CN110988233A - 一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 - Google Patents
一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110988233A CN110988233A CN201911011733.4A CN201911011733A CN110988233A CN 110988233 A CN110988233 A CN 110988233A CN 201911011733 A CN201911011733 A CN 201911011733A CN 110988233 A CN110988233 A CN 110988233A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- impurity
- sodium
- acetonitrile
- methanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种四水合辅羧酶杂质A的检测方法,利用高效液相色谱仪,检测条件为:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,流动相A:含己烷磺酸钠或类似效能离子对(如庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等磺酸钠离子对试剂)的磷酸盐缓冲溶液,流动相B:甲醇、乙腈、流动相A‑甲醇或流动相A‑乙腈中的任一种,流动相A、B按梯度程序进行;流速:0.8‑1.2ml/min,柱温:30‑50℃,检测波长:240‑270nm,进样量:20μl。该检测方法准确度灵敏度高,适于检测四水合辅羧酶原料或维生素制剂中四水合辅羧酶杂质A的含量。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,具体涉及一种检测四水合辅羧酶中杂质A含量的高效液相分析方法。
背景技术
四水合辅羧酶为维生素类药,在体内参与糖代谢中丙酮酸和a-酮戊二酸的氧化脱羧反应,是糖类代谢所必需,临床上常用于脚气病或Wernicke脑病的治疗,亦可用于辅羧酶四水合物缺乏引起的周围神经炎、消化不良等的辅助治疗,目前也用作复方维生素制剂产品注射用多种维生素(12)的其中一种原料药。四水合辅羧酶杂质A(硫胺素一磷酸酯)为四水合辅羧酶的降解产物,其结构式为:
在国内外药典中并未收载四水合辅羧酶的标准,在国家标(YBH03552014)四水合辅羧酶有关物质检查中,有四水合辅羧酶杂质A的检测,但是适用于原料的检验,不适合于含有四水合辅羧酶的复方制剂产品如注射用多种维生素(12)中四水合辅羧酶杂质A的检验,专属性不符合规定,且检测四水合辅羧酶杂质A的方法为衍生法,检测器为荧光检测器,操作繁琐,且样品处理方法并不适用。
发明内容:
为解决上述问题,本发明提供一种检测四水合辅羧酶原料以及含有四水合辅羧酶原料的维生素制剂中四水合辅羧酶杂质A含量的方法,本申请的技术方案如下:
一种检测四水合辅羧酶杂质A含量的分析方法,该方法采用高效液相色谱仪测定,其色谱条件为:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A:含己烷磺酸钠或类似效能离子对的磷酸盐缓冲溶液;
流动相B:甲醇、乙腈、流动相A-甲醇或流动相A-乙腈中的一种;
流速:0.8-1.2ml/min;
柱温:30-50℃;
检测波长:240-270nm;
进样量:20μl;
流动相A、B按梯度程序进行。
其中,优选的色谱柱为Agela Venusil XBP C18(L),250mm×4.6mm,5μm或效能相当的色谱柱;
优选的,流动相A为0.01mol/L-0.1mol/L的磷酸盐缓冲溶液,己烷磺酸钠的浓度为1g/L-4g/L,流动相A用磷酸调节pH值为3.0-5.0,流动相A中的离子对试剂可以是与己烷磺酸钠作用类似的其他离子对试剂如庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等磺酸钠离子对试剂,磷酸盐可以为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠等。
优选的,流动相B为甲醇、乙腈、流动相A-甲醇或流动相A-乙腈中的一种,其中流动相A与甲醇或乙腈的比例为20~30:80~70;
优选的流速为1.0ml/min
优选的柱温为45℃;
优选的检测波长为248nm;
进样梯度洗脱程序为:
该方法可用于检测四水合辅羧酶原料或含有四水合辅羧酶原料的制剂中四水合辅羧酶杂质A的含量,特别是维生素制剂中杂质A含量的检测,从而进行原料及制剂中四水合辅羧酶杂质A含量的质量控制。
本发明产生的有益效果:
1)通过使用高效液相色谱仪的技术,提供了一种检测四水合辅羧酶中四水合辅羧酶杂质A含量的方法,耗材易得、准确度、灵敏度高。
2)经过检测,四水合辅羧酶杂质A定量限为5.002ng,检测限为1.701ng,表明该法检测灵敏度较高。
3)四水合辅羧酶杂质A在0.250μg/ml~17.864μg/ml浓度范围内,线性回归方程为A=30965C-2366,相关系数为0.9999,线性关系良好。
4)在样品中加入已知量的四水合辅羧酶杂质A对照品,测得的平均回收率为98.13%,符合可接受标准,说明该方法准确度良好。
附图说明:
图1是实施例2中四水合辅羧酶杂质A的标准曲线图
图2是实施例4中检测待测样品的色谱图
具体实施方式:
实施例1检测限和定量限的检测
步骤(1)取四水合辅羧酶杂质A对照品约12mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;
步骤(2)精密量取步骤(1)中的溶液1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀;
步骤(3)精密量取步骤(2)中的溶液6ml,置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取20μl,注入液相色谱仪,信噪比S/N约为10:1,作为定量限,四水合辅羧酶杂质A浓度为0.25μg/ml;
步骤(4)精密量取步骤(2)中的溶液2ml,置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取20μl,注入液相色谱仪,信噪比S/N约为3:1,作为检测限,四水合辅羧酶杂质A浓度为0.085μg/ml。
实施例2标准曲线的测定
步骤(1)取四水合辅羧酶杂质A对照品约12mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;
步骤(2)分别精密量取步骤(1)中的溶液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.6ml和2.0ml,置不同10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,分别作为线性1、2、3、4、5、6和7溶液;
步骤(3)精密量取步骤(2)中的线性溶液各20μl,注入液相色谱仪,以浓度C(μg/ml)为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行线性回归,见说明书附图的图1,线性方程为A=30965C-2366,相关系数r为0.9999。
实施例3回收率的测定
步骤(1)取四水合辅羧酶杂质A对照品约12mg,精密称定,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为四水合辅羧酶杂质A对照品贮备液;
步骤(2)取四水合辅羧酶杂质A对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含10μg的溶液,作为四水合辅羧酶杂质A对照品溶液;
步骤(3)取注射用多种维生素(12)约190mg,精密称定,置5ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。注射用多种维生素(12)的处方组成参考专利CN107898805A。
步骤(4)取注射用多种维生素(12)约190mg,精密称定,共三份,分别置不同5ml量瓶中,分别精密加入步骤(1)溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml,加水稀释至刻度,摇匀,分别作为80%、100%、120%样品溶液,各浓度水平平行制备三份;
步骤(5)精密量取上述溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法,以峰面积计算供试品中四水合辅羧酶杂质A的含量,以测得量与原有量之差与加入量的比值计算回收率,结果如下表:
实施例4注射用多种维生素(12)中四水合辅羧酶杂质A含量的测定
步骤1、溶液的配制
对照品溶液的配制:取四水合辅羧酶杂质A对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含12μg的溶液,即得。
供试品溶液的配制:取注射用多种维生素(12)约190mg,精密称定,置5ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。注射用多种维生素(12)的处方组成参考专利CN107898805A。
步骤2、液相色谱条件为:
色谱柱:Agela Venusil XBP C18(L),250mm×4.6mm,5μm或效能相当的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A:己烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液,磷酸缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L,用磷酸调节pH值至3.0-5.0,己烷磺酸钠的浓度为1g/L-4g/L,还可以为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等作用类似的磺酸钠离子对试剂酸钠离子对试剂;
流动相B:流动相B:甲醇、乙腈、流动相A-甲醇或流动相A-乙腈中的任一种;
当流动相B为流动相A-甲醇或流动相A-乙腈时,流动相A-甲醇或流动相A-乙腈,流动相A与甲醇或乙腈的比例为20~30:80~70;流速:0.8-1.2ml/min;
柱温:30-50℃;
检测波长:240-270nm;
进样量:20μl;
流动相A、B按梯度程序进行。
精密量取上述溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,见说明书附图的图2。按外标法,以峰面积计算,供试品溶液中四水合辅羧酶杂质A的含量为0.44%。
实施例5四水合辅羧酶中四水合辅羧酶杂质A含量的测定
步骤1、溶液的配制
对照品溶液的配制:取四水合辅羧酶杂质A对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含12μg的溶液,即得。
供试品溶液的配制:取四水合辅羧酶约15mg,精密称定,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
步骤2、液相色谱条件为:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A:己烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液,磷酸缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L,用磷酸调节pH值至3.0-5.0,己烷磺酸钠的浓度为1g/L-4g/L,还可以为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等作用类似的磺酸钠离子对试剂酸钠离子对试剂;
流动相B:流动相B:甲醇、乙腈、流动相A-甲醇或流动相A-乙腈中的任一种;
当流动相B为流动相A-甲醇或流动相A-乙腈时,流动相A与甲醇或乙腈的比例为20~30:80~70;
流速:0.8-1.2ml/min;
柱温:30-50℃;
检测波长:240-270nm;
进样量:20μl;
流动相A、B按梯度程序进行。
精密量取上述溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法,以峰面积计算,供试品溶液中四水合辅羧酶杂质A的含量为0.38%。
Claims (9)
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述色谱柱为Agela Venusil XBP C18(L),250mm×4.6mm,5μm或与所述色谱柱效能相当的色谱柱。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相A中己烷磺酸钠的浓度为1g/L-4g/L,磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01mol/L-0.1mol/L;所述流动相A用磷酸调节pH值至3.0-5.0。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述类似效能的离子对为庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等磺酸钠离子对试剂,磷酸盐可以为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠等。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相B为流动相A-甲醇或流动相A-乙腈,流动相A与甲醇或乙腈的比为20~30:80~70。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流速为1.0ml/min,所述柱温为45℃,所述检测波长为248nm。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,该方法可用于检测四水合辅羧酶原料中杂质A的含量。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,该方法可用于检测含四水辅羧酶原料的制剂中杂质A的含量。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述制剂为维生素制剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911011733.4A CN110988233A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911011733.4A CN110988233A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110988233A true CN110988233A (zh) | 2020-04-10 |
Family
ID=70082402
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911011733.4A Pending CN110988233A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110988233A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114264745A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-01 | 重庆市食品药品检验检测研究院 | 甲磺酸伊马替尼有关物质及其制剂有关物质的检测方法 |
CN114280198A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-05 | 中国大冢制药有限公司 | 维生素b6及其有关物质的检测方法和应用 |
-
2019
- 2019-10-23 CN CN201911011733.4A patent/CN110988233A/zh active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114264745A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-01 | 重庆市食品药品检验检测研究院 | 甲磺酸伊马替尼有关物质及其制剂有关物质的检测方法 |
CN114280198A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-05 | 中国大冢制药有限公司 | 维生素b6及其有关物质的检测方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110398548B (zh) | 一种磷霉素氨丁三醇原料药及其制剂中有关杂质的高效液相色谱分离测定方法及应用 | |
CN106324141B (zh) | 一种草酸艾司西酞普兰有关物质的高效液相检测方法 | |
CN110988233A (zh) | 一种检测四水合辅羧酶杂质a含量的方法 | |
CN110824093A (zh) | 一种布立西坦及其有关物质的检测方法 | |
CN111443151A (zh) | 复方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的检测方法 | |
CN108061767B (zh) | Hplc法分离测定利伐沙班中间体及其相关杂质的方法 | |
CN113484430A (zh) | 一种采用高效液相色谱法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法 | |
CN113156024A (zh) | 高效液相色谱法测定氨基己酸及其注射液中有关物质的方法 | |
CN110133119B (zh) | 一种L-α-甘油磷酰胆碱有关物质的检测方法 | |
CN111208215B (zh) | 头孢曲松钠中杂质2-巯基苯并噻唑的检测方法 | |
CN111007162A (zh) | 一种同时检测四水合辅羧酶两种杂质含量的方法 | |
CN113484450B (zh) | 药物对映异构体检测用衍生化处理方法及测定方法、应用 | |
CN103884784B (zh) | 一种培美曲塞二钠中间体的分析检测方法 | |
CN103175930B (zh) | 一种测定亚硫酸钠含量的高效液相色谱分析方法 | |
CN111337620B (zh) | 一种检测复方氨基酸注射液中3-氨基-2-哌啶酮含量的方法 | |
CN109060991A (zh) | 一种食品中维生素b6的含量测定方法 | |
CN111289653B (zh) | 一种盐酸尼卡地平葡萄糖注射液中5-羟基甲基糠醛杂质和杂质i的检测方法 | |
CN114689737A (zh) | 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法 | |
CN111351886A (zh) | 一种测定酚磺乙胺药物中含有的杂质及其主药含量的方法 | |
CN107941977B (zh) | 他唑巴坦中间产物他唑巴坦二苯甲酯的高效液相分析方法 | |
CN111220761A (zh) | 一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法 | |
CN111044635A (zh) | 甲钴胺颗粒含量的分析方法 | |
CN112816567A (zh) | 测定褪黑素和维生素b6的高效液相色谱分析方法 | |
CN111157638A (zh) | 一种检测维生素c中草酸含量的方法 | |
CN114002356B (zh) | 高效液相色谱法检测安定剂含量的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200410 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |