CN102445502B

CN102445502B - 一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法

Info

Publication number: CN102445502B
Application number: CN201010506142.7A
Authority: CN
Inventors: 叶正良; 周大铮; 贾诚; 李德坤
Original assignee: Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-10-14
Filing date: 2010-10-14
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2030-10-14
Also published as: CN102445502A

Abstract

本发明属于药学领域，涉及一种中药材的含量测定方法，具体涉及一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法，本发明采用液相色谱法测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量。其中，所述色谱条件：色谱柱：Waters symeteryC18色谱柱；流动相：A(0.05％磷酸)-B(乙腈)，梯度洗脱，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL。

Description

一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法

技术领域

本发明属于药学领域，涉及一种中药材的含量测定方法，具体涉及一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法。

背景技术

麦冬来源于百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。具有养阴生津，润肺清心的功能。用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘；咽白喉。麦冬性状：呈纺锤形，两端略尖，长1.5～3cm，直径0.3～0.6cm。表面黄白色或淡黄白，有细纵纹。质柔韧，断面黄白色，半透明，中柱细小。气微香，味甘、微苦。

麦冬药材主含甾体皂苷类、高异黄酮类和糖类化合物。而麦冬药材及其相关制剂质量控制研究对象主要是麦冬皂苷D或B，目前，有关采用HPLC测定高异黄酮的方法未见报道。

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

发明人采用高效液相色谱法通过对来自不同产地的10批药材样品进行了甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A的比较。试验结果显示，本发明的测定方法更加快速、准确。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法。

本发明采用液相色谱法测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量。

其中，所述冬药材中三种黄酮类成分为：甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、和6-醛基异麦冬黄烷酮A。

本发明所述的测定方法，包括以下步骤：

1、对照品溶液的制备

分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成每1mL含甲基麦冬黄烷酮A 0.0968mg、甲基麦冬黄烷酮B 0.0496mg，6-醛基异麦冬黄烷酮A 0.0418mg的三种对照品溶液；

2、供试品溶液的制备

取麦冬药材粉末约6.0g，精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，过滤，合并滤液，蒸干，加水10mL使溶解，上C18反相硅胶柱富集，再用甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液；

3、含量测定

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；根据峰面积计算各组分的含量。

其中，所述色谱条件：

色谱柱：Waters symeteryC18色谱柱；流动相：A(0.05％磷酸)-B(乙腈)，梯度洗脱，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL。

进一步优选的，本发明的色谱条件：

色谱柱：Waters symeteryC18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：A(0.05％磷酸)-B(乙腈)，梯度洗脱(见表1)，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL。

表1 液相梯度洗脱条件

本发明所述的测定方法，具有操作简便，灵敏度高，准确性强，专属性强，重复性好，测定快速等诸多优点。可用于麦冬药材中甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A的含量测定。

附图说明

图1：对照品与麦冬药材样品HPLC图

图中：1.甲基麦冬黄烷酮A，2.甲基麦冬黄烷酮B，3.6-醛基异麦冬黄烷酮A，4.麦冬样品

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限制。

实施例1、测定方法

1、对照品溶液的制备

2、供试品溶液的制备

3、含量测定

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10-20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；色谱图见图1。

其中，所述色谱条件：

色谱柱：Waters symeteryC18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：A(0.05％磷酸)-B(乙腈)，梯度洗脱(见表1)，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL。。

表1 液相梯度洗脱条件

实施例2、

线性关系考察

分别精密吸取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10μL，按实施例1中色谱条件测定，记录色谱图及峰面积。以各对照品的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标计算，得甲基麦冬黄烷酮A的回归方程为Y＝35984X+36526，r＝0.9999，线性范围为9.68～96.8μg·mL^-1。甲基麦冬黄烷酮B的回归方程为Y＝31555X+10754，r＝0.9998，线性范围为4.96～49.6μg·mL^-1。6-醛基异麦冬黄烷酮A的回归方程为Y＝14256X+8106.1，r＝0.9991，线性范围为4.18～41.8μg·mL^-1。

精密度试验

精密吸取供试品溶液按上述色谱条件连续进样6次，进样量10μL，记录色谱图。测得甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A峰面积的RSD分别为0.82％，0.87％，1.01％，结果表明仪器精密度良好。

重复性试验

取同一批样品，按供试品制备方法平行6份样品，连续进样，进样量10μL，记录色谱图，分别计算各测定成分的含量。测得甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A含量的RSD分别为1.67％，2.40％，2.20％，结果表明该实验重复性良好。

稳定性试验

取同一份供试品溶液，在0，2，4，8，12，24h进样，在上述色谱条件下测定。测得甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A峰面积的RSD分别为0.84％，0.97％，1.51％，结果表明样品在24h内稳定性良好。

加样回收试验

称取6分已知含量的麦冬药材，每份约3.0g，精密称定，分别精密加入3种对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法制备样品溶液，在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A的平均回收率分别100.1％(RSD1.03％)、99.5％(RSD 1.35％)、100.2％(RSD 1.16％)。

不同批次麦冬药材的含量测定

称取10批不同批次的麦冬药材约6.0g，精密称定，按下述方法制备供试品溶液：取麦冬药材粉末约6.0g，精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，过滤，合并滤液，蒸干，加水10mL使溶解，上自制C18小柱富集，再用甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液。

在上述色谱条件下进样，记录色谱图，测定结果见表2。

表2 批麦冬药材中各成分的含量(单位：mg·g^-1)

其中，对照品溶液和供试品溶液选用实施例1中的产品。

实施例3、

从表2可以看出，在市售的10批麦冬药材当中，甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A总体含量都很低，同时可以发现，在不同的药材样品中，甲基麦冬黄烷酮A、B和6-醛基异麦冬黄烷酮A的含量也有较为明显的波动，3种黄酮类成分在10批药材中总含量范围为0.0459mg·g^-1~0.1276mg·g^-1。

实施例4、供试品溶液制备方法的考察

供试品溶液制备方法的考察本实验对甲醇、甲醇-氯仿、乙醇等不同的提取溶剂，超声、浸泡和回流提取不同提取方法提取次数，以及提取时间进行了试验比较。同时对AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺和C18反相硅胶柱进行考察，结果显示，甲醇超声提取法所得色谱图较好。采用甲醇超声提取后，须过C18反相硅胶柱洗脱富集，富集效果最佳。

实施例5、检测波长的选择

检测波长的选择在对供试品溶液进行色谱条件摸索时，在190～400nm进行全波长扫描，其中296nm波长下检测色谱峰较多，分离度可以达到指纹图谱要求的标准，因此选296nm为检测波长。

实施例6、色谱柱的选择

色谱柱的选择本实验对3种不同厂家的色谱柱：Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm，5μm)；Phenomenex Luna C18(4.6mm×250mm，5μm)和Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)进行试验筛选，比较分离度、峰形和柱效，结果Waters SymmetryC18较为适合。

实施例7、流动相的选择

流动相的选择本试验比较了甲醇-0.03％磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.05％磷酸水溶液3种不同的梯度洗脱溶剂系统，以乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统所得图谱的峰形较好、分离度大，所以选用乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统为本试验的流动相系统。

实施例8、仪器设备

Waters Alliance2695高效液相色谱仪，Waters2998检测器，Empower色谱工作站(美国Waters公司)，AL204电子天平，XS105梅特勒精密电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A对照品(自制，经光谱与色谱鉴定，纯度均达到98％以上)。10批川麦冬药材为市售药材。

Claims

1.一种测定麦冬药材中三种黄酮类成分含量的方法，包括以下步骤：

1）对照品溶液的制备

分别称取对照品甲基麦冬黄烷酮A，甲基麦冬黄烷酮B，6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成每1mL含甲基麦冬黄烷酮A0.0968mg、甲基麦冬黄烷酮B0.0496mg，6-醛基异麦冬黄烷酮A0.0418mg的三种对照品溶液；

2）供试品溶液的制备

取麦冬药材粉末6.0g，精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，过滤，合并滤液，蒸干，加水10mL使溶解，上C18反相硅胶柱富集，再用甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液；

3）含量测定

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；其中色谱条件:色谱柱：规格为4.6mm×150mm，5μm的Waters symeteryC18色谱柱；流动相：0.05%磷酸-乙腈，梯度洗脱，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL，梯度洗脱表为：

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成每1mL含甲基麦冬黄烷酮A0.0968mg、甲基麦冬黄烷酮B0.0496mg，6-醛基异麦冬黄烷酮A0.0418mg的三种对照品溶液；

供试品溶液的制备：取麦冬药材粉末6.0g，精密称定，用甲醇超声提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，过滤，合并滤液，蒸干，加水10mL使溶解，上C18反相硅胶柱富集，再用甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供试品溶液；

含量测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；其中，所述色谱条件:色谱柱：规格为4.6mm×150mm，5μm WaterssymeteryC18色谱柱；流动相：0.05%磷酸-乙腈，梯度洗脱见表1，柱温30℃，流速1.0mL·min^-1，检测波长296nm，进样量10μL；梯度洗脱表为：