CN111122734B - 一种红花药物质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种红花药物质量检测方法，其检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量，本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明本方法重现性好、耐用性好；本发明含量检测操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度高等优点。提升了红花质量的检测标准，以有效地检测红花药物质量，从而保证临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种红花药物质量检测方法。
背景技术
红花药材质量标准原载于《中国药典》2015年版中，本品为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黄变红时采摘，阴干或晒干。具有活血通经，散瘀止痛之功效。用于经闭，痛经，恶露不行，症瘕痞块，胸痹心痛，瘀滞腹痛，胸胁刺痛，跌扑损伤，疮疡肿痛。
《中国药典》2015年版中红花的质量检测方法内容为：内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。为了更好的检测药材质量，提升药材质量标准，贵州景峰注射剂有限公司根据公司的实际情况并结合《中国药典》2015年版所载的红花质量标准进行了重新修订，在之前的基础上，制定了一种红花药物质量检测方法，即修定了用薄层色谱法鉴别红花的薄层鉴别、用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙 II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A，以有效地检测红花药物质量，从而保证临床疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种红花药物质量检测方法，检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物，吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量等质量检测项目，以有效地控制红花药物质量，从而保证临床疗效。
本发明所述的一种红花药物质量检测方法，检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。
本发明所述性状为本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
本发明所述显微鉴别为本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具 3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
本发明所述薄层色谱法鉴别红花的方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水 (1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红的方法为：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷- 甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
本发明所述薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄的方法为：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
本发明所述水分检查方法照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过13.0％；所述总灰分检查方法照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过15.0％；所述酸不溶性灰分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过5.0％；所述杂质测定法照2015年版中国药典第四部通则2301测定，不得过2％；所述浸出物检查方法照2015年版中国药典第四部通则2201照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于30.0％。
本发明所述吸光度检测方法为取本品，置硅胶干燥器中干燥24小时，研成细粉，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80％丙酮溶液50ml，连接冷凝器，置50℃水浴上温浸90分钟，放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100ml 量瓶中，用80％丙酮溶液25ml分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80％丙酮溶液至刻度，摇匀，照《分光光度法》测定，在518nm的波长处测定吸光度，不得低于0.20。
本发明所述高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A含量方法为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32016)不得少于1.0％。
本发明所述高效液相色谱法测定山柰素含量方法为：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H1006)不得少于0.050％。
本发明具有以下优点：
1、本发明是为了提升红花的质量检测标准，更好的检测药材质量，在对《中国药典》(2015年版)所载的红花质量标准重新修订的基础上，制定了一种红花药物质量检测方法，研究出斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，重现性好、耐用性好的红花薄层鉴别，酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红的薄层鉴别，偶氮玉红、日落黄的薄层鉴别。
2、本发明研究出操作简便、分析快速、结果准确，分离效果好，高灵敏度的羟基红花黄色素A含量测定，改变原有方法分离效果差，灵敏度低，重复性差的方案，以有效的检测红花药材质量，从而保证临床疗效。
3、按本发明检测方法测定样品中羟基红花黄色素A的含量，羟基红花黄色素A平均含量为1.3％，重复实验RSD值1.55％，表明此羟基红花黄色素A的测定方法具有良好的重复性。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
红花药材的质量检测方法：其检测内容为性状、显微鉴别、用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙II、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度；高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A；高效液相色谱法测定山柰素含量。
【性状】本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
【鉴别】(1)本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
(2)取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加 70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
(4)取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含 0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水 (7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
【检查】水分照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过13.0％。
总灰分照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过15.0％。
酸不溶性灰分照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过5.0％。
杂质照2015年版中国药典第四部通则2301测定，不得过2％。
浸出物照2015年版中国药典第四部通则2201照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于30.0％。
吸光度取本品，置硅胶干燥器中干燥24小时，研成细粉，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80％丙酮溶液50ml，连接冷凝器，置50℃水浴上温浸90 分钟，放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100ml量瓶中，用80％丙酮溶液25ml分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80％丙酮溶液至刻度，摇匀，照《分光光度法》测定，在518nm的波长处测定吸光度，不得低于0.20。
【含量测定】照高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A含量：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
【含量测定】照高效液相色谱法测定山柰素含量
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H10O6)不得少于0.050％。
实验例：为了证明本发明检测方法的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：
1.性状：本品为不带子房的管状花，长1～2cm，表面红黄色或红色，花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8mm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉，质柔软，气微香，味微苦。
2.显微鉴别：XSP-8CC显微镜观察
本品粉末橙黄色，花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞、常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物，花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状，柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。
3.薄层鉴别：
3.1取本品粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7∶2∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，因该鉴别斑点模糊，分离度不好，故本次修订不载入正文。
3.2方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰、分离度好，故列入正文、方法学验证试验如下：
3.2.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。
对照药材制备：取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照药材各5μl。
展开剂：甲苯-乙酸乙酯-88％甲酸-水(1∶8∶2∶1)
展距：8cm。
检视：展开，取出，晾干。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法处理8批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表1。
表1重现性试验结果表
| 序号 | 批号 | 结果 |
| 1 | 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 2 | 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 3 | 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 4 | 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 5 | 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 6 | 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 7 | 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 8 | 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
3.2.2.耐用性
3.2.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表2。
表2不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.2.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表3。
表3低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.2.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表4。
表4低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
3.3取本品2g，剪碎，加70％乙醇20ml，超声处理20分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加 70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰乙酸(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1∶3∶3∶l∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点，因该鉴别斑点分离度不好，重现性差，故本次修订不载入正文。
3.4方法：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。斑点清晰、分离度好，故列入正文。方法学验证试验如下：
3.4.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。
对照品溶液制备：取酸性红73、金橙II、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μl。
展开剂：以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)；乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)。
展距：9cm。
检视：展开，取出，晾干，在可见光下检视。
结果：以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)为展开剂，供试品色谱中，与金橙II对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；再以乙酸乙酯-正丁醇-3％磷酸(1∶3∶1)为展开剂，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。
用上述方法处理8批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表5：
表5重现性试验结果表
3.4.2.耐用性
3.4.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表6。
表6不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表7。
表7低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
| 批号 | 低温(5℃) | 室温(25℃) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表8。
表8低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
3.5取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液。另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml各含0.05 mg的溶液，作为对照试剂溶液。照《薄层色谱法》试验。吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇 -氨水-水(2∶2∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点，因该鉴别斑点分离度不好，重现性差，故本次修订不载入正文。
3.6方法：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml 各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液，照《薄层色谱法》试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯- 甲酸-水(7∶2.5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。斑点清晰、分离度好，故列入正文，方法学验证试验如下：
3.6.1试验方法、条件及重现性
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司红花研究的实际情况而制定了本检测方法。
样品来源：新疆190401、云南190402、甘肃190403、河南190404、湖南190405、四川190406、西藏190407、青海190408。
对照品来源：中国食品药品检定研究院。
供试品溶液制备：取本品2g，加70％乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml，作为供试品溶液.
对照品溶液制备：取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每1ml 各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μl。
展开剂：乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)。
展距：10cm。
检视：展开，取出，晾干。
结果：供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。
用上述方法处理八批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表9：
表9重现性试验结果表
| 序号 | 批号 | 结果 |
| 1 | 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 2 | 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 3 | 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 4 | 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 5 | 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 6 | 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 7 | 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 8 | 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
3.6.2.耐用性
3.6.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各8批次的样品)，结果见表10。
表10不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.6.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表11。
表11低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表
| 批号 | 低温(5℃) | 室温(25℃) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.6.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表12。
表12低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
| 批号 | 低湿度(32％) | 高湿度(72％) |
| 新疆190401 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 云南190402 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 甘肃190403 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 河南190404 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 湖南190405 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 四川190406 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 西藏190407 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 青海190408 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。
4.【检查】
依据《中国药典》2015年版检测水分、总灰分、酸不溶性灰分、杂质、浸出物、吸光度。故在此不再作方法学考察。
4.1重金属及有害元素
4.1.1照铅、镉、砷、汞、铜测定法(通则2321原子吸收分光光度法)，根据我公司使用的检验仪器设备及物料的性质，研究起草出该样品的试验方法：
仪器及试剂：原子吸收分光光度计(普析TAS990)、微波消解萃取合成工作站(新仪MDS-10)、循环水冷却器(LabTech SH150-900)、无油空气压缩机 (普析AC-1Y)。
对照品溶液的制备：依照《中国药典》2015年版四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法配制，如下表13。
表13对照品溶液
供试品升温消解程序：见表14
表14供试品消解程序
| N(编号) | T(℃) | t(温度保持时间) | W(功率)N(样品数) |
| 1 | 130 | 10min | (n+3)*100瓦 |
| 2 | 165 | 5min | (n+3)*100瓦 |
| 3 | 195 | 20min | (n+3)*100瓦 |
供试品的制备：铅：取供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内，进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
镉：同铅测定项下供试品溶液的制备。
铜：同铅测定项下供试品溶液的制备。
汞：供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上，于120℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5％盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入10ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
砷：同铅测定项下供试品溶液的制备。
测定方法：铅(石墨炉法)精密量取空白溶液与供试品溶液各lml，精密加含1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁的溶液0.5ml，混匀，精密吸取10～20μl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅(Pb)的含量，计算，即得。
镉(石墨炉法)同铅测定方法进行测定。
铜(火焰法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线的制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中铜(Cu)的含量，计算，即得。
汞(冷蒸气吸收法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中汞(Hg)的含量，计算，即得。
砷(氢化物法)精密吸取空白溶液与供试品溶液各10ml，照标准曲线的制备项下，白“加25％碘化钾溶液(临用前配制)lml”起，依法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中砷(As)的含量，计算，即得。
4.1.2方法确认(回收试验)
4.1.2.1采用加样回收法取已知铅含量的样品(批号190401，含量：C铅＝2.0mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铅标准液(1μg/ml)0.5ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 97.8％，RSD％值为4.8％，结果见表15。
表15加样回收试验结果表
4.1.2.2采用加样回收法取已知镉含量的样品(批号190401，含量：C镉＝0.2mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入镉标准液(1μg/ml)0.05ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 100.9％，RSD％值为4.0％，结果见表16。
表16加样回收试验结果表
4.1.2.3采用加样回收法取已知铜含量的样品(批号190401，含量：C铜＝12mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铜标准液(1μg/ml)3.5ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 97.5％，RSD％值为1.4％，结果见表17。
表17加样回收试验结果表
4.1.2.4采用加样回收法取已知汞含量的样品(批号190401，含量：C汞未检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入汞标准液(1μg/ml)0.1ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为99.8％，RSD％值为3.6％，结果见表18。
表18加样回收试验结果表
4.1.2.5采用加样回收法取已知砷含量的样品(批号190401，含量：C砷＝1mg/Kg)检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入砷标准液(1μg/ml)0.25ml 按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为 102.2％，RSD％值为2.0％，结果见表19。
表19加样回收试验结果表
4.1.3实测八个不同产地供试品各1批，铅平均值为1.6mg/kg、镉平均值为0.11mg/kg、砷平均值为0.3mg/kg、汞未检出、铜平均值为12.4mg/kg(见表20)；结果重金属及有害元素的量均远远低于药典要求，故未列入正文。
表20重金属及有害元素铅、镉、砷、汞、铜测定结果表
5.【含量测定】
5.1羟基红花黄色素A含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz) 40分钟，放冷，再称定重量，25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32016)不得少于1.0％。
结果：峰形较差、重现性差，精密度不好，故不列入正文。
5.2方法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40 分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
结果：峰形好，分离效果好，准确度和精密度高，该标准列入正文，方法学考察如下：
5.2.1仪器与试药
高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondaSil C18 Superb 5μm 250 ×4.6mm
电子天平：(SHIMADZU：AUW120D；上海越平：FA1104)；HS-10260D型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)；
山柰素对照品：中国食品药品检定研究；
乙腈、乙醇为色谱纯和分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
5.2.2方法考察试验
5.2.2.1对照品溶液的制备
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每Iml含 0.13mg的溶液，即得；
5.2.2.2供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40分钟，放冷，再称定重量，乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
5.2.2.3色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(36∶64)为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
5.2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。
5.2.3线性试验
精密取浓度0.1300μg/ml、0.2600μg/ml、1.3000μg/ml、2.6000μg/ml、 6.5000μg/ml的羟基红花黄色素A对照品溶液，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到线性方程为y＝630.32x+0.9181 ，R2＝1，表明羟基红花黄色素A进样浓度在0.1300μg/ml～6.5000μg/ml范围内呈良好的线性关系，结果见表21。
表21羟基红花黄色素A线性试验结果
5.2.4仪器精密度试验
取对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样5次，测定羟基红花黄色素A 峰面积，计算RSD％(羟基红花黄色素A)值为1.84％，表明仪器精密度良好，测定结果见表22。
表22仪器精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD％ |
| 面积(A) | 1213.462 | 1243.661 | 1200.178 | 1229.666 | 1256.332 | 1228.660 | 1.84％ |
5.2.5重复性试验
精密称取同一批样品(批号190401)6份，按供试品溶液的制备方法，制得 6份供试品溶液，各精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按色谱条件进行分析，测定羟基红花黄色素A峰面积，RSD值1.55％，表明此羟基红花黄色素A的测定方法具有良好的重复性；结果见表23。
表23重复性试验结果
5.2.6稳定性试验
按供试品溶液(批号：190401)一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算羟基红花黄色素A，RSD％为1.12％，表明羟基红花黄色素A在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表24。
表24稳定性试验结果
5.2.7加标回收率
采用加样回收法，取已知含量的样品(批号190401，含量：1.3％)6份，每份精密称取约0.4g，分别加入羟基红花黄色素A对照品溶液(0.13mg/ml)1ml，按照5.2.2项下制备方法制备，在上述色谱条件下测定，测得其平均回收率为 99.3％，RSD％值为2.0％，结果见表25。
表25加样回收试验结果表
5.2.8样品含量测定
按正文收载的方法对八批样品进行含量测定，结果见表26。
表26八批样品(羟基红花黄色素A含量)
结论：从上表数据可以得出红花中含羟基红花黄色素A平均值为1.30％，符合药典要求。
5.2山柰素含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇- 0.4％磷酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为367nm，理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 9μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H10O6)不得少于0.050％。
结果：此方法为药典方法，结果分离效果好，准确度和精密度高，故在此不再作方法学考察。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (1)
1.一种红花药物质量检测方法，其特征在于：其检测内容为用薄层色谱法鉴别红花；用薄层色谱法鉴别酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红；用薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄；
所述薄层色谱法鉴别红花的方法为：取本品粉末0.5g，加N，N-二甲基甲酰胺溶液3ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5µ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1：8：2：1的甲苯-乙酸乙酯-88%甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述薄层色谱法鉴别酸性红 73、金橙Ⅱ、柠檬黄、胭脂红的方法为：取本品2g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理10分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，另取酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul，对照试液溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6：3：1：1的三氯甲烷-甲醇-丙酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，与金橙Ⅱ对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；上述薄层板再以体积比为1:3:1的乙酸乙酯-正丁醇-3%磷酸为展开剂,展开,取出,晾干，在可见光下检视，供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；
所述薄层色谱法鉴别偶氮玉红、日落黄的方法为：取本品2g,加70%乙醇20ml,振摇10分钟,滤过,滤液挥至约2ml,作为供试品溶液，另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量,加70%乙醇制成每1ml各含0.05 mg的溶液,作为对照试剂溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7：2.5：2.5的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干，供试品色谱中,在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上,不得显相同颜色的斑点。
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Denomination of invention: A quality testing method for safflower drugs Effective date of registration: 20231122 Granted publication date: 20220909 Pledgee: Qingdao Qishun Investment Management Co.,Ltd. Pledgor: GUIZHOU JINGFENG INJECTION Co.,Ltd. Registration number: Y2023980066820 |