CN103852531A

CN103852531A - 一种利用hplc-elsd测定啤酒中麦芽低聚糖的方法

Info

Publication number: CN103852531A
Application number: CN201410089102.5A
Authority: CN
Inventors: 李崎; 陈熙; 王金晶; 刘春凤; 李永仙; 郑飞云; 朱林江
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2014-03-12
Filing date: 2014-03-12
Publication date: 2014-06-11
Anticipated expiration: 2034-03-12
Also published as: CN103852531B

Abstract

本发明公开了一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法，属于化学分析检测领域。本发明采用WatersXbridgeAmide柱（250mm×4.6mm×3.5mm）；ELSD检测器：漂移管温度50℃，载气压力350KPa，A流动相为80%乙腈水溶液，B流动相为30%乙腈水溶液，流速1毫升/分钟，进样量10微升，时间30分钟，柱温35℃。根据标准曲线，计算出待测样品中麦芽低聚糖的含量。本发明采用HPLC-ELSD，即高效液相色谱和蒸发光散射检测器相结合，达到快速高效的检测，不仅不受流动相的影响，且灵敏度高，方法的稳定性和重现性好，操作简单，准确可靠。

Description

一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法

技术领域

本发明涉及一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法，属于化学分析检测领域。

背景技术

啤酒含有丰富的营养物质，被称为“液体面包”。实际上，啤酒中含量最丰富的是糖类，它们不仅提供啤酒中绝大部分的能量，而且对啤酒泡沫性能也发挥作用。而啤酒中游离糖包括单糖，二糖和多糖。单糖和高聚糖的含量相对较少，而主要成分就是低聚糖。如何能够定量地分析啤酒中麦芽低聚糖成为研究其功能性质的一个难题。

麦芽低聚糖包括麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖及麦芽八糖。目前对麦芽低聚糖的研究仅局限于定量分析麦芽三糖及以下，而对于麦芽四糖及以上并无报道。且没有一种有效检测方法能定量分析麦芽糖、麦芽三糖等低聚糖。

本发明旨在提供一种同时检测啤酒中多种麦芽低聚糖的方法，为研究啤酒酿造过程中麦芽低聚糖含量的变化对啤酒泡沫性能的影响提供帮助，同时也为生产工艺提供理论指导。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用HPLC-ELSD检测啤酒麦芽低聚糖的方法。该方法能有效对啤酒中麦芽低聚糖含量进行分析。

所述方法的具体步骤为：

（1）样品制备：取市售啤酒10.0mL，加入等体积的体积分数为10%的三氟乙酸溶液并在4℃条件下放置1小时，8000转离心10min以除去啤酒中蛋白质，转移上清液放置另一瓶中，并置于超声仪中超声处理60min以除去气泡；用0.45μm有机滤膜和C18萃取小柱过滤至透明无颗粒状态，将滤液存于样品瓶中，准备进样；

（2）样品检测：

检测装置为岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站，WatersXbridgeAmide柱的规格为：长度250毫米╳内径4.6毫米╳粒度3.5微米。

开启ELSD检测器，设置漂移管温度为50℃，载气压力为350KPa；待所设置参数平稳后将80%乙腈水溶液作为A流动相，30%乙腈水溶液作为B流动相输入到岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站。

采用梯度洗脱程序：0-16min，80%A-30%A；16-16.01min，30%A-80%A；16.01-30min，80%A；进样体积为10μL；流速1.0mL/min；柱温35℃。

待基线平稳后，进入工作状态。

将待测啤酒样品注入进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量为10微升，计算同一保留时间下的峰面积，代入标准曲线方程，即计算出待测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量。

所述标准曲线方程的绘制是称取麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖标准品，用70%乙腈水定容于容量瓶中，分别制成麦芽低聚糖含量为10、100、500、10000、20000和5000微克/毫升的溶液，分别注入进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量为10微升，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，作出标准曲线方程：y=f(x)，含量在10-5000微克/毫升范围。

所述的无水乙腈和去离子水均用0.45μm有机滤膜过滤，并放置于超声仪中超声60min。

所述乙腈和麦芽低聚糖标准品均为市售色谱纯。

本发明的检测方法中麦芽低聚糖的含量在10-5000微克/毫升的范围内与同一保留时间下的峰面积成线性关系，可利用这一规律对麦芽低聚糖的含量进行检测，且本发明采用HPLC-ELSD，即高效液相色谱-蒸发光散射检测器相结合，灵敏度高，检测快速，且不受流动相组成的干扰，因此对麦芽低聚糖检测的效果好。

附图说明

图1为本发明实施例中所使用的麦芽低聚糖标准品的高效液相色谱图，按洗脱时间从前往后，对应的洗脱峰依次是麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖及麦芽七糖。

图2为啤酒样品的高效液相色谱图；1，麦芽糖；2，麦芽三糖；3，麦芽四糖；4，麦芽五糖；5，麦芽六糖；6，麦芽七糖。

具体实施方式

实施例1测定啤酒中麦芽低聚糖含量

（1）样品制备：取市售啤酒10.0mL，加入同体积的10%（v/v）的三氟乙酸溶液并在4℃条件下放置1小时，8000转离心10min，取上清液放置另一新瓶中并置于超声仪中超声60min；用0.45μm有机滤膜和C18萃取小柱过滤，存于样品瓶中，准备进样。

（2）设置检测装置：

设置HPLC装置岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站的色谱条件：WatersXbridgeAmide柱的规格为：长度250毫米╳内径4.6毫米╳粒度3.5微米。开启ELSD检测器，设置漂移管温度为50℃，载气压力为350KPa；待所设置参数平稳后将80%乙腈水溶液作为A流动相，30%乙腈水溶液作为B流动相输入到岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为：0-16min，80%A-20%A；16-16.01min，20%A-80%A；16.01-30min，80%A；进样体积为10μL；流速1.0mL/min；柱温35℃。待基线平稳后，进入工作状态，可用于检测样品。

（3）标准曲线的绘制：

分别称取麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖标准品，用70%乙腈水定容于容量瓶中，分别制成麦芽低聚糖含量为10、100、500、10000、20000和5000微克/毫升的溶液，分别注入步骤（2）设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量10微升，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，作出标准曲线方程：麦芽糖：y=5203238x-121666，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9957；麦芽三糖：y=5627663x-670089，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9962；麦芽四糖：y=5821357x-506264，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9977；麦芽五糖：y=5413561x-227364，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9945；麦芽六糖：y=4968397x-225739，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9935；麦芽七糖：y=4180352x-328514，含量在10-5000微克/毫升范围，R²=0.9990。

（4）检测待测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量：

将三份同一待测啤酒样品注入步骤（2）设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，一次进样量为10微升，计算同一保留时间下的峰面积，代入步骤（3）所得的标准曲线方程，即计算出待测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量；所得样品色谱图如图2。

实施例2方法稳定性与重现性评估

取已知目的物含量的啤酒样品一份，加入不同质量浓度的标准溶液，制备成高（各麦芽低聚糖浓度1000微克/毫升）、中（各麦芽低聚糖浓度分别为500微克/毫升）、低（各麦芽低聚糖浓度分别为10微克/毫升）三个浓度的混合液，按照实施例1方法各测定6次，RSD值在3%左右，表明该方法的稳定性和重现性很好。回收率取平均值，麦芽糖的回收率在98.59%-109.09%之间；麦芽三糖的回收率在97.38%-108.47%；麦芽四糖的回收率在101.64%-107.89%；麦芽五糖的回收率在100.35%-106.85%；麦芽六糖的回收率在98.31%-104.68%；麦芽七糖的回收率在98.36%-106.31%；由此可见该方法可有效精确的测定啤酒中麦芽低聚糖含量。

Claims

1.一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备样品，去除蛋白质和气泡；

（2）设置装置：采用色谱柱WatersXbridgeAmide柱，规格为250mm×4.6mm×3.5μm，开启ELSD检测器，设置漂移管温度为50℃，载气压力为350KPa；待所设置参数平稳后将80%乙腈水溶液作为A流动相，30%乙腈水溶液作为B流动相输入到岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站；采用梯度洗脱程序：0-16min，80%A-20%A；16-16.01min，20%A-80%A；16.01-30min，80%A；进样体积为10μL；流速1.0mL/min；柱温35℃；待基线平稳后，进入工作状态；

（3）绘制标准曲线，得到标准曲线方程；

（4）检测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量：将待测啤酒样品注入步骤（2）设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量为10微升，计算同一保留时间下的峰面积，代入步骤（3）所得的标准曲线方程，计算出待测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述麦芽低聚糖是麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备样品的具体步骤为：取市售啤酒10.0mL，加入同体积的10%的三氟乙酸溶液并在4℃条件下放置1小时，8000转离心10min，取上清液放置另一新瓶中并置于超声仪中超声60min；用0.45μm有机滤膜和C18萃取小柱过滤，存于样品瓶中，用于分析。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的制备是称取麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖标准品，用70%乙腈水溶液定容于容量瓶中，分别制成麦芽低聚糖含量为10、100、500、10000、20000和5000微克/毫升的溶液，分别注入进入工作状态的色谱柱中，进样量为10微升，以含量为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，作出标准曲线方程。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙腈和水均用0.45μm有机滤膜过滤，并放置于超声仪中超声60min除气。