CN103063769A - 一种甲钴胺胶囊的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甲钴胺胶囊的质量检测方法，该方法采用高效液相色谱法检测甲钴胺胶囊。本发明通过大量实验优选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法，稳定性和重复性好、分析效率高、分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测甲钴铵，从而可以客观、全面、准确的评价甲钴胺胶囊的质量，对控制甲钴胺胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，具体涉及甲钴胺胶囊的质量控制方法。
背景技术
扬子江药业集团南京海陵药业有限公司生产的甲钴胺注射液产品，化学名称为：Coα-[α-(5,6)-二甲基苯并咪唑基]-Coβ-甲钴酰胺，商品名为奇信，临床广泛用于多发性神经炎、三叉神经痛；脑意外事件的后遗症、脑外伤、血管硬化引起的神经障碍；失眠、多梦、烦躁、易怒；酒精性神经炎；自律神经障碍等。甲钴胺化学性质不稳定，在加热或强光照射条件下，化学结构会发生变化会生成其它杂质，但是现有的检测方法，甲钴胺易分解，分离效果不好，检测灵敏度不高，稳定性很差，检测结果不准确。因此为了控制好甲钴胺胶囊制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确检测甲钴胺胶囊制剂中有效成分甲钴胺胶囊的检测方法。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种分离效果好，检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价甲钴胺胶囊的质量，对控制甲钴胺胶囊剂的质量和保证疗效具有重要意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明所提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法，包括以下步骤：
(1)甲钴胺标准品溶液的制备：避光条件下，取甲钴胺标准品，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释成浓度为20μg/ml甲钴胺标准品的溶液，备用；
(2)甲钴胺胶囊样品溶液的制备：取甲钴胺胶囊内容物，研细，精密称取甲钴胺1mg，置50ml棕色量瓶中，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，备用；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的甲钴胺标准品溶液注入高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为0.8～1.0ml/min，检测波长为267~270nm，柱温为30℃；
(4)甲钴胺胶囊样品中甲钴胺的含量测定：精密吸取步骤(2)甲钴胺胶囊样品溶液20μl，注入高效液相色谱仪分析20分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为0.8～1.0ml/min，检测波长为267~270nm，柱温为30℃；并按步骤(3)标准曲线测量甲钴胺胶囊中甲钴胺的含量。
作为优选方案，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法，步骤(3)中以甲钴胺胶囊的峰面积为纵坐标，浓度μg/ml为横坐标，绘制标准曲线为：Y＝21.88X+2.88，r=0.99998。
作为优选方案，本发明所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，步骤(3)和(4)所述的流速为1.0ml/min，检测波长为267nm。
作为优选方案，以上所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，步骤(3)和(4)所述的高效液相色谱仪为安捷伦1200。
作为优选方案，本发明所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，步骤(3)和(4)所述的反相C18柱为安捷伦Zorbax Extend反相C18柱。
甲钴胺胶囊在加热或强光照射条件下，化学结构会发生变化会生成其它杂质，为了严格控制好甲钴胺胶囊的质量，制定检测甲钴胺胶囊含量的方法，本发明经过大量实验对流动相组成、流动相的洗脱程序、流速、检测波长及色谱柱进行筛选。
1、本发明针对甲钴胺成分，通过全波长扫描和3D等高线观察，确定甲钴胺在267nm处有较大的吸收，灵敏度高，因此本发明采用267nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到甲钴胺化合物。
2、甲钴铵容易电离成离子状态，导致分离和洗脱效果差，本发明根据甲钴铵化学性质，对流动相的组成进行了大量筛选，确定采用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液作为流动相组成，本发明加入pH7.0磷酸三乙胺缓冲液，从而可以保证在色谱柱上达到很好的分离效果，不会出现峰重叠或拖尾现象，而且能保证在色谱柱上有很好的分离度。
3、同时本发明还对流动相的流动速度进行了考察，如流速过快，分离度不够理想，因此本发明分别考察了1.5mL/min、1mL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min不同流速，实验结果表明，当流动相的流速为1mL/min时，甲钴铵的峰形最好、分离度最好，理论塔板数最高，因此本发明采用流动相的流速为1mL/min。
4、同时本发明对色谱柱的柱温进行了筛选，考察了色谱柱在20℃、25℃、28℃、30℃和35℃条件下化合物的分离效果，实验结果表明，色谱柱在30℃条件下分离效果最好，分离重复性和稳定性最好。因此本发明采用色谱柱的柱温为30℃。
5、同时本发明对色谱柱也进行了筛选，分别考察了安捷伦(Agilent)反相C18、反相C8柱，Waters反相C18、反相C8柱，实验结果表明，以安捷伦(Agilent)反相C18柱的分离效果最好。因此，本发明以安捷伦(Agilent)反相C18柱作为分析柱。
有益效果：本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法和现有技术相比具有以下优点：
本发明根据甲钴胺胶囊注射剂中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法可以灵敏、准确的检测活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法中灵敏度低、准确度低、稳定性差等诸多缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好、对各分析成分的分离度好，可定性、定量检测分析各化合物。因此，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法可以客观、全面、准确的评价甲钴胺胶囊的质量，对控制甲钴胺胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
附图说明
图1为甲钴胺标准品的高效液相色谱检测分析图。
图2为甲钴胺胶囊样品的高效液相色谱检测分析图。
具体实施方式：
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施列1甲钴胺胶囊的质量检测方法的方法学考察
1.1稳定性实验
取甲钴胺胶囊样品适量，研细，精密称取甲钴胺1mg，置50ml棕色量瓶中，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，放置备用；分别在0，10，20，30，40，50分钟测定甲钴胺含量，计算峰面积（S）的相对标准偏差。具体实验结果如表1所示。
表1稳定性试验结果
以上稳定性实验结果表明，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法，稳定性好。
1.2重复性实验
取批号12081501甲钴胺胶囊样品，取甲钴胺胶囊样品适量，研细，精密称取6份甲钴胺1mg，分别置50ml棕色量瓶中，分别用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，放置备用；分别注入高效液相色谱仪分析20分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温为30℃；并按以上标准曲线：Y＝21.88X+2.88，r=0.99998，测量6份甲钴胺胶囊样品中甲钴胺的含量。具体实验结果如表2所示：
表2重复性试验结果
以上重复性实验结果表明，本发明提供的甲钴胺胶囊的检测方法的重复性好。
1.3检测限
本发明按以上1.1方法分析，检测甲钴铵最低检测浓度为5ug/ml，方法灵敏度高，结果准确。
实施列2甲钴胺胶囊的质量检测方法，包括以下步骤：
(1)甲钴胺标准品溶液的制备：避光条件下，取甲钴胺标准品，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释成浓度为20μg/ml甲钴胺标准品的溶液，备用；色谱分析图如图1所示。
(2)甲钴胺胶囊样品溶液的制备：分别精密取扬子江药业集团南京海陵药业有限公司生产的甲钴胺胶囊5批（121081501、121081601、121081801、121081901、121082001）内容物，分别研细，然后分别精密称取5批甲钴胺各1mg，分别置50ml棕色量瓶中，分别用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，备用；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的甲钴胺标准品溶液注入高效液相色谱仪制备标准曲线Y＝21.88X+2.88，r=0.99998。色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温为30℃；
(4)甲钴胺胶囊样品中甲钴胺的含量测定：精密吸取步骤(2)制备得到的5批甲钴胺胶囊样品溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪分析20分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温为30℃；并按步骤(3)标准曲线测量5批甲钴胺胶囊中甲钴胺的含量，色谱分析图如图2所示。具体实验结果如表3所示。
通过以上分析，有效成分甲钴胺胶囊在本发明提供的分析条件下，能够很好的达到分离，峰形好，检测灵敏度高，化合物的标准曲线的线性关系良好，r值均达到0.9999以上。因此本发明提供的分析方法，准确可靠，可以灵敏准确的定性、定量检测甲钴胺胶囊，为甲钴胺胶囊注射液的质量控制提供科学依据。
表3甲钴胺胶囊中甲钴胺的检测结果
由表1至表3的实验结果表明，本发明提供的甲钴胺胶囊的检测方法，灵敏度高，可以检测到5批甲钴胺胶囊注射剂中甲钴胺胶囊化合物，且具有较好的分离度，从保留时间看出，各化合物和对照品具有很好的匹配度；相比现有技术，本发明提供的甲钴胺胶囊的质量检测方法稳定性和重复性好，可以客观、全面、准确的评价甲钴胺胶囊的质量，对控制甲钴胺胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种甲钴胺胶囊的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 甲钴胺标准品溶液的制备：避光条件下，取甲钴胺标准品，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释成浓度为20μg/ml甲钴胺标准品的溶液，备用；
(2)甲钴胺胶囊样品溶液的制备：取甲钴胺胶囊内容物，研细，精密称取甲钴胺1mg，置50ml棕色量瓶中，用体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，备用；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的甲钴胺标准品溶液注入高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为0.8~1.0ml/min，检测波长为267~270nm，柱温为30℃；
(4)甲钴胺胶囊样品中甲钴胺的含量测定：精密吸取步骤(2)甲钴胺胶囊样品溶液20μl，注入高效液相色谱仪分析20分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为25：85：400的甲醇-乙腈-pH7.0磷酸三乙胺缓冲液；流速为0.8~1.0ml/min，检测波长为267~270nm，柱温为30℃；并按步骤(3)标准曲线测量甲钴胺胶囊中甲钴胺的含量。
2.根据权利要求1所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中以甲钴胺胶囊的峰面积为纵坐标，浓度μg/ml为横坐标绘制标准曲线为：Y＝21.88X+2.88，r=0.99998。
3.根据权利要求1所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的流速为1.0ml/min，检测波长为267nm。
4.根据权利要求1所述的甲钴胺胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的高效液相色谱仪为安捷伦1200。
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