体的偶联量。

将制备的表面带羧基的磁性粒子（样1）和实验室所制得的表面既带氨基又带羧基的磁性粒子（样2）作比较，它们偶联完后，其上清液与BCA反应，通过酶标仪的检测得到的各孔反应的吸光度值如下表所示：

。

根据表3中标准溶液吸光度值与标准蛋白浓度，得出标准蛋白浓度与吸光度的标准曲线，如通过计算样1，得图1的标准曲线及公式。

图1是BCA检测蛋白浓度标准曲线。如图1所示，将样1所测的三个吸光度值求出平均值，代入公式y=0.6697x+0.1383(y为吸光度，x为蛋白质浓度，R²为拟合度)，算出样本上清液的浓度26.4ug/ml,上清液体积为1ml,则未偶联上磁珠的抗体质量为26.4ug，因加入抗体的量为100ug，则得出偶联率为73.6%，同理，求得样品2的偶联率为58.7%，则表面带大量羧基的粒子（样1）比表面既带氨基又带羧基的粒子（样2）偶联率要高，羧基活化偶联磁珠效果更好。

实施例4

检测试纸条的制备

试纸条样品垫及结合垫按如下方法处理：（1)将玻璃纤维裁剪为25mm×5mm大小。为了优化试纸条的性能，在构建之前，需对样品垫进行预处理。将裁剪好的玻璃纤维浸泡于PBST中浸泡半小时。再将浸泡后的样品垫放于37℃烘箱中烘烤2小时后取出，制成样品垫，备用。（2）将玻璃纤维裁剪成 5mm×5mm 大小。用结合垫处理液将裁剪好的玻璃纤维先浸泡30分钟，将稀释后的免疫磁珠溶液超声5 分钟，用移液枪吸取 15ul 超声后的稀释免疫磁珠溶液，均匀点于结合垫上，置于37℃烘箱1小时，制成结合垫。（3）最后将处理好的样品垫、结合垫和商品化试纸条中已经点好T线（Sars-cov-2 spike 抗原和分析获得的N蛋白表位多肽）和C线（rabbit anti-goat IgG HL）的NC膜进行贴膜组装，组装后的试纸条用切割机切成5mm宽的试纸条。

如图2所示，试纸包括背板，用于安置上述上样垫、结合垫、吸收垫、反应膜。上样垫、结合垫、反应膜、吸收垫依次连接，排列于背板上。上样垫置于结合垫前端，结合垫的后端与反应膜的前端相接，反应膜的后端与吸收垫的前端相接。样品垫处于最前端，用于加入待测样品。结合垫上均匀分布含有二抗（人IgM/IgG）的磁珠。硝酸纤维膜（微孔膜）上设置有T线和C线。硝酸纤维膜（微孔膜）的T线部位连接有新冠病毒抗体相关的抗原。该抗原能够与待测抗体（被测抗体）识别并结合，二抗也能够识别并结合待测抗体（被测抗体）。硝酸纤维膜（微孔膜）的T线部位连接有识别并结合二抗的抗体。使用时，将待测样品加入样品垫部位，样品流经结合垫达到硝酸纤维素膜部位，其中的新冠病毒抗体与T线部位的抗原结合，同时与二抗结合。没有结合的二抗流经C线部位时，与抗（磁珠）二抗的抗体识别并结合。未发生反应或者未结合的物质经吸收垫流出。

实施例5

敏感性检测

样品来源：

阳性标准品P1-P10，阴性标准品N1-N7（购自中国食品药品检定研究院国家药品标准物质）。

检测方法：

用三个批次的试剂盒根据试剂盒的使用说明书去检测试剂盒检测样本阴性和阳性结果的符合率。

检测结果如表4所示：

。

使用三个批次的试剂盒检测了10个阳性标准品 (P1-P10)，所有结果都是阳性，阳性的符合率为 100%。7 个阴性标准品 (N1-N7) 都是阴性，特异性为 100%。

实施例6

特异性的检测

样品来源：

阴性样品: 阴性标准品 N1; 弱阳性样品: 阳性标准品 P1; 阳性样品: 阳性标准品 P5。

检测方法通过人工添加制备干扰样品（血红蛋白，胆红素，甘油三酸酯）。通过使用三个批次的试剂盒来测试三种浓度的干扰样品来比较干扰样品和未添加干扰样品之间的差异。

检测结果如表6所示：

试验结果表明，当阴性样品、弱阳性样品和阳性样品加入血红蛋白浓度5.0mg/mL，甘油三酯浓度25mg/mL，胆红素浓度0.2mg/mL时，干扰样品的检测结果与未添加样品的检测结果一致，无差异。结果表明，干扰剂对该浓度的检测结果没有影响，但仍需避免使用特殊样品：高脂血症、溶性样品和溶血性标本中可能会出现红色背景,这可能会影响检测结果。

实施例7

临床样品检测范围和线性

选择确定滴度的含有抗新冠IgM抗体/IgG抗体新冠康复者的的灭活血清的临床样本20个,按照比例对血清进行稀释，按照采用标准品确定最低检测限浓度水平进行验证，阳性检出率100%。

以上所述，仅为本申请的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域技术的技术人员在本申请公开的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此，本申请的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，含有使用磁性纳米颗粒标记的免疫层析法检测新型冠状病毒的试剂，其中，所述的试剂包括：

免疫磁珠，是偶联抗体的磁珠，所述的抗体是抗人IgM或者IgG的抗体，或者抗人IgM或者IgG的抗体的活性片段；识别抗新型冠状病毒抗体的物质。

2.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁珠中，抗体与磁珠的质量比例为（1-16）：40。

3.一种检测试纸，其特征在于，所述的试纸包括上样垫、结合垫、吸收垫、反应膜；

所述的上样垫，作为待测样品加入的部位，与结合垫以及反应膜连通；

所述的结合垫，与权利要求1所述的免疫磁珠结合；

所述的反应膜，连接新冠病毒抗原，所述的新冠病毒抗原识别新冠病毒抗体；

4.权利要求1或2所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

将抗人IgM或者IgG的抗体与磁珠偶联，制备免疫磁珠；

使用新型冠状病毒抗原制备识别抗新型冠状病毒抗体的物质；

所述的新型冠状病毒抗原是新型冠状病毒S蛋白和/或N蛋白，或者新型冠状病毒S蛋白和/或N蛋白的活性片段。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的免疫磁珠的制备包括：

1）活化：使用EDC和/或NHS活化磁珠表面的羧基；

2）偶联：将活化后的磁珠与羊抗人IgG和/或羊抗人IgM 抗体的活性片段偶联，所述的抗体与磁珠的质量比例为（1-16）：40；

6.权利要求1所述的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒用于检测新冠病毒的抗体。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的应用包括：

将待测样品与权利要求1所述的磁珠孵育；

将待测样品与权利要求1所述的识别抗新型冠状病毒抗体的物质孵育；

根据待测样品与所述的磁珠和/或所述的识别抗新型冠状病毒抗体的物质反应的结果，判断样品中是否含有抗新冠病毒的抗体。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的根据待测样品与所述的磁珠和/或所述的识别抗新型冠状病毒抗体的物质反应的结果，判断待测样品中是否含有抗新冠病毒的抗体，包括：

待测样品与所述的磁珠反应结果阳性、但是与识别抗新型冠状病毒抗体的物质反应结果阴性，表明样本中不含有抗新型冠状病毒抗体；

待测样品与所述的磁珠反应结果阳性、并且与识别抗新型冠状病毒抗体的物质反应结果阳性，表明样本中含有抗新型冠状病毒抗体；

待测样品与所述的磁珠反应结果阴性，表明测试失败或试剂失效。

9.一种检测新冠病毒抗体的方法，其特征在于，使用权利要求1或2的检测试剂盒检测新冠病毒抗体。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将Fe₃O₄纳米磁珠与人源免疫球抗体进行偶联；

利用双抗原夹心原理，将新型冠状病毒的S蛋白或者N蛋白或者其活性片段，作为包被抗原捕获针对抗新型冠状病毒抗体；检测待测样本中新型冠状病毒的的存在。