CN117607317B - 一种测定人血浆中抑郁症药物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种测定人血浆中抑郁症药物的方法，采取二维液相色谱仪进行分析，所述抑郁症药物为米氮平和坦度螺酮；具体方法包括以下工序：（1）启动第一维泵，通过一维流动相将待测样品导入第一维色谱系统的第一色谱柱进行样品的初级分离；（2）初级分离后，进入捕获柱捕获，样品中的目标组分在捕获柱中保留；（3）启动第二维泵，通过二维流动相将样品中目标组分送入第二维色谱系统的分析柱，样品中的目标组分在分析柱上分离，进入检测器进行检测，具体分析条件如说明书所述。本发明的方法测试结果精准、适用于临床、灵敏度高、经济实惠。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及抑郁症药物的测定和分析。
背景技术
米氮平（mirtazapine），化学名称为1,2,3,4,10,14b-六氢-2-甲基吡嗪基[2,1-a]吡啶并[2,3-c]苯并氮杂䓬，是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，为白色结晶性粉末，是一种去甲肾上腺素和特异性5-羟色胺抗抑郁药。坦度螺酮（Tandospirone）化学名为(3ΑΑ,4Β,7Β,7ΑΑ)-六氢-2-[4-[4-(2-嘧啶基)-1-哌嗪基]丁基]-4,7-亚甲基-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮，分子式为C21H29N5O2，分子量为383.48700，密度为1.239g/cm3，沸点为613.9ºCat 760 mmHg，折射率为1.589，4ºC储存。临床应用中，以上两种药物经常联合使用于治疗抑郁症，因为两种药物的作用的受体不同，且不存在拮抗作用。
现在技术中关于药物的分析领域已有很多种测定方法，例如：CN 116148401B公开了一种同步高效检测污泥中36种抗抑郁药物残留量的方法。包括目标药物粗提、提取液净化、采用高效液相色谱串联质谱技术进行检测、以及抗抑郁药物的定性及定量分析。CN114414707 B及一种液相色谱串联质谱检测血液中19种药物及其代谢产物的方法及试剂盒。中国专利申请201910058868公开了一种“高效液质联用同时测定35种精神药物的方法及试剂盒”，其提供了一种利用高效液相色谱串联质谱方法同时测定35种精神药物。以上现有技术大多采取液相色谱串联质谱检测的方法同时检测十几种或者几十种药物。
但是现有技术存在以下问题：1）患者一般使用1种药物治疗或2种药物联合治疗，一般不用十几种或者几十种药物同时治疗，几十种药物同时检测造成不必要的浪费，这些方案不易于大批量临床检测和应用。2）在同时检测十几或者几十种药物的过程中，存在多种目标物难以完全色谱分离，共流出等问题，导致灵敏度相对较低。3）现在技术多种药物混合在一起检测分析，分析时间长。4）质谱分析仪昂贵，分析检测成本高，维修成本高。
因此，需要根据临床需求，开发一种测试结果精准、适用于临床、灵敏度高、经济实惠的针对治疗抑郁症的药物的检测方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是研究一种测试结果精准、适用于临床、灵敏度高、经济实惠的针对治疗抑郁症的药物的检测方法，本发明的方法只需用到液相色谱仪进行检测，无需串联昂贵的质谱仪即可检测。本发明的方法主要是针对米氮平和坦度螺酮的检测。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种测定人血浆中抑郁症药物的方法，采取二维液相色谱仪进行分析，所述抑郁症药物为米氮平和坦度螺酮；所述二维液相色谱仪包括设有第一色谱柱的第一维液相色谱系统与设有分析柱的第二维色谱系统，还包括连接在第一维液相色谱系统与第二维色谱系统中间的捕获柱转移系统；所述捕获柱转移系统包括捕获柱和多流道切换阀，所述多流道切换阀分别与捕获柱、第一维液相色谱系统和第二维色谱系统连通，通过多流道切换阀的切换实现捕获柱在第一维液相色谱系统与第二维液相色谱系统之间的转移；具体方法包括以下工序：
（1）启动第一维泵，通过一维流动相将待测样品导入第一维色谱系统的第一色谱柱进行样品的初级分离；第一色谱柱内填充有微球表面键合了羧酸基的硅胶填料；
（2）初级分离后，转换捕获柱至第一维液相色谱系统，进入捕获柱捕获，样品中的目标组分在捕获柱中保留；捕获柱内填充有微球表面键合了磺酸基的硅胶填料；
（3）转换捕获柱至第二维液相色谱系统；启动第二维泵，通过二维流动相将样品中目标组分送入第二维色谱系统的分析柱，样品中的目标组分在分析柱上分离，进入检测器进行检测；
具体分析条件包括：
柱温：38℃-43℃。
一维流动相：甲醇：乙腈：25mmoL/L 磷酸铵盐水溶液=1：（2-3）：（2-3）v/v/v，氨水调pH 至 7.0-7.5；第一维泵流速：0.7-0.8 mL.min- 1；
二维流动相：水（含 1.0mmoLL 磷酸氢二铵，磷酸调 pH 至 3.00）：甲醇：乙腈
=（50-60）：（30-40）：4 v/v/v；第二维泵流速：1.1-1.2 mL.min- 1；
米氮平检测波长：293 nm；
坦度螺酮的检测波长239 nm。
实施例中优选的分析条件包括：柱温：40℃。
一维流动相：甲醇：乙腈：25mmoL/L 磷酸铵盐水溶液=1：3：3 (v/v/v)，氨水调
pH 至 7.00；第一维泵流速：0.7 mL.min- 1；
二维流动相：水（含 1.0mmoLL 磷酸氢二铵，磷酸调 pH 至 3.00）：甲醇：乙腈
=66：30：4（v/v/v）；第二维泵流速：1.2 mL.min- 1；
米氮平检测波长：293 nm。
坦度螺酮的检测波长239 nm。
优选的，所述待测样品的前处理过程包括：准确吸取乙腈1000 μL至1.5 mL EP管中，再准确加入400 μL血浆样本，涡旋振1 min后，离心8 min，取1000μL上层清液转移至进样瓶中待测。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明的方法可以用于同时分析米氮平和坦度螺酮，符合临床用药习惯，便于检测患者血液中的药物浓度。
2、本发明的方法对此两种药物的分离效果好，分析时间短，准确度高。
3、本发明的方法不需要串联质谱使用，节约成本。
4、本发明在常规第一色谱柱和第二色谱柱之间加入一根捕获柱，利用第一色谱柱进行初级分离，第一色谱柱内的键合了羧酸基的填料对米氮平和坦度螺酮有较好的保留效果，再利用捕获柱进行捕获和进一步的分离，捕获柱中对微球表面键合了磺酸基的填料对坦度螺酮和米氮平保留效果均好但是有所不同，这种搭配方案使得两种待测物质在进入分析柱之间就基本得到很好的分离，再进入分析柱分析即可，无需去改变分析柱的填料或者分析柱的内部结构。
以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
附图说明
图1为空白人血浆的色谱图；
图2为米氮平和坦度螺酮标准溶液的色谱图，米氮平的保留为5.58 min，坦度螺酮的保留为7.4min。
图3为空白人血浆中加入标准溶液的色谱图；
图4为米氮平的标准曲线；
图5为坦度螺酮的标准曲线；
图6为捕获柱停留在第二维液相色谱系统中的关联方式结构示意图（此时第一维液相色谱系统在初步分离）；
图7为捕获柱在第一维液相色谱系统中进行捕获的关联方式结构示意图（此时在捕获）；
图8为捕获柱回到第二维液相色谱系统中进行分析的关联方式结构示意图（此时在分析柱上分离进入检测系统）；
其中LC1：第一维液相色谱系统，包括 1 第一维色谱泵、 2 进样器、3 第一维色谱柱、4 废液收集器；
LC2：第二维液相色谱系统，包括 5 第二维色谱泵、 6 分析柱 、7、紫外检测器 ；
9：捕获柱转移系统，包括 8捕获柱，以及多流道切换阀，通过现有多流道切换阀的切换来实现捕获柱在第一维液相色谱系统与第二维液相色谱系统之间的转移。
具体实施方式
实施例1
人血浆中米氮平和坦度螺酮浓度的测定方法
1、药品与试剂
米氮平（含量：99.8 %，TRC）；
坦度螺酮（纯度99.9% ，中国食品药品检定研究院）
甲醇（色谱纯， ACS）；
乙腈（色谱纯， ACS）；
磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
磷酸氢二铵（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
氨水（分析纯， 国药集团化学试剂有限公司）；
高氯酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
醋酸铵（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
异丙醇（色谱纯， ACS）；
乙二醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
纯净水为纯水仪所制（不低于GB17323执行标准）。
2、仪器设备与分析条件
自动二维液相色谱系 统 由 岛津 公 司 的LC-20A 色谱 部件（ShimadzuCorporation，Kyoto，Japan ）与以及市购的全自动二维液相色谱耦合仪构成。全自动二维液相色谱耦合仪通过微流控系统将色谱泵、检测器、 进样器等色谱部件耦合在一起，构成第一维液相色谱系统（LC1）与第二维色谱系统(LC2)，被分析物质通过全自动二维液相色谱耦合仪微流控系统从LC1转移至LC2系统，完成被分析物质的分析，从而构成全自动二维液相色谱系统。第一维色谱柱、 第二维色谱柱与捕获色谱柱均安装在全自动二维液相色谱耦合仪的色谱柱温箱中；其中第一维色谱系统（LC1）的色谱泵为岛津LC-20 AT ，进样器为岛津SIL-20AC自动进样器（最大进样量1000μl）；第二维色谱系统(LC2)包括岛津LC-20AT四元低压色谱泵SPD-30A检测器，工作站为Lab Solution 工作站。
具体方法包括以下工序：
（5）启动第一维泵，通过一维流动相将待测样品导入第一维色谱系统（LC1）的第一色谱柱进行样品的初级分离；如图6所示。
（6）初级分离后，进入捕获柱，样品中的目标组分在捕获柱中保留，如图7所示；
（2）转换捕获柱至第二维液相色谱系统；如图8所示，启动第二维泵，通过二维流动相将样品中目标组分送入第二维色谱系统(LC2)的分析柱，样品中的目标组分在分析柱上分离，进入检测器进行检测；
第一色谱柱内填充有微球表面键合了羧酸基的硅胶填料；捕获柱内填充有微球表面键合了磺酸基的硅胶填料；分析柱为常规色谱柱。
分析条件：
柱温：40℃。
一维流动相：甲醇：乙腈：25mmoL/L 磷酸铵盐水溶液=1：3：3 (v/v/v)，氨水调
pH 至 7.00；第一维泵流速：0.7 mL.min- 1；
二维流动相：水（含 1.0mmoLL 磷酸氢二铵，磷酸调 pH 至 3.00）：甲醇：乙腈
=66：30：4（v/v/v）；第二维泵流速：1.2 mL.min- 1；
米氮平检测波长：293 nm。
坦度螺酮的检测波长239 nm。
3、样品处理
准确吸取乙腈1000 μL至1.5 mL EP管中，再准确加入400 μL血浆样本，涡旋振1min后，高速离心（14500 r×min-1）8 min，取1000μL上层清液转移至进样瓶中待测。
4、储备液、标准溶液、标准曲线样品及质控样品的配制
米氮平:
储备液：准确称量米氮平对照品（纯度 99.90%）13.25 mg，用 5mL 水和异
丙醇溶解并定容至 50 mL，配制成浓度为 262.759μg/mL 的米氮平储备液。
标准溶液：取 3 mL 上述米氮平储备液于 50 mL 容量瓶中，用乙二醇∶水（v : v）
1∶1（含 VC0.5mg/mL）定容至刻度，用乙二醇∶水（v : v）1∶1（含 VC0.5mg/mL）稀释10 倍，配制成浓度为 1576.56 ng/mL 的米氮平标准溶液。使用时用乙二醇∶水（v : v）1∶1（含 VC0.5mg/mL）稀释至所需浓度的标准溶液。
标准曲线样品：取上述米氮平标准溶液5mL，加入45mL空白人血浆，得到浓度157.66ng/mL 的标准曲线样品⑤；取标准曲线样品⑤25mL，加入 25mL空白人血浆，得到浓度为78.83 ng/mL的标准曲线样品④；取标准曲线样品④25mL，加入25mL空白人血浆，得到浓度为 39.41ng/mL 的标准曲线样品③；取标准曲线样品③25mL，加入25mL空白人血浆，得到浓度为 19.71 ng/mL的标准曲线样品②；取标准曲线样品②25mL，加入 25mL空白人血浆，得到浓度为9.85ng/mL的标准曲线样品①.
质控样品：取上述米氮平标准溶液 8mL，加入 92mL 空白人血浆，得到浓度
为 126.12 ng/mL 的高浓度质控样品；取上述米氮平标准溶液 4mL，加入 96mL
空白人血浆，得到浓度为 63.06 ng/mL 的中浓度质控样品；取上述米氮平标准溶
液 2mL，加入 98mL 空白人血浆，得到浓度为 31.53ng/mL 的低浓度质控样品。
坦度螺酮:具体方法同上。
标准曲线样品：标曲⑥点：49.37ng/ml；标曲⑤点：39.50ng/ml；标曲④点：
19.75ng/ml；标曲③点：9.87ng/ml；标曲②点：5.92ng/ml；标曲①点：2.96ng/ml。
质控样品：高浓度质控：37.03ng/ml；中浓度质控：14.81ng/ml；低浓度质控：4.94ng/ml。
定量方法
采用外标工作曲线法定量，将样品峰面积代入标准曲线，计算所得浓度。每批随行测定高、中、低质控样品。
6、验证结果
6.1 特异性
图1-3分别为空白人血浆、米氮平和坦度螺酮标准溶液、空白人血浆中加入标准溶液的色谱图。米氮平的保留为5.58 min，坦度螺酮的保留为7.4min，血浆内源性物质及其它杂质均不干扰样品的分离测定。
6.2 线性范围和定量限
按上述方法处理并测定配制好的标准曲线样品，以米氮平的峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程为：Y=287.49X-910.15，r =0.9994。如图4所示，线性范围9.85～157.66ng·ml-1 ，定量下限浓度为9.85 ng·ml-1。
按上述方法处理并测定配制好的标准曲线样品，以坦度螺酮的峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程为：Y= 2175.97X ，r =0.9997106。如图5所示，线性范围2.96～49.37ng·ml-1，定量下限浓度为2.96ngng·ml-1。
6.3准确度和精密度
取配制好的米氮平和坦度螺酮低、中、高 3 个水平浓度的质控样品进行处理并测定，每个浓度设置 5 组平行，测出结果代入线性回归方程计算浓度，比较该浓度与理论添加的浓度，得出方法的添加回收率和变异系数，检验准确度和日内精密度。连续 3 天配制并测定质控样品，考察方法日间精密度。由表2-3的结果可知，米氮平分析方法的回收率在106.7%～111.7%之间，日内、日间变异系数均小于3.4%。由表4-5的结果可知，坦度螺酮分析方法的回收率在 102.1%～104.4%之间， 日内、 日间变异系数均小于 5.22% 。该分析方法的灵敏度高，稳定性好，符合生物等效性研究的方法学要求，表2-表5如下所示。
以上所述为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明权利要求的保护范围之内。本发明的申请人上海市民政第三精神卫生中心是上海市民政局下属单位，本发明的具体案例是上海市民政局课题研究成果。
Claims (3)
1.一种测定人血浆中抑郁症药物的方法，采取二维液相色谱仪进行分析，其特征是，所述抑郁症药物为米氮平和坦度螺酮；所述二维液相色谱仪包括设有第一色谱柱的第一维液相色谱系统与设有分析柱的第二维色谱系统，还包括连接在第一维液相色谱系统与第二维色谱系统中间的捕获柱转移系统；所述捕获柱转移系统包括捕获柱和多流道切换阀，所述多流道切换阀分别与捕获柱、第一维液相色谱系统和第二维色谱系统连通，通过多流道切换阀的切换实现捕获柱在第一维液相色谱系统与第二维液相色谱系统之间的转移；具体方法包括以下工序：
（1）启动第一维泵，通过一维流动相将待测样品导入第一维色谱系统的第一色谱柱进行样品的初级分离；第一色谱柱内填充有微球表面键合了羧酸基的硅胶填料；
（2）初级分离后，转换捕获柱至第一维液相色谱系统，进入捕获柱捕获，样品中的目标组分在捕获柱中保留；捕获柱内填充有微球表面键合了磺酸基的硅胶填料；
（3）转换捕获柱至第二维液相色谱系统；启动第二维泵，通过二维流动相将样品中目标组分送入第二维色谱系统的分析柱，样品中的目标组分在分析柱上分离，进入检测器进行检测；
具体分析条件包括：
柱温：38℃-43℃；
一维流动相：甲醇：乙腈：25mmoL/L 磷酸铵盐水溶液=1：（2-3）：（2-3），v/v/v，氨水调pH至 7.0-7.5；第一维泵流速：0.7-0.8 mL/min；
二维流动相：水：甲醇：乙腈=66：30：4，v/v/v；第二维泵流速：1.1-1.2 mL/min，所述二维流动相中的水含 1.0mmoL/L 磷酸氢二铵并用磷酸调 pH 至 3.00；
米氮平检测波长：293 nm；坦度螺酮的检测波长239 nm。
2.根据权利要求1所述测定人血浆中抑郁症药物的方法，其特征是，具体分析条件包括：
柱温：40℃；一维流动相：甲醇：乙腈：25mmoL/L 磷酸铵盐水溶液=1：3：3 ，v/v/v，氨水调pH 至 7.00；第一维泵流速：0.7 mL/min；二维流动相：水：甲醇：乙腈=66：30：4，v/v/v；所述二维流动相中的水含 1.0mmoL/L 磷酸氢二铵并用磷酸调 pH 至 3.00；第二维泵流速：1.2mL/min；米氮平检测波长：293 nm；坦度螺酮的检测波长239 nm。
3.根据权利要求1或2所述测定人血浆中抑郁症药物的方法，其特征是，所述待测样品的前处理过程包括：准确吸取乙腈1000 μL至1.5 mL EP管中，再准确加入400 μL血浆样本，涡旋振1 min后，离心8 min，取1000μL上层清液转移至进样瓶中待测。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017218632A1 (en) * | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods of detecting anti-folic acid antibodies and uses thereof |
| CN111323527A (zh) * | 2018-12-13 | 2020-06-23 | 湖南德米特仪器有限公司 | 一种用复合二维液相色谱同时测定多种精神药物的方法 |
| CN113917024A (zh) * | 2021-10-09 | 2022-01-11 | 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） | 一种检测体内九种精神科药物及其代谢物的试剂盒 |
| CN116148401A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-05-23 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一种同步高效检测污泥中36种抗抑郁药物残留量的方法 |
-
2023
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017218632A1 (en) * | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods of detecting anti-folic acid antibodies and uses thereof |
| CN111323527A (zh) * | 2018-12-13 | 2020-06-23 | 湖南德米特仪器有限公司 | 一种用复合二维液相色谱同时测定多种精神药物的方法 |
| CN113917024A (zh) * | 2021-10-09 | 2022-01-11 | 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） | 一种检测体内九种精神科药物及其代谢物的试剂盒 |
| CN116148401A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-05-23 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一种同步高效检测污泥中36种抗抑郁药物残留量的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ANALYSIS OF BASIC PSYCHOTROPIC DRUGS IN BIOLOGICAL FLUIDS AND TISSUES BY REVERSED-PHASE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY;ANNA PETRUCZYNIK 等;ANALYSIS OF BASIC PSYCHOTROPIC DRUGS IN BIOLOGICAL FLUIDS AND TISSUES BY REVERSED-PHASE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY;20171231;第74卷(第2期);第331-346页 * |
| 基于液相色谱-二级质谱联用技术精神科药物中毒筛查平台的构建与临床应用;倪晓佳 等;中国医院药学杂志;20170816;第37卷(第17期);第1671-1674页 * |
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