CN108704134A - 一种包载ir780的靶向多功能纳米粒、应用及其制备方法 - Google Patents
一种包载ir780的靶向多功能纳米粒、应用及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，公开了一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，包括聚乳酸‑羟基乙酸共聚物PLGA外壳以及嵌入在聚乳酸‑羟基乙酸共聚物PLGA外壳内壁上的IR780碘化物，聚乳酸‑羟基乙酸共聚物PLGA外壳上连接有环状精氨酰‑甘氨酰‑天冬氨酸cRGD靶向肽段。本发明解决了现有技术中因纳米粒在肿瘤部位的分布不均而造成肿瘤易复发、治疗效果不佳的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及了一种包载IR780的靶向多功能纳米粒、应用及其制备方法。
背景技术
随着医学影像学的不断发展，单一的成像方式已不足以满足现代化日益增加的医学多样化需求，多模态造影剂随之应运而生，改变了传统造影剂单一成像的模式。近几年发展起来的一种非侵入式医学成像方法，结合了纯光学成像的高对比特性和纯超声成像的高穿透深度特性，可以提供高分辨率和高对比度的组织成像，其突出的特点为可以显示组织，并且根据不同成分的光吸收阈来鉴别组织的不同，如血红蛋白、脂肪、黑色素、胶原和水等，当组织吸收光后可以转换为声，从而产生超声波信号，这种成像方式叫做光声成像。将光声成像和传统的超声成像相结合不仅可以结合传统超声成像的高空间分辨力，还可以增强组织之间的对比度，可以很好地评估肿瘤的边界。生物荧光成像可以显示纳米粒在体内的分布，对生物体的各种生理活动进行实时可视化的检测。几种成像方式的结合可以显示肿瘤的更多信息，包括肿瘤的边界和内部信息。
光热治疗(PTT)是利用较高光热转换效率的材料，将其注入体内，待材料聚集在肿瘤组织后，用外部光源(如近红外光)对肿瘤进行辐照，将光能转换成热能来杀死癌细胞的一种治疗方法。传统的激光治疗缺乏特异性，对非肿瘤区域也会产生放射性热，并且不能渗透到深部肿瘤，治疗效果极其有限。
近红外染料IR780在近红外区域有强的吸收峰，荧光成像的效果非常好，被广泛地用于荧光成像。现有技术中也有关于携载IR780的研究，包括用自组装的血红蛋白作为载体包载IR780，用人血清白蛋白包载IR780和吉西他滨，以及将IR780装载入脂质体内等，这些技术增加了IR780的水溶性，促进了其在体内的应用。但是它们大多是利用增强渗透滞留(EPR)效应使纳米粒聚集在肿瘤部位，而近年来关于EPR效应是否有效出现了很多争议，有很多研究发现EPR效应并不能让纳米粒靶向到肿瘤区域。
同时目前也有很多利用IR780对肿瘤进行光热治疗的研究，但是单纯的光热治疗往往由于纳米粒在肿瘤部位的分布不均而影响治疗效果，容易造成肿瘤的复发，所以往往结合化疗药物对肿瘤进行治疗。但是化疗药物对人体的毒副作用大，会加重肝肾的代谢负担。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，以解决现有技术中因纳米粒在肿瘤部位的分布不均而造成肿瘤易复发、治疗效果不佳的问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳以及嵌入在聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳内壁上的IR780碘化物，聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳上连接有环状精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸cRGD靶向肽段。
进一步，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳内部包载有液态全氟戊烷PFP。
进一步，外形呈球形，粒径为265±5.1nm。
进一步，平均Zeta电位为-8.33±0.86mV。
进一步，连靶率为98.06％。
采用本发明的包载IR780的靶向多功能纳米粒，马尔文粒径分析仪测得本发明的纳米粒粒径(265±5.1)nm，本发明的纳米粒能够穿过肿瘤毛细血管内皮间隙(100nm-780nm)，所以能够满足本发明对其粒径的要求；马尔文粒径分析仪测得其平均Zeta电位为(-8.33±0.86)mV，能够保证纳米粒的相对稳定性而不致快速沉淀。透射电镜及扫描电镜检测结果显示，该纳米粒呈球形，大小均一，形态规则，分散性好，这些特性都将有利于纳米粒顺利穿过肿瘤毛细血管内皮间隙而到达肿瘤细胞周围。本发明的包载IR780的靶向多功能纳米粒在4℃条件下可稳定保存7天。
本发明的包载IR780的靶向多功能纳米粒，将IR780包裹在纳米粒的内部，利用IR780在近红外区域具有强吸收峰的性质，使该纳米粒具有较好的荧光成像效果，便于更好地对黑色素瘤进行治疗。同时在聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳上连接靶向肽段cRGD(环状精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)，不仅促进了该纳米粒在体内的应用，而且还利用cRGD靶向αvβ3过表达的肿瘤细胞的特点，保证纳米粒在肿瘤部位的充分积累，增强了治疗的效果。
液态的全氟戊烷PFP沸点为29℃，在生理条件(37℃)下即可转换为气态，但是当其被包裹进纳米材料内，由于其粒径变小，表面张力变大，沸点可升高至45℃以上。包载PFP的纳米粒在激光的辐照下可发生液气相变，由纳泡向微泡的转换过程中，由于纳米粒粒径的变大不仅可以增强超声显像，而且由于微泡破裂的级联反应还可以破坏肿瘤血管，从而促进纳米粒在肿瘤深部的渗透，进一步了增强光热治疗的效果。本发明将低沸点的液态全氟戊烷PFP包载入纳米粒的核心，使其在激光的触发下发生相变，利用此相变过程中，对肿瘤血管起到破坏作用，可以促进纳米粒在非血管部位的聚集，增强光热作用的效果，可以达到完全地抑制肿瘤生长的效果，同时避免了化疗药物的使用，从而降低了对人体的毒副作用。
本发明的目的之二是提供一种包载IR780的靶向多功能纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备PLGA-NHS：称取100mg PLGA-COOH溶解于4ml DCM中，取0.4mM NHS和0.3mMDCC溶解于2ml DCM中，然后两者混合，37℃搅拌反应12小时；透析过夜后加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀洗涤后真空干燥得白色固体PLGA-NHS；
(2)制备PLGA-PEG-COOH：称取0.02mM PLGA-NHS溶解于20ml DCM中，称取0.2mMTEA、0.4mM DIEA和0.05mM NH2-PEG-COOH，加入到上述溶液中，37℃搅拌反应12小时；透析12小时，加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，冻干得固体PLGA-PEG-COOH；
(3)制备PLGA-PEG-NHS：称取250mg PLGA-PEG-COOH溶解于25ml DCM中，称取0.4mMNHS、0.3mM DCC加入，37℃搅拌反应12小时；反应完成后，过滤，滤液低压抽干，复溶后离子层析纯化，收集目的峰；加入5倍体积的冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀真空干燥得白色固体PLGA-PEG-NHS；
(4)制备cRGD-PEG-PLGA：称取100mg PLGA-PEG-NHS和cRGD溶解于50ml 100％DMSO中，随后加入DCC和TEA搅拌反应12小时；透析12小时，离子层析纯化，收集目的峰；再反相层析纯化，收集目的峰；超滤浓缩，冻干得白色固体cRGD-PEG-PLGA。
(5)制备cRGD-PLGA-IR780-PFP：称取50mg PLGA-PEG-cRGD和2mg IR780碘化物加入4ml二氯甲烷中，并置于50ml外包有锡箔纸的离心管内，在冰浴和避光条件下震荡并置于超声波清洗仪内使其充分混匀；在冰浴条件下加入200ul PFP并混匀，声振3min，100W，声振5s、停止5s；向其中加入10ml 4％PVA溶液，声振2min，60W，声振5s、停止5s；将上述溶液加入到10ml的2％异丙醇溶液内混匀，再转移至50ml的烧杯内，加磁珠放在磁力搅拌器上搅拌3h使二氯甲烷充分挥发，经去离子水离心、洗涤3次、8000r/min、8min，获得cRGD-IFNPs，放于4℃储存备用。
本发明包载IR780的靶向多功能纳米粒的制备方法，以PLGA-COOH、NH2-PEG-COOH与cRGD为原料，通过碳二亚胺法制备cRGD-PEG-PLGA，再加入IR780碘化物及全氟戊烷PFP，采用双乳化法制备cRGD-PEG-PLGA包裹的靶向纳米粒cRGD-IFNPs。采用透射电子显微镜、扫描电子显微镜及马尔文粒径分析仪对靶向纳米粒cRGD-IFNPs粒径、电位、表面形态等进行检测；采用核磁共振谱仪、共聚焦显微镜、流式细胞仪对其的靶向性进行检测；采用不同能量的激光辐照检测其体外光热特性。成功制备出球形、大小均一、形态规则、分散性好、性质稳定的靶向纳米粒cRGD-IFNPs。该纳米粒具有良好的光学吸收性能和光热转化特性，通过cRGD对黑色素瘤具有良好的靶向能力，联合激光辐照，在体外具有良好的联合化疗和光热治疗肿瘤细胞的能力。
本发明的目的之三是提供一种包载IR780的靶向多功能纳米粒在治疗黑色素瘤上的应用。利用cRGD靶向αvβ3过表达的肿瘤细胞的特点，保证纳米粒在黑色素瘤部位的充分积累，增强了治疗的效果；通过将低沸点的液态全氟戊烷PFP包载入纳米粒的核心，增强光热作用的效果，达到完全地抑制肿瘤生长的效果，同时避免了化疗药物的使用，从而降低了对人体的毒副作用。
附图说明
图1为本发明实施例中cRGD-IFNPs的结构示意图；
图2A为本发明实施例中cRGD-IFNPs的透射电镜图；
图2B为本发明实施例中cRGD-IFNPs的扫描电镜图；
图2C为本发明实施例中cRGD-IFNPs的粒径分布图；
图2D为本发明实施例中cRGD-IFNPs的电位分布图；
图3A为本发明实施例中FITC标记cRGD-IFNPs的激光共聚焦图；
图3B为本发明实施例中流式荧光定量分析图；
图3C为本发明实施例中PLGA与cRGD-PEG-PLGA的核磁共振氢谱图；
图4A为本发明实施例中cRGD-IFNPs在不同功率下的温度时间曲线图；
图4B为本发明实施例中cRGD-IFNPs在不同浓度下的温度时间曲线图；
图5A为本发明实施例中cRGD-IFNPs在不同浓度下体外光声成像图；
图5B为本发明实施例中cRGD-IFNPs在不同浓度下体外超声成像图；
图5C为本发明实施例中cRGD-IFNPs在不同浓度下体外荧光成像图；
图6A为本发明实施例中各组NIR辐照前细胞活性的变化图；
图6B为本发明实施例中各组NIR辐照后细胞活性的变化图；
图7A为本发明实施例的体内光声成像图；
图7B为本发明实施例的体内荧光成像图；
图7C为本发明实施例的体内US模式下的超声成像图；
图7D为本发明实施例的体内CEUS模式下的超声成像图；
图8为本发明实施例在观察期14天内各组小鼠肿瘤的生长情况图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
实施例基本如附图1至图8所示：
一、本发明的包载IR780的靶向多功能纳米粒的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备PLGA-NHS：称取100mg PLGA-COOH溶解于4ml DCM中，取0.4mM NHS和0.3mMDCC溶解于2ml DCM中，然后两者混合，37℃搅拌反应12小时；透析过夜后加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀洗涤后真空干燥得白色固体PLGA-NHS；
(2)制备PLGA-PEG-COOH：称取0.02mM PLGA-NHS溶解于20ml DCM中，称取0.2mMTEA、0.4mM DIEA和0.05mM NH2-PEG-COOH，加入到上述溶液中，37℃搅拌反应12小时；透析12小时，加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，冻干得固体PLGA-PEG-COOH；
(3)制备PLGA-PEG-NHS：称取250mg PLGA-PEG-COOH溶解于25ml DCM中，称取0.4mMNHS、0.3mM DCC加入，37℃搅拌反应12小时；反应完成后，过滤，滤液低压抽干，复溶后离子层析纯化，收集目的峰；加入5倍体积的冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀真空干燥得白色固体PLGA-PEG-NHS；
(4)制备cRGD-PEG-PLGA：称取100mg PLGA-PEG-NHS和cRGD溶解于50ml 100％DMSO中，随后加入DCC和TEA搅拌反应12小时；透析12小时，离子层析纯化，收集目的峰；再反相层析纯化，收集目的峰；超滤浓缩，冻干得白色固体cRGD-PEG-PLGA。
(5)制备cRGD-PLGA-IR780-PFP：称取50mg PLGA-PEG-cRGD和2mg IR780碘化物(2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-3,3-二甲基-1-丙基-2H-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-3,3-二甲基-1-丙基吲哚鎓碘化物)加入4ml二氯甲烷中，并置于50ml外包有锡箔纸的离心管内，在冰浴和避光条件下震荡并置于超声波清洗仪内使其充分混匀；在冰浴条件下加入200ul PFP并混匀，声振3min，100W，声振5s、停止5s；向其中加入10ml 4％PVA溶液，声振2min，60W，声振5s、停止5s；将上述溶液加入到10ml的2％异丙醇溶液内混匀，再转移至50ml的烧杯内，加磁珠放在磁力搅拌器上搅拌3h使二氯甲烷充分挥发，经去离子水离心、洗涤3次、8000r/min、8min，获得cRGD-IFNPs，放于4℃储存备用。
所制得的本发明的包载IR780的靶向多功能纳米粒，如图1所示，包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳以及嵌入在聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳内壁上的IR780碘化物，聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳上连接有环状精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸cRGD靶向肽段。
二、包载IR780的靶向多功能纳米粒的一般特性、靶向性、光热性质
1、包载IR780的靶向多功能纳米粒的一般特性
(1)将1mg/ml cRGD-IFNPs置于铜网上，自然干燥后成膜，透过透射电子显微镜观察纳米粒的形态结构。
(2)将cRGD-IFNPs稀释至1mg/ml后滴于硅片上干燥过夜，用扫描电子显微镜观察其结构特征。
(3)采用马尔文粒径分析仪检测cRGD-IFNPs的大小、分布及电位。
(4)将制备得到的cRGD-PLGA和PLGA称取少许溶于DMSO中，用核磁共振氢谱分析检测其结构。
检测结果为：
(1)在4℃条件下，该纳米粒粒径在7天内无明显增大，7天后粒径缓慢增大。
(2)如图2A、图2B所示，透射电子显微镜及扫描电子显微镜下检测到该纳米粒外形呈球形，大小均一，形态规则，分散性好；如图2C、图2D所示，马尔文粒径仪检测其大小为(265±5.1)nm，电位为(-8.33±0.86)mV。
(3)如图3C所示，通过核磁共振氢谱分析对比PLGA，cRGD-PLGA在化学位移为2.7ppm和2.8ppm处有明显的多肽峰，化学位移为3.5ppm处为PEG的-CH2CH20-峰，化学位移为5.2和1.5ppm处为PLA的-CH-和-CH3峰，PGA的-0CH2-峰出现在化学位移为4.9ppm处，结果表明合成的cRGD-PLGA结构正确，cRGD成功的连接在PLGA上；
2、包载IR780的靶向多功能纳米粒的靶向性
用FITC标记cRGD，用DiI标记IFNPs，在共聚焦显微镜下观测其荧光显像，并用流式细胞仪测定其连靶率。
检测结果为：
如图3A所示，在共聚焦显微镜下可见标记了FITC的cRGD呈绿色荧光，DiI标记的IFNPs呈红色荧光，在合成图上可见二者高度重合呈橘色荧光；如图3B所示，流式细胞仪测量其FITC的荧光，连靶率可高达98.06％。
3、包载IR780的靶向多功能纳米粒的光热性质
(1)取200μl 10mg/ml cRGD-IFNPs置于96孔板中，设置808nm激光为不同能量(1、1.5、2、2.5w/cm2)辐照纳米粒，并保证激光光斑覆盖整个液面，在红外热成像仪的检测下记录其热图及升温情况.
(2)将激光能量保持2w/cm2不变，cRGD-IFNPs稀释成不同浓度(1.25、2.5、5、7.5、10mg/ml)，用红外热成像仪检测其升温情况，对照组为生理盐水。
检测结果为：
在体外光热性质的试验中发现，当浓度一定时，随着808nm激光能量的升高，红外热成像仪测定的纳米粒最高温度逐渐升高(如图4A所示)；当激光能量不变时，随着浓度的升高，纳米粒的最高温度也逐渐升高，且对照组纳米粒和生理盐水未见明显的温度变化(如图4B所示)；说明纳米粒光热性能呈激光能量依赖性和纳米粒浓度依赖性。
三、包载IR780的靶向多功能纳米粒在治疗黑色素瘤上的应用
1、包载IR780的靶向多功能纳米粒的体外多模态成像
(1)取不同浓度的cRGD-IFNPs(1.25、2.5、5、7.5、10mg/ml)置于200ul的凝胶模型中，在700nm波长处用光声成像仪记录其光声图像。
(2)取同样浓度的cRGD-IFNPs纳米粒置于同样的凝胶模型内，在808nm激光(2w/cm2)的辐照下用百胜超声仪观测10分钟内其体外超声成像。
(3)取不同浓度(1.25、2.5、5、7.5、10、20、40mg/ml)的cRGD-IFNPs置于四面避光的96孔板内，设置激发波长为780nm，发射波长为825nm，用小动物活体成像系统观测其体外荧光成像。
检测结果为：
如图5A所示，cRGD-IFNPs随着浓度的升高，体外光声成像测得的光声信号值(PA)逐渐增加，且PA值与浓度呈正比的关系；如图5B所示，在体外超声成像中可见，随着纳米粒浓度的增加，在超声模式下及造影模式下均可见其在激光辐照5min之后成像均明显增强；如图5C所示，在荧光成像中发现纳米粒浓度增加至20mg/ml之后，荧光强度开始逐渐下降，说明在浓度较高时发生了自淬灭现象，但是不影响本实验的实验剂量(<20mg/ml)。以上的结果说明了cRGD-IFNPs可以进行三模态成像。
2、包载IR780的靶向多功能纳米粒的体外光热治疗
(1)将B16细胞接种在96孔板内，取不同浓度的cRGD-IFNPs(0.01、0.5、0.1、0.25、0.5、1mg/ml)(每组3-5孔)10μl加入其中，共孵育24小时后将10μlCCK-8加入其中，并设置对照组和空白组，4小时内用酶标仪在450nm波长处观测其吸光度值。
(2)同样的浓度的cRGD-IFNPs及细胞在96孔板共孵育24小时后，用808nm(2w/cm2)激光进行辐照5min，孵育4小时后用CCK-8试剂盒检测其细胞活性。
检测结果为：
体外光热治疗选取的模型为黑色素瘤B16细胞系，不同浓度(0-1mg/ml)的cRGD-IFNPs纳米粒与细胞共孵育24h后细胞活力均在80％以上(如图6A所示)，而经过激光辐照后可见到不同程度的细胞活力下降，且纳米粒浓度越高，其细胞活力越低(如图6B所示)。说明cRGD-IFNPs在激光的辐照下对细胞有杀伤作用。
3、包载IR780的靶向多功能纳米粒的体内多模态成像
(1)将B16细胞接种在裸鼠皮下建立黑色素瘤模型，待肿瘤生长至适宜大小后，将小鼠用1％戊巴比妥全麻，尾静脉注射靶向纳米粒200ul 5mg/ml cRGD-IFNPs后，在光声成像仪下观测不同时间时其光声图像。
(2)同样取数只大小适宜的黑色素瘤模型裸鼠，尾静脉注射cRGD-IFNPs后不同时间点用808nm激光进行肿瘤的辐照5min，用百胜超仪观测其超声模式及造影模式下其超声成像效果。
(3)取瘤鼠数只麻醉后尾静脉注射cRGD-IFNPs，不同时间点于激发波长为780nm，发射波长为825nm处用小动物活体成像系统进行体内荧光成像，观测纳米粒在全身的分布。
检测结果为：
如图7A所示，成功建立皮下黑色素瘤模型之后，对肿瘤进行光声成像发现在不同时间点光声成像效果不同，从0h开始光声成像逐渐增强，6h左右可见肿瘤的显影最强，6h之后开始缓慢降低，24h依然可见很强的光声成像，说明cRGD-IFNPs到达肿瘤的最多的时间点是6h，且滞留时间较长。由于肿瘤在经过激光辐照以后，由于高热损伤肿瘤血管致其血供减少，无法如光声显像一样进行不同时间点的观察，因此根据光声成像的结果选择6h时间点尾静脉注射纳米粒，在进行激光辐照5min之后观察其超声成像，发现超声模式及造影模式下均明显增强，而对照组未见明显显影(如图7C、7D所示)。如图7B所示，体内荧光成像实验中，观察到在6h时肿瘤部位的荧光最强，结果和光声结果一致，在24h观察之后取小鼠主要器官和肿瘤可见到其体内分布，肝脏和脾脏由于内皮网状系统的摄取依然可见很强的荧光，心脏相对已无纳米粒的聚集。体内多模态实验的结果表明了制备的cRGD-IFNPs是一种很好的多模态成像造影剂，多种模态结合能更好的显示肿瘤的更多信息。
4、包载IR780的靶向多功能纳米粒的体内光热治疗
取30只瘤鼠随机分成6组，每组5只，第一组：cRGD-IFNPs+激光组，第二组：IFNPs+激光组，第三组：cRGD-PLGA-PFP+激光组，第四组：生理盐水+激光组，第五组cRGD-IFNPs组，第六组：生理盐水组。对肿瘤进行808nm激光(2w/cm2)辐照5min之后，观察14天，记录肿瘤的大小及小鼠重量的变化。
检测结果为：
如图8所示，给不同组裸鼠进行激光辐照或单纯药物治疗后，观察14天，小鼠体重无明显变化，cRGD-IFNPs和生理盐水组(saline)肿瘤未明显的增长，而其他组肿瘤均不同程度的增大，说明cRGD-IFNPs+激光(NIR)组对肿瘤的治疗最明显，明显地抑制了肿瘤的生长。
综上：包载IR780的靶向多功能纳米粒具有良好的光热性能，对黑色素瘤有明显的抑制生长和杀灭作用，且体内外的多模态成像表明其对肿瘤的显像效果非常好，能够起到更好的靶向作用，同时避免了化疗过程产生的副作用，为后续体内靶向肿瘤成像和治疗提供了实验基础和理论依据。
Claims (7)
1.一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，其特征在于：包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳以及嵌入在聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳内壁上的IR780碘化物，聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳上连接有环状精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸cRGD靶向肽段。
2.根据权利要求1所述的一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，其特征在于：所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA外壳内部包载有液态全氟戊烷PFP。
3.根据权利要求2所述的一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，其特征在于：外形呈球形，粒径为265±5.1nm。
4.根据权利要求3所述的一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，其特征在于：平均Zeta电位为-8.33±0.86mV。
5.根据权利要求4所述的一种包载IR780的靶向多功能纳米粒，其特征在于：连靶率为98.06％。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的包载IR780的靶向多功能纳米粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)制备PLGA-NHS：称取100mg PLGA-COOH溶解于4ml DCM中，取0.4mM NHS和0.3mM DCC溶解于2ml DCM中，然后两者混合，37℃搅拌反应12小时；透析过夜后加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀洗涤后真空干燥得白色固体PLGA-NHS；
(2)制备PLGA-PEG-COOH：称取0.02mM PLGA-NHS溶解于20ml DCM中，称取0.2mM TEA、0.4mM DIEA和0.05mM NH2-PEG-COOH，加入到上述溶液中，37℃搅拌反应12小时；透析12小时，加入80ml冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，冻干得固体PLGA-PEG-COOH；
(3)制备PLGA-PEG-NHS：称取250mg PLGA-PEG-COOH溶解于25ml DCM中，称取0.4mMNHS、0.3mM DCC加入，37℃搅拌反应12小时；反应完成后，过滤，滤液低压抽干，复溶后离子层析纯化，收集目的峰；加入5倍体积的冰甲醇和乙醚(体积比1:1)混合溶液，4℃冰箱静置24h，待沉淀出现后，离心收集沉淀，沉淀真空干燥得白色固体PLGA-PEG-NHS；
(4)制备cRGD-PEG-PLGA：称取100mg PLGA-PEG-NHS和cRGD溶解于50ml 100％DMSO中，随后加入DCC和TEA搅拌反应12小时；透析12小时，离子层析纯化，收集目的峰；再反相层析纯化，收集目的峰；超滤浓缩，冻干得白色固体cRGD-PEG-PLGA。
(5)制备cRGD-PLGA-IR780-PFP：称取50mg PLGA-PEG-cRGD和2mg IR780碘化物加入4ml二氯甲烷中，并置于50ml外包有锡箔纸的离心管内，在冰浴和避光条件下震荡并置于超声波清洗仪内使其充分混匀；在冰浴条件下加入200ul PFP并混匀，声振3min，100W，声振5s、停止5s；向其中加入10ml 4％PVA溶液，声振2min，60W，声振5s、停止5s；将上述溶液加入到10ml的2％异丙醇溶液内混匀，再转移至50ml的烧杯内，加磁珠放在磁力搅拌器上搅拌3h使二氯甲烷充分挥发，经去离子水离心、洗涤3次、8000r/min、8min，获得cRGD-IFNPs，放于4℃储存备用。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的包载IR780的靶向多功能纳米粒在用于制备治疗黑色素瘤药物上的应用。
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