CN103487545B - 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法 - Google Patents

卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103487545B
CN103487545B CN201310470860.7A CN201310470860A CN103487545B CN 103487545 B CN103487545 B CN 103487545B CN 201310470860 A CN201310470860 A CN 201310470860A CN 103487545 B CN103487545 B CN 103487545B
Authority
CN
China
Prior art keywords
carbachol
content
solution
preparation
impurity
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201310470860.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103487545A (zh
Inventor
张勇
周安
吴德玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui University of Traditional Chinese Medicine AHUTCM
Original Assignee
Anhui University of Traditional Chinese Medicine AHUTCM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui University of Traditional Chinese Medicine AHUTCM filed Critical Anhui University of Traditional Chinese Medicine AHUTCM
Priority to CN201310470860.7A priority Critical patent/CN103487545B/zh
Publication of CN103487545A publication Critical patent/CN103487545A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103487545B publication Critical patent/CN103487545B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种卡巴胆碱原料药、卡巴胆碱制剂中卡巴胆碱及杂质含量的高效液相色谱检测方法，采用亲水相互作用色谱体系进行分离，采用蒸发光散射、示差折光检测器或者质谱检测器进行检测，按外标法以峰面积的常用对数值与进样量的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。本发明的检测方法能够将卡巴胆碱及在卡巴胆碱原料产品中或者卡巴胆碱制剂中所含杂质如氯化胆碱和氯化乙酰胆碱有效分离，从而实现精确测定卡巴胆碱原料药与制剂中卡巴胆碱的含量及其杂质的含量，灵敏度高、重现性良好，适用于卡巴胆碱原料药、卡巴胆碱注射液、卡巴胆碱滴眼液、卡巴胆碱眼内注射溶液的质量控制。

Description

卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种卡巴胆碱原料药及其含卡巴胆碱的制剂中卡巴胆碱含量及其杂质的液相色谱检测方法。
背景技术
卡巴胆碱为一种人工合成的M胆碱受体激动剂，具有促进胃肠动力扩张、血管抑制炎症因子释放等作用。临床上常用为快速强效缩瞳剂，具有双重缩瞳作用，能直接作用于瞳孔括约肌产生缩瞳作用，同时还有抗胆碱酯酶间接作用，能维持长时间的缩瞳效果。
目前国内外药典针对卡巴胆碱的原料药的含量测定用的是非水滴定法，如中国药典2010版二部、USP35、BP2012以及EP7.0；而对于卡巴胆碱制剂的含量测定，如中国药典收载的卡巴胆碱注射液以及USP35收载的卡巴胆碱滴眼液，用的是紫外分光光度法，前处理非常的繁琐，需要用到次氯酸钠、苯酚、盐酸等试剂。而杂质的检测方法，只有EP7.0收载了，选择的是薄层检视。以上检测方法，对主成分以及杂质没有进行分离检测，主成分卡巴胆碱的含量测定数据就会受到杂质的干扰，造成偏差，并且杂质的检查方法不够灵敏。这些方法操作复杂，结果重现性差。由于卡巴胆碱与其他胆碱类杂质都属于强极性的小分子化合物，一般的反相色谱柱上保留较弱，分离效果不佳；并且在紫外吸收光谱上末端吸收，流动相及杂质干扰较大，因此选择常规的RP-HPLC-UV法无法定量检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中操作复杂、重现性差、灵敏度低等缺陷，提供一种方便、快捷、准确的高效液相色谱方法来测定卡巴胆碱原料药以及制剂的卡巴胆碱的含量，并且还可以对杂质氯化胆碱和氯化乙酰胆碱进行定量检测，方法的专属性以及灵敏度提高，并且操作更为简单，通用性得以提高，使得药品的质量控制工艺得以提高。
本发明的卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法，包括下述步骤：
（1）对照品和供试品溶液制备
取对照品和供试品分别加体积比50-90:10-50的乙腈-水或甲醇-水配制成每1ml各含0.5-1.5mg对照品、供试品的溶液，摇匀过滤，分别取续滤液作为对照品溶液、供试品溶液；所述对照品为卡巴胆碱、氯化胆碱和氯化乙酰胆碱；所述供试品为卡巴胆碱原料药或者卡巴胆碱制剂；
（2）液相色谱分离
采用亲水相互作用色谱体系对卡巴胆碱及其杂质进行分离；采用蒸发光散射、示差折光检测器或者质谱检测器进行检测；色谱条件如下：
色谱柱：氨基、氰基、二醇基、酰胺基或磺酸基键合的硅胶色谱柱；色谱柱内径2-8mm，色谱柱长度250±100mm，填充物粒径1.5-10um；
流动相：甲醇和/或乙腈与醋酸铵水溶液的混合溶液，醋酸铵水溶液的浓度为5-60mmol/L；
流速：1.0±0.5ml/min；
柱温：30± 15℃；
蒸发光散射检测器的漂移管温度为80±5℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.6±0.5L/min；
（3）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量ug的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。
优选的，步骤（1）所述对照品和供试品的配制溶液为体积比70:30的乙腈-水溶液或甲醇-水溶液。
优选的，步骤（2）所述色谱柱为二醇基、酰胺基或磺酸基键合的硅胶色谱柱。
作为优选，步骤（2）所述流动相为甲醇：醋酸铵水溶液（v/v）=40~99%:1~60%或乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=40~99%:1~60%或甲醇：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v/v）=98~1%:98~1%：1~60%。
作为优选，本发明卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法，采用下述步骤：
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱、氯化乙酰胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含1mg对照品、供试品的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
称取卡巴胆碱原料药或者卡巴胆碱制剂，加体积比70:30的乙腈-水制成每1mL含1mg的溶液，用0.45um微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：酰胺基硅胶色谱柱；色谱柱内径4.6mm，色谱柱长度250mm，填充物粒径5um；
流动相：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=70%:30%，醋酸铵水溶液浓度为40mmol/L；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
采用蒸发光散射器进行检测，蒸发光散射器的漂移管温度为80℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.6L/min；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量ug的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。
本发明是一种卡巴胆碱原料药及其含卡巴胆碱的制剂中卡巴胆碱含量及其杂质的高效液相色谱检测方法。采用亲水相互作用色谱体系进行分离，流动相为甲醇或乙腈与醋酸铵的混合液或甲醇、乙腈与醋酸铵的混合液或甲醇、乙腈与醋酸铵的混合液等度分离，流速为0.5~1.5ml/min，柱温为15℃~45℃，样品预处理为采用乙腈与水或甲醇与水超声提取样品，采用蒸发光散射或者示差折光、质谱检测器进行检测，以外标法定量测定结果。所述亲水相互作用色谱体系，是极性基团键合硅胶为填充剂的液相色谱柱（NH2、SiO2、CN、DiO2、Amide、Amphion等）。优选的固定相为酰胺基键合的硅胶色谱柱。优选的色谱柱规格，内径是4.6mm，色谱柱长度是250mm，填充物粒径是5um。
本发明的检测方法能够将卡巴胆碱及在卡巴胆碱原料产品中或者卡巴胆碱制剂中所含杂质如氯化胆碱和氯化乙酰胆碱有效分离，从而实现精确测定卡巴胆碱原料药与制剂中卡巴胆碱的含量及其杂质的含量，灵敏度高、重现性良好，适用于卡巴胆碱原料药、卡巴胆碱注射液、卡巴胆碱滴眼液、卡巴胆碱眼内注射溶液的质量控制。本发明方法操作简捷，样品色谱分析只需20分钟内完成。
附图说明
图1为卡巴胆碱原料药在Hilic Amide色谱柱出的色谱图；
图2为卡巴胆碱注射液在Hilic Amide色谱柱出的色谱图；
图3为卡巴胆碱原料药在Hilic DiO2色谱柱出的色谱图；
图4为卡巴胆碱原料药在Hilic CN色谱柱出的色谱图；
图中，1：氯化胆碱；2：氯化乙酰胆碱；3：卡巴胆碱。
具体实施方式
下述实施例是对于本发明内容的进一步说明以作为对本发明技术内容的阐释，但本发明的实质内容并不仅限于下述实施例所述，本领域的普通技术人员可以且应当知晓任何基于本发明实质精神的简单变化或替换均应属于本发明所要求的保护范围。
实施例1
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱、氯化乙酰胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含1mg的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
取卡巴胆碱原料药，含量为99%，加体积比70:30的乙腈-水制成每1mL含1mg卡巴胆碱的溶液，用0.45um微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：酰胺基硅胶色谱柱（Hilic Amide）；色谱柱内径4.6mm，色谱柱长度250mm，填充物粒径5um；
流动相：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=70:30，醋酸铵水溶液浓度为40mmol/L；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
采用蒸发光散射器进行检测，蒸发光散射器的漂移管温度为80℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.6L/min；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量ug的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。色谱图如图1。
本发明方法的检测限为（信噪比≥3）；线性范围为，相关系数r为；精密度不超过2.0%；重复性不超过2.0%；回收率达到92%以上。
实施例2
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含1mg对照品、供试品的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
精密移取卡巴胆碱注射液，标示量为1ml：0.1mg，用0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：酰胺基硅胶色谱柱（Hilic Amide）；色谱柱内径3.9mm，色谱柱长度250mm，填充物粒径4um；
流动相：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=75%:25%，醋酸铵水溶液浓度为20mmol/L；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
采用蒸发光散射器进行检测，蒸发光散射器的漂移管温度为85℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.8L/min；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量ug的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。色谱图如图2。
实施例3
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱、氯化乙酰胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含1mg对照品、供试品的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
称取卡巴胆碱原料药，含量为99%，加体积比70:30的乙腈-水制成每1mL含1mg的溶液，用0.45um微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：二醇基硅胶色谱柱（Hilic DiO2）；色谱柱内径3.0mm，色谱柱长度150mm，填充物粒径3um；
流动相：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=80%:20%，醋酸铵水溶液浓度为10mmol/L；
流速：1.2ml/min；
柱温：25℃；
采用蒸发光散射器进行检测，蒸发光散射器的漂移管温度为80℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.6L/min；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量ug的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。色谱图如图3。
实施例4
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱、氯化乙酰胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含0.5mg对照品、供试品的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
称取卡巴胆碱原料药，含量为99%，加体积比70:30的乙腈-水制成每1mL含0.5mg的溶液，用0.45um微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：氰基键合硅胶色谱柱（Hilic CN）；色谱柱内径4.0mm，色谱柱长度150mm，填充物粒径5um；
流动相：甲醇：醋酸铵水溶液（v/v）=90:10，醋酸铵水溶液浓度为20mmol/L；
流速：0.8ml/min；
柱温：25℃；
采用示差折光检测器进行检测，检测器温度30℃；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积与进样量ug作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。色谱图如图4。

Claims (1)

1.一种卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法，其特征在于，包括下述步骤：
（1）对照品溶液制备
   取对照品卡巴胆碱、氯化胆碱、氯化乙酰胆碱适量加体积比70:30的乙腈-水制成每1ml各含1mg的溶液，摇匀，过0.45mm微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备
取卡巴胆碱原料药或者卡巴胆碱制剂适量，加体积比70:30的乙腈-水制成每1mL含1mg卡巴胆碱的溶液，用0.45μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
（3）液相色谱分离
色谱条件如下：
色谱柱：酰胺基键合的硅胶色谱柱；色谱柱内径4.6mm，色谱柱长度250mm，填充物粒径5μm；
流动相：乙腈：醋酸铵水溶液（v/v）=70:30，醋酸铵水溶液浓度为40mmol/L；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
采用蒸发光散射器进行检测，蒸发光散射器的漂移管温度为80℃，以高纯氮气作为雾化气，流速为1.6L/min；
（4）浓度计算方法和检测限
按外标法以峰面积的常用对数值与进样量μg的常用对数值作线性回归计算样品中卡巴胆碱及其杂质的含量。
CN201310470860.7A 2013-10-11 2013-10-11 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法 Expired - Fee Related CN103487545B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310470860.7A CN103487545B (zh) 2013-10-11 2013-10-11 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310470860.7A CN103487545B (zh) 2013-10-11 2013-10-11 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103487545A CN103487545A (zh) 2014-01-01
CN103487545B true CN103487545B (zh) 2015-04-22

Family

ID=49827931

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310470860.7A Expired - Fee Related CN103487545B (zh) 2013-10-11 2013-10-11 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103487545B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105891368A (zh) * 2016-05-10 2016-08-24 天津医科大学总医院 人外周血单个核细胞内乙酰胆碱含量的检测方法
CN106442835A (zh) * 2016-09-23 2017-02-22 瀚盟测试科技（天津）有限公司 血浆中乙酰胆碱的浓度的uplc‑ms/ms检测方法
CN112595799A (zh) * 2020-12-11 2021-04-02 南京明捷生物医药检测有限公司 一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的lc-ms法
CN113406259A (zh) * 2021-05-28 2021-09-17 海南海灵化学制药有限公司 一种拉氧头孢钠杂质的检测方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61172889A (ja) * 1985-01-29 1986-08-04 Nippon Oil & Fats Co Ltd ホスフアチジルコリンの分取方法
JPH0493655A (ja) * 1990-04-27 1992-03-26 Nisshin Flour Milling Co Ltd ホスファチジルコリンの定量方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Analysis of acetylcholine, choline and butyrobetaine in human liver tissues by hydrophilic interaction liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Yuan Wang等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20080229;第47卷;第871～872页 *
High-performance liquid chromatography of water-soluble choline metabolites;Mordechai liscovitch等;《Analytical Biochemistry》;19851115;第151卷;第182～187页 *
HPLC-MS/MS内标法同时测定果蔬中7种植物生长延缓剂残留;杨涛等;《广州化工》;20130630;第41卷(第12期);第150～152页 *
Quantification of acetylcholine,choline,betaine,and dimethylglycine in human plasma and urine using stable-isotope dilution ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Susanne H.Kirsch等;《Journal of Chromatography B》;20101023;第878卷;第3338～3344页 *
程钢等.HPLC-MS/ESI同时测定人血浆中米屈肼和左卡尼汀.《药物分析杂志》.2010,第30卷(第4期), *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103487545A (zh) 2014-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103487545B (zh) 卡巴胆碱及其杂质含量的液相色谱检测方法
CN101762653B (zh) 一种卷烟主流烟气中主要酚类化合物的测定方法
CN105092754A (zh) 一种利用hplc测定磺酸酯类基因毒性杂质的方法
CN102798678B (zh) 注射用泮托拉唑钠中依地酸钙钠的检测及含量测定方法
CN110068633A (zh) 一种布洛芬中警示结构物质的液相色谱检测方法
CN106033079B (zh) 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法
CN102507831B (zh) 全蚕粉中1-脱氧野尻霉素含量的测定方法
CN104914178B (zh) 高效液相色谱法测定蜂蜜中果糖和葡萄糖的方法
CN102384946B (zh) 通过高效液相色谱法分离测定恩替卡韦及其非对映异构体的方法
CN101093214A (zh) 一种测定抗癫痫药物血药浓度的方法
CN103926334A (zh) 高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法
CN108398497B (zh) 一种三(壬基酚)亚磷酸酯的高效液相色谱检测方法
CN103063794B (zh) 一种依帕司他片的含量检测控制方法
Rodríguez-Palma et al. A modified micro-solid phase extraction device for in-port elution and injection into portable liquid chromatography: A proof-of-concept study
CN102636582B (zh) 测定三氮脒颗粒中三氮脒和安替比林含量的方法
CN106153795A (zh) 测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法
CN103513000A (zh) 睡莲花的鉴别和含量测定方法
CN103675187A (zh) 一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法
CN103472153B (zh) 辣椒原料及其制品中罗丹明b的检测方法
CN102798674B (zh) 一种快速的硫酸依替米星中控检测方法
CN105954431A (zh) 一种用hplc分离测定奥培米芬原料药有关物质的方法
Jin et al. Development of a validated HPLC method for the simultaneous determination of D-and L-thyroxine in human plasma
CN112526013B (zh) 超高液相色谱法检测布洛芬药物中有关物质浓度方法
CN103163227A (zh) 一种测定非布司他及其制剂有关物质的方法
CN114324663B (zh) 检测氯诺昔康有关物质的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150422

Termination date: 20191011