CN111323492A - 一种复合色谱柱以及一种二维液相色谱系统 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种复合色谱柱，包括柱体，所述柱体分为上段和下段，上段所用填料为微球表面键合了萘基的填料，下段所用填料为微球表面键合了苯磺酸基的填料。该复合色谱柱分析效果好。本发明还公开了一种二维液相色谱系统，以所述复合色谱柱作为分析柱，另外还包括萃取柱；所述萃取柱的填料为微球表面键合了羧酸基的填料。该复合液相色谱系统可实现对四种精神药物的同时分离，且分离效果好，分析时间短。

Description

一种复合色谱柱以及一种二维液相色谱系统
技术领域
本发明属于色谱柱领域，具体涉及用于精神药物的测定和分析的色谱柱和二维液相色谱系统。
背景技术
目前常用的精神药物有很多种，例如：文拉法辛、去甲文拉法辛、氨磺必利、舒必利等。2011年精神科治疗药物监测(Therapeutic drug monitoring，TDM)，对于人体血浆中精神药物的分析方法主要有液相色谱方法、液质联用检测方法等。例如：申请号201810574905.8公开了一种简便高效检测人血浆中文拉法辛及其活性代谢物O-去甲文拉法辛浓度的方法。申请号201711326671.7公开了一种用液相色谱对舒必利片的检测方法。但是以上方法都是只是针对单一精神药物的测定。
如果用现有液相色谱分析方法或液质联用检测方法来同时检测多种药物，存在以下缺点和难点：
1、一般液相色谱所使用的色谱柱为C18柱，如果两种以上药物混合在一起分析，柱子极性相差大，两种物质之间的分离时间相隔长，导致分析时间长。
2、血浆中存在其他物质的干扰，导致分离度不好。
3、血浆样品进行分析一般需要复杂的前处理过程，工序繁琐，导致整个分析过程耗时长。
4、质谱分析仪昂贵，增加企业成本和后期维修成本。
本发明拟从色谱柱和多根色谱柱所组成的色谱系统着手，拟通过色谱柱填料的改进，以及用不同色谱柱进行组合，通过常规的液相色谱仪，达到同时分析多种精神药物的目的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种复合色谱柱，以及一种二维液相色谱系统，可以实现对文拉法辛、去甲文拉法辛、氨磺必利和舒必利四种精神药物的检测。
为实现以上发明目的，本发明的技术方案是：
一种复合色谱柱，包括柱体，所述柱体分为上段和下段，上段所用填料为微球表面键合了萘基的填料，下段所用填料为微球表面键合了苯磺酸基的填料。
优选方案，上段和下段之间通过连接件连接。所述连接件进一步优选为卡套或者密封环。
优选方案，所述微球为硅胶、二氧化钛或者高分子聚合物。
一种二维液相色谱系统，包括所述复合色谱柱。
优选方案，所述上段的长度为20-50mm，下段的长度为80-150mm。
进一步优选方案，所述上段的长度为30mm，下段的长度为100mm。
一种二维液相色谱系统，以所述复合色谱柱作为分析柱，还包括萃取柱；所述萃取柱的填料为微球表面键合了羧酸基的填料。
所述液相色谱仪可以是现有常规的二维液相色谱仪，我们主要是替换了里面的分析柱和萃取柱。
优选方案，所述二维液相色谱系统，包括：流道切换阀，废液流道、用于输送一维流动相的第一流道、用于输送一维流动相的第二流道、连接有分析柱的分析流道以及萃取柱，所述废液流道、第一流道、第二流道、分析流道分别与流道切换阀的任意一个端口连接，所述萃取柱连接在所述流道切换阀剩余的任意两个端口之间。
进一步优选方案，所述流道切换阀为六通阀。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
1、本发明的复合色谱柱(分析柱)和萃取柱的填料是经过精心设计的，分离效果好。分析柱上段所用填料为微球表面键合了萘基的填料，下段所用填料为微球表面键合了苯磺酸基的填料；所述萃取柱为微球表面键合了羧酸基的填料；表面键合了苯磺酸基的填料对氨磺必利和舒必利的保留效果最强，对去甲文拉法辛的保留效果较强，微球表面键合了萘基的填料对文拉法辛的保留效果较强，而微球表面键合了羧酸基的填料对这四种药物的捕获效果都非常强，通过这种组合，可以很好的将这四种药物分离。
2、本发明的复合液相色谱仪，该色谱仪设有改进后的分析柱，并通过萃取柱的配合，构建了一种特殊的色谱柱组合，可以用于同时分析多种精神药物。
3、本发明的复合液相色谱仪对四种精神药物的同时分离效果好，分析时间短。
附图说明
图1为本发明所述复合二维液相色谱结构示意图；
图2为分析柱结构示意图；
图3为空白人血浆的色谱图；
图4为文拉法辛、去甲文拉法辛、氨磺必利、舒必利标准溶液的色谱图；
图5为空白人血浆加入文拉法辛、去甲文拉法辛、氨磺必利、舒必利(493.86ng/mL、497.81ng/mL、977.64ng/mL、985.99ng/mL)的色谱图；
图6为文拉法辛标准曲线图；
图7为去甲文拉法辛标准曲线图；
图8为氨磺必利标准曲线图；
图9为舒必利标准曲线。
其中：SI：一维流动相；C1：萃取柱(一维色谱柱) S2：二维流动相；C2：分析柱(二维色谱柱) DE：紫外检测器 P1：萃取泵 P2：分析泵 V1：流道切换阀 AS：自动进样器 L1：第一流道 L2：第二流道 L3：分析流道 L4：萃取柱连接流道 L5：废液流道；
1是分析柱的上段，2是分析柱的下段，3是连接件。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的解释和说明
如图1所示：一种复合二维液相色谱仪，流道切换阀V1，废液流道L5、用于输送一维流动相S1的第一流道L1、用于输送一维流动相S2的第二流道L2、连接有分析柱C2的分析流道L3以及萃取柱C1，所述废液流道L5、第一流道L1、第二流道L2、分析流道L3分别与流道切换阀V1的任意一个端口连接，所述萃取柱C1连接在所述流道切换阀V1剩余的任意两个端口之间。
如图2所示，所述分析柱分为上段1和下段2，上段1所用填料为微球表面键合了萘基的硅胶填料，下段2所用填料为微球表面键合了苯磺酸基的硅胶填料。上段和下段之间通过连接件3连接。所述上段的长度为30mm，下段的长度为100mm。
所述萃取柱为微球表面键合了羧酸基的硅胶填料。
具体应用：
人血浆中文拉法辛、去甲文拉法辛、氨磺必利、舒必利浓度的同时测定
1、药品与试剂
文拉法辛(含量：99.9％，中国药品生物制品检定所)；
去甲文拉法辛(含量：98.0％，萨恩化学技术有限公司)；
氨磺必利(含量：99.9％，中国药品生物制品检定所)；
舒必利(含量：100.00％，trc)；
甲醇(色谱纯，ACS)；
乙腈(色谱纯，ACS)；
磷酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
磷酸氢二铵(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
氨水(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
高氯酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
醋酸铵(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
异丙醇(色谱纯，ACS)；
乙二醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
纯净水为纯水仪所制(不低于GB17323执行标准)。
2、仪器设备与分析条件
仪器设备如前文所述。
所述同时测定多种精神药物的方法包括以下工序：
(1)启动第一维泵，通过一维流动相将待测样品导入萃取柱，样品中的目标组分在萃取柱上富集与捕获；
(2)启动第二维泵，通过二维流动相将样品中目标组分送入分析柱，样品中的目标组分在分析柱上分离，进入检测器进行检测；
表1工序图对应时间程序
Figure BDA0001904358730000041
分析条件：
柱温：40℃。
一维流动相：甲醇∶乙腈∶10mmoL/L磷酸铵盐水溶液＝1∶3∶3(v/v/v)，氨水调pH至7.00；第一维泵流速：0.7mL·min4；
二维流动相：甲醇∶乙腈∶25mmoL/L磷酸铵盐水溶液＝1∶2∶3(v/v/v)，氨水调pH至7.00；第二维泵流速：1.2mL·min-1；
文拉法辛、去甲文拉法辛检测波长：280nm。
氨磺必利、舒必利检测波长：292nm。
3、样品处理
蛋白沉淀法：准确吸取乙腈1000μL至1.5mL EP管中，再准确加入400μL血浆样本，涡旋振荡1min后，高速离心(14500r·min-1)8min，取1000μL上层清液转移至进样瓶中待测。
4、技术验证结果
4.1特异性
图3-5分别为空白人血浆、文拉法辛和去甲文拉法辛、氨磺必利、舒必利标准溶液、空白人血浆中加入标准溶液的色谱图。文拉法辛的保留为5.882min，去甲文拉法辛的保留为3.415min，氨磺必利的保留为4.605min，舒必利的保留为3.718min，血浆内源性物质及其它杂质均不干扰样品的分离测定。
4.2线性范围和定量限
测定配制好的标准曲线样品，以氟西汀、去甲氟西汀的峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程为：
文拉法辛：y＝230.8x-1030.1，r＝0.9999，线性范围24.37～1218.43ng·ml-1去甲文拉法辛：Y＝262.3x-1293.6，r＝0.9999，线性范围24.11～1205.4ng·ml-1
氨磺必利Y＝2246.0x+18034.6，r＝0.9999，线性范围48.15～2407.59ng·ml-1。
舒必利：y＝459.4x+2092.4，r＝0.9999，线性范围48.4～2420ng·ml-1
4.3准确度和精密度
取配制好的文拉法辛和去甲文拉法辛低、中、高3个水平浓度的质控样品进行处理并测定，每个浓度设置5组平行，测出结果代入线性回归方程计算浓度，比较该浓度与理论添加的浓度，得出方法的添加回收率和变异系数，检验准确度和日内精密度。连续3天配制并测定质控样品，考察方法日间精密度。由表2-3的结果可知，建立的文拉法辛分析方法的回收率在98.4％～102.7％之间，日内、日间变异系数均小于8.5％；去甲文拉法辛分析方法的回收率在102.9％～111.9％之间，日内、日间变异系数均小于4.7％；氨磺必利分析方法的回收率在98.7％～101.3％之间，日内、日间变异系数均小于3.3％；舒必利分析方法的回收率在101.7％～102.8％之间，日内、日间变异系数均小于3.9％。该分析方法的灵敏度高，稳定性好，符合生物等效性研究的方法学要求。
表2方法回收率及日内精密度(n＝5)
Figure BDA0001904358730000061
Figure BDA0001904358730000062
Figure BDA0001904358730000063
Figure BDA0001904358730000064
Figure BDA0001904358730000071
表3方法日间精密度(n＝5)
Figure BDA0001904358730000072
Figure BDA0001904358730000073
Figure BDA0001904358730000081
Figure BDA0001904358730000082
Figure BDA0001904358730000083

Claims (10)

1.一种复合色谱柱，包括柱体，其特征是，所述柱体分为上段和下段，上段所用填料为微球表面键合了萘基的填料，下段所用填料为微球表面键合了苯磺酸基的填料。
2.根据权利要求1所述复合色谱柱，其特征是，上段和下段之间通过连接件连接。
3.根据权利要求1所述复合色谱柱，其特征是，所述连接件为卡套或者密封环。
4.根据权利要求1或2所述复合色谱柱，其特征是，所述微球为硅胶、二氧化钛或者高分子聚合物。
5.根据权利要求1或2所述复合色谱柱，其特征是，所述上段的长度为20-50mm，下段的长度为80-150mm。
6.根据权利要求5所述复合色谱柱，其特征是，所述上段的长度为30mm，下段的长度为100mm。
7.一种二维液相色谱系统，其特征是，包括权利要求1-6之一所述的复合色谱柱。
8.根据权利要求7所述二维液相色谱系统，其特征是，以所述复合色谱柱作为分析柱，另外还包括萃取柱；所述萃取柱的填料为微球表面键合了羧酸基的填料。
9.根据权利要求7或8所述二维液相色谱系统，其特征是，包括：流道切换阀（V1），废液流道（L5）、用于输送一维流动相（S1）的第一流道（L1）、用于输送一维流动相（S2）的第二流道（L2）、连接有分析柱（C2）的分析流道（L3）以及萃取柱（C1），所述废液流道（L5）、第一流道（L1）、第二流道（L2）、分析流道（L3）分别与流道切换阀（V1）的任意一个端口连接，所述萃取柱（C1）连接在所述流道切换阀（V1）剩余的任意两个端口之间。
10.根据权利要求9所述二维液相色谱系统，其特征是，流道切换阀（V1）为六通阀。
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