CN111505184A - 一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于分析技术领域,涉及到一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法。本发明采用高效液相色谱法,色谱条件为色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶;流动相及洗脱方式:以含有0.05%‑2%三乙胺的磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,并按照一定的程序进行梯度洗脱;流速:0.5‑1.5 mL/min;柱温:20‑35℃;进样器温度:2‑25℃;进样量:20‑80μL;检测波长:200 nm、265 nm、325 nm、285 nm、448 nm。本发明的测定方法在样品制备过程中加入抗氧化剂,使得样品更加稳定,能够提高检测的准确度,并基于实际产品检测需求开发,适用于同时含有脂溶性维生素和水溶性维生素的产品,可同时检测6种维生素,包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9。

Description

一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法
技术领域
本发明属于分析技术领域,涉及到一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法。
背景技术
维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质,在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。这类物质在体内既不是构成身体组织的原料,也不是能量的来源,而是一类调节物质,在物质代谢中起重要作用。这类物质由于体内不能合成或合成量不足,所以虽然需要量很少,但必须经常由食物供给。
近年来,市面上相关的维生素产品越来越多,大部分是复合水溶性维生素产品或复合脂溶性维生素产品,其检测方法相对简单。而同时含有水溶性维生素和脂溶性维生素的产品,由于其基质复杂,对于分析检测具有较大的难度。同时,维生素对于光、热、氧等外部条件较为敏感,对于检测方法的可靠性也是一个挑战。因此,针对同时含有脂溶性维生素和水溶性维生素的产品,开发一个快速、准确、高效的方法十分重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足,提供了一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法。本发明的测定方法在样品制备过程中加入抗氧化剂,使得样品更加稳定,能够提高检测的准确度,并基于实际产品检测需求开发,适用于同时含有脂溶性维生素和水溶性维生素的产品,可同时检测6种维生素,包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,所述检测方法为高效液相色谱法,色谱条件为:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶;
流动相及洗脱方式:以含有0.05%-2%三乙胺的磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure BDA0002508951850000011
流速:0.5-1.5mL/min;
柱温:20-35℃;
进样器温度:2-25℃;
进样量:20-80μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm。
进一步地,所述检测方法具体包括以下步骤:
1)供试品溶液的制备
取供试品,制成供试品溶液;
2)对照品溶液的制备
取维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9,制成对照品溶液;
3)测定
a.精密量取对照品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图;
b.精密量取供试品溶液注入液相色谱仪,同法测定;
c.按外标法以峰面积计算供试品中各种维生素的含量。
进一步地,所述供试品溶液的制备采用以下方法:取供试品,加流动相A溶解并稀释25-2000倍,制成供试品溶液。
进一步地,所述对照品溶液的制备采用以下方法:精密称取维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6和维生素B9对照品,加入维生素C钠,用流动相A溶解并稀释,作为对照品溶液,其中制备的各个对照品溶液浓度与供试品溶液中对应物质的浓度接近。
进一步地,所述含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法在冻干粉针剂生产中间体维生素含量测定中的应用。
与现有技术比,本发明具有以下优点:
(1)本发明在样品配制时加入抗氧化剂维生素C钠,使得样品更加稳定,提高了检测的准确度。
(2)本方法基于实际产品检测需求开发,适用于同时含有脂溶性维生素和水溶性维生素的产品,可同时检测6种维生素,包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6和维生素B9。
(3)同时含有脂溶性水溶性维生素的产品为复方制剂,成分种类较多,本发明针对于该类产品开发,能够在排除其他组分干扰的情况下快速分析相关组分的含量,为质量控制部门提供了可靠的检测方法。
附图说明
图1是实施例1对照品中维生素B1、维生素B3的测定结果。
图2是实施例1对照品中维生素B2的测定结果。
图3是实施例1对照品中维生素B5的测定结果。
图4是实施例1对照品中维生素B6的测定结果。
图5是实施例1对照品中维生素B9的测定结果。
图6是实施例1供试品中维生素B1、维生素B3的测定结果。
图7是实施例1供试品中维生素B2的测定结果。
图8是实施例1供试品中维生素B5的测定结果。
图9是实施例1供试品中维生素B6的测定结果。
图10是实施例1供试品中维生素B9的测定结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例及附图对本发明的技术方案作进一步的说明。
实施例1
一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,包括如下步骤:
1)对照品溶液的配制:精密称取维生素B1对照品18mg、维生素B2对照品10mg、维生素B3对照品100mg、维生素B5对照品35mg、维生素B6对照品15mg、维生素B9对照品10mg、维生素C钠试剂40mg至100mL容量瓶,以流动相A溶解并稀释至刻度,制成对照品溶液,注入液相色谱仪。
2)供试品溶液的配制:取一瓶样品,加适量流动相A溶解,转移至25mL容量瓶,再多次用流动相A清洗样品瓶,并将溶液全部转移至25mL容量瓶中,以流动相A定容至刻度,摇匀,精密量取1mL至50mL容量瓶,以流动相A定容至刻度,摇匀,为供试品溶液,注入液相色谱仪。
3)高效液相色谱检测:待测样品通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离,在各对应的检测波长下,对待测物质进行定性(以各维生素的相对保留时间作为定性依据)与定量检测(以对照品峰面积通过外标法计算),液相色谱条件如下:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶
流动相及洗脱方式:以含有0.05%三乙胺的10mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure BDA0002508951850000031
流速:1.0mL/min;
柱温:25℃;
进样器温度:5℃;
进样量:50μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm;
4)计算
采用外标法计算
Figure BDA0002508951850000032
式中:Cst为对照品溶液中相应维生素的实际浓度,μg/mL
As为样品溶液中相应维生素的峰面积(注:VB2为核黄素磷酸钠和核黄素5个峰的总峰面积);
Ast为对照品溶液中相应维生素的平均峰面积(取第二份对照品溶液的两针,n=2)(注:VB2为核黄素磷酸钠和核黄素5个峰的总峰面积);
f为样品溶液稀释因子;
Cs为样品中相应维生素的浓度,mg/瓶。
5)结果
如图1-5和图6-10所示,其中图1-5为5个不同波长下对照品的测定结果,图6-10为5个不同波长下样品的测定结果,从色谱图结果可以发现各维生素对应的主峰前后均无干扰,各个组分的保留时间见表1:
表1实施例1中含有多种维生素的冻干粉针剂中个个组分的保留时间
Figure BDA0002508951850000041
通过表1可以看出采用本申请实施例1的测定方法对照品和供试品中各组分对应的色谱峰的保留时间一致。
实施例2
一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其加标回收率测定包括如下步骤:
1)加标溶液的配制:精密称取维生素B1对照品900mg、维生素B2对照品500mg、维生素B3对照品5000mg、维生素B5对照品1750mg、维生素B6对照品750mg、维生素B9对照品500mg、维生素C钠试剂40mg至20mL容量瓶,以流动相A溶解并稀释至刻度,制成对照品加标溶液;
2)供试品溶液的配制:取一瓶维生素空白样品(不含有维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9),加适量流动相A溶解,转移至25mL容量瓶,再多次用流动相A清洗样品瓶,并将溶液全部转移至25mL容量瓶中,精密量取5mL对照品加标溶液并加入,以流动相A定容至刻度,摇匀,精密量取1mL至50mL容量瓶,以流动相A定容至刻度,摇匀,制成供试品溶液,注入液相色谱仪;
3)高效液相色谱检测:待测样品通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离,在各对应的检测波长下,对待测物质进行定性(以各维生素的相对保留时间作为定性依据)与定量检测(以对照品峰面积通过外标法计算),液相色谱条件如下:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶
流动相及洗脱方式:以含有0.05%三乙胺的10mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure BDA0002508951850000051
流速:1.0mL/min;
柱温:25℃;
进样器温度:5℃;
进样量:50μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm;
4)计算
采用外标法计算
Figure BDA0002508951850000052
式中:Cst为对照品溶液中相应维生素的实际浓度,μgs/mL;
As为样品溶液中相应维生素的峰面积(注:VB2为核黄素磷酸钠和核黄素5个峰的总峰面积);
Ast为对照品溶液中相应维生素的平均峰面积(取第二份对照品溶液的两针,n=2)(注:VB2为核黄素磷酸钠和核黄素5个峰的总峰面积);
f为样品溶液稀释因子
Cs为样品中相应维生素的浓度,mg/瓶;
5)结果
各维生素组分的回收率见表2:
表2实施例2中加标对照品样品中各组分的回收率及相对偏差
成分 回收率/% 相对偏差/%
维生素B1 101.3 0.1
维生素B2 100.6 0.2
维生素B3 100.3 0.2
维生素B5 99.0 1.0
维生素B6 100.5 0.1
维生素B9 99.5 0.2
通过表2可以看出采用本申请实施例2的测定方法能够准确测定样品中各中维生素的含量。
实施例3
一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其线性范围的测定包括如下步骤:
1)对照品线性溶液的配制:精密称取维生素B1对照品18mg、维生素B2对照品10mg、维生素B3对照品100mg、维生素B5对照品35mg、维生素B6对照品15mg、维生素B9对照品10mg、维生素C钠试剂40mg,至25mL容量瓶,以流动相A溶解并稀释至刻度,从中分别取0mL、2mL、4mL、5mL、6mL、8mL至20mL容量瓶,以流动相A稀释至刻度,制成6个不同浓度的对照品线性溶液,注入液相色谱仪。
2)高效液相色谱检测:待测样品通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离,在各对应的检测波长下,考察各个维生素浓度与峰面积线性方程的相关系数,液相色谱条件如下:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶
流动相及洗脱方式:以含有0.05%三乙胺的10mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure BDA0002508951850000061
流速:1.0mL/min;
柱温:25℃;
进样器温度:5℃;
进样量:50μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm;
3)结果
各种维生素组分的回收率见表3:
表3实施例3各种维生素浓度与峰面积线性方程的相关系数
成分 相关系数R
维生素B1 0.999994
维生素B2 0.999997
维生素B3 0.999999
维生素B5 0.999806
维生素B6 0.999997
维生素B9 0.999997
通过表3可以看出采用本申请实施例3的测定方法测定的线性良好。
实施例4
一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其色谱条件的耐用性考察包括如下步骤:
1)供试品溶液的配制:取一瓶样品,加适量流动相A溶解,转移至25mL容量瓶,再多次用流动相A清洗样品瓶,并将溶液全部转移至25mL容量瓶中,以流动相A定容至刻度,摇匀,精密量取1mL至50mL容量瓶,以流动相A定容至刻度,摇匀,为供试品溶液,注入液相色谱仪。
2)高效液相色谱检测:待测样品通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离,在各对应的检测波长下,考察各待测物质的分离度(待测成分的色谱峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5),液相色谱条件如下:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶
流动相及洗脱方式:以含有0.2%三乙胺的10mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure BDA0002508951850000071
流速:1.2mL/min;
柱温:20℃;
进样器温度:25℃;
进样量:20μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm;
3)结果
各种维生素组分的分离度见表4:
表4实施例4中各种维生素的分离度
成分 分离度
维生素B1 4.133
维生素B2 2.024
维生素B3 4.218
维生素B5 8.370
维生素B6 4.042
维生素B9 2.937
实施例4对色谱参数进行了适当的调整,通过表4可以看出采用适当变动色谱参数后依然能够对各个待测组分实现较好的分离。
本领域的技术人员容易理解,以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其特征在于,所述检测方法为高效液相色谱法,色谱条件为:
色谱柱填料:十八烷基硅烷键合硅胶;
流动相及洗脱方式:以含有0.05%-2%三乙胺的磷酸二氢钾溶液为流动相A,以甲醇为流动相B,按以下程序进行梯度洗脱:
Figure FDA0002508951840000011
流速:0.5-1.5mL/min;
柱温:20-35℃;
进样器温度:2-25℃;
进样量:20-80μL;
检测波长:200nm、265nm、325nm、285nm、448nm。
2.根据权利要求1所述的含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其特征在于,所述检测方法具体包括以下步骤:
1)供试品溶液的制备
取供试品,制成供试品溶液;
2)对照品溶液的制备
取维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9,制成对照品溶液;
3)测定
a.精密量取对照品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图;
b.精密量取供试品溶液注入液相色谱仪,同法测定;
c.按外标法以峰面积计算供试品中各种维生素的含量。
3.根据权利要求2所述的含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其特征在于,所述供试品溶液的制备采用以下方法:取供试品,加流动相A溶解并稀释25-2000倍,制成供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法,其特征在于,所述对照品溶液的制备采用以下方法:精密称取维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6和维生素B9对照品,加入维生素C钠,用流动相A溶解并稀释,作为对照品溶液,其中制备的各个对照品溶液浓度与供试品溶液中对应物质的浓度接近。
5.权利要求1所述的含有多种维生素的冻干粉针剂成分测定方法在冻干粉针剂生产中间体维生素含量测定中的应用。
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