CN106033079A - 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法 - Google Patents
甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于药物分析领域，具体涉及甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法。本发明为了提供一种操作简便，迅速、精确的检测方法，用于起始物料F中的有关物质咪唑，具体是采用液相色谱检测，控制关键HPLC检测条件：流动相乙腈‑水比例为10‑30:90‑100，酰胺键合硅胶色谱柱，检测波长200‑230nm。通过控制关键检测参数实现简便，迅速、精确检测的目的，本发明方法操作简便；测定结果准确可靠；专属性强；起始物料F保留时间在3～4分钟，咪唑保留时间在6～7分钟，检测时间较短，为检测产品中有关物质、控制产品质量、保证药品安全性提供了一种全新的选择。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法。
背景技术
甲磺酸达比加群酯的起始物料F的名称为3-[(3-氨基-4-甲基氨基苯甲酰)吡啶-2-基氨基]丙酸乙酯，结构如下：
甲磺酸达比加群酯起始物料F中的已知杂质情况分析如下表：
杂质情况分析
上述有关物质检查方法参考起始物料供应商内控标准，可以测定上述已知杂质中的3-(吡啶-2-基氨基)丙酸乙酯、4-(甲氨基)-3-硝基苯甲酸、3-[(3-氨基-4-甲基氨基苯甲酰)吡啶-2-基氨基]丙酸、3-[(3-硝基-4-甲基氨基苯甲酰)吡啶-2-基氨基]丙酸乙酯，但咪唑在该有关物质测定条件下不能检出。发明人文献检索后也未发现记载有咪唑检测方法的相关报道。
咪唑作为反应物料，文献报道甚少，为更好的控制起始物料F的质量，发明人提供了一种能有效检测起始物料F中有关物质咪唑的测定方法。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种操作简便，迅速、精确的检测方法，用于检测甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑，为甲磺酸达比加群酯起始物料F中的反应物料。
本发明检测方法采用液相色谱检测咪唑，HPLC检测条件如下：
色谱相：以酰胺键合硅胶为填充剂；优选采用XAmide色谱柱；
流动相：乙腈-水体积比：10-30:90-100(优选20:80)；
流速：0.8-1.2ml/min(优选1.0ml/min)；
柱温：30-40℃(优选35℃)；
检测波长：200-230nm(优选210nm)；
理论板数按咪唑的峰计算应不低于2000；
实验材料的处理：
(1)供试品溶液的制备：取起始物料F适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含起始物料F0.5-2mg(优选1mg/ml)的溶液，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：
取咪唑适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.5-5μg(优选1μg/ml)的溶液，作为对照品溶液。
该检测方法的优点是：操作简便；测定结果准确可靠；专属性更强；起始物料F保留时间在3.05分钟，咪唑保留时间在6.71分钟，检测时间较短。
本发明有关物质检测方法的有益效果是操作简便，检测迅速，专属性更强，测定结果准确可靠；为检测杂质、控制产品质量、保证产品的安全性提供了一种全新的选择。
附图说明
图1溶剂HPLC图。
图2咪唑HPLC图。
图3起始物料F HPLC图。
图4咪唑+起始物料F混合样HPLC图。
图5咪唑紫外扫描图。
图6起始物料F紫外扫描图。
图7咪唑线性关系图
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述，进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
由于咪唑的分析检测方法文献报道甚少，故发明人根据该甲磺酸达比加群酯起始物料F各组分的物理、化学性质，认为分析检测咪唑可采用色谱法。预试中采用十八烷基键合硅胶作为固定相，水相采用水、缓冲盐进行分析，结果咪唑在此条件下无保留，与溶剂峰保留时间一致。虽然加入离子对试剂后增强了保留，但峰型较差，检测灵敏度不高。然后又选用酰胺键合硅胶为固定相，适当调整流动相比例后，峰型较好，空白无干扰，验证结果表明采用酰胺键合硅胶检测可行、科学、可靠，能有效的控制甲磺酸达比加群酯起始物料F的有关物质。具体试验研究以下：
实验材料的处理：
(1)供试品溶液的制备：取起始物料F适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含起始物料F0.5-2mg(优选1mg/ml)的溶液，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：
取咪唑适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.5-5μg(优选1μg/ml)的溶液，作为对照品溶液。
实施例1
咪唑的检测方法采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：岛津C18(250mm×4.6mm 5μm)
流动相A：水
流动相B：乙腈
等度洗脱：流动相A：流动相B(90:10)；运行50min，流速1.0mL/min，柱温：35℃，进样体积：10μL，检测波长：210nm。
结果：主峰无保留，峰型较差，空白干扰检测，再优化。
实施例2
咪唑的检测方法采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：岛津C18(250mm×4.6mm 5μm)
流动相A：0.02mol/L磷酸二氢钾(磷酸调PH4.0)
流动相B：乙腈
等度洗脱：流动相A：流动相B(90:10)；运行50min，流速1.0mL/min，柱温：35℃，进样体积：10μL，检测波长：210nm。
结果：主峰无保留，峰型较差，空白干扰检测，再优化。
实施例3
咪唑的检测方法采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：岛津C18(250mm×4.6mm 5μm)
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾(含0.1％庚烷磺酸钠，磷酸调PH3.5)
流动相B：乙腈
等度洗脱：流动相A：流动相B(95:5)；运行40min，流速1.0mL/min，柱温：35℃，进样体积：10μL，检测波长：210nm。
结果：峰型较差，空白干扰检测，再优化。
实施例4
本发明咪唑的检测方法采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：XAmide色谱柱(250mm×4.6mm 5μm)
流动相：A：水
B：乙腈
等度洗脱：流动相A：流动相B(20:80)，运行15min。流速1.0mL/min，柱温：35℃，进样体积：10μL，检测波长：210nm。
结果：峰型较好，空白无干扰，该方法操作简便，迅速、精确，拟作为咪唑的检测方法。
一、以下为本发明起始物料F中有关物质咪唑检测方法的检测条件筛选实验。
色谱条件选择
由于咪唑在常规反相HPLC测定条件下未能检出，且咪唑易溶于水，检测条件不断筛选后最终选用乙腈-水作为流动相，XAmide色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)作为色谱柱，流速：1.0ml/min；当乙腈-水比例为(20:80)时，咪唑杂质对照和主成分之间均达到良好的分离。暂定此方法作为起始物料F中有关物质咪唑检测方法。
二、以下为本发明检测方法的色谱条件确定后，验证其测定效果的实验。
1.本发明检测方法的专属性研究
对照品溶液：取咪唑适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液：取起始物料F适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含起始物料F1mg的溶液，作为供试品溶液；
系统适用性溶液：取对照品溶液及供试品溶液各1ml，混合制成系统适用性溶液。
分别取流动相、对照品溶液、供试品溶液、系统适用性溶液各10μl，注入液相色谱仪，结果见图1～图4，流动相的溶剂峰均不干扰咪唑及起始物料F的峰，且咪唑及起始物料F的峰完全分离。说明本发明检测方法的专属性较强。
2.测定波长的选择
取起始物料F、咪唑对照品各适量，分别用稀释溶剂溶解并稀释制成适宜浓度的供试品溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IVA)在200～400nm范围内扫描，结果见图5咪唑紫外扫描图、图6起始物料F紫外扫描图，其结果见表1。
表1 波长选择结果表
| 样品名 | 峰波长nm |
| 起始物料F | 220 |
| 咪唑 | 210 |
结果，起始原料起始物料F在220nm处有最大吸收，而杂质在210波长处有较强的吸收，根据检测杂质含量就高不就低的原则，选择检测波长为210nm。
3.进样量的确定
取咪唑制成浓度为0.1μg/ml的溶液，进样10μl，进样量约1ng，即起始物料F样品中的咪唑含量大于0.1％可有效检出。
4.线性试验
精密称取杂质咪唑对照品适量，用稀释剂制成一定浓度的对照溶液，进样分析，记录色谱图，线形图见图7，结果见表2。
表2 咪唑线性试验结果
5.检测限定量限
测定线性试验项下样品稀释后再检测，取基线噪声3倍值的量作为检测限。取基线噪声10倍值的量作为定量限。结果见表3。
表3 定量限及检测限
| 溶剂 | 定量限(μg/ml) | 检测限(μg/ml) |
| 咪唑 | 0.257 | 0.082 |
6.进样精密度试验
取杂质对照液，连续进样测定6次，记录峰面积，考察进样精密度，其结果见表4。
表4 进样精密度试验结果
结果显示进样精密度良好。
7.重复性试验
取xx批样品，按拟定的方法分别平行制备6份供试品溶液，同时制备相对应的咪唑对照溶液。照上述确定的有关物质检测色谱条件，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，其有关物质检查重复性试验结果见表5。
表5 有关物质检查重复性试验结果
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 咪唑 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
8.样品测定回收率
平行称取起始物料F样品9份，各约10.0mg，每3份分别按50％、100％、150％加入杂质咪唑对照液，作为供试品溶液，进样测定，记录色谱图，按外标法计算结果。结果见表6。
表6 咪唑回收率
9.小试样品及中试样品的检查
样品(批号：20140101、20140102、20140103)，按照本发明拟定的检测方法进行检查，其结果见表7。
表7 起始物料F中咪唑测定结果表
| 批号 | 20140101 | 20140102 | 20140103 |
| 咪唑 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
综上，采用本发明检测方法测定起始物料F中的咪唑，测定结果准确可靠，专属性强，起始物料F保留时间在3～4分钟，咪唑保留时间在6～7分钟，检测时间较短，为检测产品中有关物质、控制产品质量、保证药品安全性提供了一种全新的选择。
Claims (6)
1.甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法，其特征在于：咪唑采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：以酰胺键合硅胶为填充剂；
流动相：乙腈-水体积比：10-30:90-100；
流速：0.8-1.2ml/min；
柱温：30-40℃；
检测波长：200-230nm；
理论板数按咪唑的峰计算应不低于2000；
实验材料的处理：
(1)供试品溶液的制备：取起始物料F适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含起始物料F 0.5-2mg的溶液，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：
取咪唑适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.5-5μg的溶液，作为对照品溶液。
2.根据权利要求1所述的甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法，其特征在于：HPLC检测条件中色谱柱为XAmide色谱柱。
3.根据权利要求1所述的甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法法，其特征在于：HPLC检测条件中流动相乙腈-水体积比：20:80。
4.根据权利要求1所述的甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法，其特征在于：HPLC检测条件中所述的流速为1.0ml/min；柱温为35℃。
5.根据权利要求1所述的甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法，其特征在于：HPLC检测条件中所述的检测波长为210nm。
6.根据权利要求1所述的甲磺酸达比加群酯起始物料F中有关物质咪唑的检测方法，其特征在于：供试品溶液的制备中加流动相溶解，供试品溶液浓度为1mg/ml，咪唑对照品加流动相溶解并稀释，其浓度为1μg/ml。
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