CN113101243B - 口腔软组织细胞修复促进剂、口腔护理组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了口腔软组织细胞修复促进剂、口腔护理组合物及应用，所述口腔软组织细胞修复促进剂包含雪菊提取物。本发明口腔软组织细胞修复促进剂可有效修复口腔软组织细胞，从而改善口腔软组织细胞破损症状、促进破损症状愈合。

Description

口腔软组织细胞修复促进剂、口腔护理组合物及应用

技术领域

本发明涉及口腔护理技术领域，尤其是涉及一种口腔软组织细胞修复促进剂、口腔护理组合物及应用。

背景技术

据世卫组织的定义，口腔卫生是指“没有口部和面部长期疼痛、口腔和咽喉癌症、口腔感染和口疮、牙周(牙龈)病、蛀牙和牙齿脱落及限制咬啮、咀嚼、微笑、说话和社会心理健康等个人能力的其它疾病与障碍的状态”。由此可见，维持口腔软组织的健康是口腔健康很重要的部分。

通常口腔软组织问题发生在口腔黏膜，牙周等部位，如口腔感染，口疮，牙周炎，牙龈炎等，由于这些问题都与微生物相关，因此常见的预防和解决办法也以杀菌抗菌为主，传统的治疗机理是通过抗菌剂抑制住有害菌的繁殖，控制其对口腔细胞的危害，以留给机体细胞自我生长修复的机会与时间，但其实这过程中一方面，广谱抗生素同时也在抑制有益菌的生长，另一方面，长期使用抗生素会带来耐药性，菌群失衡等长期风险。所以，无论是预防，还是康复，对于口腔感染，口腔溃疡，牙周牙龈疾病等口腔软组织的问题，提高口腔细胞的自我修护能力对机体组织修复和维持口腔环境平衡有着重要的意义。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一种口腔软组织细胞修复促进剂。该促进剂可有效修复口腔软组织细胞，从而改善口腔软组织细胞破损症状、促进破损症状愈合。

本发明要解决的第二个技术问题是提供一种含有上述促进剂的口腔护理组合物。

本发明要解决的第三个技术问题是提供一种含有上述促进剂的口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞上的应用。

为解决第一个技术问题，本发明采用如下的技术方案:

一种口腔软组织细胞修复促进剂，包含雪菊提取物。

在本发明的某些实施方式中，所述雪菊提取物包含绿原酸、槲皮素、马里苷、芦丁、木犀草素、乔松素中的一种或几种。

在本发明的优选实施方式中，所述口腔软组织细胞修复促进剂还包含粘多糖；所述粘多糖包括芦荟多糖、透明质酸中的一种或两种。

在本发明的优选实施方式中，所述芦荟多糖来自于芦荟提取物。

为解决上述第二个技术问题，本发明本发明采用如下的技术方案:

一种含有上述口腔软组织细胞修复促进剂的口腔护理组合物，所述口腔软组织细胞修复促进剂中的雪菊提取物在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

在本发明的优选实施方式中，所述口腔软组织细胞修复促进剂中，芦荟多糖在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

在本发明的优选实施方式中，所述口腔软组织细胞修复促进剂中，透明质酸在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

在本发明的优选实施方式中，所述口腔护理组合物为牙膏、凝胶、漱口水或牙粉。

为解决上述第三个技术问题，本发明提供一种含有雪菊提取物的口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞中的应用，所述口腔护理组合物包含上述所述促进剂中的任何一种。

与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果:

本发明含有促进剂的口腔护理组合物可有效修复口腔软组织细胞，从而改善口腔软组织细胞破损症状、促进破损症状愈合。

附图说明

图1为对比例1细胞层0h时的显微放大平面图；

图2为对比例1细胞层24h处理后的显微放大平面图；

图3为对比例2细胞层0h时的显微放大平面图；

图4为对比例2细胞层24h处理后的显微放大平面图；

图5为实施例1细胞层0h时的显微放大平面图；

图6为实施例1细胞层24h处理后的显微放大平面图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

除非另有说明，本文中所用的所有百分比和比率均以总组合物重量计。除非另有说明，本文提及的所有成分的百分数、比例和含量均基于该成分的实际含量，并不包括在市售产品找那个可以与这些成分组合的溶剂、填料或其它物质。

本文中的术语“包含/包括”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。

本文中的术语“优选地”和它的变体是指在特定环境下能够提供特定有益效果的本发明的实施方案。然而，其它的实施方案在相同或其它的环境下也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施方案的详细描述并不表示其它实施方案是无用的，并且不旨在本发明的范畴中排除其它的实施方案。

本发明实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

作为本发明的一个方面，本发明公开一种口腔软组织细胞修复促进剂，包含雪菊提取物。

雪菊又名两色金鸡菊、波斯菊、孔雀草、蛇目菊。本发明所述的雪菊提取物是指从菊科金鸡菊属植物雪菊(Coreopsis tinctoria)的叶子、根、茎、花或任何适当部分获得的提取物。提取方法包括蒸汽蒸溜、冷浸提取法、加热回流提取超临界流体萃取，提取方法所用的溶剂包括水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇、乙醇、石油醚、丙二醇、乙酸乙酯或其他有机溶剂。

现有的口腔软组织细胞修复改善剂，主要通过两种途径改善口腔软组织细胞破损症状、促进破损面愈合：一种是抑制炎症因子释放、减轻炎症因子对口腔软组织细胞的破坏；另一种是促进破损面处粘膜细胞的修复。本发明意外发现包含雪菊提取物的口腔护理组合物可有效修复口腔软组织细胞破损面，改善口腔软组织细胞破损症状、促进破损面愈合。

根据本发明的某些实施例，所述雪菊提取物包含绿原酸、槲皮素、马里苷、芦丁、木犀草素中的一种或几种。

根据本发明的某些实施例，所述雪菊为昆仑雪菊，天山雪菊或维药雪菊。

根据本发明的某些实施例，所述雪菊提取物以溶液形态存在；

根据本发明的某些实施例，所述雪菊提取物物溶液是将固体雪菊提取物分散在水中；

根据本发明的某些优选实施例，所述雪菊提取物溶液包含丙二醇；

本发明的另一方面，所述口腔软组织细胞修复促进剂还包含粘多糖；所述粘多糖包括芦荟多糖、透明质酸中的一种或两种。

根据本发明的某些优选实施例，所述芦荟多糖来自于芦荟提取物。

本发明意外发现，当本申请口腔软组织细胞修复促进剂中加入芦荟提取物时，它和雪菊提取物互配使用可显著提高修复促进剂的细胞修复效果，加速细胞口腔溃疡面愈合。而且，本发明意外发现，当本申请口腔软组织细胞修复促进剂中加入透明质酸时，它和雪菊提取物互配使用也可显著提高修复促进剂的细胞修复效果，加速细胞口腔软组织细胞破损面愈合。

根据本发明的某些优选实施例，所述芦荟多糖是乙酰化甘露聚糖。

本发明所述的芦荟提取物是指从百合科芦荟属芦荟(又称作库拉索芦荟)的叶子、根、茎或任何适当部分获得的提取物。提取方法包括蒸汽蒸溜、冷浸提取法、加热回流提取超临界流体萃取，提取方法所用的溶剂包括水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇、乙醇、石油醚、丙二醇、乙酸乙酯或其他有机溶剂。

作为本发明的又一个方面，一种含有上述口腔软组织细胞修复促进剂的口腔护理组合物，所述口腔软组织细胞修复促进剂中的雪菊提取物在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

根据本发明的优选实施例，所述口腔软组织细胞修复促进剂中的芦荟多糖在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

根据本发明的优选实施例，所述口腔软组织细胞修复促进剂中的透明质酸在口腔护理组合物中的质量占比为0.001-1％；优选0.01-0.5％；更优选0.01％-0.05％。

根据本发明的优选实施例，所述口腔护理组合物为牙膏、凝胶、漱口水或牙粉。

作为本发明的再一个方面，本发明提供一种含有雪菊提取物的口腔护理组合物在修复口腔软组织细胞中的应用，所述口腔护理组合物包含上述所述促进剂中的任何一种。

本发明的口腔护理组合物还可以包含口腔可接受的载体。

本发明所述“口腔可接受的载体”是指适用于配制本发明所公开的口腔护理组合物的任何媒介物；当口腔可接受的载体以本发明公开的量在口中保留而不吞咽持续如本发明所需的足以允许与牙齿表面有效接触的时间段时对哺乳动物无害；总体上，口腔可接受的载体即使无意被吞咽也不会有害；合适的口腔可接受的载体包括，例如，一种或多种下列物质:水、增稠剂、缓冲剂、湿润剂、表面活性剂、研磨剂、甜味剂、调味剂、视觉辅助剂(例如，色素、染料或其混合物)、抗龋齿剂、抗菌剂、增白剂、脱敏剂、维生素、防腐剂、酶以及其混合物等。

根据本发明的某些实施例，所述口腔护理组合物中还包括保湿剂、调味剂和/或增稠剂等辅料。

“保湿剂”是防止口腔护理组合物脱水变硬的成分。示例的保湿剂包括但不限于如甘油、丙二醇、山梨醇等。按质量百分比计，保湿剂在口腔护理组合物中的含量通常为10-80％。

“增稠剂”是一种增加溶液或液体/固体混合物的粘度，但基本上不会改变其性质的物质。加入增稠剂的目的是为了给产品提供骨架、流动性和稳定性。示例的增稠剂包括，但不限于，以下一种或多种:羟乙基纤维素、羧甲基纤维素及其盐(例如羧甲基纤维素钠)、角叉菜聚糖(carrageenan)、羧基乙烯基聚合物、黄原胶(xanthan gμm)、卡拉胶、明胶、支链淀粉、海藻酸钠等。在某些实施方式中，所述增稠剂包括黄原胶、卡拉胶或羧甲基纤维素钠中的一种或多种。增稠剂在口腔护理组合物中的重量比例通常为0.2-2％。

根据本申请的某些优选实施例，所述口腔护理组合物中可进一步包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂和/或美白剂等活性成分。

“抗菌剂”是指能够在一定时间内，使口腔护理组合物中某些微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。示例的抗菌剂包括但不限于:氯化亚锡、四氢姜黄素、氯化十六烷基吡啶、三氯生等。

“抗龋剂”是指对龋病有抑制作用的物质，例如可以通过降低牙釉质羟基磷灰石的溶解度增强牙齿的抗龋能力的物质，或控制菌斑、抑制细菌生长的物质。示例的抗龋剂包括但不限于含磷试剂(磷酸钙、甘油磷酸镁、乳磷酸钙、酪蛋白酸钠等)、或精氨酸及其衍生物。

“抗敏剂”是指通过抑制神经冲动或能够封闭牙本质小管或降低其通透性，从而预防或治疗牙本质过敏症的物质。示例的抗敏剂包括但不限于:甘草酸二钾、氟化钾、硝酸钾、氯化钾等钾离子源。

“美白剂”是指对牙齿能起到美白作用的物质。示例的美白剂包括但不限于:过氧化物漂白剂。

具体实施例

修复口腔软组织细胞评价方法:

1.实验材料：

1.1细胞系：人牙龈成纤维细胞；

1.2培养基：含10％胎牛血清(简称：FBS)的DMEM培养基(改进的Eagle基础细胞培养基)，2-8℃保存2周；

1.3测试条件：温度37±0.5℃，湿度>90％，5％CO2浓度；

1.4溶液及对照：阴性对照组(简称：NC)：含1％FBS的DMEM培养基；

阳性对照组(简称：PC)：含10％FBS的DMEM培养基；

待测物质(简称：TA)：用培养液稀释至所需测试浓度。

2.试验步骤：

2.1常规培养细胞，将细胞以密度为2.0～3.0×105个/mL/孔接种于24孔板，返回培养箱培养18-24h至细胞融合。

2.2取出培养板，用无菌200μL枪头，在每个孔中间迅速划痕，造成“伤口”。用PBS清洗细胞层3次，去除脱落的细胞。

2.3每孔加入1mL含不同浓度的测试样品的培养液，同时在镜下采集图像，记为0h，标记所采集的位置。

2.4每隔24h，在所标记的相同位置，采集图片，记为24h和48h。

2.5数据分析：采用IPP图像分析软件，分析每个图像划痕区域的面积，以0h为100％，计算相对面积。

实施例1、对比例1-2：

根据表格1所述配方配置实施例1、对比例1-2，其中实施例1添加雪菊提取物，对比例1-2分别添加1wt％的FBS和10wt％的FBS。

表1:对比例1-2，实施例1配方组成

注:实施例1中雪菊提取物是将指固体雪菊提取物分散在水中所得1.0wt％浓度的雪菊提取物的水溶液。

表2：对比例1-2和实施例1的划痕相对面积大小(％)

	对比例1	对比例2	实施例1
				0h	100％	100％	100％
24h	73.95％	9.90％	26.25％

从表1和表2可以看出，经过24h细胞培养，阴性对照(对比例1)的划痕面积由开始的100％缩减为73.95％，同浓度的雪菊提取物的划痕面积由开始的100％缩减为21.43％；与阴性对照相比，实施例1中雪菊提取物有显著的细胞愈合促进作用。虽然阳性对照(对比例2)的划痕面积由开始的100％缩减为9.9％，但阳性对照中FBS的浓度达到了10％，而实施例1中雪菊提取物只有1％的浓度，参见图1-图6所示。

实施例2-实施例6

根据表格3所述配方配置实施例2-实施例6。

表3：实施例2-6配方组成

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注:实施例中雪菊提取物是将指固体雪菊提取物分散在水中所得1％浓度的雪菊提取物的水溶液

表4：实施例2-6的划痕相对面积大小(％)

	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6
						0h	100％	100％	100％	100％	100％
12h	85.67％	69.25％	51.29％	40.73％	37.11％

从表3和表4可以看出，划痕经12小时培养，雪菊提取物可快速促进细胞愈合，且随着雪菊提取物浓度的提高，细胞愈合的速度也在加快。当待测样品不经稀释，即待测样品为1.0wt％固体雪菊提取物的水溶液时，细胞愈合速度趋于平缓。

实施例7-实施例9：

根据表格5所述配方配置实施例7-实施例9；为比较数据方便，将实施2和实施例3的数据同时录入表格。

表5：实施例2-3和实施例7-9配方组成

表6：实施例2-3，实施例7-9的划痕相对面积大小(％)

	实施例2	实施例7	实施例8	实施例9	实施例3
						0h	100％	100％	100％	100％	100％
24h	54.33％	31.65％	21.43％	20.08％	20.07％

上组实施例的上述表3和表4是细胞划痕经过12小时细胞培养，观察样品的快速细胞愈合功效；本组实施例考察了24小时细胞培养后，不同浓度样品对细胞愈合的作用。

从表5和表6可以看出，即使雪菊提取物在配方中的质量占比只有0.1％，即固含物在配方中浓度只有0.001％，划痕经过24小时培养后，相对面积也比开始的100％缩小至54.33％，显示出比阴性对照(对比例1)更好的细胞愈合作用。之后随着浓度升高，经24h培养后的划痕相对面积也在不断缩小，当雪菊提取物浓度升高至在配方中的质量占比5％，即雪菊提取物的固体浓度升高至0.05％，划痕面积缩小至20.08％；但是当浓度升高至在配方中的质量占比10％，即固含物在配方中浓度升高至0.1％，划痕面积与雪菊提取物在配方中的质量占比5％浓度时相当，划痕面积并没有随着浓度的进一步提升而有明显缩小。

实施例10、对比例3-4：

根据表格7所述配方配置实施例10和对比例3-4；

表7：

注：实施例10中芦荟提取物是将指固体芦荟提取物分散在水中所得1％浓度的芦荟提取物的水溶液。

表8：对比例3-4和实施例10的划痕相对面积大小(％)

	对比例3	对比例4	实施例10
				0h	100％	100％	100％
24h	59.07％	50.35％	39.22％

从表格7和8可以看出，芦荟提取物虽然相比阴性对照也有较好的促进细胞愈合作用；但是与雪菊提取物互配使用后，细胞的划痕面积有了显著下降。也就是说：雪菊提取物和芦荟提取物有相互配合的作用，使得修复口腔软组织细胞的能力显著提升。

实施例11、对比例5-6：

根据表格9所述配方配置实施例11和对比例5-6；

表9：

表10：对比例5-6和实施例11的划痕相对面积大小(％)

	对比例5	对比例6	实施例11
				0h	100％	100％	100％
24h	67.21％	61.29％	38.72％

从表格9和10可以看出，透明质酸虽然相比阴性对照也有较好的促进细胞愈合作用；但是与雪菊提取物互配使用后，细胞的划痕面积有了显著下降。也就是说：雪菊提取物和透明质酸有相互配合的作用，使得修复口腔软组织细胞的能力显著提升。

实施例12

根据表格11所述配方配置实施例12；

表11：

表12：实施例12的划痕相对面积大小(％)

	实施例12
		0h	100％
24h	25.79％

从表格11和12可以看出：芦荟提取物、透明质酸和雪菊提取物共同合用时，即使三种成分的总量只有0.3％，但经24h培养后，划痕面积已经比0.5％雪菊提取物的划痕面积小。也就是说，所芦荟提取物、透明质酸和雪菊提取物有相互配合、相互促进修复口腔软组织细胞的能力更显著提升。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (9)

1.一种口腔护理组合物，含有口腔软组织细胞修复促进剂；其特征在于：

所述口腔软组织细胞修复促进剂包含雪菊提取物和透明质酸；

所述雪菊提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.001-1%；

所述透明质酸在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.001-1%；

所述雪菊提取物包含绿原酸、槲皮素、马里苷、芦丁、木犀草素、乔松素中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述口腔护理组合物，其特征在于：所述口腔软组织细胞修复促进剂还包含芦荟提取物；所述芦荟提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.001-1%。

3.根据权利要求1所述口腔护理组合物，其特征在于：所述雪菊提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01-0.5%。

4.根据权利要求3所述口腔护理组合物，其特征在于：所述雪菊提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01%-0.05%。

5.根据权利要求2所述口腔护理组合物，其特征在于：所述芦荟提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01-0.5%。

6.根据权利要求5所述口腔护理组合物，其特征在于：所述芦荟提取物在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01%-0.05%。

7.根据权利要求1所述口腔护理组合物，其特征在于：所述透明质酸在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01-0.5%。

8.根据权利要求7所述口腔护理组合物，其特征在于：所述透明质酸在口腔软组织细胞修复促进剂中的质量占比为0.01%-0.05%。

9.根据权利要求1所述口腔护理组合物，其特征在于：所述口腔护理组合物为牙膏、凝胶、漱口水或牙粉。

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