CN107478762A - 小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种中成药质量控制方法，具体涉及小儿复方鸡内金咀嚼片鉴别和含量测定方法。采用本发明特定的薄层色谱鉴别条件进行鉴别，以及特定的高效液相色谱条件进行含量测定，专属性和准确性强的，能够全面反映产品的化学成份，灵敏度高，重现性好，操作简单，更加客观、全面及灵敏地反映出产品质量变化情况，从而对药品质量进行整体控制，实现中药质量的全面监测。

Description

小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种中药质量控制方法，具体涉及小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法。
背景技术
在现有技术中，小儿复方鸡内金咀嚼片收入于国家注册标准[YBZ03852008]，为河南太龙药业股份有限公司独家生产的中药产品。处方：鸡内金85g，六神曲165g。制法：以上二味，粉碎成细粉，过筛，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得。性状：本品为着色异型咀嚼片；气香，味甜。处方中药材分别为鸡内金和六神曲，其中鸡内金为动物家鸡的干燥沙囊内壁。六神曲为辣蓼、青蒿、苍耳草、赤小豆、苦杏仁、麦麸、面粉共同发酵制成的曲剂，主要成分有芦丁、青蒿素、苍耳亭、阿魏酸等。
目前，现有的对小儿复方鸡内金咀嚼片进行质量检测，主要按照以下标准：
(1)鉴别：取小儿复方鸡内金咀嚼片含量测定项下细粉，置显微镜下观察：石细胞橙黄色，贝壳形，壁较厚，较宽一边纹孔明显。
(2)含量测定：取小儿复方鸡内金咀嚼片20片，精密称定，研细，取粉末约2g，精密称定，照中国药典氮测定法第一法进行消化，照中国药典氮测定法第二法进行测定。每片含氮不得低于12.0mg。
(3)重金属检査：取供试品约1.0g，照中国药典重金属检査法第二法项下方法进行检査。含重金属不得过百万分之二十。
(4)其他应符合中国药典片剂项下有关的各项规定。
上述质量标准存在缺点是：鉴别过于简单，显微鉴别仅为六神曲的质量控制指标，没有对鸡内金进行控制；含量测定氮元素为控制大类成分，专属性、重复性差，不能定量全面的检测其有效成份。
目前，关于两味药材的国家现行标准中均未涉及薄层鉴别和成分定量检验的项目。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足，提供一种专属性强，灵敏度高，重复性好，质量控制合理的小儿复方鸡内金咀嚼片鉴别和含量测定方法，该方法能够全面控制产品的质量标准。
本发明提供一种小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，所述方法包括：
(一)采用薄层色谱法进行鉴别的步骤，其中，
所述薄层色谱的条件为：以硅胶G薄层板为检测用薄层色谱板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:8:1)10℃以下放置的下层液为展开剂；
(二)采用高效液相色谱法进行含量测定的步骤，其中，
所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水-冰醋酸按体积比(85:15:0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水按体积比(50:20:30)为流动相B，按照下述条件进行梯度洗脱：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 0 100
12 0 100
20 30 70
32 85 15
34 15 85
46 15 85
优选地，步骤(一)所述的鉴别步骤还包括将小儿复方鸡内金咀嚼片采用大孔吸附树脂柱层析的步骤。
优选地，所述大孔吸附树脂柱层析的步骤包括：将小儿复方鸡内金咀嚼片与质量分数为75％甲醇溶液按照重量体积比4:25混合，超声处理，然后采用大孔吸附树脂柱，优选采用AB-8大孔吸附树脂柱进行层析，洗脱吸附平衡后，以质量分数为70％的乙醇溶液为洗脱剂对大孔吸附树脂柱进行洗脱，收集洗脱液后蒸干，加分析纯的甲醇溶液。
优选地，步骤(一)所述的鉴别步骤以鸡内金-甲醇溶液为对照药材溶液，以阿魏酸-芦丁-甲醇溶液为对照品溶液。
优选地，步骤(一)所述薄层色谱法进行鉴别的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片按所述大孔吸附树脂柱层析的步骤制得供试品溶液；
(2)将鸡内金对照药材按所述大孔吸附树脂柱层析的步骤制得鸡内金-甲醇对照药材溶液；
(3)取阿魏酸对照品和芦丁对照品，加甲醇制得阿魏酸-芦丁-甲醇对照品溶液；
(4)吸取上述三种溶液，按照所述薄层色谱条件进行鉴别。
优选地，步骤(一)所述薄层色谱法进行鉴别的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片粉碎，将其与质量分数为75％甲醇溶液按照重量体积比为4:25混合，超声处理30min，滤过，上AB-8大孔吸附树脂柱层析，以水洗至水洗液近无色，然后依次采用质量分数为35％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇使之溶解，即得供试品溶液；
(2)取鸡内金对照药材，按步骤(1)的方法制得鸡内金-甲醇对照药材溶液；
(3)取阿魏酸对照品和芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含阿魏酸0.5mg，芦丁0.5mg的混合溶液作为对照品溶液；
(4)吸取上述三种溶液，分别点于高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水按体积比12:3:8:1为展开剂展开，取出晾干，喷以质量分数为10％硫酸乙醇溶液，加热105℃至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光(365nm)下检视。
优选地，步骤(二)所述的含量测定步骤还包括将小儿复方鸡内金咀嚼片采用中性氧化铝柱进行纯化的步骤。
优选地，所述中性氧化铝柱进行纯化的步骤包括：将小儿复方鸡内金咀嚼片与色谱纯甲醇按照重量体积比为1:2.5混合，超声处理，通过中性氧化铝柱纯化，以无水乙醇溶液为洗脱剂对中性氧化铝柱进行洗脱，收集洗脱液蒸干，加色谱纯甲醇。
优选地，步骤(二)所述的含量测定步骤以青蒿素-对羟基苯甲醛-苍耳亭-甲醇溶液为对照品溶液。
优选地，步骤(二)所述高效液相色谱法进行含量测定的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片按所述中性氧化铝柱进行纯化的步骤制得供试品溶液；
(2)取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品，加甲醇制成青蒿素-对羟基苯甲醛-苍耳亭-甲醇的混合溶液为对照品溶液；
(3)吸取上述两种溶液，注入高效液相色谱仪，按照所述高效液相色谱条件进行含量测定。
优选地，步骤(二)所述高效液相色谱法进行含量测定的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片粉碎，将其与色谱纯甲醇溶液按照重量体积比为1:2.5混合，超声处理30分钟，放冷，滤过，通过中性氧化铝柱(100～120目)纯化，用无水乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，用色谱纯甲醇溶解，滤过，即得供试品溶液；
(2)取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品，加甲醇制成每1ml含青蒿素0.3mg、对羟基苯甲醛0.2mg、苍耳亭0.1mg的混合溶液为对照品溶液；
(3)吸取上述两种溶液，注入高效液相色谱仪测定，所述高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，色谱柱柱温为38℃，以甲醇-水-冰醋酸按体积比(85:15:0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水按体积比(50:20:30)为流动相B，按照下述条件进行梯度洗脱；所述流动相的流速为1ml/min；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 0 100
12 0 100
20 30 70
32 85 15
34 15 85
46 15 85
本发明的效果：
采用本发明特定的薄层色谱鉴别条件进行鉴别，以及特定的高效液相色谱条件进行含量测定，专属性和准确性强的，能够全面反映产品的化学成份，灵敏度高，重现性好，操作简单，更加客观、全面及灵敏地反映出产品质量变化情况，从而对药品质量进行整体控制，实现中药质量的全面监测。
附图说明
图1是青蒿素对照品线性考察图；
图2是对羟基苯甲醛对照品线性考察图；
图3是苍耳亭对照品线性考察图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行详细说明。应当理解的是，此处实施例仅用于示例性对本发明进行说明，并不用于对本发明进行限制。
实施例1
1.小儿复方鸡内金咀嚼片薄层鉴别方法
1.1仪器与试药
试剂：甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、硫酸均为分析纯，AB-8大孔吸附树脂柱，硅胶G薄层板。
待测样品-小儿复方鸡内金咀嚼片(批号：161022；1.2g/片)：河南太龙药业股份有限公司提供。
阴性样品1(不含鸡内金)：河南太龙药业股份有限公司提供。
阴性样品2(不含六神曲)：河南太龙药业股份有限公司提供。
空白样品3(不含鸡内金、六神曲)：河南太龙药业股份有限公司提供。
对照品：鸡内金对照药材(批号：121153-201002)，阿魏酸对照品(批号：110773-201614)，芦丁对照品(批号：100080-201610)，均由中国食品药品检定研究院提供。
仪器：ZF7C三用紫外分析仪，AL-204型电子分析天平，HQ-500DE型超声波清洗器；真空抽滤装置、(1cm×30cm)层析柱、薄层显色喷雾装置。
1.2方法
(1)供试品溶液的制备：取小儿复方鸡内金咀嚼片10片，研细，称取约4g，加入75％甲醇25ml，超声30min，滤过，上AB-8大孔吸附树脂柱(柱内经1.8cm，柱高18cm，湿法装柱)，以水洗至水洗液近无色，然后依次采用质量分数为35％乙醇、70％乙醇各60ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，加5mL甲醇使之溶解，作为供试品溶液。
(2)阴性样品溶液的制备：分别取阴性样品1、阴性样品2、空白样品3各10片，按照供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液1、阴性样品溶液2和空白样品溶液3。
(3)对照品溶液制备：取鸡内金对照药材1g，同上述供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
(4)取阿魏酸对照品和芦丁对照品，加甲醇制成每l ml含阿魏酸0.5mg，芦丁0.5mg的混合溶液作为对照品溶液。
(5)照薄层色谱法试验，吸取上述六种溶液各5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水按体积比(12:3:8:1)，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光(365nm)下检视。
1.3结果及结论
供试品溶液在鸡内金对照药材溶液和对照品溶液的斑点处均有对应斑点。阴性样品溶液1在鸡内金对照药材溶液斑点处无对应斑点。阴性样品溶液2在阿魏酸和芦丁对照品溶液斑点处无对应斑点。空白样品溶液3在鸡内金对照药材溶液、阿魏酸和芦丁对照品溶液斑点处均无对应斑点。
采用本发明特定的薄层色谱鉴别条件对小儿复方鸡内金咀嚼片进行鉴别，鉴别方法无空白干扰，成分之间无相互干扰，专属性强，可操作性强。
2.小儿复方鸡内金咀嚼片的含量测定方法
2.1仪器与试药
试剂：甲醇、乙腈、异丙醇为色谱纯，乙醇、冰醋酸为分析纯。中性氧化铝，层析柱。
仪器：Agilent1260高效液相色谱仪；Agilent 1290Infinity ELSD；AL-204型电子分析天平；HQ-500DE型超声波清洗器；DK-96-Ⅱ型恒温水浴锅；真空浓缩装置，(1cm×30cm)层析柱等。
待测样品-小儿复方鸡内金咀嚼片(批号：161022，1.2g/片)：河南太龙药业股份有限公司提供。
阴性样品(不含六神曲)：河南太龙药业股份有限公司提供。
对照品：青蒿素对照品(批号：100202-201606)，对羟基苯甲醛对照品(批号：201613)，苍耳亭对照品(批号：201609)。
2.2方法与结果
(1)供试品溶液的制备：取小儿复方鸡内金咀嚼片，研细粉碎，精密称定10g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在中性氧化铝柱(100～120目，重量为10g，内径为1cm)上，用无水乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，50℃减压浓缩至干，用色谱纯甲醇适量溶解，转移至2ml容量瓶中，加色谱纯甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
(2)对照品溶液的制备：取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品适量，精密称定，加色谱纯甲醇制成每1ml含青蒿素0.1mg、对羟基苯甲醛0.2mg、苍耳亭0.1mg的混合对照品溶液。
(3)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水-冰醋酸(85∶15∶0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水(50:20:30)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，柱温38℃，流动相流速为每分钟1ml；蒸发光散射检测器检测；理论板数以青蒿素计算应不低于6000。
表1
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 0 100
12 0 100
20 30 70
32 85 15
34 15 85
46 15 85
(4)结果本品每片含青蒿素0.016mg，对羟基苯甲醛0.104mg，苍耳亭0.050mg。
2.3含量测定方法学考察
2.3.1线性关系试验
取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品适量，精密称定，加甲醇分别制备混合对照品溶液1-5，每个对照品溶液中青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭各自的浓度见表1，分别注入液相色谱仪，按照2.2步骤(3)所述色谱条件进行测定。
以对照品浓度为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，分别得青蒿素、对羟基苯甲醛、苍耳亭线性回归方程。
结果青蒿素在1.5ug～24ug范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y＝5004X-39396；对羟基苯甲醛在1ug～16ug范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y＝9426.5x+33214；苍耳亭在0.5ug～8ug范围内呈良好的线性关系，线性回归方程方程为Y＝3118.9x-2778.1。结果分别见表2和图1、图2、图3。
表2
2.3.2专属性
阴性样品溶液的制备：取阴性样品(不含六神曲)，按照2.2.步骤(1)供试品制备方法制成缺少六神曲的阴性样品溶液。
分别精密吸取2.2步骤(1)所得供试品溶液、步骤(2)所得对照品溶液、及缺少六神曲的阴性供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，按照2.2步骤(3)所述色谱条件进行测定。
结果：供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处有相应的色谱峰；缺少六神曲的阴性供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处没有相应的色谱峰。表明所检测的成分较突出的即来源于六神曲，该方法专属性强。
2.3.3精密度
按照2.2步骤(1)所述方法制备小儿复方鸡内金咀嚼片供试品溶液，重复进样6次注入液相色谱仪，按照2.2步骤(3)所述色谱条件分别进行测定，结果见表3。
表3精密度结果
由以上结果可知，本发明的小儿复方鸡内金咀嚼片的含量测试方法具有良好的精密度。
2.3.4待测样品溶液稳定性
按照2.2步骤(1)制备方法制备供试品溶液，在室温条件下，将供试品溶液放置0、2、4、6、8、12、24h时间，分别于上述时间点，按照2.2步骤(3)所述色谱条件测定样品中青蒿素、对羟基苯甲醛、苍耳亭含量，并计算RSD值。结果见表4。
表4小儿复方鸡内金咀嚼片含量测定样品溶液稳定性试验
结果表明，本发明方法制备得到的供试品溶液在室温下，24小时内稳定性良好。
2.3.5重现性试验
取小儿复方鸡内金咀嚼片161022批六份，按照2.2步骤(1)的方法制备供试品溶液，按照2.2步骤(3)所述色谱条件，分别测定含量。结果见表5。
表5小儿复方鸡内金咀嚼片含量测定重现性试验
结果表明，本发明的含量测定方法重现性良好。
2.3.6回收率试验
分别精密称取已知含量(青蒿素0.151mg/片，对羟基苯甲醛0.093mg/片，苍耳亭0.0487mg/片)的小儿复方鸡内金咀嚼片样品六份，均按照2.2步骤(1)的方法制成六份供试品溶液。精密称取青蒿素对照品、对羟基苯甲醛对照品、苍耳亭对照品适量，制成每1ml含青蒿素0.2521mg，对羟基苯甲醛0.1559mg，苍耳亭0.0813mg的对照品混合溶液100ml，分别向六份样品中各加入对照品2ml。按照2.2步骤(3)所述色谱条件进行含量测定，并按照《中国药典》2015年版四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行回收率计算。结果见表6、7、8。
表6青蒿素加样回收率结果
表7对羟基苯甲醛加样回收率结果
表8苍耳亭加样回收率结果
综上所述，本发明小儿复方鸡内金咀嚼片的含量测定方法专属性强，精密度高，重现性好，能够有效控制产品质量。
对比例1-6
按照实施例1中1.2所述方法对小儿复方鸡内金咀嚼片进行鉴别，所不同的是，将实施例1所用展开剂分别采用以下展开剂进行替换：
a.乙酸乙酯-甲酸-水(8:1：1)
b.三氯甲烷-丙酮(95:5)
c.正丁醇-冰醋酸-水(7:1:1)
d.正丁醇-冰醋酸-水(8:2:1)
e.正丁醇-乙醇-冰醋酸-水(4:1:1:2)
f.三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)
结果在b展开剂的条件下有阴性干扰，在a、c、d、e、f展开剂条件下斑点无法彻底有效分离。
对比例7-10
按照实施例1中2.2所述方法对小儿复方鸡内金咀嚼片进行含量测定，所不同的是，将实施例1所用流动相以及洗脱条件分别采用以下流动相以及洗脱条件进行替换：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸(85∶15∶0.45)为流动相A，以正己烷-异丙醇-水(20:50:30)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 0 100
10 0 100
60 100 0
b.以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇为流动相A，以0.4％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 100 0
10 80 20
60 55 45
c.以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈：0.2％乙酸(60:40)为流动相。
d.以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸(85∶15∶0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水(50:20:30)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 0 100
10 0 100
60 100 0
在以上a-c流动相情况下，分别进行对照品溶液和供试品溶液的检测，结果方法b和c均有未显现出的主峰，方法a的保留时间比较晚，流动相跨度梯度大，且峰形不佳。在方法d情况下，各成分主峰虽明显，但峰形欠佳。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，所述方法包括：
(一)采用薄层色谱法进行鉴别的步骤，其中，
所述薄层色谱的条件为：以硅胶G薄层板为检测用薄层色谱板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(12:3:8:1)10℃以下放置的下层液为展开剂；
(二)采用高效液相色谱法进行含量测定的步骤，其中，
所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水-冰醋酸按体积比(85:15:0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水按体积比(50:20:30)为流动相B，按照下述条件进行梯度洗脱：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 0 0 100 12 0 100 20 30 70 32 85 15 34 15 85 46 15 85
2.根据权利要求1所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(一)所述的鉴别步骤还包括将小儿复方鸡内金咀嚼片采用大孔吸附树脂柱层析的步骤。
3.根据权利要求2所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂柱层析的步骤包括：将小儿复方鸡内金咀嚼片与质量分数为75％甲醇溶液按照重量体积比4:25混合，超声处理，然后采用大孔吸附树脂柱，优选采用AB-8大孔吸附树脂柱进行层析，洗脱吸附平衡后，以质量分数为70％的乙醇溶液为洗脱剂对大孔吸附树脂柱进行洗脱，收集洗脱液后蒸干，加分析纯的甲醇溶液。
4.根据权利要求1-3任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(一)所述的鉴别步骤以鸡内金-甲醇溶液为对照药材溶液，以阿魏酸-芦丁-甲醇溶液为对照品溶液。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(一)所述薄层色谱法进行鉴别的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片按所述大孔吸附树脂柱层析的步骤制得供试品溶液；
(2)将鸡内金对照药材按所述大孔吸附树脂柱层析的步骤制得鸡内金-甲醇对照药材溶液；
(3)取阿魏酸对照品和芦丁对照品，加甲醇制得阿魏酸-芦丁-甲醇对照品溶液；
(4)吸取上述三种溶液，按照所述薄层色谱条件进行鉴别。
6.根据权利要求5所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(一)所述薄层色谱法进行鉴别的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片粉碎，将其与质量分数为75％甲醇溶液按照重量体积比为4:25混合，超声处理30min，滤过，上AB-8大孔吸附树脂柱层析，以水洗至水洗液近无色，然后依次采用质量分数为35％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇使之溶解，即得供试品溶液；
(2)取鸡内金对照药材，按步骤(1)的方法制得鸡内金-甲醇对照药材溶液；
(3)取阿魏酸对照品和芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含阿魏酸0.5mg，芦丁0.5mg的混合溶液作为对照品溶液；
(4)吸取上述三种溶液，分别点于高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水按体积比12:3:8:1为展开剂展开，取出晾干，喷以质量分数为10％的硫酸乙醇溶液，加热105℃至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光(365nm)下检视。
7.根据权利要求1-6任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和测定方法，其特征在于，步骤(二)所述的含量测定步骤还包括将小儿复方鸡内金咀嚼片采用中性氧化铝柱进行纯化的步骤。
8.根据权利要求7所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，所述中性氧化铝柱进行纯化的步骤包括：将小儿复方鸡内金咀嚼片与色谱纯甲醇按照重量体积比为1:2.5混合，超声处理，通过中性氧化铝柱纯化，以无水乙醇溶液为洗脱剂对中性氧化铝柱进行洗脱，收集洗脱液蒸干，加色谱纯甲醇。
9.根据权利要求1-8任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(二)所述的含量测定步骤以青蒿素-对羟基苯甲醛-苍耳亭-甲醇溶液为对照品溶液。
10.根据权利要求1-9任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(二)所述高效液相色谱法进行含量测定的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片按所述中性氧化铝柱进行纯化的步骤制得供试品溶液；
(2)取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品，加甲醇制成青蒿素-对羟基苯甲醛-苍耳亭-甲醇的混合溶液为对照品溶液；
(3)吸取上述两种溶液，注入高效液相色谱仪，按照所述高效液相色谱条件进行含量测定。
11.根据权利要求1-10任一项所述的小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法，其特征在于，步骤(二)所述高效液相色谱法进行含量测定的步骤包括：
(1)将小儿复方鸡内金咀嚼片粉碎，将其与色谱纯甲醇溶液按照重量体积比为1:2.5混合，超声处理30分钟，放冷，滤过，通过中性氧化铝柱(100～120目)纯化，用无水乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，用色谱纯甲醇溶解，滤过，即得供试品溶液；
(2)取青蒿素、对羟基苯甲醛和苍耳亭对照品，加甲醇制成每1ml含青蒿素0.3mg、对羟基苯甲醛0.2mg、苍耳亭0.1mg的混合溶液为对照品溶液；
(3)吸取上述两种溶液，注入高效液相色谱仪测定，所述高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，色谱柱柱温为38℃，以甲醇-水-冰醋酸按体积比(85:15:0.45)为流动相A，以乙腈-异丙醇-水按体积比(50:20:30)为流动相B，按照下述条件进行梯度洗脱；所述流动相的流速为1ml/min；
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