CN103675187A - 一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法 - Google Patents

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费文静
钱勇
丁慧
诸晨
许纪峰
谢天培
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Abstract

本发明公开了一种利用反相高效液相色谱-ELSD法检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠含量的方法。其特点在于：利用乙醇超声提取胆汁中的牛磺鹅去氧胆酸钠，制成供试品溶液；然后吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，采用反相高效液相色谱-ELSD法测定，用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱，乙腈-三乙胺水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温25℃，用ELSD检测，根据样品的保留时间和色谱图进行定性分析，根据峰面积进行定量分析。该方法的优点在于：操作简便、精密度高、重现性好，可用于检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠。

Description

一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种从胆汁中检测牛磺鹅去氧胆酸钠(Sodium taurochenodeoxycholate)含量的方法，属于医药技术领域。
背景技术
胆汁酸盐是胆汁的主要活性成分，主要有清热解毒、化痰利湿等作用
牛磺鹅去氧胆酸钠，分子式为：C26H44NNaO6S，分子量521.68，CAS号为6009-98-9，其结构如图：
Figure BSA00000776088200011
现有检测方法灵敏度较低、重复性较差，不适合用于检测胆汁中的牛磺鹅去氧胆酸钠。因此有必要探索出更易操作、更准确的含量测定方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种易操作、准确度高的胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法。
本发明可以通过下列步骤来实现：
(1)将胆汁用乙醇超声提取。
(2)将提取液过滤，得到供试品溶液。
(3)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱。
(4)高效液相色谱仪设置如下：采用乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速为1ml/min；柱温25℃；进样量20μ1；
(5)ELSD检测器设置如下：雾化温度105℃，气体流速3L/min。
在步骤(1)中，所用的溶剂为纯乙醇，超声时间为20min(220W，40kHz)。
在步骤(2)中，所用的滤膜为0.45μm。
在步骤(3)中，所用的固定相是十八烷基硅烷键合硅胶。
在步骤(4)中，所用的流动相为乙腈：0.03％三乙胺水溶液，梯度洗脱；流动相的流速为1ml/min；柱温为25℃或者为室温；进样量20μl。
在步骤(5)中，ELSD的雾化温度为105℃，气体流速为3L/min。
与其他检测方法相比，本发明的有益效果如下：(1)准确度高，重现性好，结果可靠；(2)方法操作简便、实用性强，适合于胆汁的含量测定。
附图说明
图1为本发明方法实施例1的含量测定色谱图。
图2为本发明方法实施例2的含量测定色谱图。
图3为本发明方法实施例3的含量测定色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但本发明不仅限于所述实施例。
实施例1：
色谱条件与系统适应性：色谱柱使用Agilent ZORBAX Extend C18(4.6×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速1ml/min；ELSD雾化温度105℃，气体流速3L/min；柱温为25℃，进样量20μl；
供试品溶液的制备：取胆汁约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入适量乙醇，超声处理(220W，40kHz)20min，放冷，用乙醇定容至刻度，摇匀。用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。
标准品溶液的制备：精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品12.3mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀；即得。
测定法：精密吸取供试品和对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
结果：测得胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量为0.51％。供试品和对照品图谱见图1。
实施例2：
色谱条件与系统适应性：色谱柱使用Symmetrix ODS-R(4.6×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～70％乙腈；流速lml/min；ELSD雾化温度105℃，气体流速3L/min；柱温为室温；进样量为10μl；
供试品溶液的制备：取胆汁约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入适量乙醇，超声处理(220W，40kHz)20min，放冷，用乙醇定容至刻度，摇匀。用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。
对照品溶液的制备：精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品11.8mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀；即得。
测定法：精密吸取供试品和对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
结果：测得胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量为0.47％。供试品和对照品图谱见图2。
实施例3：
色谱条件与系统适应性：色谱柱使用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～40min15％乙腈～90％乙腈；流速1ml/min；ELSD雾化温度105℃，气体流速3L/min；柱温为25℃，进样量5μl；
供试品溶液的制备：取胆汁约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入适量乙醇，超声处理(220W，40kHz)20min，放冷，用乙醇定容至刻度，摇匀。用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。
对照品溶液的制备：精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品10.5mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀；即得。
测定法：精密吸取供试品和对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
结果：测得胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量为0.53％。供试品和对照品图谱见图3。

Claims (9)

1.一种利用反相高效液相色谱—ELSD法检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)将胆汁用乙醇超声提取；
(2)将提取液过滤，得到供试品溶液；
(3)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱；
(4)高效液相色谱仪设置如下：采用乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速为1ml/min；柱温25℃；进样量20μl；
(5)ELSD检测器设置如下：雾化温度105℃，气体流速3L/min。
2.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(1)中，所用的溶剂为纯乙醇，超声时间为20min(220W，40kHz)。
3.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(2)中，所用的滤膜为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(3)中，所用的固定相是十八烷基硅烷键合硅胶。
5.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(4)中，所用的流动相为乙腈：0.03％三乙胺水溶液，梯度洗脱。
6.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(4)中，样品的进样量可以是10～100μl之间。
7.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，使用ELSD检测器。
8.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，ELSD雾化温度为105℃。
9.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，ELSD气体流速为3L/min。
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