CN111220761A - 一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法 - Google Patents

一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明以乙腈和水缓冲溶液为流动相，建立了碱性咪唑反应液的高效液相色谱分析方法。流动相选用的介质普通易得，可行性高；操作过程简单方便，适用性好，分析准确快速、功效高，对产品质量评价科学可靠，对咪唑合成反应的条件选择、优化有着重要意义。

Description

一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法
技术领域
本发明属于化学分析方法领域，尤其涉及测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法。
背景技术
咪唑是一种五元杂环化合物，一般为无色棱形结晶体或微黄色结晶体，具有腐蚀性、刺激性、毒性。咪唑作为一种重要的化工中间体，在医药、农药、固化剂等方面都有着广泛的应用，其国外市场需求每年都以30％的速度递增。
目前，文献报道的甲基咪唑、乙基咪唑、硝基咪唑的检测方法主要有紫外光谱法、气相色谱法和液相色谱法，但对咪唑的检测方法报道甚少。刘娜等发表的克霉唑阴道片中微量咪唑测定方法，以己烷磺酸钠作为离子对试剂，甲醇-磷酸二氢钾/磷酸缓冲液为流动相进行梯度洗脱；程利侠等采用柱前衍生-高效液相色谱法测定烟用添加剂中微量咪唑的含量，实验以丹磺酰氯为衍生试剂，柱前衍生，经乙酸乙酯萃取、浓缩、乙腈定容后，经C18色谱柱分离，用乙腈-水为流动相梯度洗脱，荧光检测器测定。
本发明方法研究的咪唑反应液样品，含水量达80％以上且含多种杂质，不宜采用紫外光谱和气相色谱的方法。高效液相色谱法是20世纪70年代发展起来的一项高效、快速的分离分析技术，适用于含水溶液体系常量和微量组分的分析。本发明建立了咪唑的高效液相色谱分析方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法，咪唑反应液样品，含水量达80％以上且含多种杂质，本发明建立的高效液相色谱分析方法准确度高、精密度好、快速高效。
本发明的上述目的通过如下技术方案实现：
测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法，采用以下方式进行：
色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，以乙腈和含离子对试剂的水缓冲溶液为流动相，所述乙腈和水缓冲溶液的体积比为20：80～60：40，检测波长为210-310nm，柱温25-40℃，流动相速度为0.5-1.5mL/min，所述缓冲溶液中十二烷基硫酸钠含量为15～20mmol/L，磷酸/磷酸二氢钾或磷酸/磷酸二氢钠调节pH至3-5。
检测方法：根据离子对色谱法的分析步骤，测定咪唑的检出限，建立标准曲线，进行准确度和精密度、样品测定实验。
进一步的，所述乙腈和水缓冲溶液的体积比为40：60。
进一步的，采用二极管阵列检测器测定，检测波长为210nm。
进一步的，所述柱温为30℃。
进一步的，所述流动相速度为1mL/min。
本发明的技术方案的实验原理如下：
碱性反应液中咪唑化合物进入色谱柱之后，在酸性条件下质子化，生成咪唑离子，再与流动相中的十二烷基硫酸根离子结合，形成疏水性离子对化合物，在色谱柱表面溶解，延长咪唑在色谱柱上的保留时间。
本发明技术方案中：所述检测的进样方式按标准溶液、样品溶液、样品溶液、标准溶液的顺序依次进行进样分析；为保证数据的准确性，两次标准溶液之间的试样进样次数不应超过15次，如果超过15次应该在中间添加标准曲线。
为了达到好的检测效果和准确度，校准曲线线性相关系数R≥0.999，在添加浓度5.0～100.0mg/kg浓度范围内，回收率应在90.0％～110.0％之间，相对标准偏差(RSD)应小于5％。这样可以有效的降低由于仪器开机后的不稳定而造成的误差，提高最终检测结果的准确度。
有益效果：
本发明以乙腈和水缓冲溶液为流动相，建立了碱性咪唑反应液的高效液相色谱分析方法。流动相选用的介质普通易得，可行性高；操作过程简单方便，适用性好，分析准确快速、功效高，对产品质量评价科学可靠，对咪唑合成反应的条件选择、优化有着重要意义。
附图说明
图1为咪唑标准曲线谱图。
图2为待测物咪唑样品高效液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题及有益效果更佳清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步详细说明。另外，本发明的实施例，可以理解是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的技术人员在本发明的范围内可以对下述实施例进行变化、修改、替换和变型。
1.仪器与试剂
仪器
高效液相色谱仪(HPLC)：依利特EClass3100，配有DAD3100二极管阵列检测器；
分析天平：梅特勒-多利多，精确至0.1mg；
超声波清洗器；
容量瓶：100mL；
试管：10mL；
移液管：10mL；
移液枪：1000μL。
试剂
纯水：GB/T 6682规定的一级水；
乙腈：一级色谱纯；
磷酸二氢钾：分析纯；
十二烷基硫酸钠：分析纯；
磷酸：分析纯；
水缓冲溶液：称取6g十二烷基硫酸钠、3g磷酸二氢钾于2L的广口瓶中，加入纯净水1300mL，将广口瓶至于超声清洗仪器中超声溶解，以磷酸调节pH至3.5，备用；
咪唑标准储备液：准确称取咪唑标准样品0.1g(精确至0.0002g)于100mL容量瓶中，纯水溶解并稀释至刻度，摇匀备用；
咪唑标准溶液：准确移取200μL标准储备液于10mL试管中，纯水稀释50倍，摇匀备用。
2.色谱条件
色谱柱：Supersil-ODS-B(4.6mm×250mm，5μm)；
紫外检测波长：210nm；
色谱工作站：Chromsoft色谱工作站；
流动相：乙腈/水缓冲溶液(40︰60，V/V)；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL。
实施例1
本实施例对本发明方法的方法学数据进行测定，包括以下步骤：
标样储备液的配制：称取0.1g(精确至0.0002g)咪唑标准品(99.5％)于100mL容量瓶中，纯水定容至刻度线，摇匀，备用。
试样溶液的配制：称取0.2g(精确至0.0001g)咪唑反应液样品于100mL容量瓶中，纯水定容至刻度，摇匀，稀释10倍，备用。
分析条件：采用依利特EClass3100高效液相色谱仪；DAD3100二极管阵列检测器；Supersil-ODS-B(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：一级色谱纯乙腈和水缓冲溶液溶液；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；检测波长：210nm；2D谱图比较；Chromsoft色谱工作站。
测定：待仪器在规定的条件下稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针咪唑出峰面积相对变化小于1.5％后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进行测定。
结果计算：将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液咪唑出峰面积分别进行平均，手动或利用色谱工作站峰面积-含量线形拟合，外标法计算样品中咪唑的含量。
结果按式(1)计算
Figure BDA0002408223660000041
式中：
A1—样品溶液中咪唑的峰面积；
A2—标样溶液中咪唑的峰面积；
m1—样品的质量(g)；
m2—标样的质量(g)；
P—标样的纯度；
试验结果以平行测定结果的算数平均值为准，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过0.5％。
标准曲线绘制：
将上述标准储备液稀释成10～100mg/L范围内六个不同水平的标准工作溶液，在确定的分析条件下进样分析，以进样浓度c值与对应的峰面积A绘制咪唑常量分析标准曲线，并进行线性回归，得到回归方程和相关系数，见图1。在测定范围内，咪唑有良好的线性关系，线性相关系数R＝0.9996。
准确度：
采用倍量加入法在咪唑反应液样品中添加咪唑标准品进行添加回收率试验，添加量为10mg和50mg 2个水平，每个添加水平5次重复测定。根据测定结果，计算本发明的方法咪唑的加标回收率，结果见表1和表2：
表1咪唑10mg加标回收率统计表
Figure BDA0002408223660000051
表2咪唑50mg加标回收率统计表
Figure BDA0002408223660000052
精密度：
分别称取8份咪唑反应液样品约0.2g(精确至0.0001g)于100mL容量瓶，超纯水水定容至刻度。在上述分析条件下稀释10倍进样，计算其相对标准偏差(RSD)。结果见表3：
表3咪唑精密度结果统计表
Figure BDA0002408223660000061
通过上述数据可以看出本发明的方法准确度和精密度符合常量分析要求，数据准确可靠，分析速度快，操作简单，易于普及应用。
实施例2
本实施例检测咪唑的含量，包括以下步骤：
标样溶液的配制：称取0.1g(精确至0.0002g)咪唑标准品(99.5％)于100mL容量瓶中，纯水定容至刻度线，摇匀；再用纯水稀释50倍，待用。
试样溶液的配制：称取0.2g(精确至0.0001g)咪唑反应液样品于100mL容量瓶中，纯水定容至刻度，摇匀，稀释10倍进样待测。
分析条件、测定方法、结果计算，同实施例1，结果见表4。
表4反应液中咪唑样品检测结果：
Figure BDA0002408223660000071

Claims (5)

1.一种测定碱性反应液中咪唑含量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，采用以下方式进行：
色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，以乙腈和含离子对试剂的水缓冲溶液为流动相，所述乙腈和水缓冲溶液的体积比为20：80～60：40，检测波长为210-310nm，柱温25-40℃，流动相速度为0.5-1.5mL/min，所述缓冲溶液中十二烷基硫酸钠含量为15～20mmol/L，磷酸/磷酸二氢钾或磷酸/磷酸二氢钠调节pH至3-5。
检测方法：根据离子对色谱法的分析步骤，测定咪唑的检出限，建立标准曲线，进行准确度和精密度、样品测定实验。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述乙腈和水缓冲溶液的体积比为40：60。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，采用二极管阵列检测器测定，检测波长为210nm。
4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述柱温为30℃。
5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述流动相速度为1mL/min。
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