CN106596765A - 一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法 - Google Patents

一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及食品添加剂检测领域，具体涉及一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，包括：配制待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液和麦芽三糖标准液，并将麦芽三糖标准液按指定倍数稀释成多份；将待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液分别进行高效液相色谱分析，得到相应的色谱峰和保留时间，绘制麦芽三糖标准曲线，通过比对相应的色谱峰和保留时间判定待测样品中含有麦芽糊精后，利用麦芽三糖标准曲线得到待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量，二者之比即为待测样品中麦芽糊精的添加量。本发明提供了一种适用范围广、样品前处理简单、检测效率高、准确度高的检测方法。

Description

一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法
技术领域
本发明涉及食品添加剂检测领域，具体涉及一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法。
背景技术
麦芽糊精是保健食品原料中常加入的一种廉价辅料，其本身是一种由单糖、低聚糖和多糖组成的复杂混合物，国家标准中目前暂无保健食品原料中麦芽糊精含量的标准检测方法。虽然行业内有一些麦芽糊精的检测方法在应用，如硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、酶解法，但这些检测方法存在诸多弊端，如前处理复杂、易受样品本底中其他糖类物质的干扰，准确度较低，实际应用效果较差。
中国专利文献(CN104792708)公开了一种中红外光谱技术检测保健食品中糊精含量的方法，利用傅里叶红外光谱仪分别扫描不同含量的糊精标准样品和待测样品，然后通过糊精主强峰的相对强度以进行质量识别。考虑到保健食品体系复杂，含有的组分较多，红外光谱图谱峰较多，在识别糊精主强峰时，其他色谱峰容易对糊精的主强峰造成干扰，影响最终糊精的质量含量的判定，使得检测精度较低，同时且该方法局限性大，需要预先提供不含麦芽糊精的待测样品。因此亟需开发一种简单、准确的食品原料中麦芽糊精的检测方法来监控食品原料生产厂家的原料质量。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的麦芽糊精检测前处理复杂、易受干扰、检测准确度较低的缺陷，从而提供一种适用范围广、样品前处理简单、检测效率高、准确度高的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法。
为此，本申请提供了一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，包括如下步骤：
前处理步骤，配制待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液和麦芽三糖标准液，并将麦芽三糖标准液按指定倍数稀释成多份；
测定步骤，将所述待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液分别进行高效液相色谱分析，得到相应的色谱峰和保留时间，绘制麦芽三糖标准曲线，通过比对相应的色谱峰和保留时间判定待测样品中含有麦芽糊精后，利用麦芽三糖标准曲线通过外标法分别计算待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，进而得到待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量，二者之比即为待测样品中麦芽糊精的添加量。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述测定步骤中，判定待测样品中含有麦芽糊精的方法为：
检测待测样品各色谱峰的保留时间中是否同时包括麦芽糖和麦芽三糖的保留时间，若同时包括，则判定待测样品中含有麦芽糊精。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述前处理步骤中，根据麦芽三糖标准曲线得到麦芽三糖线性回归方程为：lnC＝a×lnA-b；
其中，C为麦芽三糖标准液的浓度，单位为mg/mL；
A为麦芽三糖标准液的峰面积，单位为mAU；
a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述测定步骤中，待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量的计算公式为：
麦芽三糖含量
其中，C′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，单位为mg/mL；
F为稀释体积倍数；
m为待测样品或麦芽糊精的称样量，单位为mg；
A′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积，单位为mAU；
a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述前处理步骤中，将配制的待测样品液和麦芽糊精对照样品液在定容后超声25-30min，并过0.45μm滤膜，备用。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述前处理步骤中，将配制的麦芽糖标准液和麦芽三糖标准液在定容后超声5-10min。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述前处理步骤中，将麦芽三糖标准溶液分别稀释2、4、10和20倍后得到稀释液。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述测定步骤中，在进行高效液相色谱分析时，色谱条件为：
高效液相色谱仪，配ELSD检测器；
色谱柱为氨基柱(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相为乙腈-水溶液(75∶25)，等度洗脱；
流速为1.0mL/min；
ELSD漂移管温度为35℃；
柱温为30℃；
进样量为20μL。
所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法中，所述前处理步骤中，配制待测样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液和麦芽糊精对照样品液时所用的水为超纯水。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的检测方法中，通过比对待测样品和标准样品的色谱峰及保留时间确定待测样品中是否含有麦芽糊精，以实现定性检测，这是基于麦芽糊精中同时含有麦芽糖和麦芽三糖，且麦芽糊精在食品原料加工过程中成分稳定，这样只需比对两个色谱峰及保留时间就能确定待测样品中是否含有麦芽糊精，检测的样品数量少、效率高。在进行定量检测时，由麦芽三糖的标准曲线得到麦芽三糖的线性回归方程，即麦芽三糖的浓度与峰面积之间的关系式，进而得到待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量，二者之比即为待测样品中麦芽糊精的添加量，这是由于麦芽三糖的浓度与峰面积具有双对数关系，通过读取待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积再经过计算即可得到麦芽三糖的浓度，检测方法不受样品本底中含糖类物质的干扰，准确度高。
2.本发明提供的检测方法中，将待测样品、对照样品和标准样品配制成溶液进行高效液相色谱分析，不受原料形态(固态或液态)的影响，适用范围广，且样品前处理简单。
材料准备：
麦芽糊精对照品，中粮集团中粮生化能源销售有限公司；
90％麦芽糖、98％麦芽三糖标准品，中国药品生物制品检定所；
色谱乙腈，德国默克；
高纯氮气，中山市富安气体有限公司；
高效液相色谱仪，Agilent 1260(配ELSD检测器)；
超声水浴锅，德国julabo。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为麦芽糖(Maltose)标准样品HPLC图；
图2为麦芽三糖(Maltotriose)标准样品HPLC图；
图3为麦芽糊精对照品HPLC图；
图4为实施例1保健食品原料试样HPLC图。
具体实施方式
实施例1
前处理步骤，称取长沙金农天然植物制品实业有限公司生产的中药提取物原料0.5094g作为待测样品和其使用的辅料麦芽糊精对照品0.5071g，分别置于25mL容量瓶中，加入超纯水定容至刻度，摇匀后置于超声水浴锅中超声25-30min，并过0.45μm滤膜，备用。然后分别称取麦芽糖和麦芽三糖标准样品37.1mg和40.5mg置于20mL容量瓶中，加超纯水定容，超声5-10min，作为标准液，然后将麦芽三糖标准液分别稀释2、4、10和20倍后得到稀释液。
测定步骤，将所述待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液分别按照下述色谱条件进行高效液相色谱分析，得到相应的色谱峰和保留时间，并绘制麦芽三糖标准曲线。待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液的峰面积和浓度如下表1所示。
色谱条件为：
高效液相色谱仪，配ELSD检测器；
色谱柱为氨基柱(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相为乙腈-水溶液(75∶25)，等度洗脱；
流速为1.0mL/min；
ELSD漂移管温度为35℃；
柱温为30℃；
进样量为20μL。
表1待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽三糖标准液及其稀释液的峰面积和浓度
其中，STD1、STD2、STD3、STD4和STD5分别为麦芽三糖标准液及其稀释2、4、10和20倍后得到的稀释液。
定性检测，检测待测样品各色谱峰的保留时间中是否同时包括麦芽糖和麦芽三糖的保留时间，即图1和图2的特征峰对应的保留时间，若同时包括，即图4中同时包括图1和图2的特征峰对应的保留时间，则判定待测样品中含有麦芽糊精。
定量检测，当判定待测样品中含有麦芽糊精后，利用麦芽三糖标准曲线得到麦芽三糖线性回归方程为：lnC＝a×lnA-b；其中，C为麦芽三糖标准液的浓度，单位为mg/mL；A为麦芽三糖标准液的峰面积，单位为mAU；a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距，从而得到a为0.8068，b为7.4578，即lnC＝0.8068×lnA-7.4578，R2＝0.9999。待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量的计算公式为：麦芽三糖含量其中，C′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，单位为mg/mL；F为稀释体积倍数；m为待测样品或麦芽糊精的称样量，单位为mg；A′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积，单位为mAU；a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距，通过读取的待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积利用上述计算公式分别计算得到待测样品中麦芽三糖的含量X1为麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量X2为二者之比X1/X2为44.5％，即为待测样品中麦芽糊精的添加量。
实施例2
前处理步骤，称取广东一方制药有限公司生产的中药提取物原料0.5094g作为待测样品和其使用的辅料麦芽糊精对照品0.5055g，分别置于25mL容量瓶中，加入超纯水定容至刻度，摇匀后置于超声水浴锅中超声25-30min，并过0.45μm滤膜，备用。然后分别称取麦芽糖和麦芽三糖标准样品39.85mg和40.40mg置于20mL容量瓶中，加超纯水定容，超声5-10min，作为标准液，然后将麦芽三糖标准液分别稀释2、4、10和20倍后得到稀释液。
测定步骤，将所述待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液分别按照下述色谱条件进行高效液相色谱分析，得到相应的色谱峰和保留时间，并绘制麦芽三糖标准曲线。待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液的峰面积和浓度如下表2所示。
色谱条件为：
高效液相色谱仪，配ELSD检测器；
色谱柱为氨基柱(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相为乙腈-水溶液(75∶25)，等度洗脱；
流速为1.0mL/min；
ELSD漂移管温度为35℃；
柱温为30℃；
进样量为20μL。
表2待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽三糖标准液及其稀释液的峰面积和浓度
其中，STD1、STD2、STD3、STD4和STD5分别为麦芽三糖标准液及其稀释2、4、10和20倍后得到的稀释液。
定性检测，检测待测样品各色谱峰的保留时间中是否同时包括麦芽糖和麦芽三糖的保留时间，即图1和图2的特征峰对应的保留时间，若同时包括，则判定待测样品中含有麦芽糊精。
定量检测，当判定待测样品中含有麦芽糊精后，利用麦芽三糖标准曲线得到麦芽三糖线性回归方程为：lnC＝a×lnA-b；其中，C为麦芽三糖标准液的浓度，单位为mg/mL；A为麦芽三糖标准液的峰面积，单位为mAU；a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距，从而得到a为0.8345，b为-7.6858，即lnC＝0.8345×lnA-7.6858，R2＝0.9999。待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量的计算公式为：麦芽三糖含量其中，C′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，单位为mg/mL；F为稀释体积倍数；m为待测样品或麦芽糊精的称样量，单位为mg；A′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积，单位为mAU；a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距，通过读取的待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积利用上述计算公式分别计算得到待测样品中麦芽三糖的含量X1为麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量X2为二者之比X1/X2为74.7％，即为待测样品中麦芽糊精的添加量。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (9)

1.一种食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
前处理步骤，配制待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液和麦芽三糖标准液，并将麦芽三糖标准液按指定倍数稀释成多份；
测定步骤，将所述待测样品液、麦芽糊精对照样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液及其稀释液分别进行高效液相色谱分析，得到相应的色谱峰和保留时间，绘制麦芽三糖标准曲线，通过比对相应的色谱峰和保留时间判定待测样品中含有麦芽糊精后，利用麦芽三糖标准曲线通过外标法分别计算待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，进而得到待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量，二者之比即为待测样品中麦芽糊精的添加量。
2.根据权利要求1所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述测定步骤中，判定待测样品中含有麦芽糊精的方法为：
检测待测样品各色谱峰的保留时间中是否同时包括麦芽糖和麦芽三糖的保留时间，若同时包括，则判定待测样品中含有麦芽糊精。
3.根据权利要求1或2所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述前处理步骤中，根据麦芽三糖标准曲线得到麦芽三糖线性回归方程为：lnC＝a×lnA-b；
其中，C为麦芽三糖标准液的浓度，单位为mg/mL；
A为麦芽三糖标准液的峰面积，单位为mAU；
a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距。
4.根据权利要求3所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述测定步骤中，待测样品和麦芽糊精对照品中麦芽三糖的含量的计算公式为：
麦芽三糖含量
其中，C′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的浓度，单位为mg/mL；
F为稀释体积倍数；
m为待测样品或麦芽糊精的称样量，单位为mg；
A′为待测样品或麦芽糊精对照品中麦芽三糖的峰面积，单位为mAU；
a为麦芽三糖标准曲线的斜率，b为麦芽三糖标准曲线的截距。
5.根据权利要求1～4任一所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述前处理步骤中，将配制的待测样品液和麦芽糊精对照样品液在定容后超声25-30min，并过0.45μm滤膜，备用。
6.根据权利要求1～5任一所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述前处理步骤中，将配制的麦芽糖标准液和麦芽三糖标准液在定容后超声5-10min。
7.根据权利要求1～6任一所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述前处理步骤中，将麦芽三糖标准溶液分别稀释2、4、10和20倍后得到稀释液。
8.根据权利要求1～7任一所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述测定步骤中，在进行高效液相色谱分析时，色谱条件为：
高效液相色谱仪，配ELSD检测器；
色谱柱为氨基柱(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相为乙腈-水溶液(75∶25)，等度洗脱；
流速为1.0mL/min；
ELSD漂移管温度为35℃；
柱温为30℃；
进样量为20μL。
9.根据权利要求1～9任一所述的食品原料中麦芽糊精添加量的检测方法，其特征在于，所述前处理步骤中，配制待测样品液、麦芽糖标准液、麦芽三糖标准液和麦芽糊精对照样品液时所用的水为超纯水。
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