CN111122734B - 一种红花药物质量检测方法 - Google Patents
一种红花药物质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111122734B CN111122734B CN201911383955.9A CN201911383955A CN111122734B CN 111122734 B CN111122734 B CN 111122734B CN 201911383955 A CN201911383955 A CN 201911383955A CN 111122734 B CN111122734 B CN 111122734B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- taking
- spots
- test
- thin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 title claims abstract description 43
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 85
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 42
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 claims abstract description 25
- 235000012730 carminic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L woodstain scarlet Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 25
- CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M acid orange 7 Chemical compound [Na+].OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 23
- 235000012733 azorubine Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- TVWOWDDBXAFQDG-DQRAZIAOSA-N azorubine Chemical compound C1=CC=C2C(\N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S(O)(=O)=O)O)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 TVWOWDDBXAFQDG-DQRAZIAOSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 114
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 60
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 59
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 54
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 43
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 23
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 23
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 20
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 14
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 6
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 6
- JXQGGZBUGUHLEJ-UHFFFAOYSA-N butyl acetate formic acid hydrate Chemical compound O.OC=O.CCCCOC(C)=O JXQGGZBUGUHLEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 5
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- GCHZQTJYIFBIDC-UHFFFAOYSA-N chloroform methanol propan-2-one hydrate Chemical compound O.OC.CC(C)=O.ClC(Cl)Cl GCHZQTJYIFBIDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims description 4
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 114
- SQFSKOYWJBQGKQ-UHFFFAOYSA-N kaempferide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 SQFSKOYWJBQGKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 38
- IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N (6e)-2,5-dihydroxy-6-[(e)-1-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enylidene]-2,4-bis[(2s,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]cyclohex-4-ene-1,3-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C(C(C(O)([C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C1=O)=O)=C(O)\C1=C(/O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N 0.000 abstract description 35
- ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N hydroxysafflor yellow A Natural products OCC1OC(C(O)C(O)C1O)C2=C(O)C(O)(C3OC(CO)C(O)C(O)C3O)C(=O)C(=C2O)C(=O)C=Cc4ccc(O)cc4 ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 abstract description 12
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 9
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 30
- 239000000463 material Substances 0.000 description 20
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 13
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 12
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 11
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 11
- RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N arsenic atom Chemical compound [As] RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 10
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 10
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 9
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 8
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 8
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 8
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 8
- 206010041662 Splinter Diseases 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 6
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 6
- KINGXFAMZNIVNL-SXQDSXCISA-N safflor yellow A Natural products OC[C@@H]1O[C@H]2[C@H](OC3=C2C(=O)C(=C(O)C=Cc4ccc(O)cc4)C(=O)[C@]3(O)[C@@H]5O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)[C@@H](O)[C@H]1O KINGXFAMZNIVNL-SXQDSXCISA-N 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000446313 Lamella Species 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000000120 microwave digestion Methods 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- -1 taken out Substances 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KKFKEEZKEBEWAC-UHFFFAOYSA-N N.C(C)O.C(CCC)O.C(C)(=O)OCC Chemical compound N.C(C)O.C(CCC)O.C(C)(=O)OCC KKFKEEZKEBEWAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 2
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 2
- YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N magnesium nitrate Chemical compound [Mg+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- STZCRXQWRGQSJD-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 STZCRXQWRGQSJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000077 Abdominal mass Diseases 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 229910000881 Cu alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- JMUFJNCIWRHXIR-UHFFFAOYSA-N O.OC.OC=O.CCOC(C)=O Chemical compound O.OC.OC=O.CCOC(C)=O JMUFJNCIWRHXIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061876 Obstruction Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003321 atomic absorption spectrophotometry Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- ALKZAGKDWUSJED-UHFFFAOYSA-N dinuclear copper ion Chemical compound [Cu].[Cu] ALKZAGKDWUSJED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011003 system suitability test Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/045—Standards internal
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种红花药物质量检测方法，其检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量，本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明本方法重现性好、耐用性好；本发明含量检测操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度高等优点。提升了红花质量的检测标准，以有效地检测红花药物质量，从而保证临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种红花药物质量检测方法。
背景技术
红花药材质量标准原载于《中国药典》2015年版中，本品为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黄变红时采摘，阴干或晒干。具有活血通经，散瘀止痛之功效。用于经闭，痛经，恶露不行，症瘕痞块，胸痹心痛，瘀滞腹痛，胸胁刺痛，跌扑损伤，疮疡肿痛。
《中国药典》2015年版中红花的质量检测方法内容为：内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。为了更好的检测药材质量，提升药材质量标准，贵州景峰注射剂有限公司根据公司的实际情况并结合《中国药典》2015年版所载的红花质量标准进行了重新修订，在之前的基础上，制定了一种红花药物质量检测方法，即修定了用薄层色谱法鉴别红花的薄层鉴别、用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙 II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A，以有效地检测红花药物质量，从而保证临床疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种红花药物质量检测方法，检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物，吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量等质量检测项目，以有效地控制红花药物质量，从而保证临床疗效。
本发明所述的一种红花药物质量检测方法，检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。
本发明所述性状为本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
本发明所述显微鉴别为本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具 3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
本发明所述薄层色谱法鉴别红花的方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水 (1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红的方法为：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷- 甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
本发明所述薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄的方法为：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
本发明所述水分检查方法照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过13.0％；所述总灰分检查方法照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过15.0％；所述酸不溶性灰分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过5.0％；所述杂质测定法照2015年版中国药典第四部通则2301测定，不得过2％；所述浸出物检查方法照2015年版中国药典第四部通则2201照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于30.0％。
本发明所述吸光度检测方法为取本品，置硅胶干燥器中干燥24小时，研成细粉，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80％丙酮溶液50ml，连接冷凝器，置50℃水浴上温浸90分钟，放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100ml 量瓶中，用80％丙酮溶液25ml分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80％丙酮溶液至刻度，摇匀，照《分光光度法》测定，在518nm的波长处测定吸光度，不得低于0.20。
本发明所述高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A含量方法为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32016)不得少于1.0％。
本发明所述高效液相色谱法测定山柰素含量方法为：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H1006)不得少于0.050％。
本发明具有以下优点：
1、本发明是为了提升红花的质量检测标准，更好的检测药材质量，在对《中国药典》(2015年版)所载的红花质量标准重新修订的基础上，制定了一种红花药物质量检测方法，研究出斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，重现性好、耐用性好的红花薄层鉴别，酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红的薄层鉴别，偶氮玉红、日落黄的薄层鉴别。
2、本发明研究出操作简便、分析快速、结果准确，分离效果好，高灵敏度的羟基红花黄色素A含量测定，改变原有方法分离效果差，灵敏度低，重复性差的方案，以有效的检测红花药材质量，从而保证临床疗效。
3、按本发明检测方法测定样品中羟基红花黄色素A的含量，羟基红花黄色素A平均含量为1.3％，重复实验RSD值1.55％，表明此羟基红花黄色素A的测定方法具有良好的重复性。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
红花药材的质量检测方法：其检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。
【性状】本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
【鉴别】(1)本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
(2)取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加 70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
(4)取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含 0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水 (7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
【检查】水分照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过13.0％。
总灰分照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过15.0％。
酸不溶性灰分照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过5.0％。
杂质照2015年版中国药典第四部通则2301测定，不得过2％。
浸出物照2015年版中国药典第四部通则2201照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于30.0％。
吸光度取本品，置硅胶干燥器中干燥24小时，研成细粉，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80％丙酮溶液50ml，连接冷凝器，置50℃水浴上温浸90 分钟，放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100ml量瓶中，用80％丙酮溶液25ml分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80％丙酮溶液至刻度，摇匀，照《分光光度法》测定，在518nm的波长处测定吸光度，不得低于0.20。
【含量测定】照高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
【含量测定】照高效液相色谱法测定山柰素含量
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H10O6)不得少于0.050％。
实验例：为了证明本发明检测方法的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：
1.性状：本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
2.显微鉴别：XSP-8CC显微镜观察
本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
3.薄层鉴别：
3.1取本品粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7∶2∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，因该鉴别斑点模糊，分离度不好，故本次修订不载入正文。
3.2方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰、分离度好，故列入正文、方法学验证试验如下：
3.2.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。
对照药材制备：取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照药材各5μl。
展开剂：甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)
展距：8cm。
检视：展开，取出，晾干。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法处理8批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表1。
表1重现性试验结果表
| 序号 | 批号 | 结果 |
| 1 | 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 2 | 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 3 | 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 4 | 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 5 | 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 6 | 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 7 | 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 8 | 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
3.2.2.耐用性
3.2.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表2。
表2不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.2.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表3。
表3低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.2.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表4。
表4低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
3.3取本品2g，剪碎，加70％乙醇20ml，超声处理20分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加 70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰乙酸(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1∶3∶3∶l∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点，因该鉴别斑点分离度不好，重现性差，故本次修订不载入正文。
3.4方法：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。斑点清晰、分离度好，故列入正文。方法学验证试验如下：
3.4.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。
对照品溶液制备：取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μl。
展开剂：以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)；乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)。
展距：9cm。
检视：展开，取出，晾干，在可见光下检视。
结果：以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
用上述方法处理8批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表5：
表5重现性试验结果表
3.4.2.耐用性
3.4.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表6。
表6不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表7。
表7低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
| 批号 | 低温(5℃) | 室温(25℃) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表8。
表8低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
3.5取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液。另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含0.05 mg的溶液，作为对照试剂溶液。照《薄层色谱法》试验。吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇 -氨水-水(2∶2∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点，因该鉴别斑点分离度不好，重现性差，故本次修订不载入正文。
3.6方法：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml 各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯- 甲酸-水(7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。斑点清晰、分离度好，故列入正文，方法学验证试验如下：
3.6.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液.
对照品溶液制备：取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml 各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μl。
展开剂：乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)。
展距：10cm。
检视：展开，取出，晾干。
结果：供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
用上述方法处理八批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表9：
表9重现性试验结果表
| 序号 | 批号 | 结果 |
| 1 | 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 2 | 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 3 | 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 4 | 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 5 | 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 6 | 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 7 | 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 8 | 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
3.6.2.耐用性
3.6.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表10。
表10不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.6.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表11。
表11低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
| 批号 | 低温(5℃) | 室温(25℃) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.6.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表12。
表12低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
4.【检查】
依据《中国药典》2015年版检测水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度。故在此不再作方法学考察。
4.1重金属及有害元素
4.1.1照铅、镉、砷、汞、铜测定法(通则2321原子吸收分光光度法)，根据我公司使用的检验仪器设备及物料的性质，研究起草出该样品的试验方法：
仪器及试剂：原子吸收分光光度计(普析TAS990)、微波消解萃取合成工作站(新仪MDS-10)、循环水冷却器(LabTech SH150-900)、无油空气压缩机 (普析AC-1Y)。
对照品溶液的制备：依照《中国药典》2015年版四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法配制，如下表13。
表13对照品溶液
供试品升温消解程序：见表14
表14供试品消解程序
| N(编号) | T(℃) | t(温度保持时间) | W(功率)N(样品数) |
| 1 | 130 | 10min | (n+3)*100瓦 |
| 2 | 165 | 5min | (n+3)*100瓦 |
| 3 | 195 | 20min | (n+3)*100瓦 |
供试品的制备：铅：取供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内，进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
镉：同铅测定项下供试品溶液的制备。
铜：同铅测定项下供试品溶液的制备。
汞：供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上，于120℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5％盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入10ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
砷：同铅测定项下供试品溶液的制备。
测定方法：铅(石墨炉法)精密量取空白溶液与供试品溶液各lml，精密加含1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁的溶液0.5ml，混匀，精密吸取10～20μl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅(Pb)的含量，计算，即得。
镉(石墨炉法)同铅测定方法进行测定。
铜(火焰法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线的制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中铜(Cu)的含量，计算，即得。
汞(冷蒸气吸收法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中汞(Hg)的含量，计算，即得。
砷(氢化物法)精密吸取空白溶液与供试品溶液各10ml，照标准曲线的制备项下，白“加25％碘化钾溶液(临用前配制)lml”起，依法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中砷(As)的含量，计算，即得。
4.1.2方法确认(回收试验)
4.1.2.1采用加样回收法取已知铅含量的样品(批号190401，含量：C铅＝2.0mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铅标准液(1μg/ml)0.5ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 97.8％，RSD％值为4.8％，结果见表15。
表15加样回收试验结果表
4.1.2.2采用加样回收法取已知镉含量的样品(批号190401，含量：C镉＝0.2mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入镉标准液(1μg/ml)0.05ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 100.9％，RSD％值为4.0％，结果见表16。
表16加样回收试验结果表
4.1.2.3采用加样回收法取已知铜含量的样品(批号190401，含量：C铜＝12mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铜标准液(1μg/ml)3.5ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 97.5％，RSD％值为1.4％，结果见表17。
表17加样回收试验结果表
4.1.2.4采用加样回收法取已知汞含量的样品(批号190401，含量：C汞未检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入汞标准液(1μg/ml)0.1ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为99.8％，RSD％值为3.6％，结果见表18。
表18加样回收试验结果表
4.1.2.5采用加样回收法取已知砷含量的样品(批号190401，含量：C砷＝1mg/Kg)检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入砷标准液(1μg/ml)0.25ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 102.2％，RSD％值为2.0％，结果见表19。
表19加样回收试验结果表
4.1.3实测八个不同产地供试品各1批，铅平均值为1.6mg/kg、镉平均值为0.11mg/kg、砷平均值为0.3mg/kg、汞未检出、铜平均值为12.4mg/kg(见表20)；结果重金属及有害元素的量均远远低于药典要求，故未列入正文。
表20重金属及有害元素铅、镉、砷、汞、铜测定结果表
5.【含量测定】
5.1羟基红花黄色素A含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz) 40分钟，放冷，再称定重量，25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32016)不得少于1.0％。
结果：峰形较差、重现性差，精密度不好，故不列入正文。
5.2方法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
结果：峰形好，分离效果好，准确度和精密度高，该标准列入正文，方法学考察如下：
5.2.1仪器与试药
高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondaSil C18 Superb 5μm 250 ×4.6mm
电子天平：(SHIMADZU：AUW120D；上海越平：FA1104)；HS-10260D型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)；
山柰素对照品：中国食品药品检定研究；
乙腈、乙醇为色谱纯和分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
5.2.2方法考察试验
5.2.2.1对照品溶液的制备
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含 0.13mg的溶液，即得；
5.2.2.2供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
5.2.2.3色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
5.2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
5.2.3线性试验
精密取浓度0.1300μg/ml、0.2600μg/ml、1.3000μg/ml、2.6000μg/ml、 6.5000μg/ml的羟基红花黄色素A对照品溶液，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到线性方程为y＝630.32x+0.9181 ，R2＝1，表明羟基红花黄色素A进样浓度在0.1300μg/ml～6.5000μg/ml范围内呈良好的线性关系，结果见表21。
表21羟基红花黄色素A线性试验结果
5.2.4仪器精密度试验
取对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样5次，测定羟基红花黄色素A 峰面积，计算RSD％(羟基红花黄色素A)值为1.84％，表明仪器精密度良好，测定结果见表22。
表22仪器精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD％ |
| 面积(A) | 1213.462 | 1243.661 | 1200.178 | 1229.666 | 1256.332 | 1228.660 | 1.84％ |
5.2.5重复性试验
精密称取同一批样品(批号190401)6份，按供试品溶液的制备方法，制得 6份供试品溶液，各精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按色谱条件进行分析，测定羟基红花黄色素A峰面积，RSD值1.55％，表明此羟基红花黄色素A的测定方法具有良好的重复性；结果见表23。
表23重复性试验结果
5.2.6稳定性试验
按供试品溶液(批号：190401)一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算羟基红花黄色素A，RSD％为1.12％，表明羟基红花黄色素A在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表24。
表24稳定性试验结果
5.2.7加标回收率
采用加样回收法，取已知含量的样品(批号190401，含量：1.3％)6份，每份精密称取约0.4g，分别加入羟基红花黄色素A对照品溶液(0.13mg/ml)1ml，按照5.2.2项下制备方法制备，在上述色谱条件下测定，测得其平均回收率为 99.3％，RSD％值为2.0％，结果见表25。
表25加样回收试验结果表
5.2.8样品含量测定
按正文收载的方法对八批样品进行含量测定，结果见表26。
表26八批样品(羟基红花黄色素A含量)
结论：从上表数据可以得出红花中含羟基红花黄色素A平均值为1.30％，符合药典要求。
5.2山柰素含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H10O6)不得少于0.050％。
结果：此方法为药典方法，结果分离效果好，准确度和精密度高，故在此不再作方法学考察。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (1)
1.一种红花药物质量检测方法，其特征在于：其检测内容为用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；
所述薄层色谱法鉴别红花的方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5µ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1：8：2：1的甲苯-乙酸乙酯-88%甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述薄层色谱法鉴别酸性红 73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红的方法为：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6：3：1：1的三氯甲烷-甲醇-丙酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙Ⅱ对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以体积比为1:3:1的乙酸乙酯-正丁醇-3%磷酸为展开剂,展开,取出,晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；
所述薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄的方法为：取本品2g,加70%乙醇20ml,振摇10分钟,滤过,滤液挥至约2ml,作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量,加70%乙醇制成每1ml各含0.05 mg的溶液,作为对照试剂溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7：2.5：2.5的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干，供试品色谱中,在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上,不得显相同颜色的斑点。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911383955.9A CN111122734B (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 一种红花药物质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911383955.9A CN111122734B (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 一种红花药物质量检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111122734A CN111122734A (zh) | 2020-05-08 |
| CN111122734B true CN111122734B (zh) | 2022-09-09 |
Family
ID=70504096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911383955.9A Active CN111122734B (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 一种红花药物质量检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111122734B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113588648B (zh) * | 2021-09-01 | 2024-01-02 | 石河子大学 | 一种小秦艽花蒙药材的质量检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1689636A (zh) * | 2004-04-07 | 2005-11-02 | 北京奇源益德药物研究所 | 以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法 |
| CN1876161A (zh) * | 2005-05-12 | 2006-12-13 | 贵阳云岩西创药物科技开发有限公司 | 治疗乳腺增生的乳癖康药物制剂及制法和质量控制方法 |
| KR101831436B1 (ko) * | 2017-05-31 | 2018-02-22 | 서울대학교산학협력단 | 크로마토그래프지문의 유사성 비교를 통한 원료의 품질 평가 방법 |
-
2019
- 2019-12-28 CN CN201911383955.9A patent/CN111122734B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1689636A (zh) * | 2004-04-07 | 2005-11-02 | 北京奇源益德药物研究所 | 以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法 |
| CN1876161A (zh) * | 2005-05-12 | 2006-12-13 | 贵阳云岩西创药物科技开发有限公司 | 治疗乳腺增生的乳癖康药物制剂及制法和质量控制方法 |
| KR101831436B1 (ko) * | 2017-05-31 | 2018-02-22 | 서울대학교산학협력단 | 크로마토그래프지문의 유사성 비교를 통한 원료의 품질 평가 방법 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Application of near infrared spectroscopy to the analysis and fast quality assessment of traditional Chinese medicinal products;Chao Zhang et al;《Acta Pharmaceutica Sinica B》;20141231;第4卷(第3期);第234-241页 * |
| Rapid analysis of dyed safflowers by color objectification and pattern recognition methods;Manfei Xu et al;《Journal of Traditional Chinese Medical Sciences》;20161231;第3卷;第182-192页 * |
| 多指标综合评价优选葶苈生脉方中丹参、红花提取工艺;史红星 等;《中国现代中药》;20151231(第12期);第1317-1320,1335页 * |
| 红花药材(饮片)补充检验方法和检验项目批件20141112100831(1);国家食品药品监督管理总局;《豆丁网页https://www.docin.com/p-2258571637.html》;20190924;第1页 * |
| 红花药材掺伪染色检测方法的实验研究;闵春艳 等;《中国药事》;20151231;第17卷(第8期);第772-775页 * |
| 红金片质量标准的研究;刘松青 等;《中国医院药学杂志》;19961231(第12期);第531-533页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111122734A (zh) | 2020-05-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108562683B (zh) | 一种韭根药物质量检测方法 | |
| CN103869041B (zh) | 一种止咳口服药物组合物的检测方法 | |
| CN113933445A (zh) | 一种石斛标准汤剂质量控制方法 | |
| CN111122734B (zh) | 一种红花药物质量检测方法 | |
| CN111467387A (zh) | 一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法 | |
| CN104535665A (zh) | 一种党参药材的检测方法 | |
| CN111122731B (zh) | 一种赤芍药物质量检测方法 | |
| CN113777183A (zh) | 女贞子药材及其炮制品的特征图谱构建方法、多指标成分含量检测方法 | |
| CN111122735B (zh) | 一种川芎药物质量检测方法 | |
| CN113759037B (zh) | 南葶苈子和/或北葶苈子配方颗粒特征图谱及其构建方法和鉴别方法 | |
| CN110850022A (zh) | 一种用于双冬胶囊质量的检测方法 | |
| CN113156010B (zh) | 一种厚朴温中汤物质基准的质量控制方法 | |
| CN115980249A (zh) | 一种虎耳草药材质量检测方法 | |
| CN112710797B (zh) | 一种用于止咳平喘药物组合物的质量检测方法 | |
| CN108303491B (zh) | 一种香樟根药物质量检测方法 | |
| CN111413423B (zh) | 地骨皮uplc特征图谱的构建方法及地骨皮的检测方法 | |
| CN115541728A (zh) | 一种红花药材及红花药物制剂的特征图谱构建方法及应用 | |
| CN108802260B (zh) | 一种用于荷叶药材、饮片及配方颗粒质量控制的薄层鉴别方法 | |
| CN106177499A (zh) | 一种铁皮石斛总黄酮提取方法 | |
| CN111089919B (zh) | 一种丹参药物的质量检测方法 | |
| CN115266982B (zh) | 一种全面控制落花生枝叶质量的检测方法 | |
| CN115372503B (zh) | 决明子的指纹图谱构建与检测方法、基础鉴定的构建方法及其应用 | |
| CN108627582A (zh) | 一种用于止痛的大青木香药物 | |
| CN115201398B (zh) | 一种搜山虎药材及其提取物与制剂的质量检测方法 | |
| CN113624904B (zh) | 姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A quality testing method for safflower drugs Effective date of registration: 20231122 Granted publication date: 20220909 Pledgee: Qingdao Qishun Investment Management Co.,Ltd. Pledgor: GUIZHOU JINGFENG INJECTION Co.,Ltd. Registration number: Y2023980066820 |