CN105784854A - 一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 - Google Patents
一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105784854A CN105784854A CN201410807314.2A CN201410807314A CN105784854A CN 105784854 A CN105784854 A CN 105784854A CN 201410807314 A CN201410807314 A CN 201410807314A CN 105784854 A CN105784854 A CN 105784854A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- solution
- mobile phase
- cholelithiasis
- detect
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种牛磺熊去氧胆酸中有关物质的检测方法，特别是涉及一种应用HPLC-ELSD法同时测定牛磺熊去氧胆酸中8种有关物质的方法。该方法采用辛烷基键合硅胶色谱柱，蒸发光散射检测器，采用流动相A和B混合等度或梯度洗脱，其中流动相A：2.5～50mmol/L铵盐缓冲液， 流动相B：甲醇或乙腈。本方法简便、快速、准确、可靠，色谱峰分离度良好，可同时定性或定量检测牛磺熊去氧胆酸中的8种有关物质。
Description
技术领域
本发明涉及用于一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD），属于化学药物分析技术领域。
背景技术
牛磺熊去氧胆酸（tauroursodeoxycholicacid,TUDCA）的化学名为2-[[(3α,5β,7β)-3,7-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]氨基]乙烷磺酸，是由熊去氧胆酸的羧基与牛磺酸的氨基之间缩合而成的结合型胆汁酸，较熊去氧胆酸多一个牛磺酸基团，极性大为增加，溶解胆固醇能力也大大提高。牛磺熊去氧胆酸可增加胆汁中胆汁酸的浓度、抑制胆固醇结晶的形成、促进胆固醇结石的溶解，对降低保胆取石复发率、提高治愈率有十分重要的意义。
牛磺熊去氧胆酸在合成和贮存过程中，可能会产生或引入牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）、牛磺胆石酸、熊去氧胆酸（UDCA）、胆酸、胆石酸、鹅去氧胆酸（CDCA）、7-酮基胆石酸、牛磺酸、牛磺胆酸以及其他相关杂质。
目前国内外药典均未收载牛磺熊去氧胆酸。张晓艳等（华西药学杂志.2012,27(5)：585~587）公开了一种测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中有关物质的HPLC测定方法和测定条件，该方法和条件采用紫外检测器及等度洗脱，只对产品中牛磺鹅去氧胆酸进行检测；孙文霞等（药物分析杂质.2007,27(04)：590~592）公开了一种测定熊去氧胆酸中有关物质的HPLC测定方法和测定条件，采用紫外检测器和等度洗脱测定胆酸、胆石酸、鹅去氧胆酸、7-酮基胆石酸这4种杂质的含量。胆酸类物质紫外吸收弱，或仅有末端吸收，采用紫外检测器进行检测时需采用低波长进行检测，但多种有机溶剂在190nm~220nm波长范围内有吸收（常用有机溶剂的截止波长：甲醇205nm，乙腈190nm，异丙醇205nm），对待测组分存在干扰，存在基线波动、噪音大、灵敏度低、线性差、准确度不高等问题。而且现有文献报道最多也只检测了4种杂质，不能很好的控制牛磺熊去氧胆酸的质量。牛磺熊去氧胆酸的8种已知杂质中即有极性相差较大的组分，又有极性接近的组分，通常会采用多个色谱系统来进行检测，特别是牛磺-7-酮基胆石酸与牛磺鹅去氧胆酸、胆酸与熊去氧胆酸，7-酮基胆石酸与鹅去氧胆酸极性接近，很难有效分离；牛磺熊去氧胆酸与胆酸、胆石酸极性相差较大，在同一色谱条件下，组分间保留时间相差较多，强保留组分的峰型将随保留时间延长而展宽，使其检测灵敏度降低，甚至有些组分无法洗脱下来，采用一个色谱条件很难同时快速检测牛磺熊去氧胆酸的8种已知杂质和其他未知杂质。
为了更快速、准确的检测牛磺熊去氧胆酸原料及其制剂中的杂质，发明人提供了一种新的可定性和定量测定牛磺熊去氧胆酸中杂质含量的方法，以实现简便、快速、精确控制产品质量的目的。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种用于检测牛磺熊去氧胆酸中8种已知杂质进行准确定性和定量的方法，用于牛磺熊去氧胆酸的质量控制，采用高效液相色谱检测，检测条件如下：
本发明的检测方法，所用的色谱条件如下：
固定相：以辛烷基键合硅胶为填充剂；
柱温为30~40℃；
流动相A：2.5～50mmol/L铵盐缓冲液（调节pH至2.5~3.5）；
流动相B：甲醇或乙腈
洗脱条件（1）或（2）：
（1）、采用流动相A与流动相B混合等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为56～75∶25～44；
（2）、采用梯度洗脱，条件如下：
总流速：0.7~1.2ml/min；
蒸发光散射检测器：漂移管温度为95~115℃，载气流量为2.5~3.5L/min；
进样量：2～50μl；
其中，铵盐缓冲液选自甲酸铵、乙酸铵、氨水、三乙胺或其混合物；
其中，pH调节剂选自甲酸、乙酸、三氟乙酸或其混合物。
溶液的配制：
1）、系统适用性溶液：取牛磺熊去氧胆酸、牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸对照品适量，用稀释剂配制成适宜浓度的混合溶液，作为系统适用性溶液。
2）、供试品溶液：取牛磺熊去氧胆酸适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸5.0～50mg的溶液，即得。
3）、对照品溶液：精密称取牛磺熊去氧胆酸对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释，制成2.5μg/ml～250μg/ml的系列浓度的线性对照品溶液；或分别精密称取牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成2.5μg/ml～250μg/ml的系列浓度的杂质线性对照品溶液。
其中，稀释剂为乙腈和水混合溶液，其中乙腈：水的体积比为35～55∶45～65。
结果计算：计算牛磺熊去氧胆酸对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数的线性回归方程，用该方程计算供试品中各杂质的含量；或用牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸杂质对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数的线性回归方程，分别计算供试品中各杂质的含量。
发明人经过大量试验研究，开发出了本发明提供了的检测方法，优点在于：
1）操作简便易行，方法可控，灵敏度高、专属性和准确度好，可同时检测牛磺熊去氧胆酸及其8种已知杂质和其他未知杂质，为控制产品质量提供了一种全新的方法，从而提高产品的质量可控性；
2）采用HPLC-ELSD方法检测，可以避免牛磺熊去氧胆酸及其8种已知杂质和其他未知杂质紫外吸收弱、紫外响应差异大的问题，牛磺熊去氧胆酸及其8种已知杂质在本方法中，响应差异不大，因此除可以采用各杂质对照品计算各杂质含量，也可采用牛磺熊去氧胆酸计算各杂质的含量；在所选缓冲盐及梯度条件下，流动相比例的变化造成的基线的噪音波动较小，可满足各杂质测定的灵敏度要求；
3）采用流动相A与流动相B按所述比例混合后进行等度洗脱的方式，可以将主成分与8种杂质完全分离；而采用分段梯度洗脱，可在更短的时间（30min内）完成主成分与8种杂质的分离，提高检测效率；
4）通过梯度洗脱，有效降低了色谱峰展宽行为，可获得较尖锐及对称的色谱峰，使各杂质检测的灵敏度提高，进而保证结果准确可靠。
附图说明
图1为系统适用性溶液色谱图（实施例5）
图2为供试品溶液色谱图（实施例5）
图3为稀释剂色谱图（实施例5）
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述说明，但不限制本发明。
实施例1-4为本发明牛磺熊去氧胆酸中8种杂质检测方法及含量测定方法检测条件的筛选试验。
实施例1色谱柱的确定
初定流动相：流动相A-流动相B；
流动相A为50mmol/L氨水（用甲酸调节pH至3.5），流动相B为乙腈；
柱温为40℃；
流速为1.0ml/min；
蒸发光散射检测器，漂移管温度为115℃，载气流速为2.5L/min；
供试品溶液：取牛磺熊去氧胆酸原料适量，配制为约10mg/ml的溶液，即得；
系统适用性溶液：取牛磺熊去氧胆酸、牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸对照品适量，配制为含各组分约250μg/ml的混合溶液，即得；
精密量取供试品溶液10μl，分别于不同色谱柱条件下，注入高效液相色谱仪，流动相A-流动相B（65∶35），记录色谱图，结果见表1：
表1色谱柱选择结果
上述结果表明：牛磺熊去氧胆酸及其相邻杂质在辛烷基键合硅胶柱上能较好分离。
实施例2流动相的选择
分别精密量取牛磺熊去氧胆酸对照品溶液1（2.5μg/ml）或牛磺熊去氧胆酸对照品溶液2（5.0μg/ml）及系统适用性溶液，于不同流动相条件下，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。考察不同缓冲盐种类、浓度及不同pH调节剂对组分分离（系统适用性溶液出峰个数）及检测灵敏度的影响，结果见表2：
表2缓冲盐选择结果
柱：色谱柱编号同表1。
上述结果表明：采用2.5mmol/L?50mmol/L铵盐缓冲液，用甲酸、乙酸或三氟乙酸调节pH值至2.5?3.5范围内，可获得较高灵敏度，可保证杂质定量测定的准确度。
在等度洗脱条件下，虽然检测时间较长（80min以上），但也可将牛磺熊去氧胆酸及8种已知杂质完全洗脱出来，且随洗脱时间延长，峰型展宽变钝，检测灵敏度较低，因此发明人尝试采用梯度洗脱方式，并对各时间段流动相比例升高速率进行调整，比较对照品溶液主峰的信噪比及系统适用性溶液的出峰个数，使主成分及各杂质峰能有效分离，并具有适宜保留时间，采用表2中条件2、5、6、8进行梯度洗脱，梯度调整结果见表3-4：
表3梯度洗脱条件1
表4梯度洗脱条件2
分别调整流动相B起始比例、阶段1（3?12min）及阶段2（12?24min）流动相比例变化速率，结果见表5：
表5色谱条件调整考察结果
结果：流动相B起始比例在25～35%范围内微调，3～12min及12～24min内流动相B升高速率分别在2.0%/min～3.0%/min范围内微调，总流速在0.7ml/min～1.2ml/min范围内调整，柱温在30～40℃范围内调整，牛磺熊去氧胆酸与8种已知杂质均可有效分离。
如仅需达到定性检测的目的，采用流动相A与流动相B以体积比56～75∶25～44混合洗脱即可。
如需满足短时间内多次洗脱的目的，缩短进针时间间隔，则优选采用梯度洗脱方式，条件见表6：
表6梯度洗脱优选条件
实施例3蒸发光散射检测器条件的确定
色谱条件：
色谱柱：同实施例1中色谱柱3；
流动相：同实施例2中缓冲盐6；
梯度洗脱条件：
流速：1.0ml/min；
进样量为10μl；
考察蒸发光散射检测器条件，漂移管温度在70～115℃范围内，载气流速在2.5～4.0L/min范围内的影响，分别取10μg/ml牛磺熊去氧胆酸对照品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，考察不同条件下牛磺熊去氧胆酸响应的灵敏度，其他色谱条件如上，结果见表7。
表7蒸发光散射检测器条件对灵敏度的影响
结果：漂移管温度在95~115℃范围内调整，载气流量在2.8~3.5L/min范围内调整，对牛磺熊去氧胆酸的检测灵敏度无限制影响，均可满足测定要求。漂移管温度优选范围为100～110℃，载气流量优选范围为3.0～3.2L/min。
实施例4定量方法的确定
色谱条件：同实施例3；
蒸发光检测器：同实施例3中条件3；
取牛磺熊去氧胆酸、牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸对照品适量，分别配制为约含2.5μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、250μg/ml浓度水平的对照品线性溶液；
供试品溶液：同实施例1中方法配制；
取各对照品线性溶液及供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
定量方法1：以各杂质线性对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数计算线性回归方程，并用所得方程计算供试品中相应杂质的含量；
定量方法2：以牛磺熊去氧胆酸对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数计算线性回归方程，并用该方程计算供试品中各杂质的含量；
比较两种方法算得的杂质含量，结果见表8。
表8定量方法比较
结果：用牛磺熊去氧胆酸对照品所得线性方程计算各待测杂质含量与用各待测杂质对照品所得线性方程算得结果无显著差异，因此，两种定量方式均可用于牛磺熊去氧胆酸中上述杂质含量的计算。
因此本品中杂质定量方式可为：
（1）用牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸杂质对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数的线性回归方程，分别计算供试品中各杂质的含量；
（2）或以牛磺熊去氧胆酸对照品溶液浓度的对数与相应峰面积的对数计算线性方程，用该方程计算供试品中各杂质的含量；
如需达到简化操作，提高测定效率的目的，优选采用以牛磺熊去氧胆酸对照品溶液浓度的对数与相应峰面积的对数计算线性方程进行杂质含量计算的方法。
实施例5-10为本发明检测方法的色谱条件确定后，验证其测定效果的试验。
实施例5系统适用性试验
色谱条件：同实施例4；
溶液配制：同实施例1中方法配制供试品溶液及系统适用性溶液；
分别取系统适用性溶液、供试品溶液和稀释剂注入色谱仪，按上述色谱条件进行检测，结果见表9-10，色谱图见图1、图2和图3。
表9系统适用性试验结果1
取牛磺熊去氧胆酸对照品适量，精密称定，用稀释剂溶解并稀释制成100μg/ml的对照品溶液，连续进样6针，记录色谱图，计算峰面积的RSD，结果见表10。
表10系统适用性试验结果2
结果：溶剂对本品中上述8种杂质的测定均无干扰，牛磺熊去氧胆酸及各杂质峰间分离度均不低于1.5；对照品溶液连续进样6针，峰面积的RSD不大于2.0%，表明所选方法具有较好系统适用性。
实施例6灵敏度试验
色谱条件：同实施例4；
取牛磺熊去氧胆酸对照品及各杂质对照品适量，用溶剂溶解并稀释至信噪比约为3.0时，即为检测限溶液，取该溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算牛磺熊去氧胆酸及各杂质检测限，结果见表11。
表11灵敏度试验结果——检测限
取牛磺熊去氧胆酸对照品及各杂质对照品适量，用溶剂溶解并稀释至信噪比约为10.0时，即为定量限溶液，取该溶液注入高效液相色谱仪，连续进样6针，记录色谱图，计算牛磺熊去氧胆酸及各杂质定量限，并计算各色谱峰面积的RSD，结果见表12。
表12灵敏度试验结果——定量限
上述试验结果表明，本方法用于测定牛磺熊去氧胆酸原料的有关物质，具有较高灵敏度，可保证测定结果准确可靠。
实施例7线性试验
色谱条件：同实施例4；
线性浓度对照品溶液配制：同实施例4；
取各浓度线性对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以各组分浓度的对数值为横坐标，以相应浓度峰面积的对数值为纵坐标进行线性回归，计算线性方程，结果见表13。
表13线性试验结果
Ki：杂质线性斜率；K0：牛磺熊去氧胆酸线性斜率；
上述试验结果表明，牛磺熊去氧胆酸及其杂质进样浓度的对数与峰面积的对数呈良好线性关系，可保证测的结果准确可靠；在所选测定条件下，牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸响应值与牛磺熊去氧胆酸响应值相当，可采用牛磺熊去氧胆酸对照品溶液浓度的对数与相应的峰面积对数的线性回归方程，用该方程计算供试品中各杂质的含量。
实施例8准确度试验
色谱条件：同实施例4；
取牛磺熊去氧胆酸原料，照实施例1中方法配制3份供试品溶液；另取牛磺熊去氧胆酸原料9份，分别加入0.05%、0.10%、0.20%浓度水平的各杂质对照品溶液，每个浓度配制3份，做为加样回收溶液；取供试品溶液及加样回收溶液，分别注入色谱仪，按实施例4中定量方法2计算各杂质的回收率，结果见表14-17。
表14准确度试验结果1
表15准确度试验结果2
表16准确度试验结果3
表17准确度试验结果4
结果：3个浓度水平9份加样回收样品测得的平均回收率均在98%～102%范围内，RSD均小于2.0%，满足杂质含量测定要求，可保证测得结果的准确性和可靠性。
实施例9重复性试验
色谱条件：同实施例4；
取牛磺熊去氧胆酸原料，照实施例1中供试品溶液配制方法配制为6份供试品溶液，分别测定，按实施例4中定量方法2计算各杂质含量，结果见表18。
表18重复性试验结果
| 样品 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 均值(%) | 差值(%) |
| 牛磺-7-酮基胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | \ | \ |
| 牛磺鹅去氧胆酸(%) | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | \ |
| 牛磺胆石酸(%) | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | \ |
| 胆酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | \ | \ |
| 熊去氧胆酸(%) | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | \ |
| 7-酮基胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | \ | \ |
| 鹅去氧胆酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | \ | \ |
| 胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | \ | \ |
| 最大单杂（%） | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | \ |
| 总杂质（%） | 0.09 | 0.10 | 0.09 | 0.10 | 0.10 | 0.09 | 0.09 | 0.01 |
注：差值=最大值-最小值
结果：6份供试品溶液测得结果无显著差异，表明该方法具有较好重复性。
实施例10溶液稳定性试验
色谱条件：同实施例4；
取实施例9中样品溶液1，分别于室温下放置0、2、4、6、12小时后注入液相色谱仪，记录色谱图，按实施例4中定量方法2计算各时间点供试品溶液中各杂质的含量，结果见表19。
表19溶液稳定性试验结果
| 杂质名称 | 0小时 | 2小时 | 4小时 | 6小时 | 12小时 |
| 牛磺-7-酮基胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 牛磺鹅去氧胆酸(%) | 0.03% | 0.03% | 0.03% | 0.03% | 0.03% |
| 牛磺胆石酸(%) | 0.02% | 0.02% | 0.02% | 0.02% | 0.02% |
| 胆酸(%) | 0.03% | 0.03% | 0.03% | 0.03% | 0.03% |
| 熊去氧胆酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 7-酮基胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 鹅去氧胆酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 胆石酸(%) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 最大单杂（%） | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 |
| 总杂质（%） | 0.09 | 0.10 | 0.09 | 0.10 | 0.10 |
上述结果表明，供试品溶液在室温条件下放置，于12小时内稳定。
实施例11样品测定
色谱条件：同实施例4；
取3批牛磺熊去氧胆酸原料适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸10mg的溶液，分别测定，采用实施例中定量方法2计算各杂质含量，进行有关物质，结果见表20。
表20样品测定结果
| 组分 | TU5-201309001V | TU5-201309002V | TU5-201309003V |
| 牛磺-7-酮基胆石酸 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 牛磺鹅去氧胆酸 | ＜0.05% | ＜0.05% | ＜0.05% |
| 牛磺胆石酸 | ＜0.05% | ＜0.05% | ＜0.05% |
| 胆酸 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 熊去氧胆酸 | ＜0.05% | 0.1% | ＜0.05% |
| 7-酮基胆石酸 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 鹅去氧胆酸 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 胆石酸 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 最大未知单杂 | 0.07% | 0.06% | 0.06% |
| 其他杂质总量 | 0.2% | 0.1% | 0.1% |
以上结果表明，采用本发明提供的HPLC-ELSD法，可同时测定牛磺熊去氧胆酸中8种已知杂质的含量，具有较高专属性、准确性及耐用性，可保证测得结果准确可靠，从而达到有效控制产品质量的目的，以在保证产品质量的同时，确保产品的安全有效性。
本发明实施例仅作为示例，在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，但只要使用本发明所述的质量控制方法，均在本发明保护范围之内。
Claims (5)
1.一种采用高效液相色谱检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法，检测条件如下：
固定相：以辛烷基键合硅胶为填充剂；
流动相：流动相A：2.5～50mmol/L盐缓冲液，调pH至2.5~3.5；流动相B：甲醇或乙腈；
洗脱条件：
采用流动相A与流动相B混合等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为56～75∶25～44；
或采用流动相A与流动相B梯度洗脱，洗脱条件如下：
流速：0.7~1.2ml/min；
柱温：30~40℃；
蒸发光散射检测器：漂移管温度为95~115℃，载气流量为2.5~3.5L/min；
其中，铵盐缓冲液选自甲酸铵、乙酸铵、氨水、三乙胺或其混合物；
其中，pH调节剂选自甲酸、乙酸、三氟乙酸或其混合物。
2.如权利要求1所述的方法，所述梯度洗脱条件如下：
3.如权利要求1或2所述的方法，所述漂移管温度为100～110℃，载气流量为3.0～3.2L/min。
4.如权利要求1或2所述方法，其特征在于溶液的制备方法如下：
1）、供试品溶液：取牛磺熊去氧胆酸适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸5.0～50mg的溶液，即得；
2）、对照品溶液的制备：精密称取牛磺熊去氧胆酸对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释，制成2.5μg/ml～250μg/ml的系列浓度的线性对照品溶液；
其中，稀释剂为乙腈和水混合溶液，其中乙腈：水的体积比为35～55∶45～65。
5.如权利要求1或2所述方法，其特征在于溶液的制备方法如下：
1）、供试品溶液：取牛磺熊去氧胆酸适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸5.0～50mg的溶液，即得；
2）、对照品溶液的制备：分别精密称取牛磺-7-酮基胆石酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆石酸、胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、鹅去氧胆酸、胆石酸对照品适量，用稀释剂溶解并定量稀释制成2.5μg/ml～250μg/ml的系列浓度的杂质线性对照品溶液；
其中，稀释剂为乙腈和水混合溶液，其中乙腈：水的体积比为35～55∶45～65。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410807314.2A CN105784854B (zh) | 2014-12-23 | 2014-12-23 | 一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410807314.2A CN105784854B (zh) | 2014-12-23 | 2014-12-23 | 一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105784854A true CN105784854A (zh) | 2016-07-20 |
| CN105784854B CN105784854B (zh) | 2020-06-16 |
Family
ID=56386338
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410807314.2A Active CN105784854B (zh) | 2014-12-23 | 2014-12-23 | 一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105784854B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108072704A (zh) * | 2016-11-08 | 2018-05-25 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于液相色谱质谱联用的粪便中胆汁酸的检测方法 |
| CN108169377A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-06-15 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种新的牛磺鹅去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法 |
| CN108717084A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-10-30 | 天津量信检验认证技术有限公司 | 熊胆粉中熊去氧胆酸含量的液相色谱-质谱检测方法 |
| CN115469035A (zh) * | 2022-09-27 | 2022-12-13 | 湖南泰新医药科技有限公司 | 测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005039381A2 (en) * | 2003-05-05 | 2005-05-06 | Drug Risk Solutions, L.L.C. | Compositions and processes for analysis of pharmacologic agents in biological samples |
| CN102114044A (zh) * | 2009-12-31 | 2011-07-06 | 福建归真堂药业股份有限公司 | 一种人工加工熊胆粉及其制备方法 |
| CN102477059A (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-30 | 成都国为医药科技有限公司 | 一种高纯度牛磺熊去氧胆酸及其制备方法 |
| CN103675187A (zh) * | 2012-09-11 | 2014-03-26 | 上海诗丹德生物技术有限公司 | 一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法 |
-
2014
- 2014-12-23 CN CN201410807314.2A patent/CN105784854B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005039381A2 (en) * | 2003-05-05 | 2005-05-06 | Drug Risk Solutions, L.L.C. | Compositions and processes for analysis of pharmacologic agents in biological samples |
| CN102114044A (zh) * | 2009-12-31 | 2011-07-06 | 福建归真堂药业股份有限公司 | 一种人工加工熊胆粉及其制备方法 |
| CN102477059A (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-30 | 成都国为医药科技有限公司 | 一种高纯度牛磺熊去氧胆酸及其制备方法 |
| CN103675187A (zh) * | 2012-09-11 | 2014-03-26 | 上海诗丹德生物技术有限公司 | 一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张晓艳等: "HPLC测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中的有关物质", 《华西药学杂志》 * |
| 赵勇等: "HPLC-ELSD 法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量", 《药物分析杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108072704A (zh) * | 2016-11-08 | 2018-05-25 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于液相色谱质谱联用的粪便中胆汁酸的检测方法 |
| CN108072704B (zh) * | 2016-11-08 | 2021-05-11 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于液相色谱质谱联用的粪便中胆汁酸的检测方法 |
| CN108169377A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-06-15 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种新的牛磺鹅去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法 |
| CN108717084A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-10-30 | 天津量信检验认证技术有限公司 | 熊胆粉中熊去氧胆酸含量的液相色谱-质谱检测方法 |
| CN115469035A (zh) * | 2022-09-27 | 2022-12-13 | 湖南泰新医药科技有限公司 | 测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105784854B (zh) | 2020-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105092754B (zh) | 一种利用hplc测定磺酸酯类基因毒性杂质的方法 | |
| Moliner-Martínez et al. | Advantages of monolithic over particulate columns for multiresidue analysis of organic pollutants by in-tube solid-phase microextraction coupled to capillary liquid chromatography | |
| Saito et al. | Solid-phase dispersive extraction method for analysis of benzodiazepine drugs in serum and urine samples | |
| CN105891351B (zh) | 一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法 | |
| CN105784854A (zh) | 一种检测牛磺熊去氧胆酸中有关物质的方法 | |
| Liu et al. | Development of a UHPLC–MS/MS method for the determination of plasma histamine in various mammalian species | |
| CN102147397A (zh) | 一种采用高效液相色谱检测功能啤酒中牛磺酸的方法 | |
| CN107462650A (zh) | 人体尿液中环境激素的检测方法 | |
| Hu et al. | Stand out from matrix: Ultra-sensitive LC− MS/MS method for determination of histamine in complex biological samples using derivatization and solid phase extraction | |
| Yu et al. | A sensitive and accurate method for the determination of perfluoroalkyl and polyfluoroalkyl substances in human serum using a high performance liquid chromatography-online solid phase extraction-tandem mass spectrometry | |
| Shen et al. | Determination of β2-agonists by ion chromatography with direct conductivity detection | |
| Hsieh et al. | A mixed-mode liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for the determination of cytarabine in mouse plasma | |
| CN106033079A (zh) | 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法 | |
| Fa et al. | Color and alcohol removal for the simultaneous detection of amino acids and sugars in wine by two-dimensional ion chromatography | |
| Murugan et al. | A review on method development and validation by using HPLC | |
| CN101169394A (zh) | 化妆品中克林霉素的高效液相色谱检测方法 | |
| Deshmukh et al. | A review on analytical method development and validation by high performance liquid chromatography technique | |
| Hroch et al. | HPLC determination of arginases inhibitor N-(ω)-hydroxy-nor-l-arginine using core–shell particle column and LC–MS/MS identification of principal metabolite in rat plasma | |
| Xu et al. | Capillary liquid chromatographic analysis of fat-soluble vitamins and β-carotene in combination with in-tube solid-phase microextraction | |
| Kawaguchi et al. | Automated isotope dilution liquid chromatography–tandem mass spectrometry with on-line dilution and solid phase extraction for the measurement of cortisol in human serum sample | |
| Tiwari et al. | HPLC: a modern approach of development and validation | |
| Leme et al. | In situ measurement of pH in liquid chromatography systems using a colorimetric approach | |
| Mazumder et al. | High resolution 19F {1H} nuclear magnetic resonance spectroscopy and liquid chromatography–solid phase extraction–offline 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy for conclusive detection and identification of cyanide in water samples | |
| CN108226340B (zh) | 一种分离测定双氟米松及其6β双氟米松和16β双氟米松的方法 | |
| CN109254086B (zh) | 一种头孢克洛干混悬剂样品中的十二烷基硫酸钠的hplc检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |