CN103869039A - 一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法，所述的七种禁用化合物为甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚。本发明的检测方法可准确、快速地检测香精香料中七种禁用化合物的含量，适用于食品、日用化工、烟草、制药等行业中香精料液、辅助溶剂的质量安全控制，具有操作简单、快速准确、重复性好、灵敏度好等特点。

Description

一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法

技术领域

本发明属于香精香料理化检验、分析测试技术领域，主要涉及到香精香料中甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚含量的同时测定方法。

背景技术

在卷烟产品配方设计和制造过程中，基于提高产品感官舒服度以及加工工艺需求，经常需要添加具有保润、增香、甜味、助燃等功能添加剂，同时也需要添加食用级酒精作为辅助溶剂。香精香料作为卷烟的重要组成成分，其质量安全性一直备受烟草行业及卷烟消费者的重点关注。

甲醇是具有类似酒精气味的易挥发性液体。可通过皮肤接触侵害人体细胞组织，特别是对人体视觉神经网膜有破坏作用，误饮含有甲醇的白酒可能会导致人体双目失明。假冒食用级酒精可用于配制空气清新剂、香水、油漆，消费者在使用时不知不觉会受到慢性毒害，不到严重时很难发现。但甲醇价格只有酒精的一半，工业酒精假冒食用酒精曾一度泛滥成灾，防范在香精香料中混入甲醇（工业酒精）是一个较为严峻的质量安全问题。

仲丁醇是无色透明的易燃液体，具备类葡萄酒的气息。可用于制造甲乙酮等香料。仲丁醇有刺激和麻醉作用，吸入时对眼、鼻、喉有刺激作用，并出现头痛、眩晕、倦怠、恶心等症状。

黄樟素天然存在于黄樟油、大叶樟油、南美巴西黄樟油、北美黄樟油等天然芳香油中，是许多天然香精如黄樟精油、八角精油和樟脑油的主要成分，曾经用于啤酒作为感官风味修饰剂。采用黄樟、肉豆蔻、野姜、月桂树等香料制成的香精中可能少量存在黄樟素。黄樟素可与肝脏组织形成黄樟素与DNA加合物，进而引起肝脏损伤甚至基因突变，研究表明黄樟素也可能是消化系统、血液系统的强致癌物，目前各国均已禁止使用黄樟素作为食品添加剂。

咪唑是含有两个间位氮原子的五元芳杂环化合物，呈弱酸性，可与强碱形成盐。咪唑类衍生物种类较多，对人体和环境的危害性目前尚有争议，其中可口可乐曾因4-甲基咪唑问题陷入信任危机。卷烟产品在吸燃时，若含有咪唑，不能排除吸燃时发生化学反应形成潜在危害性的咪唑类物质。因此，为安全起见，香精香料中应避免使用咪唑。

香豆素又称双呋喃环和氧杂萘邻酮，广泛存在于自然界的植物中，芸香科、伞形科、豆科、兰科、木樨科、茄科和菊科植物等植物中均含有香豆素。香豆素作为重要的香料原料，已经在各行各业中普遍使用，具备成熟的工业合成生产方法。然而，相关动物毒理学研究表明，香豆素对小鼠胚胎有毒性，能引起痛觉消失，使胆碱酯酶发生变化，对大鼠为可疑致肿瘤物，因此很多国家均针对香豆素规定了使用限量要求。

二甲苯麝香是具有麝香气味的人工合成硝基化合物，主要作为定香剂存在于洗涤用品和家用清洁用品中，已有报道在润肤乳液、香水和除臭剂中曾检出大剂量的二甲苯麝香。二甲苯麝香能够在环境中稳定存在，且具有较强生物富集性，已经在城市地下水、地表水、鱼类、人体体脂和人乳中检出二甲苯麝香，此外也有研究表明二甲苯麝香对某些贝类具有生理毒性。作为高持久性、高生物蓄积性物质，二甲苯麝香已被欧盟化学品管理署列为高度关注物质。

芝麻酚天然存在于芝麻油中，微溶于水，具有较强的抗氧化能力，常在食品、医药和香精香料中作为抗氧化剂。然而毒理学研究表明，芝麻酚可能对动物腺胃有毒性，会引起腺胃刺瘤或癌变。日本已将芝麻酚列为食品禁用添加剂。

为确保卷烟质量安全，需对可能添加的香精香料、酒精等添加剂的质量安全进行密切关注和监控，对管理法规中明确要求禁用的物质，甚至可能对人体健康有危害的物质也应予以高度关注。

现有测试技术中，采用气相色谱－质谱分析香精香料中禁用化合物（甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚）的研究报道较少，限于上述物质的化学性质不同，目前尚未报道有一次性可同时检测七种禁用化合物的检测方法。

发明内容

本发明目的是在于提供一种气相色谱-质谱联用检测方法，可一次性同时准确检测香精香料中七种禁用化合物，当工业企业在采购香精香料时，可快速准确地提供检测报告，及时发现可能有潜在质量安全的来料，避免企业将含超限量禁用化合物的香精香料使用在产品中，进而保障企业产品的质量安全性。

因此，本发明提供一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法，所述禁用化合物为甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚，该方法为气相色谱-质谱联用法，以CH₂Cl₂为溶剂，采用萘为内标物，采用内标法定量，采用毛细管色谱柱分离样品，进样口温度：200℃；升温程序的初始温度为35℃；分流比为10:1～30:1。

本发明所述的检测方法，其中，在质谱检测时设置两次时间事件，第一次是在进样后3.20-4.50min之间关闭质谱灯丝；第二次是在进样后15.30-16.00关闭质谱灯丝。

本发明所述的检测方法，其中所述的毛细管色谱柱的规格为30m×250μm×0.25μm，优选为HP-INNOWax气相色谱柱。

本发明所述的检测方法，其中升温程序为：初始温度35℃，保持2min；9℃/min的速率升温至65℃，保持1min；8℃/min的速率升温至200℃，保持2min；20℃/min的速率升温至230℃，保持8min。

本发明所述的检测方法，其中，气相色谱条件为：进样口温度：200℃；进样量：1μl，分流进样，分流比：10:1；载气：纯度≥99.999%的氦气，恒流模式，流速：1.0mL/min；升温程序：35℃（2min），9℃/min升温至65℃（1min），8℃/min升温至200℃（2min），20℃/min升温至230℃（8min），总运行时间：34.708分钟。

本发明所述的检测方法，其中，质谱分析条件：电离方式：电子轰击源：EI；电离能量：70eV；传输线温度：240℃，离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；测定方式：选择离子监视方式扫描；溶剂延迟：2.50min。

本发明所述的检测方法，其中样品前处理的方法为：

称取香精香料样品，置于三角锥形瓶中，加入含内标物的CH₂Cl₂萃取液，混合均匀后加入除水剂（例如无水硫酸钠或无水硫酸镁）进行除水，静置后移取清液，用有机滤膜过滤，收集滤液待测。

本发明所述的检测方法，其中所述的无水硫酸钠使用前应在烘箱200℃条件下烘烤2h，置于干燥器中冷却至室温后使用。

本发明所述的检测方法，其中所述的无水硫酸镁使用前应在马弗炉550℃下烘烤2h，置于干燥器中冷却至室温后使用。

本发明所述的检测方法，具体包括以下步骤：

1）制备含内标萃取液

称取内标物萘，以CH₂Cl₂为溶剂，配制含内标萘的CH₂Cl₂萃取液；

2）制备标准工作溶液

采用定量称取、混合方式制备七种禁用化合物混合标准溶液，采用逐步稀释法配制标准工作溶液，采用含内标的CH₂Cl₂萃取液进行配制和稀释，采用逐步稀释法制备各级标准工作溶液；

3）绘制标准工作曲线

以内标定量法，绘制标准工作曲线，横轴为各禁用化合物与内标的浓度比，纵轴为各禁用化合物与内标的响应比，对其进行最小二乘法回归分析，即得到标准工作曲线；

4）样品前处理

称取香精香料样品，置于三角锥形瓶中，加入含内标的CH₂Cl₂萃取液，将三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振，振荡完毕后，加入除水剂进行除水，静置后移取清液，用0.22um有机滤膜过滤，收集滤液待测；

5）气相色谱-质谱联用分析

样品经前处理后，滤液收集于色谱瓶中，上机测试，采用SIM模式（选择离子监测模式）采集响应信号，各禁用物质与内标的响应比值，代入标准工作曲线进行计算，即可得出各禁用物质的检测结果。

发明详述

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案来实现：一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法，所述的七种禁用化合物为甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚，该方法包括以下步骤：

步骤一，制备含内标萃取液：以萘为内标，称取400mg萘，精确至0.1mg，以CH₂Cl₂为溶剂，定容于100ml的棕色容量瓶中，得到4mg/ml的内标母液，然后取1ml内标母液，以CH₂Cl₂为溶剂，定容于1000ml的棕色容量瓶中，制得到浓度为4μg/ml的含内标萃取液。

步骤二，制备标准工作溶液：分别称取100mg甲醇、100mg仲丁醇、100mg黄樟素、100mg咪唑、500mg香豆素、50mg二甲苯麝香、100mg芝麻酚，以步骤一所述内标萃取液进行溶解，分别定容于100ml棕色容量瓶中，制得各禁用目标物母液。分别移取上述七种目标物母液各1ml，以内标萃取液稀释，定容于100ml棕色容量瓶中，制得混标，如表1所示。

表1七种香精香料中禁用化合物混标母液

采用逐步稀释法制备标准工作溶液，采用微量移液器，分别移取1ml、500μl、200μl、100μl、50μl、20μl、10μl混标，以内标萃取液稀释，定容于10ml棕色容量瓶中，分别记为S7，S6，S5，S4，S3，S2，S1。各级标准溶液浓度如表2所示。

表2香精香料中7种禁用物质标准溶液

步骤三，绘制标准工作曲线：将步骤二所得各级标准工作溶液，进行气相色谱质谱联用分析，以内标定量法，绘制标准工作曲线，横轴为各禁用化合物与内标的浓度比，纵轴为各禁用化合物与内标的响应比，对其进行最小二乘法回归分析，即得到标准工作曲线，工作曲线线性相关系数R²>0.99。

步骤四，样品前处理：称取0.3g香精香料样品，精确记录至0.001g，置于50ml具塞三角锥形瓶中，加入10ml步骤一所述内标萃取液，将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振30min，速率为200rpm，振荡完毕后，加入2g除水剂（无水硫酸钠，或无水硫酸镁）进行除水，静置后移取清液，用0.22um有机滤膜过滤，收集滤液待测。

步骤五，气相色谱-质谱联用分析：将步骤四所得前处理后的滤液，转移至色谱瓶中，进行气相色谱质谱联用分析，得出待测目标物响应信号，根据步骤三所得的标准工作曲线，计算可得香精香料样品中甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香和芝麻酚的实测含量。

进一步，所述的气相色谱质谱联用分析条件为：

气相色谱条件：色谱柱：Agilent19091N-133，HP-INNOWax，规格为30m×250μm×0.25μm；进样口温度：240℃；进样量：1μl，分流进样，分流比：10:1；载气：纯度≥99.999%的氦气，恒流模式，流速：1.0mL/min；升温程序：35℃（2min），9℃/min升温至65℃（1min），8℃/min升温至200℃（2min），20℃/min升温至230℃（8min），总运行时间：34.708分钟；

质谱分析条件：电离方式：电子轰击源（EI）；电离能量：70eV；传输线温度：240℃，离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；测定方式：选择离子监视方式扫描；溶剂延迟：2.50min；

时间事件条件：3.20-4.50min关闭质谱灯丝，屏蔽CH₂Cl₂溶剂峰以及乙醇或其他杂质峰；15.30-16.00min关闭质谱灯丝，屏蔽丙二醇峰。

进一步，采用较低浓度的S1或S2标准工作溶液，连续测定10次，计算结果标准方差，以3倍方差记为检出限，以10倍方差记为定量限。采用标准加入法，分别加入中浓度、低浓度标准溶液，经前处理方法处理，进气相色谱质谱联用分析，连续测试6次，评估检测方法的重复性，并计算中浓度、低浓度条件下回收率，评估方法的可靠性。结果如表3所示。

表3香精香料中七种禁用化合物检测限、定量限、重复性、回收率

进一步，在所述的步骤一之前还包括测定用器皿的准备步骤：实验所用的具塞三角锥形瓶、玻璃滴管等器皿洗净后，用二次蒸馏水淋洗三次，烘箱150℃条件下烘烤2h，冷却至室温备用。

发明的有益效果

与现有技术相比，本发明的检测方法具有如下优良效果：

1）七种目标禁用化合物的化学性质差异较大，目前尚未见同时测定上述七种禁用化合物的文献报道。而本发明方法采用HP-INNOWax气相色谱柱作为色谱分离柱，规格为30m×250μm×0.25μm，该色谱柱极性合适，分离条件优化后，七种目标物和样品本底干扰物质、溶剂干扰峰均可较好地分离，因此可得到较好地定量结果。

2）采用本发明的检测方法，可一次性同时测定七种禁用化合物，大大节约了检测时间，大大提高了工作效率。

3）香精香料样品中普遍使用水、乙醇、丙二醇等溶剂，本发明的检测方法针对香精香料样品特点，优化分离条件，致使目标物甲醇在溶剂峰（即CH₂Cl₂溶剂峰）之前出峰，然后关闭灯丝（第一次时间事件），屏蔽了随后的CH₂Cl₂溶剂峰和乙醇等杂质峰。随后也有相应的时间事件（第二次时间事件），滤掉潜在的庞大的丙二醇峰（该物质在香精香料中存在几率较高，且含量较高）。这两次时间事件很好地保护了灯丝和质谱离子源。本发明的检测方法实现了准确分离测试烟草添加剂中七种禁用化合物的同时，也大大提高了仪器的耐用性，实测约1200个样品后，未出现灯丝烧断现象。

4）本发明的检测采用色谱纯级CH₂Cl₂作为溶剂是合适的选择，香精香料分析中普遍采用的乙醇溶剂，即使色谱纯级乙醇溶剂中偶尔难免会有微量甲醇干扰，进而破坏了目标物甲醇的定量准确性。而根据本发明方法，色谱纯CH₂Cl₂难以避免微量CHCl₃则会杂在溶剂峰中，不会对甲醇准确定量带来干扰。

5）本发明的检测方法的程序升温的起始温度仅为35℃，并停留2min，该条件可使得甲醇完全分离开，定量效果较好。若仅关注甲醇单项指标，3min内在溶剂峰出峰之前即可完成检测。如附图16所示，图16的左上TIC图可看出，甲醇杂在溶剂峰中，基于innowax色谱柱，降低升温程序的初始温度，如图16的右上TIC图所示，进一步改善并修改分离条件，可获得甲醇峰初步分离，改良措施包括：降低进样口初始温度，降低升温程序初始温度，适当升高分流比。为了保证甲醇峰形获得良好分离（如图16中的下图所示），同时为保护灯丝，本发明的检测方法设定了溶剂峰延迟以及两次时间事件，从而获得了甲醇良好的分离结果。

6）萘的气息很重很特殊，微量萘气息即可被人体察觉，因此通常萘不存在于香精香料中，本发明方法采用萘作为内标，在定量上不会受到干扰。

采用本发明的检测方法，可快速、准确地检测香精香料中七种禁用化合物（甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香和芝麻酚）的含量，适用于食品、日用化工、烟草、制药等行业中香精料液、辅助溶剂的质量安全控制，具有操作简单快速、定量准确性好、重复性好、灵敏度高等特点。

本发明的检测方法不必对各检测目标进行分步分别测试，既能保障烟草添加剂原料质量安全，同时也能够提高作业效率，大大节省检测环节所需时间，并提高了质谱仪器的耐用度。

附图说明

图1甲醇标准工作曲线；

图2仲丁醇标准工作曲线；

图3黄樟素标准工作曲线；

图4咪唑标准工作曲线；

图5香豆素标准工作曲线；

图6二甲苯麝香标准工作曲线；

图7芝麻酚标准工作曲线；

图8内标（萘）质谱图；

图9甲醇质谱图；

图10仲丁醇质谱图；

图11黄樟素质谱图；

图12咪唑质谱图；

图13香豆素质谱图；

图14二甲苯麝香质谱图；

图15芝麻酚质谱图；

图16优化分离条件前后，甲醇的出峰情况；

图17标准样品选择离子扫描色谱图，其中1：甲醇，2：仲丁醇，3：黄樟素，4：咪唑，5：香豆素，6：二甲苯麝香，7：芝麻酚，IS：内标；

图18实施例3的样品选择离子扫描色谱图；

图19实施例4的样品选择离子扫描色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施方式对本发明做进一步说明。

下面实施例中用到的标准品和内标如表4所示。

表4七种禁用化合物标准品及内标信息

其它试剂：CH₂Cl₂，色谱纯。无水硫酸钠/无水硫酸镁，分析纯。

其它辅助设备：分析天平（感量0.0001g），回旋振荡器，微量移液器，烘箱。

主要检测仪器：气相色谱质谱联用仪。

实施例1定性确证与定量计算

本发明实际仪器条件下，定性离子、定量离子的选择主要依据图8-图15各物质质谱图的碎片及丰度确定。待测样品液和标准工作溶液的选择离子色谱峰应在相同保留时间处（±0.01min）出现，且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度比与标准品相比应符合：相对丰度＞50%时，允许±10%偏差；相对丰度20%～50%时，允许±15%偏差；相对丰度10%～20%时，允许±20%偏差；相对丰度≤10%时，允许有±50%偏差，此时可定性确证目标分析物。以各自碎片相对丰度最高的质荷比作为定量离子。各禁用化合物的保留时间、定性离子和定量离子如表5所示。

表5七种禁用化合物及内标物定量和定性选择离子表

试样中各禁用化合物的含量按式（1）进行计算：

$X_i=\frac{(C_i-C_{i0})\×V_c}{m}...\left(1\right)$

式中：

X_i——试样中禁用化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

C_i——由标准曲线得出的试样中禁用化合物浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

C_i0——空白本底含量值，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V_c——萃取液的体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）。

实施例2绘制标准工作曲线

将表2中不同浓度的标准工作溶液S1-S7分别转移至色谱瓶中，进行气相色谱质谱联用分析，采用内标法进行定量，采用最小二乘法进行线性拟合，结合香精香料实际样品中禁用化学物含量较少特性，采用强制过原点模式，确保微量定量检测时的准确性和可靠性。

横轴为各禁用化合物与内标的浓度比，纵轴为各禁用化合物与内标的响应比，对其进行最小二乘法回归分析，即得到标准工作曲线，工作曲线线性相关系数R²>0.99。实际测试中每个标准点测试两次，取平均值进行计算，实测时除咪唑外，工作曲线线性相关系数R²>0.999。各禁用化合物的标准工作曲线如图1～图7所示。各禁用化合物全扫描质谱图如图17所示。

实施例3实际香精香料样品中七种禁用化合物测定

将某香精香料样品摇匀，用玻璃滴管吸取样品取样至50ml具塞三角锥形瓶中，同时用电子天平进行准确读数，实际称量为0.2987g，加入10ml内标萃取液（含有的4μg/ml的CH₂Cl₂溶液），将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振30min，速率为200rpm，振荡完毕后，加入2g无水硫酸钠进行除水，静置后移取清液，用0.22um有机滤膜过滤，收集滤液，上气相色谱质谱联用仪进行测试，工作曲线同实施例2，定性定量方法同实施例1，选择离子扫描色谱图如附图18所示，将选择离子扫描条件下各物质响应信号代入标准工作曲线计算，求得该样品中甲醇含量为243.34mg/kg，其它禁用化合物未检出。

实施例4实际香精香料样品中七种禁用化合物测定

将某香精香料样品摇匀，用玻璃滴管吸取样品取样至50ml具塞三角锥形瓶中，同时用电子天平进行准确读数，实际称量为0.3123g，加入10ml内标萃取液（含有的4μg/ml的CH₂Cl₂溶液），将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振30min，速率为200rpm，振荡完毕后，加入2g无水硫酸钠进行除水，静置后移取清液，用0.22um有机滤膜过滤，收集滤液，上气相色谱质谱联用仪进行测试，工作曲线同实施例2，定性定量方法同实施例1，选择离子扫描色谱图如附图19所示，将选择离子扫描条件下各物质响应信号代入标准工作曲线计算，求得该样品中甲醇含量50.22mg/kg，香豆素含量1.16mg/kg，其它禁用化合物未检出。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明较佳实施例，谨说明而非限制本发明的实施范围，参照上述实施例进行详细说明，本领域技术人员应当理解，对本发明进行修改或等同替换，而未脱离本发明的范围和实质的，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (10)

1.一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法，所述禁用化合物为甲醇、仲丁醇、黄樟素、咪唑、香豆素、二甲苯麝香及芝麻酚，该方法为气相色谱-质谱联用法，以CH₂Cl₂为溶剂，采用萘为内标物，采用内标法定量，采用毛细管色谱柱分离样品，进样口温度：200℃；升温程序的初始温度为35℃；分流比为10:1～30:1。

2.权利要求1的检测方法，其中，在质谱检测时设置两次时间事件，第一次是在进样后3.20-4.50min之间关闭质谱灯丝；第二次是在进样后15.30-16.00关闭质谱灯丝。

3.权利要求1的检测方法，其中所述的毛细管色谱柱的规格为30m×250μm×0.25μm，优选为HP-INNOWax气相色谱柱。

4.权利要求1的检测方法，其中升温程序为：初始温度35℃，保持2min；9℃/min的速率升温至65℃，保持1min；8℃/min的速率升温至200℃，保持2min；20℃/min的速率升温至230℃，保持8min。

5.权利要求1-4任一项的检测方法，其中，气相色谱条件为：进样口温度：240℃；进样量：1μl，分流进样，分流比：10:1；载气：纯度≥99.999%的氦气，恒流模式，流速：1.0mL/min；升温程序：35℃（2min），9℃/min升温至65℃（1min），8℃/min升温至200℃（2min），20℃/min升温至230℃（8min），总运行时间：34.708分钟。

6.权利要求1-5任一项的检测方法，其中，质谱分析条件：电离方式：电子轰击源：EI；电离能量：70eV；传输线温度：240℃，离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；测定方式：选择离子监视方式扫描；溶剂延迟：2.50min。

7.权利要求1-6任一项的检测方法，其中，样品前处理的方法为：

称取香精香料样品，置于三角锥形瓶中，加入含内标物的CH₂Cl₂萃取液，混合均匀后加入除水剂（例如无水硫酸钠或无水硫酸镁）进行除水，静置后移取清液，用有机滤膜过滤，收集滤液待测。

8.权利要求7的检测方法，其中所述的无水硫酸钠使用前应在烘箱200℃条件下烘烤2h，置于干燥器中冷却至室温后使用。

9.权利要求7的检测方法，其中所述的无水硫酸镁使用前应在马弗炉550℃下烘烤2h，置于干燥器中冷却至室温后使用。

10.权利要求1-9任一项的检测方法，该方法包括以下步骤：

1）制备含内标萃取液

称取内标物萘，以CH₂Cl₂为溶剂，配制含内标萘的CH₂Cl₂萃取液；

2）制备标准工作溶液

采用定量称取、混合方式制备七种禁用化合物混合标准溶液，采用逐步稀释法配制标准工作溶液，采用含内标的CH₂Cl₂萃取液进行配制和稀释，采用逐步稀释法制备各级标准工作溶液；

3）绘制标准工作曲线

以内标定量法，绘制标准工作曲线，横轴为各禁用化合物与内标的浓度比，纵轴为各禁用化合物与内标的响应比，对其进行最小二乘法回归分析，即得到标准工作曲线；

4）样品前处理

称取香精香料样品，置于三角锥形瓶中，加入含内标的CH₂Cl₂萃取液，将三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振，振荡完毕后，加入除水剂进行除水，静置后移取清液，用0.22um有机滤膜过滤，收集滤液待测；

5）气相色谱-质谱联用分析

样品经前处理后，滤液收集于色谱瓶中，上机测试，采用SIM模式（选择离子监测模式）采集响应信号，各禁用物质与内标的响应比值，代入标准工作曲线进行计算，即可得出各禁用物质的检测结果。

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