CN103926334A

CN103926334A - 高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法

Info

Publication number: CN103926334A
Application number: CN201310016004.4A
Authority: CN
Inventors: 陈礼莉; 胡崇林; 李雯; 蒲友明
Original assignee: CHENGDU CHEMPARTNER Co Ltd
Current assignee: CHENGDU CHEMPARTNER Co Ltd
Priority date: 2013-01-16
Filing date: 2013-01-16
Publication date: 2014-07-16

Abstract

本发明公开了高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法；其步骤包括：将经预处理的待测样品进行高效液相色谱法检测，即可；检测使用梯度洗脱，流动相A为截止波长≤210nm缓冲盐，流动相B为乙腈；梯度洗脱的条件：以流动相A与流动相B的体积比（90：10）~（98：2）洗脱5分钟；后以流动相A与流动相B的体积比（20：80）~（10：90）洗脱，或线性洗脱至流动相A与流动相B的体积比（20：80）~（10：90）；洗脱至杂质除去。有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮。该方法能精确检测上述有机溶剂，方便快捷，灵敏度高，可检测低浓度样品，且准确度高。

Description

高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法。

背景技术

N,N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethyl formamide,DMF）是一种无色高沸点有机溶剂，其沸点为153℃。N,N-二甲基甲酰胺（DMF）能与水、乙醇、乙醚、醛、酮、酯、卤代烃和芳烃等混溶。其结构式为：

其分子式为：C₃H₇NO，分子量：73.10

N，N-二甲基乙酰胺（N,N-Dimethylacetamide，DMAC）是一种无色透明有机溶剂，其沸点为166℃。能与水、醇、醚、酯、苯、三氯甲烷和芳香化合物等有机溶剂任意混合。其结构式为：

其分子式为：C₄H₉NO，分子量：87.12

N-甲基吡咯烷酮（N-Methyl-2-Pyrrolidone，NMP）是一种无色透明油状液体，微有胺的气味，其沸点为203℃。能与水、醇、醚、酯、酮、卤代烃、芳烃和蓖麻油互溶。挥发度低，热稳定性、化学稳定性均佳，能随水蒸气挥发。有吸湿性。对光敏感。其结构式为：

其分子式为：C₅H₉NO，分子量：99.13

在药物合成过程中，DMF常常作为反应试剂或重结晶试剂；DMAC在医药和农药上大量用来合成抗菌素和农药杀虫剂；NMP是一种极性的非质子传递溶剂，广泛用于农药、医药和清洁剂等方面。在各国药典中药物中残留的DMF，DMAC和NMP均属于二类溶剂，是限制使用的，其残留限度分别是0.088％，0.109％和0.053％。

目前，药物中残留溶剂检测方法主要是顶空-气相色谱法。由于DMF，DMAC和NMP沸点高（分别是153℃，166℃和203℃），法规要求其残留限度低（分别是0.088％（880ppm），0.109%（1090ppm）和0.053％（530ppm）），用顶空气相色谱法常不能达到其检测灵敏度。因此，药典建议采用直接进样-气相色谱法检测这种高沸点溶剂DMF，DMAC和NMP，增大进样口温度，从而更好地气化DMF，DMAC和NMP，达到其检测灵敏度。但是，在实际操作中，直接进样-气相色谱法中，水相直接进样会对气相色谱仪及色谱柱造成不同程度的损害，对于水溶性药物，尤其是只能溶于水的药物，是不能采用直接进样-气相色谱法来进行检测，故水溶性药物中残留DMF，DMAC和NMP的检测成为难题。该现象亟待解决。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中水溶性药物中残留N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）的检测难度大，且可操作性不强的缺陷，提供一种利用高效液相色谱法（HPLC）检测药物中残留有机溶剂的方法，该方法能够精确检测水溶性药物中残留的N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP），方便快捷，灵敏度高，可检测低浓度样品，且准确度高。

高效液相色谱法（HPLC）是色谱法的重要分支，是以液体（不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等）为流动相，采用高压输液系统，将流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器（最常用的是紫外检测器）进行检测，从而实现对样品的分析。

现有技术中，没有用高效液相色谱法（HPLC）进行水溶性药物中残留的N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）检测的方法。本发明的发明人，根据高效液相色谱法的上述性质，尝试选择适合的条件，进行药物中残留的N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）的检测。该技术方案，填补了现有技术的空白，具有深远而重大的意义。

本发明的目的之一是，提供一种高效液相色谱法（HPLC）检测药物中残留有机溶剂的方法；

其步骤包括：将经过预处理的待测样品进行高效液相色谱法（HPLC）检测，即可；其中，所述的检测使用梯度洗脱的方法，流动相A为缓冲盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述的缓冲盐为截止波长≤210nm的缓冲盐；

所述的梯度洗脱的条件为：以流动相A与流动相B的体积比为（90：10）~（98：2）洗脱5分钟；之后以流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）洗脱，或线性洗脱至流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）；洗脱至杂质除去，即可。

其中，所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）中的一种或多种。

本发明中，所述的截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。其测量是用1cm光径的吸收池装溶剂，用空气为修比，改变照射波长，当吸光度A=1时，此时的波长称为该溶剂的截止波长。

本发明中，较佳的，所述的以流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）洗脱的洗脱时间为5分钟~10分钟，所述的线性洗脱至流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）的洗脱时间为5分钟~10分钟。

本发明中，较佳的，所述的经过预处理的待测样品为含待测样品0.1~100mg/ml的溶液；所述的溶液的溶剂为流动相A。

较佳的，所述的待测样品为可能含有N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP），且能溶于水、水与甲醇的混合液、以及水与乙腈的混合液的样品；更佳的，所述的水与甲醇的混合液中，水与甲醇的体积比为（90：10）~（100：0）；所述的水与乙腈的混合液中，水与乙腈的体积比为（90：10）~（100：0）；更佳的，所述的待测样品为磷丙泊酚钠药物样品。

本发明中，较佳的，所述的高效液相色谱法（HPLC）中，色谱柱为：十八硅烷键合硅胶色谱柱、辛烷键合硅胶色谱柱或苯基色谱柱；

较佳的，所述的高效液相色谱法的流动相为：

流动相A：pH4~10的磷酸盐缓冲液和/或pH4~10的乙酸盐缓冲液；

流动相B：乙腈；

更佳的，所述的磷酸盐缓冲液为NaH₂PO₄缓冲液；所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01~0.05mol/L；进一步更佳的，所述的pH值用0.1mol/L的NaOH水溶液调节。

更佳的，所述的乙酸盐缓冲液为乙酸铵缓冲液；进一步更佳的，所述的乙酸铵缓冲液的pH值为5.8。

较佳的，所述的流动相的洗脱的梯度条件如下：

时间min	缓冲盐%	乙腈%
			0.0	95	5
5.0	95	5

10	20	80
			15	20	80
15.01	95	5
			23.0	stop

较佳的，待测样品的流速为0.5~1.5mL/min；

较佳的，检测时的柱温为20~40℃；

较佳的，检测时的检测波长为210~240nm；

较佳的，检测时的进样体积为5~20μL。

本发明中，较佳的，所述的高效液相色谱法（HPLC）检测后，待测样品的含量的计算方法为：

采用下述公式计算样品中残留DMF，DMAC和NMP的含量：

其中，X（％）代表残留溶剂的含量；

A_样品为样品中残留DMF，DMAC或NMP的色谱峰面积；

A_标准为标准溶液中DMF，DMAC或NMP的面积；

C_标准溶剂为标准溶液中DMF，DMAC或NMP的浓度；

C_样品为样品的浓度。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明采用高效液相色谱法（HPLC）检测药物中残留N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）的方法，简单快捷，检测灵敏度高，N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP）的检测底限分别低至0.46ppm、0.51ppm和0.57ppm，待测样品的浓度可分别低至0.05mg/mL、0.05mg/mL和0.10mg/mL，结果准确可靠。

附图说明

图1为高效液相色谱法（HPLC）的空白溶剂的色谱图。

图2为高效液相色谱法（HPLC）的混合溶剂标准溶液（N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP））的色谱图。

图3为高效液相色谱法（HPLC）检测磷丙泊酚钠药物样品的色谱图。

图4为高效液相色谱法（HPLC）检测检测混合溶剂标准溶液（N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP））和磷丙泊酚钠样品混合液的色谱图。

图5为顶空-气相色谱法检测磷丙泊酚钠药物样品的色谱图。

图6为高效液相色谱法（HPLC）检测检测混合溶剂标准溶液（N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP））和磷丙泊酚钠样品混合液在254nm波长下的色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

一、混合溶剂标准溶液和待测样品（如磷丙泊酚钠药物样品）溶液的制备

1、混合溶剂标准溶液（0.088mg/mL DMF，0.109mg/mL DMAC和0.053mg/mL NMP）的制备：

称取88mg DMF，109mg DMAC和53mg NMP于含有3mL流动相A的10mL容量瓶中，用流动相A溶解后定容至刻度后混匀。再精密移取1.0mL该溶液于100mL容量瓶中，用流动相A定容到刻度，摇匀后备进样用，标识为STD#1对照溶液；

其中，所述的流动相A为0.01mol/L的NaH₂PO₄缓冲液，所述的NaH₂PO₄缓冲液的pH值为6.0。

为了检验标准1（STD#1）的配制及其检测是否可靠，以同样的方法制备STD#2对照溶液。

2、待测样品溶液（100mg/mL的磷丙泊酚钠药物样品，成都睿智化学研究有限公司生产）的制备：

称取水溶性药物待测样品0.5g放入5mL容量瓶中，用流动相A溶解并稀释定容。标识为SS#1样品溶液。

为了减少误差，计算平均值，以相同的方法制备SS#2样品溶液。

二、待测样品的测试

1、高效液相色谱法（HPLC）的色谱条件

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪，带PDA检测器或等效仪器

色谱柱：十八硅烷键合硅胶色谱柱。

流动相：流动相A：0.01mol/L的NaH₂PO₄缓冲液（0.1mol/LNaOH调节pH至6）；流动相B：乙腈；

流动相梯度条件如下：

时间min	NaH₂PO₄缓冲液%（A%）	乙腈%（B%）
			0.0	95	5
5.0	95	5
			10	20	80
20	20	80
			20.0	stop

流速：1.0mL/min；

柱温：35℃；

检测波长：210nm；

进样体积：10μL；

空白溶剂的色谱图如图1所示，空白溶剂样品检测为本领域常规，在每次检测前进行，其检测的色谱条件为：流动相A中不添加任何样品，其余同待测样品检测的检测条件。

混合溶剂标准溶液（N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP））的色谱图如图2所示，其中，1为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的色谱峰，2为N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）的色谱峰，3为N-甲基吡咯烷酮（NMP）的色谱峰。

磷丙泊酚钠药物样品色谱图如图3所示，其中，1为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的色谱峰，2为N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）的色谱峰，3为N-甲基吡咯烷酮（NMP）的色谱峰。

混合溶剂标准溶液（N,N-二甲基甲酰胺（DMF），N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）和N-甲基吡咯烷酮（NMP））添加磷丙泊酚钠样品色谱图如图4所示，其中，1为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的色谱峰，2为N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）的色谱峰，3为N-甲基吡咯烷酮（NMP）的色谱峰。

三、待测样品的含量的计算

采用下述公式计算样品中残留DMF，DMAC和NMP的含量：

其中，X（％）代表待测样品中残留的溶剂的含量；

A_样品为样品中残留DMF，DMAC或NMP的色谱峰面积；

A_标准为标准溶液中DMF，DMAC或NMP的面积；

C_标准溶剂为标准溶液中DMF，DMAC或NMP的浓度；

C_样品为样品的浓度。

根据上述检测步骤，测得参数如下：

对于DMF：A_样品为0.8；A_标准为3315；C_标准溶剂为0.09194mg/mL；C_样品为95.68mg/mL。

由此测得的DMF浓度为<LOQ（<0.46ppm）。

对于DMAC：A_样品为13.6；A_标准为3340.6；C_标准溶剂为0.1025mg/mL；C_样品为95.68mg/mL。

由此测得的DMAC浓度为4.36ppm。

对于NMP：A_样品为3.8；A_标准为1037.6；C_标准溶剂为0.05671mg/mL；C_样 _品为95.68mg/mL。

由此测得的NMP浓度为2.17ppm。

实验中DMF、DMAC和NMP的混合标准工作曲线是用空白溶剂加混合标准溶液制备，制备过程中DMF、DMAC、NMP的浓度分别为：

DMF：0.04597、0.9194、9.194、45.97、91.94、137.91μg/mL，

DMAC：0.05125、1.025、10.25、51.25、102.5、153.75μg/mL，

NMP：0.05671、0.5671、5.671、28.355、56.71、85.065μg/mL。

在本法所确定的实验条件下进样，测定其峰面积，以浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制DMF、DMAC和NMP的混合标准溶液工作曲线，得标准曲线方程及其相关系数，如表1所示。

表1：标准曲线方程及其相关系数

化合物名称	曲线方程	相关系数
			N,N-二甲基甲酰胺（DMF）	Y=34.18X+23.49	0.9997
N,N-二甲基乙酰胺（DMAC）	Y=29.81X+10.43	0.9999
			N-甲基吡咯烷酮（NMP）	Y=18.50X+1.089	1.0000

残留有机溶剂的检测其实是限度检测，一般来说，只要药物中残留溶剂峰面积低于该溶剂限度的峰面积，即认为该药物中的残留有机溶剂是合格的。由于在方法的验证中已经用标准溶剂做过标准曲线，线性和方法回收率均是符合要求的，因此用外标法的绝对校正因子计算药物中残留溶剂含量，相对每次检测样品均需做标准曲线而言，显得操作简单便捷。因此，本发明中，使用外标法，通过上述待测样品的含量的计算中的公式，计算样品中残留DMF，DMAC和NMP的含量。

回收率和精密度的评价：

空白样品中分别添加五个不同浓度水平（1％、10％、50％、100％和150％）的DMF、DMAC和NMP混合标准溶液；即

DMF添加浓度分别为9.194ng/mg、91.94ng/mg、459.7ng/mg、919.4ng/mg和1379.1ng/mg；

DMAC添加浓度分别为10.25ng/mg、100.25ng/mg、512.5ng/mg、1025ng/mg和1537.5ng/mg；

NMP添加浓度分别为5.671ng/mg、56.71ng/mg、283.55ng/mg、567.1ng/mg和850.65ng/mg，

按照操作方法制备样品溶液。回收率范围及精密度见表2。

表2：回收率及变异系数

本方法对水溶性药物的检出限为：

DMF：0.46ppm；DMAC：0.51ppm；NMP：0.57ppm。

实施例2

色谱柱：辛烷键合硅胶色谱柱。

流动相：流动相A：乙酸铵，乙酸铵的pH值为5.8；流动相B：乙腈；

流速：0.5mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：230nm；

进样体积：5μL；

其余操作步骤及条件均同实施例1。

经过上述实验步骤，能够测得样品中DMF、DMAC和NMP的含量，且检测结果准确可靠。

实施例3

色谱柱：苯基色谱柱。

流动相：流动相A：0.01mol/L的NaH₂PO₄缓冲液（0.1mol/L NaOH调节pH至10）；流动相B：乙腈；

流动相梯度条件如下：

时间min	NaH₂PO₄缓冲液%（A%）	乙腈%（B%）
			0.0	90	10
5.0	90	10
			10	10	90
20	10	90
			20.0	stop

流速：1.5mL/min；

柱温：20℃；

检测波长：240nm；

进样体积：5μL；

其余操作步骤及条件均同实施例1。

实施例4

流动相：流动相A：0.01mol/L的NaH₂PO₄缓冲液（0.1mol/LNaOH调节pH至4）；流动相B：乙腈；

流动相梯度条件如下：

时间min	NaH₂PO₄缓冲液%（A%）	乙腈%（B%）
			0.0	98	2
5.0	98	2
			10	15	85
20	15	85
			20.0	stop

柱温：40℃；

检测波长：220nm；

进样体积：20μL；

其余操作步骤及条件均同实施例1。

对比实施例1

采用本发明限定范围外的顶空-气相色谱法，空白溶剂、混合标准溶剂制备方法如实施例1，顶空-气相色谱条件如下：

结果如图5所示。其中，1”表示混合标准溶液-10000%的曲线图，2”表示混合标准溶液-100%的曲线图，3”为空白样的曲线图；1为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的色谱峰，2为N-N-二甲基乙酰胺（DMAC）的色谱峰。

从图5可以看出：当按照药典限度要求制备混合溶剂的标准溶液，所用药品量为100mg/mL时，DMF（0.088mg/mL）DMAC（0.109mg/mL）和NMP（0.053mg/mL）是不能检出的，因此，顶空-气相色谱法不能检测出DMF、DMAC和NMP的含量。

对比实施例2

检测波长为254nm以上，其余待测样品及检测步骤和条件均同实施例1。

结果如图6所示，其中，1’表示混合标准溶剂的曲线图，2’表示空白样的曲线图；1为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的色谱峰，2为N-N-二甲基乙酰胺（DMAC），3为N-甲基吡咯烷酮的色谱峰。

由图6可以得知：DMF、DMAC和NMP检测灵敏度急剧下降，DMF的信噪比（S/N）为8.6，DMAC的信噪比（S/N）为7.2，NMP的信噪比（S/N）为3.2，均没有达到定量限的信噪比（定量限的信噪比为≥10），难以达到定量检测水溶性药物中残留DMF、DMAC和NMP的要求。

信噪比的计算方法为：信噪比（S/N）=2H/h；其中，H是峰高，即峰最高点到基线的距离；h是噪音最大值和最小值之间的差值。

Claims

1.一种高效液相色谱法检测药物中残留有机溶剂的方法；其特征在于：其步骤包括：将经过预处理的待测样品进行高效液相色谱法检测，即可；其中，所述的检测使用梯度洗脱的方法，流动相A为缓冲盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述的缓冲盐为截止波长≤210nm的缓冲盐；

所述的梯度洗脱的条件为：以流动相A与流动相B的体积比为（90：10）~（98：2）洗脱5分钟；之后以流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）洗脱，或线性洗脱至流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）；洗脱至杂质除去，即可；

其中，所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的之后以流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）洗脱的洗脱时间为5分钟~10分钟，所述的线性洗脱至流动相A与流动相B的体积比为（20：80）~（10：90）的洗脱时间为5分钟~10分钟。

3.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的经过预处理的待测样品为含待测样品0.1~100mg/ml的溶液；所述的溶液的溶剂为流动相A。

4.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的待测样品为能溶于水、水与甲醇的混合液、以及水与乙腈的混合液的样品；较佳的，所述的待测样品为磷丙泊酚钠药物样品。

5.如权利要求4所述的方法；其特征在于：所述的水与甲醇的混合液中，水与甲醇的体积比为（90：10）~（100：0）；所述的水与乙腈的混合液中，水与乙腈的体积比为（90：10）~（100：0）。

6.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的高效液相色谱法中的色谱柱为：十八硅烷键合硅胶色谱柱、辛烷键合硅胶色谱柱或苯基色谱柱。

7.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的高效液相色谱法的流动相为：

流动相A：pH4~10的磷酸盐缓冲液和/或pH4~10的乙酸盐缓冲液；

流动相B：乙腈；

较佳的，所述的磷酸盐缓冲液为NaH₂PO₄缓冲液；所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01~0.05mol/L；所述的pH值用0.1mol/L的NaOH水溶液调节；

较佳的，所述的乙酸盐缓冲液为乙酸铵缓冲液；更佳的，所述的乙酸铵缓冲液的pH值为5.8。

8.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的流动相的洗脱的梯度条件如下：

时间min 缓冲盐% 乙腈% 0.0 95 5 5.0 95 5 10 20 80 15 20 80 15.01 95 5 23.0 stop

9.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的待测样品的流速为0.5~1.5mL/min；所述的检测时的柱温为20~40℃；所述的检测时的检测波长为210~240nm；所述的检测时的进样体积为5~20μL。

10.如权利要求1所述的方法；其特征在于：所述的高效液相色谱法检测后，待测样品的含量的计算方法为：

采用下述公式计算样品中残留N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮的含量：

其中，X（％）代表残留溶剂的含量；

A_样品为样品中残留N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮的色谱峰面积；

A_标准为标准溶液中N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮的面积；

C_标准溶剂为标准溶液中N,N-二甲基甲酰胺，N-N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮的浓度；

C_样品为样品的浓度。