CN111329875A - 用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物及应用 - Google Patents
用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物,所述口腔护理组合物包含β‑葡聚糖和口腔可接受的载体;所述β‑葡聚糖包含≥70%的β‑1,3糖苷键。本文还公开了包含一种口腔护理组合物以及组合物在修复口腔软组织细胞中的应用。本发明的口腔护理组合物可显著地修复口腔软组织细胞和维持口腔环境平衡;可预防和治疗口腔感染、口腔溃疡和牙周牙龈疾病等口腔软组织的问题。
Description
技术领域
本发明涉及口腔护理技术领域,尤其是涉及用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物及应用。
背景技术
据世卫组织的定义,口腔卫生是指“没有口部和面部长期疼痛,口腔和咽喉癌症,口腔感染和口疮,牙周(牙龈)病,蛀牙和牙齿脱落及限制咬啮、咀嚼、微笑、说话和社会心理健康等个人能力的其它疾病与障碍的状态”。由此可见,维持口腔软组织的健康是口腔健康很重要的部分。
通常口腔软组织问题发生在口腔黏膜,牙周等部位,如口腔感染,口疮,牙周炎,牙龈炎等,由于这些问题都与微生物相关,因此常见的预防和解决办法也以杀菌抗菌为主,传统的治疗机理是通过抗菌剂抑制住有害菌的繁殖,控制其对口腔细胞的危害,以留给机体细胞自我生长修复的机会与时间,但其实这过程中一方面,广谱抗生素同时也在抑制有益菌的生长,另一方面,长期使用抗生素会带来耐药性,菌群失衡等长期风险。所以,无论是预防还是康复,对于口腔感染,口腔溃疡,牙周牙龈疾病等口腔软组织的问题,提高口腔细胞的自我修护能力对机体组织修复和维持口腔环境平衡有着重要的意义。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物。该口腔护理组合物可显著地修复口腔软组织细胞和维持口腔环境平衡;可预防口腔感染、口腔溃疡和牙周牙龈疾病等口腔软组织的问题。
本发明要解决的第二个技术问题是提供一种口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞中的应用。
为解决上述第一个技术问题,本发明采用如下技术方案:
一种用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物,包含β-葡聚糖和口腔所接受的载体;所述β-葡聚糖包含≥70%的β-1,3糖苷键。
作为一种优选的实施方式,所述β-葡聚糖包含≥85%的β-1-3糖苷键。
作为一种优选的实施方式,所述β-葡聚糖中还包含β-1,6糖苷键。
作为一种优选的实施方式,其特征在于:所述β-葡聚糖为酵母葡聚糖。
作为一种优选的实施方式,其特征在于:所述β-葡聚糖在组合物中的质量比≥0.01%;优选0.01-1.5%;更优选0.05%-1.0%;最优选0.1-0.5%。
作为一种优选的实施方式,所述组合物中还包含EGCg。
作为一种优选的实施方式,所述EGCg在组合物中的质量占比≥0.01%;优选≥1ppm;优选≥5ppm;更优选≥10ppm;最优选≥20ppm。
作为一种优选的实施方式,所述EGCg来源于茶多酚。
作为一种优选的实施方式,所述EGCg来源于茶提取液。
作为一种优选的实时方式,所述口腔护理组合物还包括儿茶素(catechin,C)、表儿茶素(epicatechin,EC)、没食子儿茶素(gallocatechin,GC)、表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)、儿茶素没食子酸酯(catechin gallate,CG)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechin gallate,GCG)、绿原酸的一种或几种的组合。
为解决上述第二个技术问题,如上所述口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞中的应用。
与现有技术相比较,本发明具有如下有益效果:
本发明的口腔护理组合物可显著地修复口腔软组织细胞和维持口腔环境平衡;可预防口腔感染、口腔溃疡和牙周牙龈疾病等口腔软组织的问题。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明,下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解,下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的,不应以此限制本发明的保护范围。
除非另有说明,本文中所用的所有百分比和比率均以总组合物重量计。除非另有说明,本文提及的所有成分的百分数.比例和含量均基于该成分的实际含量,并不包括在市售产品找那个可以与这些成分组合的溶剂.填料或其它物质。
本文中的术语“包含/包括”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。
本文中的术语“优选地”和它的变体是指在特定环境下能够提供特定有益效果的本发明的实施方案。然而,其它的实施方案在相同或其它的环境下也可以是优选的。此外,一个或多个优选实施方案的详细描述并不表示其它实施方案是无用的,并且不旨在本发明的范畴中排除其它的实施方案。
本发明实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行;所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
现有的口腔软组织细胞修复改善剂,主要通过两种途径改善口腔软组织细胞破损症状,促进破损面修复。一种是抑制炎症因子释放,减轻炎症因子对口腔软组织细胞的破坏;另一种是促进破损面处软组织细胞的修复。
作为本发明的一个方面,本发明一种修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物,包含β-葡聚糖和口腔所接受的载体,其中所述β-葡聚糖包含≥70%的β-1,3葡萄糖糖苷键;优选≥75%;更优选≥80%;最优选≥85%。
本发明意外地发现包含β-1,3糖苷键的葡聚糖的口腔护理组合物,且所述β-1,3糖苷键在β-葡聚糖中含量≥70%时,这种特定口腔护理组合物可有效修复口腔软组织细胞破损面,改善口腔软组织细胞破损症状,促进破损面修复。
葡聚糖
葡聚糖是指以葡萄糖为单糖组成的同型多聚糖,葡萄糖单元之间以糖苷键连接。其中根据糖苷键的类型又可分为α-葡聚糖和β-葡聚糖;本发明选用的原料为β-葡聚糖;所述β-葡聚糖通常含有β-1,3糖苷键、β-1,4糖苷键和β-1,6糖苷键等,而在本发明的原料β-葡聚糖中,β-1,3糖苷键含量≥70%。
根据本发明的某些实施例,所述β-1,3糖苷键其结构如下:
根据本发明的某些实施例,所述β-葡聚糖还进一步包含β-1,6糖苷键,所述β-1,6糖苷键其结构如下:
根据本发明的某些实施例,所述β-葡聚糖为酵母葡聚糖;所述酵母葡聚糖以β-1,3糖苷键为主链,含有少量β-1,6糖苷键分支结构的多糖,其中β-1,3糖苷键占85%以上,分子量约为500-1000KD。
根据本发明的某些实施例,所述葡聚糖糖苷键结构以及结构比例可通过IR、NMR、HPLC等方法分析检测。
作为本发明的另一方面,所述用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物还包含EGCg;
EGCg
EGCg(Epigallocatechin gallate,结构式如下所示)即表没食子儿茶素没食子酸酯,是绿茶茶多酚的主要组成成分,是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体,具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。
根据本发明的某些实施例,所述EGCg在组合物中的质量比≥1ppm;优选≥5ppm;更优选≥10ppm;最优选≥20ppm;
根据本发明的某些实施例,所述EGCg来源于茶多酚。
茶多酚
茶多酚,又名抗氧灵、维多酚、防哈灵,是茶叶中所含的一类多羟基类化合物,简称TP,主要化学成分为儿茶素类(黄烷醇类)、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚合酚类等化合物的复合体;其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分,占茶多酚总量的65%~80%。儿茶素类化合物主要包括EGCg(Epigallocatechin gallate),儿茶素(catechin,C)、表儿茶素(epicatechin,EC)、没食子儿茶素(gallocatechin,GC)、表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)、儿茶素没食子酸酯(catechin gallate,CG)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)。因此,一般茶多酚中可能含有一定量本发明原料EGCg,可以作为本发明原料EGCg的来源。茶多酚可通过使用有机溶剂萃取茶叶并浓缩后获得。
根据本发明的某些实施例,所述EGCg来源于茶提取液。
茶提取液
茶提取液是从茶叶片通过水、酒精等溶剂提取后所得的溶液,主要包括茶多酚、咖啡因、芳香油、水分、矿物质、色素、碳水化合物、蛋白质、氨基酸、维生素等。
根据本发明的某些实施例,所述茶提取液是通过茶的酵母发酵制得的产物。
茶的酵母发酵产物是指由天然酿酒酵母菌与绿茶提取物发酵得来,可以提供茶多酚、茶多糖、茶氨酸等多种绿茶抗氧化、抗衰老成分。通过酵母菌发酵,提供多种氨基酸、有机酸等多种成分,协同作用,具有显著的清除自由基、抑制酪氨酸酶作用,美白等功效。可市售购买,比如安琪酵母销售的茶酵母提取物。
在本发明的某些优选实施例中,所述茶优选为黄山毛峰、龙井、碧螺春。
根据本发明的某些实施例,所述口腔护理组合物还进一步包括儿茶素(catechin,C)、表儿茶素(epicatechin,EC)、没食子儿茶素(gallocatechin,GC)、表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)、儿茶素没食子酸酯(catechin gallate,CG)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)、绿原酸的一种或几种的组合。
根据本发明的某些实施例,所述口腔护理组合物为牙膏.凝胶.漱口水或牙粉。
根据本发明的某些实施例,本发明的口腔护理组合物还可以包含口腔可接受的载体。
口腔可接受的载体
本发明所述“口腔可接受的载体”是指适用于配制本发明所公开的口腔护理组合物的任何媒介物;当口腔可接受的载体以本发明公开的量在口中保留而不吞咽持续如本发明所需的足以允许与牙齿表面有效接触的时间段时对哺乳动物无害;总体上,口腔可接受的载体即使无意被吞咽也不会有害;合适的口腔可接受的载体包括,例如,一种或多种下列物质:水、增稠剂、缓冲剂、湿润剂、表面活性剂、研磨剂、甜味剂、调味剂、视觉辅助剂(例如,色素.染料或其混合物)、抗龋齿剂、抗菌剂、增白剂、脱敏剂、维生素、防腐剂、酶以及其混合物等。
根据本发明的某些实施例,所述口腔护理组合物中还包括保湿剂、调味剂和/或增稠剂等辅料。
保湿剂
所述“保湿剂”是防止口腔护理组合物脱水变硬的成分。示例的保湿剂包括但不限于如甘油、丙二醇、山梨醇等。按质量百分比计,保湿剂在口腔护理组合物中的含量通常为10-80%。
增稠剂
所述“增稠剂”是一种增加溶液或液体/固体混合物的粘度,但基本上不会改变其性质的物质。加入增稠剂的目的是为了给产品提供骨架.流动性和稳定性。示例的增稠剂包括,但不限于,以下一种或多种:羟乙基纤维素、羧甲基纤维素及其盐(例如羧甲基纤维素钠)、角叉菜聚糖(carrageenan)、羧基乙烯基聚合物、黄原胶(xanthangμm)、卡拉胶、明胶、支链淀粉、海藻酸钠等。在某些实施方式中,所述增稠剂包括黄原胶、卡拉胶或羧甲基纤维素钠中的一种或多种。增稠剂在口腔护理组合物中的重量比例通常为0.2-2%。
根据本申请的某些优选实施例,所述口腔护理组合物中可进一步包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂和/或美白剂等活性成分。
抗菌剂
所述“抗菌剂”是指能够在一定时间内,使口腔护理组合物中某些微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。示例的抗菌剂包括但不限于:氯化亚锡、四氢姜黄素、氯化十六烷基吡啶、三氯生等。
抗龋剂
所述“抗龋剂”是指对龋病有抑制作用的物质,例如可以通过降低牙釉质羟基磷灰石的溶解度增强牙齿的抗龋能力的物质,或控制菌斑、抑制细菌生长的物质。示例的抗龋剂包括但不限于含磷试剂(磷酸钙、甘油磷酸镁、乳磷酸钙、酪蛋白酸钠等)或精氨酸及其衍生物。
抗敏剂
所述“抗敏剂”是指通过抑制神经冲动或能够封闭牙本质小管或降低其通透性,从而预防或治疗牙本质过敏症的物质。示例的抗敏剂包括但不限于:甘草酸二钾、氟化钾、硝酸钾、氯化钾等钾离子源。
美白剂
所述“美白剂”是指对牙齿能起到美白作用的物质。示例的美白剂包括但不限于:过氧化物漂白剂。
作为本发明的又一方面,提供了上述组合物在修复口腔软组织细胞上的应用。
本发明中修复口腔软组织细胞评价方法如下:
1.实验材料:
1.1细胞系:人牙龈成纤维细胞;
1.2培养基:含10%胎牛血清(简称:FBS)的DMEM培养基(改进的Eagle基础细胞培养基),2-8℃保存2周;
1.3测试条件:温度37±0.5℃,湿度>90%,5%CO2浓度;
1.4溶液及对照:阴性对照组(简称:NC):含1%FBS的DMEM培养基;
阳性对照组(简称:PC):含10%FBS的DMEM培养基;
待测物质(简称:TA):用培养液稀释至所需测试浓度。
2.试验步骤:
2.1常规培养细胞,将细胞以密度为2.0~3.0×105个/mL/孔接种于24孔板,返回培养箱培养18-24h至细胞融合。
2.2取出培养板,用无菌200μL枪头,在每个孔中间迅速划痕,造成“伤口”。用PBS清洗细胞层3次,去除脱落的细胞。
2.3每孔加入1mL含不同浓度的测试样品的培养液,同时在镜下采集图像,记为0h,标记所采集的位置。
2.4每隔12h,在所标记的相同位置,采集图片,记为12h,24h和48h。
2.5数据分析:采用IPP图像分析软件,分析每个图像划痕区域的面积,以0h为100%,计算相对面积。
具体实施例
实施例1-2,对比例1-5:
根据表格1所述配方配置实施例1-2.对比例1-5,其中实施例1添加2号β-葡聚糖,实施例2添加酵母葡聚糖,对比例1添加1wt%的FBS,对比例2添加10%的FBS,对比例3添加α-葡聚糖0.05%,对比例4添加0.05%燕麦葡聚糖,对比例5添加0.05%的2号β-葡聚糖。
表1:对比例1-5,实施例1配方组成
实施例1添加的1号β-葡聚糖中β-1,3糖苷键含量为70%;
实施例2添加的酵母葡聚糖以β-1,3-葡聚糖为主链,含量少量β-1,6-葡聚糖分支结构的多糖聚合物,其中β-1,3糖苷键占聚合物糖苷键的85%以上,分子量约为500-1000KD;
对比例4添加的燕麦葡聚糖是主要通过β-1,3和β-1,4糖苷键连接的聚合物,其中β-1,4和β-1,3糖苷键的比例约为2.4:1,β-1,3糖苷键占聚合物糖苷键的25%;
对比例5添加的1号葡聚糖中β-1,3键葡聚糖链糖苷键的50%以上。
表2:对比例1-2和实施例1的划痕相对面积大小(%)
对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | 实施例1 | 实施例2 | |
0h | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% |
24h | 79.54% | 10.70% | 89.10% | 53.45% | 56.43% | 40.90% | 35.30% |
从表1和表2可以看出,对比例1为阴性对照,FBS的浓度为1%,对比例2为阳性对照,FBS的浓度为10%,对比例3-5和实施例1-2的样品浓度均为0.05%。划痕经过24h细胞培养后,阴性对照(对比例1)的划痕面积由开始的100%缩减为79.54%;阳性对照(对比例2)的划痕面积由开始的100%缩减为10.70%;对比例3的划痕面积由开始的100%缩减为56.43%;对比例4的划痕面积由开始的100%缩减为53.45%;对比例5的划痕面积由开始的100%缩减为56.43%;实施例1的划痕面积由开始的100%缩减为40.90%;实施例2的划痕面积由开始的100%缩减为35.30%。由对比例和实施例的24小时后的划痕面积可以看出,α-葡聚糖无促进细胞修复的作用;含少量β-1,3键葡聚糖的燕麦葡聚糖有较小的促进细胞修复的作用;而含有β-1,3糖苷键50%以上的葡聚糖的促进细胞修复作用与燕麦葡聚糖基本相当;但当葡聚糖葡萄糖链上的β-1,3糖苷键占70%以上时,葡聚糖的促进细胞修复作用有了显著的提高,且β-1,3糖苷键占85%以上的酵母葡聚糖效果更好。
实施例3-7:
根据表格3所述配方配置实施例实施例3-7,其中实施例3添加0.01%酵母葡聚糖,实施例4添加0.1%酵母葡聚糖,实施例5添加0.5%酵母葡聚糖,实施例6添加1%酵母葡聚糖,实施例7添加1.5%酵母葡聚糖。为比较数据方便,将对比例1-2,实施2数据同时录入表格。
表3:实施例3-7配方组成(表格中百分比为重量百分比)
表4:实施例3-7的划痕相对面积大小(%)
对比例1 | 对比例2 | 实施例3 | 实施例2 | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 | 实施例7 | |
0h | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% |
24h | 79.54% | 10.70% | 55.76% | 35.30% | 31.77% | 27.59% | 20.32% | 20.13% |
从表3和表4可以看出,划痕经24小时培养,当酵母葡聚糖浓度为0.01%时,划痕面积由开始的100%缩减为55.76%;
当酵母葡聚糖浓度为0.05%时,划痕面积由开始的100%缩减为35.30%,相比0.01%浓度的酵母葡聚糖,划痕面积有了更为明显的大幅减少;
当酵母葡聚糖浓度为0.1%时,划痕面积由开始的100%缩减为31.77%%;
当酵母葡聚糖浓度为0.5%时,划痕面积由开始的100%缩减为27.59%%;
当酵母葡聚糖浓度为1.0%时,划痕面积由开始的100%缩减为20.32%%,显然随着酵母葡聚糖浓度的升高,划痕面积在不断缩小,实施例配方的促进细胞修复作用在不断上升;
但当酵母葡聚糖浓度升高到1.5%时,划痕面积经24小时培养缩减为20.13%,与浓度为1.0%时的划痕面积相当,并没有进一步缩小,即1.5%浓度葡聚糖配方在浓度上明显较1.0%大,但促进细胞修复作用的能力并没有随之显著上升。
实施例8,对比例6:
根据表5所述配方配置对比例6和实施例8,其中对比例6添加1ppmEGCg,实施例8添加0.01%酵母葡聚糖和1ppmEGCg。为比较数据方便,将对比例1-2和实施3数据同时录入表格。
表5:对比例6,实施例8配方组成(表格中百分比为重量百分比)
表6:对比例6,实施例8的24h划痕相对面积大小(%)
对比例1 | 对比例2 | 对比例6 | 实施例3 | 实施例8 | |
0h | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% |
24h | 79.54% | 10.70% | 73.50% | 55.76% | 43.27% |
从表5和表6可以看出,划痕经24小时培养,仅添加1ppmEGCg的对比例6相比阴性对照,并没有表现出较好的划痕面积。
在实施例3的基础上添加1ppm浓度EGCg,划痕面积由原先的55.76%降低到了43.27%,可见EGCg对β-葡聚糖修复口腔软组织细胞有显著的增效。
实施例9-10:
根据表7所述配方配置实施例9-10,实施例9添加0.01%酵母葡聚糖和10ppm茶多酚,实施例10添加0.01%酵母葡聚糖和0.1%茶提取液。
表7:实施例9-10的配方组成(表格中百分比为重量百分比)
实施例9 | 实施例10 | |
酵母葡聚糖 | 0.01% | 0.01% |
茶多酚 | 10ppm | / |
茶提取液 | / | 0.01% |
DMEM | 添加至100% | 添加至100% |
实施例9添加的茶多酚含有EGCg,且EGCg在茶多酚中的质量占比为70%,实施例10添加的茶提取液中,茶多酚浓度为30%。
表8:实施例9-10的24h划痕相对面积大小(%)
实施例9 | 实施例10 | |
0h | 100% | 100% |
24h | 35.57% | 33.59% |
从表7和表8可以看出,划痕经24小时培养,添加茶多酚和酵母葡聚糖的实施例9划痕面积缩小为35.57%,添加茶提取液和酵母葡聚糖的实施例10划痕面积缩小为33.59%,都表现出比单独添加0.01%酵母葡聚糖(参见实施例3)更好的促进细胞修复作用。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (11)
1.用于修复口腔软组织细胞的口腔护理组合物,其特征在于:包含β-葡聚糖和口腔所接受的载体;所述β-葡聚糖包含≥70%的β-1,3糖苷键。
2.根据权利要求1所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述β-葡聚糖包含≥85%的β-1-3糖苷键。
3.根据权利要求1所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述β-葡聚糖中还包含β-1,6糖苷键。
4.根据权利要求1所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述β-葡聚糖为酵母葡聚糖。
5.根据权利要求1所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述β-葡聚糖在组合物中的质量比≥0.01%;优选0.01-1.5%;更优选0.05%-1.0%;最优选0.1-0.5%。
6.根据权利要求1所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述组合物中还包含EGCg。
7.根据权利要求6所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述EGCg在组合物中的质量占比≥1ppm;优选≥5ppm;更优选≥10ppm;最优选≥20ppm。
8.根据权利要求6所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述EGCg来源于茶多酚。
9.根据权利要求6所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述EGCg来源于茶提取液。
10.根据权利要求6所述的口腔护理组合物,其特征在于:所述口腔护理组合物还包括儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、绿原酸的一种或几种的组合。
11.如权利要求1-10所述口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞中的应用。
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