CN111235107A - 一种用于免疫细胞培养的添加剂、培养基及免疫细胞的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于免疫细胞培养的添加剂，添加剂的具体组成为：4‑氨基‑3‑酰基‑2‑萘酚、丝素蛋白、大豆低聚肽、水龙骨多糖、枸杞多糖、黄芩甙、IL‑2、IL‑12、IL‑21、胰岛素、亚硒酸钠、丙戊酸。本发明添加剂中的4‑氨基‑3‑酰基‑2‑萘酚和细胞生长因子IL‑2、IL‑12、IL‑21一起诱导免疫细胞扩增，本发明添加剂中的龙骨多糖、枸杞多糖和黄芩甙复配使用，刺激免疫细胞，提高免疫细胞的兴奋度，可有效抑制细胞进入休眠，提高免疫细胞的活性，进而促进免疫细胞的扩增。本发明添加剂中的丝素蛋白和大豆低聚肽配合使用，调节细胞扩增过程中的渗透压，对细胞膜起保护作用，提高细胞的保水能力。本发明添加剂的原料间协同作用，提高免疫细胞的增值率和免疫活性。

Description

一种用于免疫细胞培养的添加剂、培养基及免疫细胞的培养 方法
技术领域
本发明涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种用于免疫细胞培养的添加剂、培养基及免疫细胞的培养方法。
背景技术
哺乳动物的免疫系统包括多个独特的细胞，这些细胞起到防御细菌、病毒、毒素以及其他非-宿主物质入侵宿主的作用。对免疫系统的特异性起到主要作用的细胞类型称作淋巴球，淋巴球中具有B细胞、T细胞以及称作自然杀伤细胞的NK细胞。NK细胞自产生具备能够准确区分自身和外界的能力，及时找出非自身之物并去除，因此称作自然杀伤(NK)细胞。
在免疫疗法中激活的免疫细胞中，NK细胞是作为一种特征性形态的大颗粒淋巴细胞，具有杀死被感染病毒、肿瘤细胞的能力突出且不杀死大部分正常细胞的特性，NK细胞与IL-2、IL-12、干扰素等细胞因子反应，由此提供效价、分泌性、增殖性机能。在人体中，NK细胞的表现型是CD16及CD56，由于细胞表面上没有T细胞受体复合物，CD16和CD56被用作NK细胞的标志物。
但是，即使对于正常人而言，这样对杀伤癌细胞起到卓越作用的NK细胞仅占据外周血淋巴球的5～25％，对于癌症患者而言，该比率降低至不足5％，因此，若没有通过免疫疗法的额外扩增过程，则对癌细胞的杀伤作用受限。
在培养免疫细胞时，培养基作为免疫细胞体外扩增的主要载体，直接关系着其体外诱导的结果，包括增殖数量、杀瘤效果等各种生物活性指标。在基础研究中，为了促进细胞生长，培养液中添加了动物源性血清等生物活性物质，但是动物性成分在免疫细胞的临床性应用显然是不被允许的，因为存在血清批次造成的质量不稳定以及动源性污染等问题而存在安全隐患，在血源性细胞的培养中可从自身血样中提取的小量血清即可满足，甚至可以无需添加血清。因而越来越多的技术人员致力于研究成分明确的不含动物血清的培养基，即无血清培养基，可排除动物源性污染和血清导致的不确定性。但是，现有的无血清培养基扩增免疫细胞普遍存在增殖率低，细胞活性差，杀瘤效果不理想等问题，获得大量体外培养的免疫细胞存在困难。因此，寻找一种可以提高免疫细胞增殖率及免疫活性的培养基是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种用于免疫细胞培养的添加剂，可以诱导免疫细胞增殖，提高免疫细胞的增值率和细胞的免疫活性。
本发明的目的之二在于提供一种用于免疫细胞的培养基。
本发明的目的之三在于提供一种免疫细胞的培养方法。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种用于免疫细胞培养的添加剂，所述添加剂的具体组成为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚、丝素蛋白、大豆低聚肽、水龙骨多糖、枸杞多糖、黄芩甙、IL-2、IL-12、IL-18、胰岛素、亚硒酸钠、丙戊酸。
进一步地，所述添加剂中各组分的添加浓度为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚22-25μg/L、丝素蛋白10.5-14.8μg/L、大豆低聚肽18-21μg/L、水龙骨多糖30-35mg/L、枸杞多糖45-50mg/L、黄芩甙22-25mg/L、IL-2 100-150μg/L、IL-12 80-120μg/L、IL-21 5-50μg/L、胰岛素10-15mg/L、亚硒酸钠20-25mg/L、丙戊酸3-5ng/L。
进一步地，所述添加剂中各组分的添加浓度为4-氨基-3-酰基-2-萘酚24μg/L、丝素蛋白12.5μg/L、大豆低聚肽19μg/L、水龙骨多糖33mg/L、枸杞多糖45mg/L、黄芩甙23mg/L、IL-2 125μg/L、IL-12 100μg/L、IL-21 25μg/L、胰岛素12mg/L、亚硒酸钠22mg/L、丙戊酸4ng/L。
进一步地，所述丝素蛋白的分子量为1474-1531Da，所述大豆低聚肽的平均分子量小于500Da。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种用于免疫细胞的培养基，包括基础培养基，所述基础培养基中添加上述的添加剂。
进一步地，所述免疫细胞为NK细胞。
进一步地，所述基础培养基为RPMI-1640。
本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
一种免疫细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)在基础培养基中加入上述的添加剂，制备得到培养基；
(2)采集待培养的免疫细胞接种至上述步骤(1)的培养基中，置于5％CO2、37℃培养箱中培养。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供一种用于免疫细胞培养的添加剂，添加剂中的4-氨基-3-酰基-2-萘酚和细胞生长因子IL-2、IL-12、IL-21一起诱导免疫细胞扩增，本发明添加剂中的龙骨多糖、枸杞多糖和黄芩甙复配使用，刺激免疫细胞，提高免疫细胞的兴奋度，可有效抑制细胞进入休眠，提高免疫细胞的活性，进而促进免疫细胞的扩增。本发明添加剂中的丝素蛋白和大豆低聚肽配合使用，调节细胞扩增过程中的渗透压，对细胞膜起保护作用，提高细胞的保水能力。本发明添加剂的原料间协同作用，诱导免疫细胞增殖，缩短培养周期，提高免疫细胞的增值率和免疫活性。本发明还提供一种用于免疫细胞的培养基，通过在基础培养基中添加上述添加剂制备得到，及利用上述培养基培养免疫细胞的方法，该过程操作简便，便于免疫细胞体外的大量增殖，为免疫细胞更好的用于肿瘤治疗提供保障。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种NK细胞的培养方法，包括以下步骤:
(1)在基础培养基RPMI-1640中加入添加剂，添加剂中各组分的添加浓度为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚24μg/L、分子量为1531Da的丝素蛋白12.5μg/L、大豆低聚肽19μg/L、水龙骨多糖33mg/L、枸杞多糖45mg/L、黄芩甙23mg/L、IL-2125μg/L、IL-12 100μg/L、IL-21 25μg/L、胰岛素12mg/L、亚硒酸钠22mg/L、丙戊酸4ng/L；
(2)取健康人外周血15mL转移至50mL的离心管中，离心后取血浆，加入生理盐1：1稀释，将稀释液平铺至淋巴细胞分离液上层，2000r/min离心15min，吸取白膜层，生理盐水洗涤三次，去除上清，将细胞用RPMI-1640培养基重悬，采用磁珠筛选，获得NK细胞，调整至细胞密度为1×106/mL，在T75细胞培养瓶中加入10mL上述步骤(1)的培养基，取2mL密度为1×106/mL的NK细胞接种于上述培养基中，置于5％CO2、37℃培养箱中培养，每隔2天补液一次，培养12天。
实施例2
一种NK细胞的培养方法，包括以下步骤:
(1)在基础培养基RPMI-1640中加入添加剂，添加剂中各组分的添加浓度为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚25μg/L、分子量为1474Da的丝素蛋白14μg/L、大豆低聚肽20μg/L、水龙骨多糖35mg/L、枸杞多糖45mg/L、黄芩甙22mg/L、IL-2 130μg/L、IL-12 80μg/L、IL-21 30μg/L、胰岛素10mg/L、亚硒酸钠20mg/L、丙戊酸3ng/L的；
(2)取健康人外周血15mL转移至50mL的离心管中，离心后取血浆，加入生理盐1：1稀释，将稀释液平铺至淋巴细胞分离液上层，2000r/min离心15min，吸取白膜层，生理盐水洗涤三次，去除上清，将细胞用RPMI-1640培养基重悬，采用磁珠筛选，获得NK细胞，调整至细胞密度为1×106/mL，在T75细胞培养瓶中加入10mL上述步骤(1)的培养基，取2mL密度为1×106/mL的NK细胞接种于上述培养基中，置于5％CO2、37℃培养箱中培养，每隔2天补液一次，培养12天。
实施例3
一种NK细胞的培养方法，包括以下步骤:
(1)在基础培养基RPMI-1640中加入添加剂，添加剂中各组分的添加浓度为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚22μg/L、分子量为1531Da的丝素蛋白10.5μg/L、大豆低聚肽18μg/L、水龙骨多糖30mg/L、枸杞多糖48mg/L、黄芩甙24mg/L、IL-2 100μg/L、IL-12 90μg/L、IL-21 50μg/L、胰岛素15mg/L、亚硒酸钠25mg/L、丙戊酸5ng/L的；
(2)取健康人外周血15mL转移至50mL的离心管中，离心后取血浆，加入生理盐1：1稀释，将稀释液平铺至淋巴细胞分离液上层，2000r/min离心15min，吸取白膜层，生理盐水洗涤三次，去除上清，将细胞用RPMI-1640培养基重悬，采用磁珠筛选，获得NK细胞，调整至细胞密度为1×106/mL，在T75细胞培养瓶中加入10mL上述步骤(1)的培养基，取2mL密度为1×106/mL的NK细胞接种于上述培养基中，置于5％CO2、37℃培养箱中培养，每隔2天补液一次，培养12天。
对比例1
对比例1提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的4-氨基-3-酰基-2-萘酚，其余均和实施例1相同。
对比例2
对比例2提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的丝素蛋白，将大豆低聚肽的用量调整为28.5μg/L，其余均和实施例1相同。
对比例3
对比例3提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的大豆低聚肽，将丝素蛋白的用量调整为28.5μg/L，其余均和实施例1相同。
对比例4
对比例4提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的龙骨多糖，将枸杞多糖的用量调整为78μg/L，其余均和实施例1相同。
对比例5
对比例5提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的枸杞多糖，将龙骨多糖的用量调整为78μg/L，其余均和实施例1相同。
对比例6
对比例6提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的枸杞多糖，将龙骨多糖的用量调整为78μg/L，其余均和实施例1相同。
对比例7
对比例7提供一种NK细胞的培养方法，和实施例1的区别为添加剂的成分不同，省去添加剂中的黄芩甙，将龙骨多糖的用量调整为56μg/L，其余均和实施例1相同。
收集实施例1、对比例1至7中培养12天后的细胞，加入0.4％的台盼蓝计数活细胞，并采用SPAA统计软件进行统计处理，以P＜0.05为差异，统计各组培养12天后细胞的增殖倍数，统计结果如表1所示。
表1
组别 扩增倍数
实施例1 7.32±1.23
对比例1 1.97±0.32
对比例2 2.78±0.73
对比例3 2.85±0.95
对比例4 2.31±0.84
对比例5 2.20±0.41
对比例6 2.02±0.62
对比例7 2.15±0.37
由表1可以看出，实施例1的免疫细胞的扩增倍数较高，达到6.09-8.55倍，可显著提高免疫细胞在体外的增值率。对比例1至7中调整添加剂的成分后细胞扩增倍数降低，这是因为本发明添加剂中的4-氨基-3-酰基-2-萘酚诱和细胞生长因子IL-2、IL-12、IL-21一起诱导免疫细胞扩增，本发明添加剂中的龙骨多糖、枸杞多糖和黄芩甙复配使用，提高免疫细胞的兴奋度，可有效抑制细胞进入休眠，提高免疫细胞的活性，进而促进免疫细胞的扩增。本发明添加剂中的丝素蛋白和大豆低聚肽配合使用，调节细胞扩增过程中的渗透压，对细胞膜起保护作用，提高细胞的保水能力。由对比例1至7可以看出，省去任意成分后，其扩增效果均不及本发明的实施例1，进一步说明上述成分协同作用，提高免疫细胞在体外扩增的数量。
观察培养的NK细胞对A549细胞的杀伤活性：A549的接种量为1×104个/孔，效靶比为10:1，接种A549细胞20h后，分别加入实施例1和对比例1至7培养的NK细胞，通过观察可知在加入NK细胞70h左右时，达到最大杀伤效果，统计每组的杀伤效率，如表2所示。
表2
组别 杀伤效率(％)
实施例1 92.37
对比例1 75.21
对比例2 80.45
对比例3 81.68
对比例4 78.95
对比例5 77.10
对比例6 75.67
对比例7 76.81
由表2可以看出，各组对肿瘤细胞均有不同程度的杀伤力，其中实施例1的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤效率最高，说明本发明通过在培养基中添加4-氨基-3-酰基-2-萘酚、丝素蛋白、大豆低聚肽、水龙骨多糖、枸杞多糖、黄芩甙等成分，培养得到的NK细胞免疫活性更高，对肿瘤细胞的杀伤效果较好。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种用于免疫细胞培养的添加剂，其特征在于，所述添加剂的具体组成为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚、丝素蛋白、大豆低聚肽、水龙骨多糖、枸杞多糖、黄芩甙、IL-2、IL-12、IL-18、胰岛素、亚硒酸钠、丙戊酸。
2.根据权利要求1所述用于免疫细胞培养的添加剂，其特征在于，所述添加剂中各组分的添加浓度为：4-氨基-3-酰基-2-萘酚22-25μg/L、丝素蛋白10.5-14.8μg/L、大豆低聚肽18-21μg/L、水龙骨多糖30-35mg/L、枸杞多糖45-50mg/L、黄芩甙22-25mg/L、IL-2 100-150μg/L、IL-12 80-120μg/L、IL-21 5-50μg/L、胰岛素10-15mg/L、亚硒酸钠20-25mg/L、丙戊酸3-5ng/L。
3.根据权利要求2所述用于免疫细胞培养的添加剂，其特征在于，所述添加剂中各组分的添加浓度为4-氨基-3-酰基-2-萘酚24μg/L、丝素蛋白12.5μg/L、大豆低聚肽19μg/L、水龙骨多糖33mg/L、枸杞多糖45mg/L、黄芩甙23mg/L、IL-2 125μg/L、IL-12 100μg/L、IL-21 25μg/L、胰岛素12mg/L、亚硒酸钠22mg/L、丙戊酸4ng/L。
4.根据权利要求1至3任一项权利要求所述用于免疫细胞培养的添加剂，其特征在于，所述丝素蛋白的分子量为1474-1531Da，所述大豆低聚肽的平均分子量小于500Da。
5.一种用于免疫细胞的培养基，其特征在于，包括基础培养基，所述基础培养基中添加权利要求1至3任一项所述的添加剂。
6.根据权利要求5所述用于免疫细胞的培养基，其特征在于，所述免疫细胞为NK细胞。
7.根据权利要求5所述用于免疫细胞的培养基，其特征在于，所述基础培养基为RPMI-1640。
8.一种免疫细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在基础培养基中加入权利要求1所述的添加剂，制得培养基；
(2)采集待培养的免疫细胞接种至上述步骤(1)的培养基中，置于5％CO2、37℃培养箱中培养。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112618697A (zh) * 2020-12-22 2021-04-09 浙江师范大学 一种水产低温保护剂及其用途
CN114600868A (zh) * 2022-02-22 2022-06-10 张帅军 一种细胞保存液及其在保存cik细胞中的应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104593317A (zh) * 2013-10-31 2015-05-06 中国食品发酵工业研究院 一种用于细胞培养基的大豆活性肽添加剂
CN104894065A (zh) * 2015-07-09 2015-09-09 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法
CN106190976A (zh) * 2016-08-12 2016-12-07 浙江译美生物科技有限公司 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法
CN106701679A (zh) * 2016-12-26 2017-05-24 浙江丹晖生物科技有限公司 Nk细胞体外扩增培养基组合和培养方法
CN107384852A (zh) * 2017-07-27 2017-11-24 山东兴瑞生物科技有限公司 一种支持细胞分化为内耳毛细胞的方法及应用
CN108220235A (zh) * 2016-12-22 2018-06-29 细胞邦(北京)生物技术有限公司 一种体外活化扩增人自然杀伤（nk）细胞的方法及其专用培养体系

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104593317A (zh) * 2013-10-31 2015-05-06 中国食品发酵工业研究院 一种用于细胞培养基的大豆活性肽添加剂
CN104894065A (zh) * 2015-07-09 2015-09-09 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法
CN106190976A (zh) * 2016-08-12 2016-12-07 浙江译美生物科技有限公司 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法
CN108220235A (zh) * 2016-12-22 2018-06-29 细胞邦(北京)生物技术有限公司 一种体外活化扩增人自然杀伤（nk）细胞的方法及其专用培养体系
CN106701679A (zh) * 2016-12-26 2017-05-24 浙江丹晖生物科技有限公司 Nk细胞体外扩增培养基组合和培养方法
CN107384852A (zh) * 2017-07-27 2017-11-24 山东兴瑞生物科技有限公司 一种支持细胞分化为内耳毛细胞的方法及应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EUI-BEAK BYUN ET AL.: "Enhancement of anti-tumor activity of gamma-irradiated silk fibroin via immunomodulatory effects", 《CHEMICO-BIOLOGICAL INTERACTIONS》 *
佟丽等: "黄芩甙对NK杀伤活性的影响", 《中药药理与临床》 *
张连生等: "枸杞多糖对NK细胞杀伤活性的影响", 《健康必读杂志》 *
朱晓燕等: "丝素蛋白材料对免疫细胞激发作用的研究进展", 《国际生物医学工程杂志》 *
王晓华等: "枸杞多糖增强效应T细胞增殖和杀瘤活性机制的研究", 《中国实验诊断学》 *
邹慧娟等: "HDAC抑制因子VPA在促进白血病细胞凋亡及其对NK细胞自然杀伤敏感性中的作用研究", 《第八届全国免疫学学术大会》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112618697A (zh) * 2020-12-22 2021-04-09 浙江师范大学 一种水产低温保护剂及其用途
CN112618697B (zh) * 2020-12-22 2021-10-01 浙江师范大学 一种水产低温保护剂及其用途
CN114600868A (zh) * 2022-02-22 2022-06-10 张帅军 一种细胞保存液及其在保存cik细胞中的应用

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