CN111363822A - 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 - Google Patents
包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111363822A CN111363822A CN202010242717.2A CN202010242717A CN111363822A CN 111363822 A CN111363822 A CN 111363822A CN 202010242717 A CN202010242717 A CN 202010242717A CN 111363822 A CN111363822 A CN 111363822A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mirna
- solution
- nanoparticle
- nanoparticle solution
- cooh
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 100
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 57
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 17
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 76
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 58
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 24
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 claims description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 14
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 13
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 12
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 8
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 claims description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 6
- 108091086713 miR-96 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091028482 miR-96-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091090007 miR-96-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 claims description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 claims description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims description 3
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 3
- CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-5-sulfanylidenepyrrolidin-2-one Chemical compound ON1C(=O)CCC1=S CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 2
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 7
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 6
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 206010023215 Joint effusion Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 201000001819 hydrarthrosis Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2367/00—Characterised by the use of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Derivatives of such polymers
- C08J2367/04—Polyesters derived from hydroxy carboxylic acids, e.g. lactones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2371/00—Characterised by the use of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Derivatives of such polymers
- C08J2371/02—Polyalkylene oxides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2387/00—Characterised by the use of unspecified macromolecular compounds, obtained otherwise than by polymerisation reactions only involving unsaturated carbon-to-carbon bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2471/00—Characterised by the use of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Derivatives of such polymers
- C08J2471/02—Polyalkylene oxides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明提供一种纳米颗粒溶液，其包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，特别是修饰有功能分子例如核苷酸序列的纳米颗粒。本发明还提供制备所述纳米颗粒溶液的方法，以及利用所述纳米颗粒溶液检测微小RNA(miRNA)标志物的方法。
Description
技术领域
本发明涉及纳米材料和医用纳米探针领域，具体涉及一种纳米颗粒溶液，其包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，特别是修饰有功能分子例如核苷酸序列的纳米颗粒。本发明还涉及制备所述纳米颗粒溶液的方法，以及利用所述纳米颗粒溶液检测微小RNA(miRNA)标志物的方法。
背景技术
由于其独特的物理化学性能，纳米材料在医学领域中，尤其是在药物递送、医学检测、生物传感、医用材料改性等方面具有良好的应用前景。
在纳米材料的生物医学诊断应用中，会采用纳米颗粒来检测疾病标志物，通过比较检测前后纳米颗粒的荧光、颜色、聚集状态等变化对疾病进行诊断。其中，以生物可降解聚合物和天然磷脂等为原料的纳米颗粒因具有良好的生物相容性和循环稳定性，已被广泛用于药物运输和生物传感应用中。
对癌症患者进行早期筛查、早期确诊并进行治疗，能够显著提高患者治疗生存率，对癌症临床治疗具有重要意义。癌细胞的特征性分泌物及特异性抗原的单克隆抗体因具有检测方法便捷、检测灵敏度高等优点，已被用于临床的早期癌症筛查。然而，肿瘤分泌物检测受个体差异性影响较大，而癌细胞单克隆抗体检测存在检测成本高、干扰因素多、检测稳定性差等缺点，也限制了其临床应用。
miRNA是长度为20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过调控基因的翻译过程来调控基因表达。其中，能够调控癌细胞无限增殖、免疫逃逸、细胞迁移和血管生成等过程的miRNA正逐渐成为癌症检测和治疗的特定。另外，miRNA具有高度的特异性、序列保守等特点，是实现癌症超早期、超灵敏体外诊断的潜在选择。
现有的癌症早期诊断技术存在检测特异性差、检测结果不稳定、检测成本高等缺点，难以在癌症早期筛查中普及。另一方面，传统的miRNA检测手段主要为Northern杂交、微阵点分析和荧光定量PCR，这些检测手段耗时耗力、过程复杂、处理技术要求高、成本高，无法满足临床癌症早期筛查的要求。
借助高稳定性和安全性的纳米材料实现快速高效的miRNA检测，具有重要的应用和研究意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种制备方法简单、血液稳定性高、生物安全性良好的聚合物胶束纳米颗粒溶液，通过在颗粒表面交联特定的核苷酸序列捕获特异性miRNA，该纳米颗粒捕获miRNA后会导致阿霉素分子的荧光淬灭，从而检出血液样本中的miRNA。本发明的纳米颗粒溶液和检测方法可促进miRNA检测技术更加便捷和高效，适用于对多种疾病尤其是癌症标志物的超早期、超灵敏体外检测。
本发明包括以下方面：
根据本发明的第一方面，提供了一种纳米颗粒溶液，所述纳米颗粒溶液包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，所述纳米颗粒含有质量比为20:1～5:1的聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)；在另一实施方案中，所述纳米颗粒由质量比为20:1～5:1的聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)组成。
优选地，本发明的纳米颗粒溶液所含的纳米颗粒表面结合有功能分子，例如可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列、可靶向肿瘤细胞的靶向性分子、可与特异性抗原结合的抗体等。
优选地，本发明的纳米颗粒溶液所含的纳米颗粒的粒径大小为30～200nm，表面电荷为-20～-50mV。
优选地，在本发明的纳米颗粒溶液中，纳米颗粒表面结合的功能分子为可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列。在所述核苷酸序列与特定miRNA标志物互补配对形成核苷酸双链后，阿霉素分子可嵌合至所述核苷酸双链，进而导致嵌合的阿霉素分子在荧光强度检测中发生荧光淬灭。更优选的是，所述核苷酸序列为可通过化学交联法与所述纳米颗粒表面羧基结合的5′端氨基化的DNA单链。
在本发明的实施方案中，所述miRNA标志物包括：癌症miRNA标志物，如miR-96-5p、miRNA-23b、miRNA-31、miRNA-21、miRNA-152、miRNA-451；类风湿性关节炎特征性miRNA，如miRNA-16、miRNA-155；肺结核特征性miRNA，如miRNA-150。
根据本发明的第二方面，提供了使用本发明第一方面所述的纳米颗粒溶液检测样品中特定miRNA标志物的方法，该方法包括以下步骤：
(1)取微量样品(<0.1mL)加至纳米颗粒溶液中，混合均匀并在常温静置10～60min，所述纳米颗粒溶液中的纳米颗粒表面结合有可与所述特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列；
(2)向(1)所得混合溶液加入10～100μM阿霉素分子，混合均匀；
(3)检测(2)所得混合溶液中的阿霉素荧光强度，与阴性对照组相比，若阿霉素分子的荧光强度明显减弱或消失则检测结果为阳性，若荧光强度不变则检测结果为阴性。在体外细胞实验中，可用等量PBS代替样品配制混合溶液作为阴性对照。在人血检测实验中，可将健康人血液样本作为阴性对照。
在本发明的实施方案中，所述miRNA标志物包括：癌症miRNA标志物，如miR-96-5p、miRNA-23b、miRNA-31、miRNA-21、miRNA-152、miRNA-451；类风湿性关节炎特征性miRNA，如miRNA-16、miRNA-155；肺结核特征性miRNA，如miRNA-150。
根据本发明的第三方面，提供了本发明第一方面所述的纳米颗粒溶液在制备疾病检测试剂中的用途，所述疾病包括癌症、类风湿性关节炎、肺结核等。
根据本发明的第四方面，提供了一种用于制备纳米颗粒溶液的方法，其包括以下步骤：
(1)在第一溶液中使聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)以20:1～5:1的质量比混合；
(2)将步骤(1)的混合物逐滴加入4％乙醇水溶液中，同时以60～150W的功率进行超声混合，促使PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH进行自组装，获得聚合物胶束溶液；
(3)向所述聚合物胶束溶液中相继加入1-(3-二1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)，通过化学交联法将可与特定miRNA标志物互补配对形成核苷酸双链的5′端氨基化的DNA单链结合到胶束表面上，其中加入的EDC和NHS与溶液中聚合物的摩尔比分别在5:1～30:1范围内；
(4)使用截留分子量为10～100kD的透析袋，以透析法除去游离分子杂质，得到纯化的纳米颗粒溶液。
在进一步的实施方案中，所述第一溶液为氯仿、乙腈或二甲基亚砜。
本发明所用的术语“聚合物胶束”具有聚合物和纳米材料领域的常用含义，通常是指具有两亲性片段的聚合物在溶液体系中形成的胶束结构。在本发明的背景下，“聚合物胶束”、“聚合物纳米胶束”、“聚合物胶束纳米颗粒”、“纳米粒子”、“纳米颗粒”等术语可互换使用。
本发明还包括上述实施方案的任意组合。对实施方案中各成分、要素、步骤的等同替代也被本发明所涵盖。
与现有技术相比，本发明的优势至少在于：
1.本发明所述纳米颗粒溶液制备成本低、制备方法简单、体系血液稳定性优良，且具有极高的检测特异性和灵敏度。
2.本发明对miRNA的荧光定量检测方法具有检测成本低、临床操作简单、检测结果准确灵敏、可实现批量化和自动化检测等优点。
3.本发明可针对不同疾病尤其是癌症的miRNA标志物进行个性化设计和制备，有助于对癌症的高灵敏度和超早期的精准体外诊断。
4.本发明所述的含有聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)的聚合物胶束纳米颗粒，可按需用各种功能分子修饰(例如可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列、可靶向肿瘤细胞的靶向性分子、可与特异性抗原结合的抗体等)，实现多种医用效果。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明纳米颗粒的粒径分布图；
图2为本发明纳米颗粒的透射电镜图；
图3为不同PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH质量比对纳米颗粒粒径和多聚分散度的影响；
图4为DSPE-PEG-COOH对纳米颗粒的粒径稳定性的影响；
图5为阴性对照与结直肠癌上清液检测后的荧光强度值比较；
图6为阿霉素荧光光谱。
具体实施方式
本发明制备实施例1
将10mg的PLGA-PEG-COOH(美国Creative PEGworks公司，货号DLG-5k20k21)和1mg的DSPE-PEG-COOH(美国Avanti Polar lipids公司，货号880135)溶解于2mL氯仿中并混合均匀；将氯仿溶液逐滴加入4％乙醇水溶液中，边滴加边使用细胞超声破碎仪以20kHz的频率和90W的功率持续超声5min，促使两种嵌段共聚物进行自组装并促进氯仿溶液挥发，得到聚合物胶束溶液。
相继加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(德国Merck sigma公司，货号E6383)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(德国Merck sigma公司，货号130672)(请加入EDC和NHS用量)，将定制合成的结直肠癌标志物miR-96-5p对应cDNA(序列5′-GGGAGCTCATAGGCCGGCCCCTGGCTGCAGATG-3′)的5′端氨基化互补DNA单链(购自上海生工生物公司)通过EDC/NHS化学交联至胶束表面的羧基上。使用截留分子量为10kD的透析袋透析混合溶液8h，期间更换透析液3次，即得纯化的纳米颗粒。粒度分析仪检测该纳米颗粒的粒径大小为98.6nm(图1)，表面电位为-28.4mV，透射电镜结果表明纳米颗粒呈球形单分散(图2)。
本发明制备实施例2
参照本发明制备实施例1制备纳米颗粒溶液，不同之处在于：PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH的质量比为5:1；自组装过程中以60W功率进行超声处理；偶联使用截留分子量为20kD的透析袋进行透析。
本发明制备实施例3
参照本发明制备实施例1制备纳米颗粒溶液，不同之处在于：PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH的质量比为20:1；自组装过程中以130W功率进行超声处理；偶联使用截留分子量为50kD的透析袋进行透析。
对比制备实施例1
参照本发明制备实施例1制备纳米颗粒溶液，不同之处在于：PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH的质量比为1:1。
对比制备实施例2
参照本发明制备实施例1制备纳米颗粒溶液，不同之处在于：PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH的质量比为30:1。
由图3可见，PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH的质量比在20:1～5:1的范围内，纳米颗粒的尺寸分布更加均一，粒径也较小。
对比制备实施例3
参照本发明制备实施例1制备纳米颗粒溶液，但不加入DSPE-PEG-COOH，仅使用PLGA-PEG-COOH制备纳米颗粒。
由图4可见，单一的PLGA-PEG-COOH制备形成的纳米颗粒，其尺寸均一性和体系稳定性较低，颗粒会自发聚集，不利于试剂长期保存，并且可能导致检测结果不可信。使用PLGA-PEG-COOH与DSPE-PEG-COOH共同形成(质量比10:1)的纳米颗粒则具有较高的尺寸均一性并能在长时间内保持稳定。
miRNA标志物的检测
检测1：将本发明制备实施例获得的纳米颗粒溶液100μL加至96孔培养板中，取Caco-2人结直肠癌细胞培养液上清100μL(阴性对照组为加入100μL的PBS)至纳米颗粒溶液中，常温静置30min后，加入5μM的阿霉素分子(购自德国Merck sigma公司，货号D1515)并混合均匀，使用多功能酶标仪检测阿霉素在597nm处的荧光强度(图5)。可见在加入Caco-2人结直肠癌细胞培养液上清的混合液中，阿霉素的荧光强度显著下降，表明阿霉素发生荧光猝灭，指示样品的检测结果为阳性。
检测2：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与膀胱癌标志物miRNA-23b互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将J82人膀胱癌细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测3：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与肺癌标志物miRNA-31互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将NCI-H226人肺癌细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测4：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与肝癌标志物miRNA-21互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将HepG2人肝癌细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测5：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与宫颈癌标志物miRNA-152互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将HeLa人宫颈癌细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测6：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与胃癌标志物miRNA-451互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将MKN45人胃癌细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测7：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与神经胶质瘤标志物miRNA-21互补配对的DNA序列。参照检测1的方法进行检测，将U87MG人神经胶质母细胞瘤细胞培养液上清加入该纳米颗粒溶液中混合，然后将微量阿霉素加入混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测8：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与类风湿性关节炎特征性miRNA-16互补配对的DNA序列。将该纳米颗粒溶液与类风湿性关节炎患者的关节积液混合。参照检测1的方法进行检测，将微量阿霉素加入本例的混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
检测9：参照本发明制备实施例的方法制备纳米颗粒溶液，不同之处在于纳米颗粒表面键合可与肺结核特征性miRNA-150互补配对的DNA序列。将该纳米颗粒溶液与肺结核患者外周血样品混合。参照检测1的方法进行检测，将微量阿霉素加入本例的混合样品中，使用酶标仪检测样品的阿霉素荧光强度，荧光强度显著下降。
Claims (11)
1.一种纳米颗粒溶液，其特征在于：所述纳米颗粒溶液包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，所述纳米颗粒含有质量比为20:1～5:1的聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)。
2.权利要求1所述的纳米颗粒溶液，其中所述纳米颗粒表面结合有功能分子，例如可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列、可靶向肿瘤细胞的靶向性分子、可与特异性抗原结合的抗体等。
3.权利要求2所述的纳米颗粒溶液，其中所述纳米颗粒的粒径大小为30～200nm，表面电荷为-20～-50mV。
4.权利要求2或3所述的纳米颗粒溶液，其中所述功能分子为可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列；且在所述核苷酸序列与特定miRNA标志物互补配对形成核苷酸双链后，阿霉素分子可嵌合至所述核苷酸双链，进而导致嵌合的阿霉素分子在荧光强度检测中发生荧光淬灭。
5.权利要求4所述的纳米颗粒溶液，其中所述核苷酸序列为可通过化学交联法与所述纳米颗粒表面羧基结合的5′端氨基化的DNA单链。
6.权利要求4所述的纳米颗粒溶液，其中所述miRNA标志物包括：癌症miRNA标志物，如miR-96-5p、miRNA-23b、miRNA-31、miRNA-21、miRNA-152、miRNA-451；类风湿性关节炎特征性miRNA，如miRNA-16、miRNA-155；肺结核特征性miRNA，如miRNA-150。
7.使用权利要求4-6中任一项所述的纳米颗粒溶液检测样品中特定miRNA标志物的方法，该方法包括以下步骤：
(1)取微量样品加至纳米颗粒溶液中，混合均匀并在常温静置10～60min，所述纳米颗粒溶液中的纳米颗粒表面结合有可与所述特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列；
(2)向(1)所得混合溶液加入10～100μM阿霉素分子，混合均匀；
(3)检测(2)所得混合溶液中的阿霉素荧光强度，与阴性对照组相比，若阿霉素分子的荧光强度明显减弱或消失则检测结果为阳性，若荧光强度不变则检测结果为阴性。
8.权利要求7所述的方法，其中所述miRNA标志物包括：癌症miRNA标志物，如miR-96-5p、miRNA-23b、miRNA-31、miRNA-21、miRNA-152、miRNA-451；类风湿性关节炎特征性miRNA，如miRNA-16、miRNA-155；肺结核特征性miRNA，如miRNA-150。
9.权利要求4-6中任一项所述的纳米颗粒溶液在制备疾病检测试剂中的用途，所述疾病包括癌症、类风湿性关节炎、肺结核等。
10.一种用于制备纳米颗粒溶液的方法，其包括以下步骤：
(1)在第一溶液中使聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)以20:1～5:1的质量比混合；
(2)将步骤(1)的混合物逐滴加入4％乙醇水溶液中，同时以60～150W的功率进行超声混合，促使PLGA-PEG-COOH和DSPE-PEG-COOH进行自组装，获得聚合物胶束溶液；
(3)向所述聚合物胶束溶液中相继加入1-(3-二1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)，通过化学交联法将可与特定miRNA标志物互补配对形成核苷酸双链的5′端氨基化的DNA单链结合到胶束表面上，其中加入的EDC和NHS与溶液中聚合物的摩尔比分别在5:1～30:1范围内；
(4)使用截留分子量为10～100kD的透析袋，以透析法除去游离分子杂质，得到纯化的纳米颗粒溶液。
11.权利要求10所述的方法，其中所述第一溶液为氯仿、乙腈或二甲基亚砜。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911144488.4A CN110964816A (zh) | 2019-11-20 | 2019-11-20 | 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 |
| CN2019111444884 | 2019-11-20 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111363822A true CN111363822A (zh) | 2020-07-03 |
| CN111363822B CN111363822B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=70031054
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911144488.4A Withdrawn CN110964816A (zh) | 2019-11-20 | 2019-11-20 | 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 |
| CN202010242717.2A Active CN111363822B (zh) | 2019-11-20 | 2020-03-31 | 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911144488.4A Withdrawn CN110964816A (zh) | 2019-11-20 | 2019-11-20 | 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN110964816A (zh) |
Citations (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH086204A (ja) * | 1994-06-17 | 1996-01-12 | Canon Inc | 光記録媒体、光記録方法及び情報再生方法 |
| US20020177136A1 (en) * | 2000-08-23 | 2002-11-28 | Mcbranch Duncan W. | Peptide nucleic acid based molecular sensors for nucleic acids |
| US20050130167A1 (en) * | 2002-10-25 | 2005-06-16 | Gang Bao | Multifunctional magnetic nanoparticle probes for intracellular molecular imaging and monitoring |
| WO2008083090A2 (en) * | 2006-12-26 | 2008-07-10 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc | Heteropolynucleotide duplexes with purine-purine base pairing |
| CN101708162A (zh) * | 2009-12-10 | 2010-05-19 | 深圳先进技术研究院 | 纳米颗粒及其制备方法 |
| CN102181438A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 张立营 | 一种核苷酸检测序列及其检测方法 |
| CN102552934A (zh) * | 2012-02-15 | 2012-07-11 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 阿霉素纳米粒及其制备方法 |
| WO2012094574A2 (en) * | 2011-01-06 | 2012-07-12 | The Johns Hopkins University | Stabilized polyribonucleotide nanoparticles |
| WO2013033513A1 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Apoptosis-targeting nanoparticles |
| CN103301481A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-09-18 | 湖南大学 | 一种靶向核酸载药系统及其应用 |
| CN103933578A (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-23 | 中国科学院动物研究所 | miRNA-185的应用和含有其的药物组合物 |
| WO2015005669A1 (en) * | 2013-07-09 | 2015-01-15 | Bioneer Corporation | LIVER CANCER RELATED GENES-SPECIFIC siRNA, DOUBLE-STRANDED OLIGO RNA MOLECULES COMPRISING THE siRNA, AND COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CANCER COMPRISING THE SAME |
| TW201515650A (zh) * | 2013-05-06 | 2015-05-01 | 艾爾妮蘭製藥公司 | 遞送經脂質調配之核酸分子之劑量及方法 |
| CN104792753A (zh) * | 2015-04-07 | 2015-07-22 | 上海大学 | 基于结合抑制点击化学反应检测小分子配体靶蛋白的荧光生物传感方法 |
| CN104840966A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-08-19 | 国家纳米科学中心 | 一种核酸纳米结构抗癌复合药物及其制备方法和应用 |
| CN105018604A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-11-04 | 中国医科大学 | 一种探针室温下检测耐药基因多态性的试剂盒 |
| WO2016105542A2 (en) * | 2014-12-24 | 2016-06-30 | Neximmune, Inc | Nanoparticle compositions and methods for immunotherapy |
| CN105770912A (zh) * | 2016-04-21 | 2016-07-20 | 四川大学 | 具有肿瘤近红外荧光显像功能的载药atp敏感脂质体及其制备方法 |
| CN105795625A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-07-27 | 深圳市鲲鹏数码科技有限公司 | 智能手环 |
| WO2016183447A1 (en) * | 2015-05-14 | 2016-11-17 | The Johns Hopkins University | Compositions of nucleic acid-containing nanoparticles for in vivo delivery |
| WO2017010854A1 (ko) * | 2015-07-13 | 2017-01-19 | 국립암센터 | 나노입자를 이용한 핵산 검출용 키트 및 핵산 검출 방법 |
| CA3003267A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Translate Bio Ma, Inc. | Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes |
| CN106868146A (zh) * | 2017-03-06 | 2017-06-20 | 新乡医学院 | 用于检测与结直肠癌长春新碱耐药相关的miRNA表达的引物、试剂盒、方法及应用 |
| CN107106493A (zh) * | 2014-11-21 | 2017-08-29 | 西北大学 | 球形核酸纳米颗粒缀合物的序列特异性细胞摄取 |
| CN107475388A (zh) * | 2017-08-22 | 2017-12-15 | 深圳市恩普电子技术有限公司 | 鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒 |
| CN107921005A (zh) * | 2015-02-13 | 2018-04-17 | 友杏生技医药股份有限公司 | 利用纳米颗粒治疗肿瘤的组合物和方法 |
| TW201815395A (zh) * | 2016-10-27 | 2018-05-01 | 德瑪製藥公司 | 二去水半乳糖醇或其衍生物或類似物於治療小兒中樞神經系統惡性病之用途 |
| TW201821125A (zh) * | 2016-11-02 | 2018-06-16 | 日商日東電工股份有限公司 | 皮膚纖維化症治療劑 |
| CN108542893A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-09-18 | 中山大学 | 一种具有优良血液稳定性能的纳米颗粒及其制备方法 |
| CN108704134A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-10-26 | 重庆医科大学 | 一种包载ir780的靶向多功能纳米粒、应用及其制备方法 |
| WO2019133190A1 (en) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Texas Tech University System | High efficient delivery of plasmid dna into human and vertebrate primary cells in vitro and in vivo by nanocomplexes |
| CN110079866A (zh) * | 2016-12-22 | 2019-08-02 | 胡家铭 | 一种免疫脂质-聚合物杂化纳米粒生物芯片和其应用 |
| CN110129413A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-16 | 南京求臻基因科技有限公司 | 一种选择性捕获和纯化microRNA的纳米磁性颗粒及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-11-20 CN CN201911144488.4A patent/CN110964816A/zh not_active Withdrawn
-
2020
- 2020-03-31 CN CN202010242717.2A patent/CN111363822B/zh active Active
Patent Citations (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH086204A (ja) * | 1994-06-17 | 1996-01-12 | Canon Inc | 光記録媒体、光記録方法及び情報再生方法 |
| US20020177136A1 (en) * | 2000-08-23 | 2002-11-28 | Mcbranch Duncan W. | Peptide nucleic acid based molecular sensors for nucleic acids |
| US20050130167A1 (en) * | 2002-10-25 | 2005-06-16 | Gang Bao | Multifunctional magnetic nanoparticle probes for intracellular molecular imaging and monitoring |
| WO2008083090A2 (en) * | 2006-12-26 | 2008-07-10 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc | Heteropolynucleotide duplexes with purine-purine base pairing |
| CN101708162A (zh) * | 2009-12-10 | 2010-05-19 | 深圳先进技术研究院 | 纳米颗粒及其制备方法 |
| WO2012094574A2 (en) * | 2011-01-06 | 2012-07-12 | The Johns Hopkins University | Stabilized polyribonucleotide nanoparticles |
| CN102181438A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 张立营 | 一种核苷酸检测序列及其检测方法 |
| US20140303081A1 (en) * | 2011-08-31 | 2014-10-09 | University of Georgia Foundation, Inc. | Apoptosis-targeting nanoparticles |
| WO2013033513A1 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Apoptosis-targeting nanoparticles |
| CN102552934A (zh) * | 2012-02-15 | 2012-07-11 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 阿霉素纳米粒及其制备方法 |
| CN103933578A (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-23 | 中国科学院动物研究所 | miRNA-185的应用和含有其的药物组合物 |
| TW201515650A (zh) * | 2013-05-06 | 2015-05-01 | 艾爾妮蘭製藥公司 | 遞送經脂質調配之核酸分子之劑量及方法 |
| CN103301481A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-09-18 | 湖南大学 | 一种靶向核酸载药系统及其应用 |
| WO2015005669A1 (en) * | 2013-07-09 | 2015-01-15 | Bioneer Corporation | LIVER CANCER RELATED GENES-SPECIFIC siRNA, DOUBLE-STRANDED OLIGO RNA MOLECULES COMPRISING THE siRNA, AND COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CANCER COMPRISING THE SAME |
| CN107106493A (zh) * | 2014-11-21 | 2017-08-29 | 西北大学 | 球形核酸纳米颗粒缀合物的序列特异性细胞摄取 |
| WO2016105542A2 (en) * | 2014-12-24 | 2016-06-30 | Neximmune, Inc | Nanoparticle compositions and methods for immunotherapy |
| CN107921005A (zh) * | 2015-02-13 | 2018-04-17 | 友杏生技医药股份有限公司 | 利用纳米颗粒治疗肿瘤的组合物和方法 |
| CN104792753A (zh) * | 2015-04-07 | 2015-07-22 | 上海大学 | 基于结合抑制点击化学反应检测小分子配体靶蛋白的荧光生物传感方法 |
| CN104840966A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-08-19 | 国家纳米科学中心 | 一种核酸纳米结构抗癌复合药物及其制备方法和应用 |
| WO2016183447A1 (en) * | 2015-05-14 | 2016-11-17 | The Johns Hopkins University | Compositions of nucleic acid-containing nanoparticles for in vivo delivery |
| CN105018604A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-11-04 | 中国医科大学 | 一种探针室温下检测耐药基因多态性的试剂盒 |
| WO2017010854A1 (ko) * | 2015-07-13 | 2017-01-19 | 국립암센터 | 나노입자를 이용한 핵산 검출용 키트 및 핵산 검출 방법 |
| CA3003267A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Translate Bio Ma, Inc. | Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes |
| CN105770912A (zh) * | 2016-04-21 | 2016-07-20 | 四川大学 | 具有肿瘤近红外荧光显像功能的载药atp敏感脂质体及其制备方法 |
| CN105795625A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-07-27 | 深圳市鲲鹏数码科技有限公司 | 智能手环 |
| TW201815395A (zh) * | 2016-10-27 | 2018-05-01 | 德瑪製藥公司 | 二去水半乳糖醇或其衍生物或類似物於治療小兒中樞神經系統惡性病之用途 |
| TW201821125A (zh) * | 2016-11-02 | 2018-06-16 | 日商日東電工股份有限公司 | 皮膚纖維化症治療劑 |
| CN110079866A (zh) * | 2016-12-22 | 2019-08-02 | 胡家铭 | 一种免疫脂质-聚合物杂化纳米粒生物芯片和其应用 |
| CN106868146A (zh) * | 2017-03-06 | 2017-06-20 | 新乡医学院 | 用于检测与结直肠癌长春新碱耐药相关的miRNA表达的引物、试剂盒、方法及应用 |
| CN107475388A (zh) * | 2017-08-22 | 2017-12-15 | 深圳市恩普电子技术有限公司 | 鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒 |
| WO2019133190A1 (en) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Texas Tech University System | High efficient delivery of plasmid dna into human and vertebrate primary cells in vitro and in vivo by nanocomplexes |
| CN108542893A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-09-18 | 中山大学 | 一种具有优良血液稳定性能的纳米颗粒及其制备方法 |
| CN108704134A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-10-26 | 重庆医科大学 | 一种包载ir780的靶向多功能纳米粒、应用及其制备方法 |
| CN110129413A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-16 | 南京求臻基因科技有限公司 | 一种选择性捕获和纯化microRNA的纳米磁性颗粒及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110964816A (zh) | 2020-04-07 |
| CN111363822B (zh) | 2024-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Biodegradable nano-films for capture and non-invasive release of circulating tumor cells | |
| CN107469088B (zh) | 一种基于dna折纸术的精确识别靶向纳米载体的构建方法及其应用 | |
| Mout et al. | Surface functionalization of nanoparticles for nanomedicine | |
| Mokhtarzadeh et al. | Aptamers as smart ligands for nano-carriers targeting | |
| CN109288815B (zh) | 一种可实现肿瘤靶向投递核酸药物的多级递送纳米粒子的制备方法和应用 | |
| CN108210482B (zh) | 一种载miRNA复合纳米颗粒及其制备方法和应用 | |
| Li et al. | Ammonium salt modified mesoporous silica nanoparticles for dual intracellular-responsive gene delivery | |
| CN107022516A (zh) | 一种在细胞微囊泡表面修饰配体的方法 | |
| CN105087593A (zh) | 一种her2核酸适配体及其应用 | |
| CN111701031B (zh) | 靶向线粒体负载circRNA的纳米材料及其制备方法和应用 | |
| Fan et al. | A novel phosphoester-based cationic co-polymer nanocarrier delivers chimeric antigen receptor plasmid and exhibits anti-tumor effect | |
| CN114099695A (zh) | 一种ra16-a与dna四面体载体共聚物及其制备方法和应用 | |
| EP3215545B1 (en) | A process for preparing water-dispersible single-chain polymeric nanoparticles | |
| CN106727323B (zh) | 一种透明质酸纳米囊泡及其制备方法和应用 | |
| CN110368364A (zh) | 酸响应聚阳离子胶束纳米粒、其制备方法及用途 | |
| CN111363822B (zh) | 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法 | |
| CN110204664B (zh) | 一种共载药物和基因用阳离子聚合物及其应用 | |
| CN104592522B (zh) | 一种可降解的酸敏型聚天冬酰胺共聚物及其制备方法和应用 | |
| Yang et al. | Extracellular vesicles and their engineering strategies, delivery systems, and biomedical applications | |
| CN111035757A (zh) | 肿瘤免疫-化学联合治疗dna纳米制剂的方法 | |
| CN113105625B (zh) | 一种琥珀酸维生素e修饰的聚乙烯亚胺衍生物、制备方法及其应用 | |
| CN114949259A (zh) | 一种氮杂冠醚结构的基因递送载体及其制备方法和应用 | |
| CN109295133B (zh) | 一种基于非线性杂交链式扩增的适配体-dna高分子聚合物的构建方法和应用 | |
| CN113293137B (zh) | 一种基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法及其应用 | |
| CN108904811B (zh) | 适配体修饰的二氧化硅纳米药物的制备及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |