CN111220763B - 高含量dsm作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用 - Google Patents

高含量dsm作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及食品检测领域，具体涉及高含量DSM（4‑(2‑羟基异丙基)‑1,3‑环己二烯‑1‑羧酸‑异麦芽糖）作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用。同时，本发明提出了一种椴树蜂蜜的真实性评价方法，以DSM为特征化合物，当其在蜂蜜中的含量介于250‑450 mg/kg时，可将其判定为椴树蜂蜜；否之，则判定为其它蜂蜜或者掺假椴树蜂蜜。本发明中提供的方法具有简单、高效等优点，便于操作和推广，对制定优质椴树蜜的相关行业或国家标准的制定具有一定的指导意义，同时对保护蜂蜜消费者的合法权益和维护蜂蜜消费行业的健康发展具有重要的现实意义。

Description

高含量DSM作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用
技术领域
本发明涉及食品检测领域，具体涉及高含量DSM作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用。
背景技术
蜂蜜是由蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。由于蜂蜜具有丰富的营养价值，深受消费者青睐，其销售量也呈逐年上升趋势。我国疆域辽阔，地形复杂，气候多样，资源丰富，蜜源植物丰富多彩。油菜、洋槐、枣花、荆条、椴树、紫云英、荔枝、枇杷等是我国主要蜜源植物，是我国大宗蜂蜜生产的主要来源，而其单花蜜是我国市场上蜂蜜中的主要形式。糠椴和紫椴是椴树的主要品种，两者主要分布在东北地区的长白山区、小兴安岭和完达山等山区，属于林区蜜源植物。椴树的花期始于6月下旬，终止于7月上旬，花期一般20天左右。椴树蜜是我国东北地区最具特色的蜂蜜品种。
不同品种的单花蜂蜜的色泽、口感、香味等差距较大，而椴树蜂蜜因色香味俱佳，深受人们喜爱。由于椴树蜂蜜产量有限，生产成本较高，导致其市场售价较高，是其它蜂蜜价格的3-5倍。不良企业为了追逐高额利润，往往会采用其它单花蜜冒充椴树蜜，或者在椴树蜜中勾兑其它廉价的单花蜜，甚至勾兑果葡糖浆。当前业内尚未制定任何有关椴树蜜的标准，或行业标准，而相关标准和鉴别方法的缺失为当前椴树蜂蜜市场掺假的乱象提供的可能。椴树蜂蜜掺假现象不仅损害了蜂蜜消费者的正当权益，而且危害了蜂产品消费行业的健康发展和市场秩序。因此，亟需开发一种切实有效的椴树蜂蜜真实性和纯度评价方法。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明首先通过液相色谱串联高分辨质谱的正负模式对大量的椴树蜂蜜与其他常见单花蜜扫描分析，发现在负模式的总离子流色谱图中5.97 min存在一个响应强度极高的化合物（图1），通过采用精确提取离子流色谱(m/z 551.19849;提取窗口为5 mDa；见图2)，比较其峰面积发现，该物质在椴树蜜中的含量显著区别于其他常见单花蜜（至少包括20余种）。该物质的全扫描质谱图和子离子质谱图见图3（其中上图为全扫描质谱图，下图为子离子质谱图），由该图可知，该物质峰的主要碎片含有m/z181.08592和m/z 341.10784。基于高分辨质谱提供的精确质量数m/z 551.19814，获得该物质的元素组成为C23H35O15 -，此外，在全扫描图谱中还发现了前体离子m/z 505.19266，其元素组成为C22H33O13 -，与m/z 551.19814相比，元素组成中减少了CH2O2；且两者的MS/MS图谱中碎片离子的种类和丰度完全一致，故两者属于同一种物质，仅仅是离子化形式的不同，其中m/z 551.19814为[M+ CH2O2-H]-，而m/z 505.19266为[M-H]-。基于上述分析，可知，该物质的元素组成为C22H34O13。随后，基于高分辨质谱获得的精确质量数的MS/MS图谱，采用Compound Discoverer 2.0软件对该物质进行多重化学物质数据库进行检索，如mzCloud、Chem Bank等。试验结果表明，DSM的MS/MS图谱中的碎片离子m/z 181.08592 (C10H13O3 -)对应化合物为4-(2-羟基异丙基)-1,3-环己二烯-1-羧酸（质谱图见图4）。此外，DSM的MS/MS图谱中另外一个关键的碎片离子m/z 341.10784 (C12H21O11 -)对应的化学物质为异麦芽糖。基于上述数据，将化合物DSM鉴定为4-(2-羟基异丙基)-1,3-环己二烯-1-羧酸-异麦芽糖（图5）。为了验证本发明指出DSM的化学结构的准确性和科学性，发明人委托宝鸡市辰光生物科技有限公司从椴树蜜中提出、纯化出了该化合物，并获得该化合物的高纯度的对照品20mg。随后采用获得DSM对照品采用NMR(核磁共振)的1H谱和13C的化学结构表征，详细的结果见表1。
表1
Figure 273870DEST_PATH_IMAGE001
此外，为保证DSM鉴定结果的有效性，本实验采用β-葡萄糖醛酸酶对纯化后的DSM进行了酶解处理，然后再次采用液相串联高分辨质谱分析，结果发现了高含量的m/z181.08592和m/z 341.10784 (C12H21O11 -；异麦芽糖)，并且，两者的色谱和质谱性质均与标准品进行了对比，结果完全一致，酶解获得结果再次证明了DSM化学结构鉴定的准确性。另外，本发明采集了椴树的鲜花、花蜜和椴树蜜等样本，样本经过前处理之后，由LC-HRMS进样分析，发现椴树的鲜花、花蜜和椴树蜜中均含有DSM这个物质，这说明，DSM是椴树的次级代谢产物，它通过蜜蜂的采集行为迁移、并富集在蜂蜜中。因此，可以采用高含量的DSM做为椴树蜂蜜的真实性鉴别及纯度评价指标，用于评价椴树蜂蜜中是否掺入果葡糖浆或者混入其他廉价蜂蜜。通过对大量椴树蜂蜜样本的分析，发现不同年份和不同产地的椴树蜂蜜中DSM的含量介于250-450 mg/kg。
根据上述发现，本发明首先提出了高含量4-(2-羟基异丙基)-1,3-环己二烯-1-羧酸-异麦芽糖（以下简称DSM）作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用，所述高含量为250-450mg/kg，所述DSM化学结构如下：
Figure 872341DEST_PATH_IMAGE002
。
本发明进一步提出一种椴树蜜的真实性评价方法，以DSM为特征性化合物，若蜂蜜样本中DSM的含量介于250-450 mg/kg时，判断所述蜂蜜样本为椴树蜂蜜；反之，则判定所述蜂蜜样本为其它蜂蜜或者掺假椴树蜂蜜。
作为优选，通过加入DSM的空白蜂蜜确认DSM的含量与峰面积间的线性关系，根据蜂蜜样本中DSM的峰面积推算其含量。
作为优选，采用UHPLC-Q-Orbitrap（超高液相色谱-高分辨质谱）和/或 LC-MS/MS检测蜂蜜样本。
作为优选，DSM在UHPLC-Q-Orbitrap的精确提取离子流色谱图中含有m/z 551.19814（[M+CH2O2-H]-）准分子离子峰，其精确质量数的误差应当小于5 ppm；优选DSM色谱峰的保留时间为5.86 min，保留时间偏差小于0.2min。
此外，为了提高椴树蜂蜜的鉴别能力，DSM的精确质量数和保留时间除了满足上述条件之外，该物质的MS/MS图谱（子离子图谱）中应该含有其主要的碎片离子，本发明进一步确定了其特征碎片离子（DSM的MS/MS图谱中应含有以下一个或多个碎片离子蜂）：m/z341.10784、m/z 181.08592、m/z 89.02332、m/z 101.02332、m/z 119.03389，其精确质量数的误差应当小于10 ppm。基于上述MS/MS图谱中提供的主要碎片离子，即便是在无DSM对照品的情况，依然可以通过判定蜂蜜样本中含有椴树蜂蜜，并可积分母离子峰面积用于椴树蜂蜜含量的计算。
作为优选，采用UHPLC-Q-Orbitrap对蜂蜜样本进行检测时，液相条件如下：
采用C18色谱柱，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为B，采用梯度洗脱程序分离：以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B，采用梯度洗脱程序分离：0-2.0 min，5%的流动相B；2.0-7.0 min，5-30%的流动相B；7.0-14min，30-95%的流动相B；14-18 min，95%的流动相B；18.0-18.1 min，95-5%的流动相B；18.1-20.0 min，5%的流动相B。
优选液相的流速为0.30 mL/min。
优选进样量为5.0 µL。
作为优选，采用UHPLC-Q-Orbitrap对蜂蜜样本进行检测时，质谱条件如下：
离子源参数：鞘气的流速45 arb；辅助气的流速10 arb；挡锥气的流速0 arb； 电喷雾电压3.5 kV；离子导管的温度320 ℃；S-lens RF level设为 60；离子源的温度350℃；
优选采集的模式为负离子模式下的Full MS-ddMS2，确保扫描范围包含551.19814Da，碰撞能量（NCE）为35。其中Full MS的具体参数设置如下：分辨率：70000；AGCTarget：3e6；Maximum IT：100 ms；Scan range：100-800 Da； Spectrum data：Centroid；其中dd-MS2的具体参数设置如下：分辨率：17500；AGC Target：1.6e5；Maximum IT：50 ms；Loop count：1； Isolation window：2.0 Da； NCE：35；Spectrum data：Centroid；ddsettings中，Minimum AGC： 8.0e3；Apex trigger：2-6 s；Exclude isotope：on；Dynamicexclusion：8.0 s。
采用LC-MS/MS对蜂蜜样本进行检测时，由于检测仪器的不同，LC-MS/MS的液相和质谱设置条件与UHPLC-Q-Orbitrap差异较大。
优选液相条件如下：采用C18色谱柱（优选采用较短的C18色谱柱），柱温为25℃，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B；采用梯度洗脱程序分离：0-0.8 min，5%的流动相B；0.8-1.2 min，5-40%的流动相B；1.2-2.5 min，40-90%的流动相B；2.5-3.5min，90%的流动相B；3.5-3.6 min，90-5%的流动相B；3.6-6.0 min，5%的流动相B。
优选液相的流速为0.30 mL/min。
优选进样量为3.0 µL。
作为优选，为了准确定量蜂蜜中的DSM，采用LC-MS/MS对蜂蜜样本进行检测时，采集的模式为负离子模式下的多反应监测（MRM），MRM关键参数的设置如下：DSMFragementor：125 V， 551.0>505.0，5 eV (定量离子)，551.0>341.0，18 eV（定性离子）。
质谱条件如下：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：负离子扫描；离子喷雾电压：3500V；雾化气压力：45 psi；干燥气温度：300 ℃；干燥气流速：5 L /min；鞘气温度：250 ℃；鞘气流速：11 L /min。
其中，DSM的详细MRM参数设置参见表2。
表2 LC-MS/MS在定量分析检测蜂蜜中DSM的MRM关键参数设置
Figure 404823DEST_PATH_IMAGE003
为验证建立的LC-MS/MS方法科学合理性，本发明考察了该方法的准确度和精密度，变异系数均小于10%，完全符合残留检测分析的要求。
基于本方法采用的仪器和公布的参数，不同分析实验室和检测机构可以依据液相串联高分辨质谱或者液相串联三重四极杆质谱技术的相关知识，对其中的参数进行一定调整。
作为优选，在检测前，还包括利用甲醇水对所述蜂蜜样本进行提取的步骤；
在所述甲醇水中，优选甲醇与水的体积比为2：（7~9），优选为2：8。
作为优选，对蜂蜜样本进行检测前， 将蜂蜜按1：（9~11）的质量体积比充分溶于甲醇水中，进行提取；更优选为1：10。
作为一种优选方案，所述提取具体包括如下步骤：按0.8 g蜂蜜样品: 7.2mL甲醇水的比例将其混合，并使蜂蜜充分化开后，20194 g，4℃离心20 min，取上清过0.22 µm滤膜，再取10 µL的提取液，然后添加990 µL甲醇水的比例稀释一次。
本发明涉及到的试剂和标准品在市场上均可获得，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。
本发明的有益效果在于：
本发明首次公布了椴树蜂蜜中一种高含量物质为DSM，并提出了高含量DSM可作为椴树蜂蜜真实性和纯度评价的指标，采用液相串联质谱（UHPLC-Q-Orbitrap或LC-MS/MS）检测蜂蜜中DSM的方法。基于高分辨质谱提供的精确质量数，该方法具有较高的特异性和灵敏度，检出限可以达到5 µg/kg 。
此外，为了准确定量椴树蜂蜜中DSM含量，本发明还对该物质的LC-MS/MS检测方法和关键的检测参数进行了优化。
同时，本发明中的方法还具有简单、高效等优点，便于操作和推广，对保护蜂蜜消费者的合法权益和维护蜂蜜消费行业的健康发展具有重要的现实意义。
附图说明
图1为LC-HRMS检测椴树蜜的总离子流色谱图(TIC)。
图2为LC-HRMS检测椴树蜜中DSM的提取离子流色谱图(EIC)。
图3为DSM精确质量数的Full Mass和MS/MS质谱图，其中上图为Full Mass质谱图，下图为MS/MS质谱图。
图4为化合物m/z 181的Full Mass和MS/MS质谱图。
图5为椴树蜂蜜中生物标志物DSM的化学结构。
图6为UHPLC-Q-Orbitrap检测DSM分别在空白蜂蜜和椴树蜂蜜样本中的精确提取离子流色谱图，其中提取的质量窗口偏差小于5 ppm。
图7为UHPLC-Q-Orbitrap的Full MS-ddMS2模式检测定量19种蜜源蜂蜜样品中DSM的含量。
图8为LC-MS/MS的MRM模式下DSM的定量、定性离子提取离子流色谱图。
图9为LC-MS/MS的MRM模式检测市场上50个椴树蜂蜜样品中DSM的含量分布概率。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
仪器与试剂：
1. 质谱仪（Q-Exactive Plus），美国Thermo Fisher Scientific公司；
2. 1200 series液相色谱-6460三重四级杆质谱，美国Agilent Technologies公司；
3.台式低温离心机（1-15Pk，德国Sigma公司；
4.电子分析天平（PL203），德国METTLERTOLEDO公司；
5.超纯水机（Milli-Q Gradient），美国Millipore公司；
6.涡动仪（G560E），美国Scientific Industries公司；
DSM（化学结构见图5）标准品委托宝鸡市辰光生物科技有限公司提取纯化得到，NMR(核磁共振)信息见表1；β-葡萄糖醛酸酶购买于默克化工技术(上海)有限公司；甲酸(FA)从上海安谱实验科技股份有限(CNW)公司购买；乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)购买于Fisher公司。
实施例1
1.样品来源
从市场或者蜂农处购买常见的真实蜂蜜样本共80份用于检测各种蜂蜜中DSM的含量，具体的包括：洋槐、枣花、油菜、荔枝、鸭脚木、龙眼、石榴、雪脂莲、柠条、野坝子、老瓜头、枸杞、党参、桉树、麦卢卡、野桂花、乌桕、向日葵蜂蜜各四个样品，以及8个椴树样品。
2. 溶液配制
提取溶液：移取甲醇20 mL，超纯水定容到100 mL。4 ℃保存。
DSM标准溶液：称取10 mg的DSM标准品，甲醇定容至10 mL。4 ℃保存，有效期2个月。
3. Q Exactive plus测试条件如下：
（1）样品处理：
称取0.8 g蜂蜜加入7.2 mL 提取溶液，在室温下涡旋至完全溶解，并在20194 g，4℃下离心20 min。收集上清液过0.22 µm滤膜，进样瓶中加入990 µL提取液，再取过膜后的液体10 µL转移至进样品瓶涡旋混匀，等待上机分析。
（2）质控样本：
称取0.8 g空白蜂蜜（不含DSM）加入7.2 mL 提取溶液，在室温下涡旋至完全溶解，并在20194 g，4 ℃下离心20 min。收集上清液过0.22 µm滤膜，进样瓶中加入890 µL提取液，再取过膜后的液体10 µL转移至进样瓶中涡旋混匀，再移取100 µL浓度为2 mg/L的DSM标准溶液。涡旋混匀，等待上机分析。
（3）Q Exactive plus仪器设置
色谱条件为：分析柱为C18色谱柱。以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为B，采用梯度洗脱程序分离：以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为B，采用梯度洗脱程序分离：0-2.0 min，5%的B； 2.0-7.0 min，5-30%的B； 7.0-14min，30-95%的B； 14-18min，95%的B； 18.0-18.1 min，95-5%的B；18.1-20.0 min，5%的B；流速：0.30 mL/min；进样量：5.0 µL。
离子源参数：鞘气的流速45； 辅助气的流速10；挡锥气的流速0； 电喷雾电压3.5kV；离子导管的温度320℃；S-lens RF level设为 60； 离子源的温度350 ℃。
采集的模式为负离子模式下的Full MS-ddMS2。
其中Full MS的具体参数设置如下：分辨率：70000；AGC Target：3e6；Maximum IT：100 ms；Scan range：200-800 Da； Spectrum data：Centroid。其中dd-MS2的具体参数设置如下：分辨率：17500；AGC Target：1.6e5；Maximum IT：50 ms；Loop count：1； Isolationwindow：2.0 Da； NCE：35；Spectrum data：Centroid。而dd settings中，Minimum AGC：8.0e3；Apex trigger：2-6 s；Exclude isotope：on；Dynamic exclusion：8.0 s。
质谱生成的数据通过Xcalibur软件收集并存储，将质谱采集的raw数据通过Xcalibur的Qualitative browser分析，比较样品与空白加标样品中DSM的Full MS及MS/MS图谱，确定样品中含有DSM。检测DSM分别在空白蜂蜜和椴树蜂蜜样本中的精确提取离子流色谱图，其中提取的质量窗口偏差小于5ppm，得到图6。
（4）标准曲线的绘制：在空白蜂蜜样品提取后过滤膜的稀释100倍的溶液中制备一系列DSM溶液（20，50，100，200，500，1000 ng/mL）。并指定200 µg/L的空白添加为质控样本。数据通过Trace Finder软件处理，定量蜂蜜样品中DSM的含量。得到标准曲线公式为Y=1.656e5X+5.852e5，R2=0. .9962 （X为浓度Y定量离子响应积分值）
通过Trace Finder软件即可分析蜂蜜样品中的DSM含量。通过浓度稀释计算，得到蜂蜜中DSM的含量，见图7。当样品中DSM的含量介于250-450 mg/kg时，可以被认为样品蜂蜜的蜜源为椴树，该样品为椴树蜂蜜。
实施例2
1.样品来源
从市场购买标签为椴树蜂蜜的多种品级或品牌的蜂蜜样本共100份。
2. 实验步骤
（1）溶液配制
提取溶液：移取甲醇20 mL，超纯水定容到100 mL。4 ℃保存。
DSM标准溶液：称取10 mg的DSM标准品，甲醇定容至10 mL。4 ℃保存，有效期2个月。
（2）样品处理：
称取0.8 g蜂蜜加入7.2 mL 提取溶液，在室温下涡旋至完全溶解，并在20194 g，4℃下离心20 min。收集上清液过0.22 µm滤膜，进样瓶中加入990 µL提取液，再取过膜后的液体10 µL转移至进样瓶中涡旋混匀，等待上机分析。
（3）质控样品：
称取0.8 g空白蜂蜜（不含DSM）加入7.2 mL 提取溶液，在室温下涡旋至完全溶解，并在20194 g，4 ℃下离心20 min。收集上清液过0.22 µm滤膜，进样瓶中加入890 µL提取液，再取过膜后的液体10 µL转移至进样瓶中涡旋混匀，再移取100 µL浓度为2 mg/L的DSM标准溶液。涡旋混匀，等待上机分析。
3. Agilent1200液相色谱-6460三重四级杆质谱分析条件如下：
液相条件中采用较短的C18色谱柱分离，是以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为B，采用较短的梯度洗脱程序分离：0-0.8 min，5%的流动相B；0.8-1.2 min，5-40%的流动相B；1.2-2.5 min，40-90%的流动相B；2.5-3.5 min，90%的流动相B；3.5-3.6 min，90-5%的流动相B；3.6-6.0 min，5%的流动相B。优选液相的流速为0.30 mL/min。优选进样量为3.0 µL。
LC-MS/MS的质谱条件如下：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：负离子扫描；监测方式：多反应监测（MRM）；离子喷雾电压：3500 V；雾化气压力：45 psi；干燥气温度：300℃；干燥气流速：5 L /min；鞘气温度：250℃；鞘气流速：11 L /min。
采集的模式为负离子模式下的MRM模式。MRM参数： Fragementor：125V, 551.0>505.0，5 eV（定量自立），551.0>341.0，18 eV（定性离子）。
LC-MS/MS的MRM模式下DSM的定量、定性离子提取图见图8。
4.标准曲线的绘制：在空白蜂蜜样品提取后过滤膜的稀释100倍的溶液中制备一系列DSM溶液（20，50，100，200，500，1000 ng/mL）。并指定200 µg/L的空白添加为质控样本。
通过Agilent 的Mass Hunter定量软件分析样品及空白加标样品。外标法定量，得到标准曲线公式为Y=21901.0802*X+101787.7436，R2=0.9987 （X为浓度Y定量离子响应积分值）。
通过定量软件即可分析蜂蜜样品中的DSM含量。结果如图9所示，其中61%的样品中DSM的含量小于250mg/kg，这表明市场上销售的商品椴树蜂蜜存在严重的质量问题，其纯度问题堪忧。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.高含量DSM作为椴树蜂蜜特征性标志物的应用，所述高含量为250-450 mg/kg，所述DSM的化学结构如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
2.一种椴树蜂蜜的真实性评价方法，其特征在于，以DSM为特征化合物，采用UHPLC-Q-Orbitrap 和/或 LC-MS/MS检测蜂蜜样本，若蜂蜜样本中DSM的含量介于250-450 mg/kg时，判断所述蜂蜜样本为椴树蜂蜜；反之，则判定所述蜂蜜样本为其它蜂蜜或者掺假椴树蜂蜜；
其中，所述DSM的化学结构如下：
Figure 174766DEST_PATH_IMAGE002
；
采用UHPLC-QOrbitrap对蜂蜜样本进行检测时，液相条件如下：采用C18色谱柱，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为B，采用梯度洗脱程序分离：0-2.0 min，5%的流动相B；2.0-7.0 min，5-30%的流动相B；7.0-14min，30-95%的流动相B；14-18 min，95%的流动相B；18.0-18.1 min，95-5%的流动相B；18.1-20.0 min，5%的流动相B；质谱条件如下：离子源参数：鞘气的流速45 arb；辅助气的流速10 arb；挡锥气的流速0 arb； 电喷雾电压3.5 kV；离子导管的温度320 ℃；S-lens RF level设为 60；离子源的温度350 ℃；采集的模式为负离子模式下的Full MS-ddMS2，扫描范围包含551.19814 Da，碰撞能量为35；
采用LC-MS/MS对蜂蜜样本进行检测时，液相条件如下：采用C18色谱柱，柱温为25℃，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B；采用梯度洗脱程序分离：0-0.8 min，5%的流动相B；0.8-1.2 min，5-40%的流动相B；1.2-2.5 min，40-90%的流动相B；2.5-3.5min，90%的流动相B；3.5-3.6 min，90-5%的流动相B；3.6-6.0 min，5%的流动相B；质谱条件如下：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；监测方式：多反应监测；离子喷雾电压：3500V；雾化气压力：45 psi；干燥气温度：300℃；干燥气流速：5 L /min；鞘气温度：250℃；鞘气流速：11 L /min；采集的模式为负离子模式下的MRM模式，MRM参数如下：Fragementor：125V, 551.0>505.0，5 eV，551.0>341.0，18 eV。
3.根据权利要求2所述的真实性评价方法，其特征在于，DSM在UHPLC-Q-Orbitrap的精确提取离子流色谱图中含有m/z 551.19814（[M+CH2O2-H]-）准分子离子峰，其精确质量数的误差应当小于5 ppm；DSM色谱峰的保留时间为5.86 min，保留时间偏差小于0.2min。
4.根据权利要求2所述的真实性评价方法，其特征在于，DSM的MS/MS图谱中应含有m/z341.10784、m/z 181.08592、m/z 89.02332、 m/z 101.02332、m/z 119.03389中的一个或多个碎片离子峰，其精确质量数的误差应当小于10 ppm。
5.根据权利要求2所述的真实性评价方法，其特征在于，在检测前，还包括利用20%甲醇水对所述蜂蜜样本进行提取的步骤；所述蜂蜜样本与甲醇水的质量体积比1：（9~11），在所述甲醇水中，甲醇与水的体积比为2：（7~9）。
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