CN115389666A - 一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,涉及工业产品的分析检测领域,特别是涉及化妆品类的检测领域。本发明通过对化妆品样品进行均质化处理、超声提取、离心定容,高效提取样品中的麦角硫因和依克多因;之后采用糖分析柱,将流动相中乙腈含量控制在一定比例内,对化妆品样品中的麦角硫因和依克多因进行高效液相色谱分析,可以实现待测化妆品中麦角硫因和依克多因含量的准确、快速同时测定。本发明提供的麦角硫因和依克多因的检测方法操作简单、检测时间短、分离效果好、精密度和准确度高、稳定性好、能够用于快速准确检测化妆品中的麦角硫因和依克多因,并且降低检测成本。
Description
技术领域
本发明涉及工业产品的分析检测领域,特别是涉及化妆品类的分析检测领域,更为具体地涉及一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法。
背景技术
麦角硫因(Ergothioneine)即巯基组氨酸甜菜碱(Thiolhistidine-betaine),是一种稀有的天然手性氨基酸,具有清除自由基、解毒、维持DNA的生物合成、细胞的正常生长、细胞免疫、抗辐射、美白及抗衰老等诸多功能,尤其在抗氧化和能量调节等方面起到重要的作用,是一种多功能的细胞生理保护剂。并且麦角硫因极易溶于水,不易分解,对光、热不敏感,医药、食品饮料、化妆品等领域具有广泛的用途和市场前景。
依克多因(Ectoine),又称四氢嘧啶,是一种环状氨基酸衍生物,它能在高盐、热变性、干燥、冰冻等极端环境下,被用作酶、核酸、膜及细胞的保护剂及稳定剂,具有隔离刺激源、增强皮肤免疫力、加速细胞修复、修复紫外线损伤、拯救皮肤锁水能力、抗衰抗皱等作用,因此在酶剂生产、医学、保健食品以及化妆品工业等领域具有广泛的应用前景。
由于优良的生物学特性,麦角硫因和依克多因被以单体或者两者互配的形式广泛添加于化妆品中。目前,针对化妆品中的麦角硫因和依克多因单独检测已经有所报道,但高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因还尚未见报道。因此,为了解决单独检测麦角硫因和依克多因时一个样品需要进两次样,耗时长,要处理两次数据,费时费力的技术问题,建立一种快速、准确、稳定的同时检测不同产品形态化妆品中麦角硫因和依克多因,是对麦角硫因和依克多因互配化妆品进行生产的前提和基础,可以为制定相关行业标准及国家标准提供参考,也对保护消费者利益起到重要作用。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是如何能够同时高效检测化妆品中麦角硫因和依克多的含量。
[技术方案]
本发明提供一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,在同一仪器、同一色谱柱、等度洗脱条件下,对化妆品中麦角硫因和依克多因进行定性和定量分析,以解决现有的检测方法一个样品需要进两次样,耗时长,要处理两次数据,费时费力的技术问题。
本发明所述高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,所述化妆品的形态包括:水剂状、粉状、膏状、乳液状,包括以下步骤:
(1)对化妆品进行预处理
将化妆品样品进行均质处理,称取2.0g均质处理后的化妆品样品于50mL离心管中,加入浓度为0.1%的乙腈水溶液,涡旋震荡20min,然后超声(频率40kHZ,功率50W)提取20min;再放入离心机以80000r/min的转速离心5min,吸取上清液将它转移至转入50mL容量瓶中,用所述浓度为0.1%的乙腈水溶液定容至50mL,摇匀后取1mL提取液,过0.22μm滤膜后,供高效液相色谱仪测定;
(2)使用高效液相色谱法对麦角硫因和依克多因进行检测
所述高效液相色谱法采用的色谱柱为糖分析柱,色谱柱的柱温为20-40℃,检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器,检测波长为200-260nm,优选为210nm;流动相包括流动相A和流动相B,所述流动相A是纯水,所述流动相B是色谱级乙腈,所述流动相A与所述流动相B的体积比为(30-20):(70-80),流动相流速为0.5-1.0mL/min。
在本发明的一种实施方式中,所述流动相A与所述流动相B的体积比为40:60,30:70,29:71,28:72,27:73,26:74,25:75,26:74,23:77,22:78,21:79,或20:80。优选23:77。
在本发明的一种实施方式中,所述流动相流速为0.5mL/min,0.6mL/min,0.7mL/min,0.8mL/min,0.9mL/min,或1.0mL/min。优选为1.0mL/min。
在本发明的一种实施方式中,所述色谱柱的柱温为20℃,22℃,25℃,28℃,30℃,32℃,35℃,或40℃。优选25-35℃。
在本发明的一种实施方式中,检测波长为210nm。
在本发明的一种实施方式中,所述高效液相色谱法中进样量为1-20μL,包括:1μL,2μL,5μL,8μL,10μL,12μL,15μL,或20μL。优选为15μL。
[有益效果]
本发明通过对化妆品样品进行均质化处理、超声提取、离心定容,高效提取样品中的麦角硫因和依克多因;之后采用糖分析柱,将流动相中乙腈含量控制在一定比例内,对化妆品样品中的麦角硫因和依克多因进行高效液相色谱分析,可以实现待测化妆品中麦角硫因和依克多因含量的准确、快速同时测定。
本发明的检测方法操作简单、检测时间短、分离效果好、节省溶剂、样品制备便捷,其回收率及重复性能满足日常检测的要求,适用于化妆品中麦角硫因和依克多因的高效同时检测。
附图说明
图1是麦角硫因标准品HPLC色谱图。
图2是依克多因标准品HPLC色谱图。
图3是麦角硫因和依克多因混合品HPLC色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为本发明保护的范围。
本发明提供一种高效同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,所述方法包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测,所述高效液相色谱法的色谱条件如下:色谱柱为糖分析柱,流动相包括流动相A和流动相B,所述流动相A是纯水,所述流动相B是色谱级乙腈。
在一个具体的实施方案中,所述化妆品为水剂状、膏状、乳液状。
在一个具体的实施方案中,所述糖分析柱为InfinityLab Poroshell 120EC-C18(4.6x250mm,4μm)或ZORBAX OriginalCarbohydrate(4.6x250mm,5μm)色谱柱,为美国Agilent公司生产,优选糖分析柱为ZORBAX OriginalCarbohydrate(4.6x250mm,5μm)。
在一个具体的实施方案中,所述流动相A与所述流动相B的体积比为(40-20):(60-80),例如可以为40:60,30:70,29:71,28:72,27:73,26:74,25:75,26:74,23:77,22:78,21:79或20:80,优选为23:77。
在一个具体的实施方案中,所述流动相的流速为0.5-1.0mL/min,例如可以为0.5mL/min,0.6mL/min,0.7mL/min,0.8mL/min,0.9mL/min,1.0mL/min。
优选为1.0mL/min。
在一个具体的实施方案中,所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为20-40℃,例如可以为20℃,22℃,25℃,28℃,30℃,32℃,35℃,40℃。优选为25-35℃。
在一个具体的实施方案中,所述高效液相色谱法中检测器为紫外检测器(UV检测器)或二极管阵列检测器(DAD检测器)。检测波长为200-260nm,优选为210nm。
在一个具体的实施方案中,所述高效液相色谱法中进样量为1-20μL,例如可以为1μL,2μL,5μL,8μL,10μL,12μL,15μL,20μL。优选为10μL。
在一个具体的实施方式中,所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。其中,等度洗脱是指在样品组分的分析周期中,流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。
本发明所使用的仪器和材料如下:
仪器与试剂:超高效液相色谱仪Agilent 1260Infinity II(Agilent公司),配DAD检测器;色谱柱:InfinityLab Poroshell 120EC-C18(4.6x250mm,4μm),ZORBAX OriginalCarbohydrate(4.6x 250mm,5μm),(Agilent公司);0.22μm微孔滤膜(天津博纳艾杰尔科技有限公司);乙腈(HPLC级,Fisher);麦角硫因(深圳中科欣扬生物科技有限公司);依克多因(深圳中科欣扬生物科技有限公司);超纯水机Milli-Q(Merck)。化妆品预处理用到的超声仪器是超声清洗仪,频率是40kHZ,功率是50W。
配制麦角硫因标准品溶液:准确称取麦角硫因标准品取0.020g(精确至0.0001g),置100mL量瓶中,加浓度为77%的乙腈水溶液溶解,并制成麦角硫因终浓度为200mg/L的标准品母液;吸取100μL 200mg/L标准品母液于1.5mL离心管中,加入900μL 77%乙腈水溶液充分混匀,得到20mg/L溶液,用0.2μm有机滤膜滤头过滤并导入棕色玻璃瓶中,用于进行高效液相色谱分析。
配制依克多因标准品溶液:准确称取依克多因标准品取0.020g(精确至0.0001g),置100mL量瓶中,加浓度为77%的乙腈水溶液溶解,并制成依克多因终浓度为200mg/L的标准品母液;吸取100μL 200mg/L标准品母液于1.5mL离心管中,加入900μL 77%乙腈水溶液充分混匀,得到20mg/L溶液,用0.2μm有机滤膜滤头过滤导入棕色玻璃瓶中,用于进行高效液相色谱分析。
配制麦角硫因和依克多因混合标准品溶液:分别准确称取麦角硫因和依克多因标准品取0.020g(精确至0.0001g),置100mL量瓶中,加浓度为77%的乙腈水溶液溶解,并制成麦角硫因和依克多因终浓度均为200mg/L的混合标准品母液;吸取100μL 200mg/L混合标准品母液于1.5mL离心管中,加入900μL 77%乙腈水溶液充分混匀,得到20mg/L混合标准品溶液,用0.2μm有机滤膜滤头过滤导入棕色玻璃瓶中,用于进行高效液相色谱分析。
水剂状、膏状、乳液状化妆品:根据在化妆品销售包装的可视面上标注的化妆品有效成分名称和含量,水剂状化妆品中含有麦角硫因和依克多因标分别为0.05mg/g和3mg/g;膏状化妆品中含有麦角硫因和依克多因标分别为0.03mg/g和5mg/g;乳液状化妆品中含有麦角硫因和依克多因标分别为0.02mg/g和8mg/g。
实施例1检测标准品
色谱分离条件优化
(1)检测波长的确定。将浓度为20mg/L混合标准品溶液在200-260nm波长范围内进行扫描,测得麦角硫因和依克多因在210nm处有显著特征吸收峰,因此设定检测波长为210nm。
(2)色谱柱的确定。以安捷伦InfinityLab Poroshell 120EC-C18(1号柱),ZORBAXOriginalCarbohydrate(2号柱)两款色谱柱进行验证,麦角硫因和依克多因在1号柱上出峰时间靠前且分离效果很差,而在2号柱上的保留效果和分离效果较好,因此选用2号柱用于检测麦角硫因和依克多因。
(3)流动相体积比的确定。将流动相A:B的体积比设为40:60或者30:70,得到的麦角硫因和依克多因混标色谱图中麦角硫因和依克多因色谱峰图接近,形成了峰重叠区,因此在该等度洗脱下不能满足检测的需要。将流动相A:B体积比设为20:80,得到的麦角硫因和依克多因混标色谱图中没有发现麦角硫因和依克多因色谱峰图,因此在该等度洗脱下不能满足检测的需要。将流动相A:B的体积比为23:77,得到的麦角硫因和依克多因色谱峰图能很好地分离,形成单独的色谱峰,满足检测需要。
(4)流速的确定。通过实验比较了不同流速(0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0mL/min)条件下,样品中麦角硫因和依克多因与杂质的分离效果,结果表明流速为1.0mL/min时,麦角硫因和依克多因具有较好的分离度,实际样品中其它杂质峰对麦角硫因峰基本无干扰,因此确定流速为1.0mL/min。
(5)综上,最终确立的高效液相色谱条件为:
流动相:流动相A(纯水):流动相B(色谱级乙腈)体积比=23:77。
流速:1.0mL/min。
进样量:15μL。
柱温:30℃。
检测波长:210nm。
洗脱方式:等度洗脱。
(6)麦角硫因和依克多因的线性方程及相关系数
在(5)确定的色谱条件下,将麦角硫因和依克多因混合标准品溶液依次从低浓度到高浓度进样,按所得峰面积与对应的标准工作溶液浓度绘制标准曲线。结果表明麦角硫因和依克多因浓度与峰面积具有良好的线性关系(表1)。
表1麦角硫因和依克多因的线性方程及相关系数
待测物 | 线性范围(mg/L) | 线性回归方程 | 相关系数(R<sup>2</sup>) |
麦角硫因 | 5.0-40.0 | y=27.709x-14.614 | 0.9998 |
依克多因 | 5.0-25.0 | y=17.962x-0.4418 | 0.9999 |
(7)待测样品的检测结果计算和表述
待测样品中麦角硫因或依克多因的含量用如下的公式计算:
式中:
X—待测样品中麦角硫因或依克多因的含量(mg/g);
M—待测样品取样量(g);
V1—待测样品稀释体积(mL);
V2—待测样品定容体积(mL);
V3—吸取待测样品体积(mL);
C—从标准曲线上计算试样品中麦角硫因或依克多因的浓度(mg/L);
(8)检测限、定量限确定
从麦角硫因和依克多因混合标准溶液(S/N<20的浓度)所得色谱图,以信噪比为3︰1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限,得到麦角硫因和依克多因的检测限为0.005mg/g和0.0014mg/g;以实际样品测量时精密度和准确度都达到要求的最小浓度为定量限(LOQ),得到麦角硫因和依克多因的定量限为0.016mg/g和0.005mg/g。
(9)仪器精密度试验
取麦角硫因和依克多因混合标准品溶液(20mg/L),平行制备6份,在上述(5)记载的色谱条件下进样,根据标准曲线计算称量麦角硫因和依克多因含量。结果见表2,由表2可知,计算出麦角硫因和依克多因含量的RSD分别为0.68%、0.25%,都小于5%,此结果表明仪器精密度良好。
表2仪器精密度试验
实施例2检测化妆品
(1)对化妆品进行预处理
将水剂状、膏状或乳液状的化妆品样品进行均质化处理,准确称取2.0g均质处理后的化妆品样品于50mL离心管中,加入0.1%乙腈溶液,涡旋震荡20min,超声提取20min;再放入离心机以80000r/min的转速离心5min,吸取上清液将它转移至转入50mL容量瓶中,用所述0.1%乙腈溶液定容至50mL,摇匀后取1mL提取液,过0.22μm滤膜后,供超高效液相色谱仪测定。
(2)使用高效液相色谱法对麦角硫因和依克多因进行检测
流动相:流动相A(纯水):流动相B(色谱级乙腈)体积比=23:77。
流速:1.0mL/min。
进样量:15μL。
柱温:30℃。
检测波长:210nm。
洗脱方式:等度洗脱。
(3)将步骤(2)的检测数据代入实施例1表1的方程,计算得到麦角硫因和依克多因的含量。
实施例3化妆品加标回收试验
准确度(加标回收试验)
选取已知麦角硫因和依克多因含量的水剂状、膏状、乳液状的化妆品样品,每一样品分别添加3种质量浓度的麦角硫因和依克多因,每种质量浓度各做6个平行样,同时测定对照样品(除了原本含有的麦角硫因和依克多因,不额外加麦角硫因和依克多因的化妆品)中麦角硫因和依克多因含量的含量,利用差减法确定加入麦角硫因和依克多因含量的测定量,与加入量比较计算麦角硫因和依克多因含量的添加回收率。按照含量50%、100%、150%做加标回收,每个加标样品做6个平行,详细结果见表3。由表3中结果可见,麦角硫因和依克多因在水剂状、膏状、乳液状的化妆品样品中的加标回收率均在80.0~120.0%之间,证明该方法的准确度较高,可满足分析要求。
表3准确度试验结果
实施例4化妆品检测的重复性试验
参照实施例2进行化妆品样品中麦角硫因和依克多因含量测定的重复性实验。结果见表4。由表4可知,水剂状、膏状、乳液状的化妆品样品中麦角硫因和依克多因含量的RSD都小于5%,表明本方法重复性良好。
表4重复性试验
由此可见,在使用本发明的检测方法时,进一次样同时检测出麦角硫因和依克多因的含量,大大减少了检测时间,实现了定量指标翻倍,提高工作效率节省检测费用的有益效果。
以上实施例为本发明的部分实施方式,并不限制于本发明。对本领域技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下做出的若干改进和变型,也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.同时检测化妆品中麦角硫因和依克多因的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)对化妆品进行预处理
将化妆品样品进行均质处理,然后加入乙腈水溶液,涡旋震荡后用超声提取麦角硫因和依克多因;提取结束后离心,吸取上清液用乙腈水溶液定容,过微滤膜后,用于进行高效液相色谱仪测定;
(2)使用高效液相色谱法对麦角硫因和依克多因进行检测
所述高效液相色谱法采用的色谱柱为糖分析柱,色谱柱的柱温为20-40℃,检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器,检测波长为200-260nm,优选为210nm;流动相包括流动相A和流动相B,所述流动相A是纯水,所述流动相B是色谱级乙腈,所述流动相A与所述流动相B的体积比为(30-20):(70-80),流动相流速为0.5-1.0mL/min。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,将化妆品样品进行均质处理,称取2.0g均质处理后的化妆品样品于50mL离心管中,加入浓度为0.1%的乙腈水溶液,涡旋震荡20min,然后超声辅助提取20min;再放入离心机以80000r/min的转速离心5min,吸取上清液将它转移至转入50mL容量瓶中,用所述浓度为0.1%的乙腈水溶液定容至50mL,摇匀后取1mL提取液,过0.22μm滤膜后,供高效液相色谱仪测定。
4.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。
5.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,所述流动相A与所述流动相B的体积比为23:77。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相流速为1.0mL/min。
7.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,所述色谱柱的柱温为25-35℃。
8.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,检测波长为210nm。
9.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,进样量为15μL。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述化妆品的形态包括:水剂状、膏状、乳液状。
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