CN104569265B - 一种舒筋风湿酒的质量检测方法 - Google Patents
一种舒筋风湿酒的质量检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种舒筋风湿酒的质量检测方法，该检测方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件。本发明提供的检测方法简化了提样步骤；缩短了回流时间；减少了萃取试剂三氯甲烷的用量；提高了效率，更加经济环保。
Description
技术领域
本发明涉及检测方法，具体涉及一种舒筋风湿酒的质量检测方法。
背景技术
舒筋风湿酒，其处方为春根藤30g、络石藤30g、鸡血藤30g、血风藤20g、乌多年30g、虎杖10g、水高丽30g、黑老虎根20g。其制法为：以上八味药材，粉碎成细粉，加白酒1050ml，浸泡1小时，再加热回流5.5小时，滤过，滤液备用；另取蔗糖制成单糖浆，与上述滤液混合，加入白酒至1000ml，混匀，滤过，灌装，即得。其功能与主治为：祛风湿，舒筋活络。用于风湿性关节痛，跌打损伤，筋骨疼痛，腰肢酸痛等症。
已公开的舒筋风湿酒质量检测方法记载于《国家中成药标准汇编》经络肢体脑系分册第654-657页，具体为：
供试品溶液的制备：精密量取本品10ml，蒸干，残渣加2.5mol/l硫酸溶液30ml使溶解，移至锥形瓶中，置沸水浴中加热回流1小时，冷却，加三氯甲烷30ml，加入回流1小时，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤溶液，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷振摇提取5次，每次30nl，合并三氯甲烷液，用无水硫酸钠适量脱水，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀、即得。
对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
由于此检测方法存在样品处理方法复杂；耗时长，效率低；且萃取试剂用量大，污染环境，不经济环保等缺陷，申请人提供了一种检测舒筋风湿酒的新方法，可简化提样步骤；缩短回流时间；减少萃取试剂三氯甲烷的用量；提高效率，且经济环保。
2010年版《中国药典》第一部中的虎杖原药材检测项下，公开了大黄素的含量测定， 其中供试品溶液的制备和色谱检测条件为：
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.1g，精密称定，精密加入三氯甲烷25ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，称定重量，置80℃水浴中加热回流2小时，冷却至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，精密量取10ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅氧烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1磷酸溶液(80：20)为流动相；检测波长为254nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
若采用虎杖原药材的含量检测方法直接检测舒筋风湿酒的含量，那么会出现以下问题：1.舒筋风湿酒的样品为液体样品且含有挥发性溶剂乙醇，采用移液管量取体积比称重更方便，准确。2.虎杖含量测定方法中，供试品加热回流时间更长，需2小时，实际考察发现回流超过30min，大黄素含量会下降。3.萃取分液如若采用虎杖方法，则比产品方法少一次萃取，实验证明采用一次分液，大黄素萃取不完全。4.虎杖检测方法没有对分液合并的三氯甲烷溶液采用无水硫酸钠脱水处理，而少量的硫酸溶液进入到三氯甲烷溶液中将在蒸干的过程中使大黄素变黑，碳化，严重影响其含量。
因此，需要提供一种步骤简单，溶剂用量少，经济环保，耗时短，提取大黄素含量高的方法，以便检测舒筋风湿酒，提高产品质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种舒筋风湿酒的质量检测方法。
本发明提供的一种舒筋风湿酒的质量检测方法，该检测方法包括以下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、色谱条件。
所述供试品溶液的制备包括以下步骤：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入1-4mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各15-30ml，置80℃水浴加热回流15-90分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15-30ml三氯甲烷振摇提取1-2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得。
优选地，所述供试品溶液的制备：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入1-2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各15-30ml，置80℃水浴加热回流30-60分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15-30ml三氯甲烷振摇提取1-2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得。
进一步优选，所述供试品溶液的制备：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入2.5mol/l 硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流30-60分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1-2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得。
所述色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm。
具体的，本发明提供的质量检测方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入1-2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各15-30ml，置80℃水浴加热回流30-60分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15-30ml三氯甲烷振摇提取1-2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm；
检测方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选地，该方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm；
检测方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明提供的检测方法中，每1ml舒筋风湿酒中含大黄素不得少于90μg。
本发明提供的方法具有以下优点：
1、与原方法相比，本发明具有以下不同：
2、本发明优势：
1)与原检测方法相比：改进了样品处理方法，包括：简化了提样步骤；缩短了回流时间；减少了萃取试剂三氯甲烷的用量；提高了效率，更加经济环保。
2)本发明供试品溶液的处理方法，不仅在舒筋风湿酒的含量检测中，可以使大黄素的含量更高，检测结果更稳定，同时，也可以用于其他药材中大黄素的含量检测，适用范围广。
3)本发明含量测定方法，稳定性好、灵敏度高，用本方法检测出的产品质量稳定。
附图说明
图1-A、图1-B、图1-C为HPLC色谱图，其中，A为对照品溶液、B为供试品溶液、C为阴性样品溶液；
图2：大黄素线性关系曲线图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
1、实验材料
1.1、样品来源：
舒筋风湿酒由株洲千金药业股份有限公司提供。
1.2仪器与试剂：
仪器：高效液相色谱仪器：Agilent1200；VWD检测器；
超纯水机(ABW-1001-U型艾科浦)。
试剂：甲醇(色谱纯，天津市密欧化学试剂有限公司)；
无水乙醇(分析纯，湖南汇虹试剂有限公司)；
环己烷(分析纯，湖南汇虹试剂有限公司)；
乙酸乙酯(分析纯，西陇化工股份有限公司)；
石油醚(60-90℃)(分析纯天津市密欧化学试剂有限公司)；
冰醋酸(分析纯湖南汇虹试剂有限公司)；
三氯甲烷(分析纯，天津市富宇精细化工股份有限公司)；
甲苯(分析纯湖南汇虹试剂有限公司)；
丙酮(分析纯，株洲石英化玻有限公司)；
水(重蒸馏，临用前制备)；
磷酸(分析纯，湖南汇虹试剂有限公司)。
1.3对照品
大黄素对照品(中国食品药品检定研究院，含量测定用，批号：110756-200110)。
2、色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)；
流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；柱温：35℃；进样量：10μL；理论板数按大黄素峰计算不低于1500。
3、供试品溶液的制备：
方法一：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流15分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法二：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法三：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流60分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法四：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及 三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流90分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法五：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml，三氯甲烷振摇提取2次，每次30ml，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法一、方法二、方法三、方法四比较不同提取时间；方法二、方法五比较不同萃取次数。
方法六：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入1mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各15ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法七：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流60分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法八：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入4mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各15ml，置80℃水浴加热回流90分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法九：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入4mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各20ml，置80℃水浴加热回流15分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用20ml三氯甲烷振摇提取2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续 滤液即得；
方法十：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入3mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各25ml，置80℃水浴加热回流80分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用25ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法十一：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各20ml，置80℃水浴加热回流20分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用20ml三氯甲烷振摇提取2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法十二：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入1.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流50分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15ml三氯甲烷振摇提取2次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法十三：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入1.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各20ml，置80℃水浴加热回流40分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用20ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法十四：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入2mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各25ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得；
方法十五：精密量取舒筋风湿酒10ml(批号20130103)，依次加入1mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流90分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用15ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过， 取续滤液即得。
4、阴性样品溶液的制备
按处方配比，取除虎杖外的其他药材，按工艺制备制成缺虎杖的阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成缺虎杖的阴性样品溶液。
5、对照品溶液的制备
取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
6、色谱条件与专属性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算不低于1500。见图1-A、1-B和1-C。
图1-A、1-B和1-C结果显示：按照上述色谱条件，大黄素分离很好，阴性样品大黄素峰面积为供试品的4％以内，专属性较强。
7、线性关系考察
取大黄素对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，定容。配置成质量浓度为330μg/ml的对照品溶液。分别依次将其稀释一倍，稀释四次，得到四个浓度的对照品溶液：165.00μg/ml、82.66μg/ml、41.45μg/ml、20.79μg/ml、10.41μg/ml。将以上共五个浓度的对照品进样分析，按2项下的色谱条件测定大黄素的峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)，样品浓度(μg/ml)为横坐标(X)，得大黄素回归方程Y＝36.91926X+26.44238(r＝0.99997)。
见表1和图2。
表1 大黄素线性关系考察结果
| 进样浓度(μg/ml) | 10.41 | 20.79 | 41.45 | 82.66 | 165.00 | 330.00 |
| 进样量(μg) | 0.1041 | 0.2079 | 0.4145 | 0.8266 | 1.6500 | 3.3000 |
| 峰面积值 | 386.72 | 773.64 | 1571.93 | 3094.43 | 6151.95 | 12188.95 |
表1和图2结果显示：大黄素在10.41-330.00μg/ml线性良好。
8、精密度试验
分别精密吸取同一供试品溶液(批号20130103)10μl，采用供试品溶液制备方法3中的方法二制备供试品溶液，连续测定6次，按2项下的色谱条件测定大黄素的峰面积，见表2。
表2 大黄素精密度试验结果
表2结果显示：其RSD为0.23％。
结果表明：仪器精密度良好，
9 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号20130103)10μl，采用供试品溶液制备方法3中的方法二制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、16、24小时进样，按2项下的色谱条件测定大黄素的含量。结果见表3。
表3 大黄素稳定性试验考察结果
表3结果显示：RSD为0.31％。
结果表明：供试品溶液在24h内稳定。
10 重复性试验
精密量取本品(批号20130103)10ml各6份，按照3项下供试品溶液的制备操作(采用供试品溶液制备方法3中的方法二制备供试品溶液)，按2项下的色谱条件测定大黄素的峰面积，结果见表4。
表4 大黄素重复性试验考察结果
表4结果显示：RSD为1.8％。
结果表明该方法重复性良好。
11 加样回收试验
分别精密吸取大黄素0.5944mg/ml对照品溶液1ml 6份，置锥形瓶中，水浴挥干甲醇，分别精密吸取本品(批号20130103)、白酒各5ml于上述锥形瓶中，按照3项下供试品溶液的制备操作(采用供试品溶液制备方法3中的方法二制备供试品溶液)，按2项下的色谱条件测定含量，计算回收率，结果见表5。
表5 大黄素加样回收率试验(n＝6)
12 检测方法：
精密吸取3项下各供试品溶液制备方法制备的供试品溶液及5项下制备的对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按2项下所述色谱条件测定，记录色谱峰。
结果：见表6
表6 不同供试品溶液制备方法的检测结果
| 供试品溶液的制备方法 | 大黄素含量(μg/ml) |
| 方法一 | 101 |
| 方法二 | 114 |
| 方法三 | 111 |
| 方法四 | 108 |
| 方法五 | 114 |
| 方法六 | 103 |
| 方法七 | 111 |
| 方法八 | 94 |
| 方法九 | 97 |
| 方法十 | 96 |
| 方法十一 | 106 |
| 方法十二 | 105 |
| 方法十三 | 109 |
| 方法十四 | 107 |
| 方法十五 | 99 |
实施例2：现有方法与实施例1检测方法的比较
1、针对不同批号的样品，采用实施例1的十五种供试品的方法进行检测，同时，采用对比例1和对比例2的方法进行检测，具体为：
对比例1：取本发明中的舒筋风湿酒(批号20130106)10ml，按照《中国药典》2010年版第一部虎杖原药材项下供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，并按照公开的虎杖原药材项下的色谱条件测定大黄素含量。
对比例2：取本发明中的舒筋风湿酒(批号20130106)10ml，按照舒筋风湿酒标准中公开的原舒筋风湿酒的含量测定方法中供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，并按照原方法的色谱条件测定大黄素含量。
2、实验结果
2.1 样品批次为20130106的检测结果：见表7
表7 大黄素的含量测定结果对比
表7结果显示：对比例1、2的含量不高于85μg/ml，本发明实施例1的十五种方法中，最低为95μg/ml，最高为115μg/ml。
2.2 样品批次为20130108的检测结果：见表8
表8 大黄素的含量测定结果对比
表8结果显示：对比例1、2的结果分别为83μg/ml、79μg/ml，而本发明提供的方法中最低为93μg/ml，最高达112μg/ml。
以上结果表明：用本发明供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液，在含量测定过程中，大黄素含量均比对比例1、对比例2的含量高。
实施例3：虎杖标准检测以下三批次的舒筋风湿酒
采用的供试品溶液同实施例1中第3项下的方法二。
检测方法采用《中国药典》2010年版，虎杖原药材项下的含量检测方法，检测结果见表9：
表9 三批产品含量检测结果对比
通过考察以上三批产品大黄素含量，表9结果显示：三批产品采用本发明检测方法的大黄素含量值远高于采用虎杖原药材含量检测方法测得的大黄素含量，说明本发明的检测方法更加有效。
从样品处理方法上比较，本发明的样品处理方法，回流时间更短，效率更高。
实施例4：
1、仪器与试剂：同实施例1。
2、实验样品：同实施例1。
色谱条件：Agilent TC-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；甲醇-0.1％磷酸溶液(65:35)为流动相；检测波长为254nm。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500。
3、供试品溶液的制备
采用虎杖原药材检测项下的供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，参数与实施例1中的相同。
4、对照品溶液的制备
取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
5、色谱条件与专属性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(82:18)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算不低于1500。
6、样品含量测定
取本品十批，分别照本实施例3项下供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液各10μl，按本实施例5项下色谱条件测定，计算样品中大黄素的含量。
7、试验结果：见表10。
表10 十批样品的含量测定结果
通过考察以上十批产品的含量，表10结果显示：十批产品采用虎杖原药材检测项下的检测方法，平均含量为82.4μg/ml，远低于本发明实施例2中的含量平均值105。
结果表明：用虎杖原药材项下检测方法检测大黄素，大黄素在提取过程中损失较大。
实施例5：
1、仪器与试剂：同实施例1。
2、实验样品：同实施例1。
色谱条件：Agilent TC-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；甲醇-0.1％磷酸溶液(65:35)为流动相；检测波长为254nm。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500。
3、供试品溶液的制备
采用原舒筋风湿酒检测方法中供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，参数与实施例1中的相同。
4、对照品溶液的制备
取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
5、色谱条件与专属性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算不低于1500。
6、样品含量测定
取本品十批，分别照3项下供试品溶液制备方法中的方法二制备，分别精密吸取供试品溶液各10μl，按5项上述色谱条件测定，计算样品中大黄素的含量。
7、试验结果：见表11。
表11 十批样品的含量测定结果
通过考察以上十批产品的含量，表11结果显示：十批产品采用实施例6的检测方法平均含量为75.1μg/ml，低于实施例2的含量平均值105.0。
结果表明：用原舒筋风湿酒的供试品制备方法检测大黄素，大黄素在提取过程中损失较大。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (2)
1.一种舒筋风湿酒的质量检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：精密量取舒筋风湿酒10ml，依次加入2.5mol/l硫酸溶液及三氯甲烷各30ml，置80℃水浴加热回流30分钟，冷却，分取三氯甲烷液，酸液用30ml三氯甲烷振摇提取1次，用无水硫酸钠脱水，合并三氯甲烷液，三氯甲烷液70℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0.1％磷酸溶液按照比例为82：18为流动相；检测波长为254nm；
检测方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，每1ml舒筋风湿酒中含大黄素不得少于90μg。
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