CN108627582A - 一种用于止痛的大青木香药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于止痛的大青木香药物，包括大青木香检测方法及饮片炮制方法，其质量检测具体内容为性状、用显微及薄层色谱法鉴别大青木香、水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物。本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明本方法重现性好、耐用性好。

Description

一种用于止痛的大青木香药物

技术领域

本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种用于止痛的大青木香药物。

背景技术

大青木香产于浙江、福建、湖南、广东、广西、四川、贵州、云南等省区，生于山谷林中。贵州主要分布于赤水、习水、绥阳、罗甸、长顺、独山等地。具有镇痛解痉、理气止痛、清热解毒、止血的作用，民间常用于治疗痉挛性胃痛，腹痛，急性胃肠炎，胃及十二指肠溃疡，痢疾，跌打损伤，疮痈肿毒，外伤出血，蛇咬伤，骨结核等。

大青木香质量标准原载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003 年版)中，为马兜铃科植物广西马兜铃Aristolochia kwangsiensis Chun et How ex C.F.Liang的块状根。质量标准中只含有性状和一般理化鉴别项，因大青木香具有活血通络，行气止痛，化湿消肿。用于胃痛，腹痛，喉痛，跌扑损伤，风湿疼痛^[3]。是通迪胶囊中主要原料之一。根据当地用药习惯和《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)、《贵州苗族医药研究与开发》、《中药大辞典》，结合《国家药品标准技术规范》及《贵州省中药、民族药质量标准》编写大纲要求，为了更好的控制药材质量，对《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)所载的大青木香质量标准重新修订。在之前的基础上，取消专属性不强的化学反应鉴别，增加了薄层鉴别和水分、总灰分、酸不溶性灰分、饮片中马兜铃酸I限量、浸出物等的检测项目。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于止痛的大青木香药物，其质量检测具体检测内容为性状、用显微及薄层色谱法鉴别大青木香、水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物。

本发明的另一目的是提供了大青木香饮片的炮制方法及检测方法。

所述性状检测方法为本品呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙，栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色，木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性，气微香，味苦。

所述用显微鉴别方法为本品粉末棕色，淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6-36μm，层纹明显，石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5-12μm，纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

所述用薄层色谱法鉴别大青木香的方法为取本品粉末0.5-5g，加 60-90℃的石油醚20-60ml，超声提取12-45min，滤过，残渣加甲醇20-40 ml，再超声提取15-40min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述用薄层色谱法鉴别大青木香的方法为取本品粉末1g，加60-90℃石油醚50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述水分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过15.0％，所述总灰分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过8.0％、酸不溶灰分不得过3.0％，所述浸出物检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2201照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，不得少于6.0％。

所述大青木香饮片炮制方法为：除去杂质，打碎成粗颗粒，用5-15倍量的0.5mol/LNaHCO₃溶液浸泡20-30小时，弃去浸泡液，用清水冲洗2-4 次，再用清水浸泡2-5小时，弃去水液；再用5-15倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡15-30小时，同法反复5-12次，干燥，即可。

优选的，所述大青木香饮片炮制方法为：除去杂质，打碎成粗颗粒，用10倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡24小时，弃去浸泡液，用清水冲洗三次，再用清水浸泡3小时，弃去水液；再用10倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡24小时，同法反复7-10次，干燥，即可。

所述大青木香饮片中马兜铃酸I限量测定方法为：马兜铃酸I限量照高效液相色谱法(2015年版中国药典第四部通则0512)测定；

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照时间为0-40分钟、流动相A为：30-100％、流动相B为0-70％条件进行梯度洗脱，检测波长为 260nm，理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备 取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品粉末0.5-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80％甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-50分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

优选的，所述大青木香饮片中马兜铃酸I限量测定方法为：马兜铃酸I 限量照2015年版中国药典第四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照时间为0-40分钟、流动相A为：30-100％、流动相B为0-70％条件进行梯度洗脱，检测波长为 260nm，理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

所述马兜铃酸I限量测定中梯度洗脱具体规定为：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-10	30→34	70→66
10-18	34→35	66→65
			18-20	35→45	65→55
20-30	45	55
			30-31	45→53	55→47
31-35	53	47
			35-40	53→100	47→0

本发明具有以下优点：

1、本发明是为了更好的检测药材质量，在对《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)所载的大青木香质量标准重新修订的基础上，取消专属性不强的化学反应鉴别，增加了薄层鉴别和水分、总灰分、酸不溶性灰分、饮片中马兜铃酸I限量、浸出物等的检测项目，以有效的检测大青木香质量，从而保证临床疗效。

2、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好。

3、用本发明色谱条件测定大青木香饮片中马兜铃酸I的含量，平均含量为0.00044％，RSD值0.68％，表明此马兜铃酸I的测定方法具有良好的重复性。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

【性状】本品呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙，栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色。木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性。气微香，味苦。

【鉴别】(1)本品粉末棕色。淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6-36μm，层纹明显。石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5-12μm。纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

(2)取本品粉末1g，加60-90℃石油醚50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇 2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分 不得过15.0％(2015年版中国药典第四部通则0832 第二法)。

总灰分 不得过8.0％(2015年版中国药典第四部通则2203)。

酸不溶灰分 不得过3.0％(2015年版中国药典第四部通则2203)。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法(2015年版中国药典第四部通则 2201)项下热浸法测定，用75％乙醇作为溶剂，不得少于6.0％。

饮片

【炮制】除去杂质，打碎成粗颗粒，用10倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡24小时，弃去浸泡液，用清水冲洗三次，再用清水浸泡3小时，弃去水液；再用10倍量的0.5mol/LNaHCO₃溶液浸泡24小时，同法反复7-10 次，干燥，即可。

【检査】水分不得过13％；总灰分、酸不溶灰分同药材。

马兜铃酸I限量 照高效液相色谱法(2015年版中国药典第四部通则 0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于 5000。

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-10	30→34	70→66
10-18	34→35	66→65
			18-20	35→45	65→55
20-30	45	55
			30-31	45→53	55→47
31-35	53	47
			35-40	53→100	47→0

对照品溶液的制备 取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率 40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

【性味与归经】苦，寒。心，胃，大肠经。

【功效与主治】活血通络，行气止痛，化湿消肿。用于胃痛，腹痛，喉痛，跌扑损伤，风湿疼痛。

【用法与用量】1-3g；或研末吞服。

【注意】(1)本品含有马兜铃酸，马兜铃酸有引起肾脏损害等不良反应的报道，用药时间不能超过2个周期。

(2)儿童及老人慎用。

(3)肾脏病患者、孕妇及新生儿禁用。

【贮藏】置通风干燥处。

实施例2

【性状】本品呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙，栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色。木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性。气微香，味苦。

【鉴别】(1)本品粉末棕色。淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6-36μm，层纹明显。石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5-12μm。纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

(2)取本品粉末0.5g，加60-90℃的石油醚20ml，超声提取12min，滤过，残渣加甲醇20ml，再超声提取15min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分 不得过15.0％(2015年版中国药典第四部通则0832 第二法)。

总灰分 不得过8.0％(2015年版中国药典第四部通则2203)。

酸不溶灰分 不得过3.0％(2015年版中国药典第四部通则2203)。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法(2015年版中国药典第四部通则 2201)项下热浸法测定，用75％乙醇作为溶剂，不得少于6.0％。

饮片

【炮制】：除去杂质，打碎成粗颗粒，用7倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡26小时，弃去浸泡液，用清水冲洗3次，再用清水浸泡3小时，弃去水液；再用7倍量的0.5mol/LNaHCO₃溶液浸泡18小时，同法反复5-12 次，干燥，即可。

【检査】水分不得过13％；总灰分、酸不溶灰分同药材。

马兜铃酸I限量 照高效液相色谱法(2015年版中国药典第四部通则 0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于 5000。

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-10	30→34	70→66
10-18	34→35	66→65
			18-20	35→45	65→55
20-30	45	55
			30-31	45→53	55→47
31-35	53	47
			35-40	53→100	47→0

对照品溶液的制备 取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

【性味与归经】苦，寒。心，胃，大肠经。

【功效与主治】活血通络，行气止痛，化湿消肿。用于胃痛，腹痛，喉痛，跌扑损伤，风湿疼痛。

【用法与用量】1-3g；或研末吞服。

【注意】(1)本品含有马兜铃酸，马兜铃酸有引起肾脏损害等不良反应的报道，用药时间不能超过2个周期。

(2)儿童及老人慎用。

(3)肾脏病患者、孕妇及新生儿禁用。

【贮藏】置通风干燥处。

实施例3

【性状】本品呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙，栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色。木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性。气微香，味苦。

【鉴别】(1)本品粉末棕色。淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6-36μm，层纹明显。石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5-12μm。纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

(2)取本品粉末5g，加60-90℃的石油醚60ml，超声提取45min，滤过，残渣加甲醇40ml，再超声提取40min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分 不得过15.0％(通则0832第二法)。

总灰分 不得过8.0％(通则2203)。

酸不溶灰分 不得过3.0％(通则2203)。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下热浸法测定，用75％乙醇作为溶剂，不得少于6.0％。

饮片

【炮制】：除去杂质，打碎成粗颗粒，用13倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡25小时，弃去浸泡液，用清水冲洗3次，再用清水浸泡4小时，弃去水液；再用13倍量的0.5mol/LNaHCO₃溶液浸泡25小时，同法反复5-12 次，干燥，即可。

【检査】水分不得过13％；总灰分、酸不溶灰分同药材。

马兜铃酸I限量 照高效液相色谱法(通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于 5000。

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-10	30→34	70→66
10-18	34→35	66→65
			18-20	35→45	65→55
20-30	45	55
			30-31	45→53	55→47
31-35	53	47
			35-40	53→100	47→0

对照品溶液的制备 取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇30ml，密塞，称定重量，超声处理50分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

【性味与归经】苦，寒。心，胃，大肠经。

【功效与主治】活血通络，行气止痛，化湿消肿。用于胃痛，腹痛，喉痛，跌扑损伤，风湿疼痛。

【用法与用量】1-3g；或研末吞服。

【注意】(1)本品含有马兜铃酸，马兜铃酸有引起肾脏损害等不良反应的报道，用药时间不能超过2个周期。

(2)儿童及老人慎用。

(3)肾脏病患者、孕妇及新生儿禁用。

【贮藏】置通风干燥处。

实验例：为了证明本发明的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：

1、【性状】本品性状根据样品描述，本品根呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙。栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色。木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性。气微香，味苦。

2、【成分】根含尿囊素(IllIntoin)，马兜铃酸 (IristolochicIcid)I，β-谷甾醇(β-sitosterol)，6-甲氧基去硝基马兜铃酸甲酯(6-methoxydenitroIristolochic Icidmethyl ester)和6-甲氧基马兜铃酸I甲酯 (6-methoxyIristolochic Icid I methylester)等。块根还含木兰花碱(mIgnoflorine)^[4]。

3、【鉴别】

3.1本品粉末显微特征(XSP-8CC显微镜观察)。

本品粉末棕色。淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6～36μm，层纹明显。石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5～12μm。纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

3.2取本品粉末1g，加稀盐酸10ml，水浴加热5分钟，滤过，滤液加氨试液使成碱性，加三氯甲烷15ml振摇提取，分取三氯甲烷液，置于水浴上蒸干，残渣加5％硫酸溶液2ml溶解，滤过，滤液加碘化铋钾试液12滴，生成红棕色沉淀不明显。因该鉴别专属性不强，故本次标准修订不载入正文。

3.3方法为：取本品粉末1g，加石油醚(60～90℃)50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-乙酸(4∶1∶0.1)为展开剂(饱和8分钟)展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。斑点清晰、分离度好，故列入正文。

3.3.1.试验方法、条件及重现性

方法来源：结合我公司大青木香研究的实际情况而制定了本方法。

样品来源：贵州长顺170811、安龙170812、习水170813、罗甸 170814、独山170815、兴义170816、赤水170817、广西龙州 170818、陆川170819、靖西170820

对照药材来源：经药材植物鉴定后，自制的大青木香对照药材。

对照品来源：马兜铃酸I对照品：为中国食品药品检定研究院，批号： 110746-201611

供试品溶液制备：取本品粉末1g，加石油醚(60～90℃)50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。

点样量：供试品溶液及对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl。

展开剂：环己烷-乙酸乙酯-乙酸(4∶1∶0.1)为展开剂

展距：10cm

显色及检视：置紫外光灯(254nm)下检视。在供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。

结果：在供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。

用上述方法处理10批各个产地的样品，并按规定的方法展开，结果见表1

表1试验方法、条件及重现性试验结果

3.3.2.耐用性

3.3.2.1不同薄层板的比较

比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各10批次的样品)，结果见表2。

表2：不同薄层板耐用性结果表

结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。

3.3.2.2不同温度的比较

比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表3。

表3：低温(5℃)室温(25℃)环境条件下自制板展开效果表

结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。

3.3.2.3不同湿度的比较

比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表4。

表4：低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表

结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。

经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。

4.【检查】

依据《中国药典》相关内容，结合本品特性，研究制定了相应的检查项目。

4.1水分

照水分测定法(《中国药典》2015版四部通则0832第二法)测定。实测十个不同产地样品各1批，平均值11.4％(见表5)，最低测定值为8.2％，最高测定值为13.4％，以平均测定值的130％设限，为14.8％，故暂定本品水分不得过15.0％。

表5水分测定结果表

4.2总灰分

照总灰分测定法(《中国药典》2015版四部通则2302)测定。实测十个不同产地样品各1批，平均值5.9％(见表6)，最低测定值为4.6％，最高测定值为6.8％，以平均测定值的130％设限，为7.6％。故暂定本品总灰分不得过8.0％。

表6总灰分结果表

4.3酸不溶性灰分

照酸不溶性灰分测定法(《中国药典》2015版四部通则2302)测定。实测十个不同产地样品各1批，平均值2.1％(见表7)，最低测定值为1.5％，最高测定值为2.6％，以平均测定值的130％设限，为2.7。故暂定本品酸不溶性灰分不得过3.0％。

表7酸不溶性灰分测定结果表

4.4重金属及有害元素

4.4.1照铅、镉、砷、汞、铜测定法(通则2321原子吸收分光光度法)，根据我公司使用的检验仪器设备及物料的性质，研究起草出该样品的试验方法：

仪器及试剂：原子吸收分光光度计(普析TIS990)、微波消解萃取合成工作站(新仪MDS-10)、循环水冷却器(LIbTech SH150-900)、无油空气压缩机(普析IC-1Y)。

对照品溶液的制备：依照《中国药典》2015年版四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法配制，如下表8。

表8对照品溶液

供试品升温消解程序：见表9

表9供试品消解程序

供试品的制备：铅：取供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml,混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内，进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇勻，即得。同法同时制备试剂空白溶液。

镉：同铅测定项下供试品溶液的制备。

铜：同铅测定项下供试品溶液的制备。

汞：供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸10ml，过氧化氢1ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置新仪MDS-10微波消解炉内进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上，于120℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至2～ 3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5％盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入10ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。同法同时制备试剂空白溶液。

砷：同铅测定项下供试品溶液的制备。

测定方法：铅(石墨炉法)精密量取空白溶液与供试品溶液各lml，精密加含1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁的溶液0.5ml，混匀，精密吸取10 ～20μl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅(Pb)的含量，计算，即得。

镉(石墨炉法)同铅测定方法进行测定。

铜(火焰法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线的制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中铜(Cu)的含量，计算，即得。

汞(冷蒸气吸收法)精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中汞(Hg)的含量，计算，即得。

砷(氢化物法)精密吸取空白溶液与供试品溶液各10ml，照标准曲线的制备项下，自“加25％碘化钾溶液(临用前配制)lml”起，依法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中砷(Is)的含量，计算，即得。

4.4.2方法确认(回收试验)

4.4.2.1采用加样回收法。取已知铅含量的样品(批号170811，含量： C_铅＝0.7mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铅标准液(1μg/ml) 0.2ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为102.3％，RSD％值为3.6％，结果见表10。

表10加样回收试验结果表

4.4.2.2采用加样回收法。取已知镉含量的样品(批号170811，含量： C_镉＝0.06mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入镉标准液(1μg/ml) 0.015ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为102.3％，RSD％值为4.7％，结果见表11。

表11加样回收试验结果表

4.4.2.3采用加样回收法。取已知铜含量的样品(批号170811，含量： C_铜＝8.6mg/Kg)6份，每份精密称取0.25g，分别加入铜标准液(1μg/ml) 2.0ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为100.2％，RSD％值为3.5％，结果见表12。

表12加样回收试验结果表

4.4.2.4采用加样回收法。取已知汞含量的样品(批号170811，含量：C_汞未检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入汞标准液(1μg/ml)0.1ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为101.9％，RSD％值为2.8％，结果见表13。

表13加样回收试验结果表

4.4.2.5采用加样回收法。取已知砷含量的样品(批号170811，含量： C_砷＝0.6mg/Kg)检出)6份，每份精密称取0.25g，分别加入砷标准液(1μg/ml)0.25ml按照供试品制备方法制备。在上述检测方法条件下测定，测得其平均回收率为104.2％，RSD％值为4.3％，结果见表14。

表14加样回收试验结果表

4.4.3实测十个不同产地供试品各1批，铅平均值为0.7mg/kg、镉平均值为0.05mg/kg、、砷平均值为0.5mg/kg、汞未检出、铜平均值为6.8mg/kg(见表15)；结果重金属及有害元素的量均远远低于药典要求，故未列入正文。

表15重金厲及有害元素铅、镉、砷、汞、铜测定结果表

5.【浸出物】醇溶性浸出物 照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，实测十个不同产地样品各1批，平均值8.6％(见表16)，最低测定值为7.2％，最高值11.6％，以平均测定值的70％设限，为6.0％。故暂定本品醇溶性浸出物不得少于6.0％。

表16醇溶性浸出物结果表

饮片

6、【炮制】除去杂质，打碎成粗颗粒，用10倍量的0.5mol/L NIHCO₃溶液浸泡24小时，弃浸泡液，用清水冲洗三次，再用清水浸泡3小时，弃清水液；同法反复7～10次，取出干燥，即可。

7、【鉴别】

(1)本品粉末棕色。淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6～36μm，层纹明显。石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5～12μm。纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

(2)取本品粉末0.5g，加石油醚(60～90℃)50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大青木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-乙酸(4∶1∶0.1)为展开剂(饱和8分钟)展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。因大青木香饮片通过炮制后，马兜铃酸I的量低于0.001％，用上述鉴别方法未能见到相同颜色斑点。故饮片本次标准修订不载入正文。

8、【检査】8.1水分 不得过13.0％(通则0832第二法)参照《中国药典》2015版药材和饮片检定通则制定，结果见表17

表17：十批大青木香饮片水分

8.2总灰分 不得过8.0％(通则2302)。

表18：十批大青木香饮片总灰分

8.3酸不溶性灰分 不得过3.0％(通则2203)

表19十批大青木香饮片酸不溶性灰分

9、限量检查

因大青木香中引起肾毒性的成分马兜铃酸I,因此对大青木香的饮片参照细辛的限量制定了马兜铃酸I含量限度，从而确保其用药安全。该标准列入正文。

9.1仪器与试药

高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondISil C18 Superb 5μm 250×4.6mm

电子天平：(SHIMIDZU:IUW120D；上海越平：FI1104)；HS-10260D 型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)；

马兜铃酸I对照品：为中国食品药品检定研究院，批号：110746-201611 含量以98.9％计。

甲醇为色谱纯和分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。

9.2方法考察试验

9.2.1方法来源：参考《中国药典》2015年版细辛检查项下的马兜铃酸限量检查测定。

马兜铃酸I照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512) 测定。

9.2.2.1对照品溶液的制备 取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得。

9.2.2.2供试品溶液的制备 取本品中粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

9.2.2.3色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相I，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于5000。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

9.2.2.4线性试验

取马兜铃酸I对照品溶液(0.20706μg/ml)。分别精密量取4、8、16、 20、30、40μl，注入色谱仪，按正文色谱条件试验，结果见表9.4.2.1，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，回归方程为： y＝3094.8x+0.1562，相关系数R²＝0.9997，表明马兜铃酸I在0.00082824～ 0.0082824μg范围内线性关系良好；见表20。

表20马兜铃酸I线性试验结果

9.2.2.5仪器精密度试验

取9.4.2.1项下制备的对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6 次，测定马兜铃酸I峰面积，计算RSD％(马兜铃酸I)值为0.92％，表明仪器精密度好，测定结果见表21。

表21仪器精密度试验结果

9.4.2.6重复性试验

取同一批样品(批号：171101)6份，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，按上述色谱条件测定样品中马兜铃酸I的含量，平均含量为0.00044％， RSD值0.68％，表明此马兜铃酸I的测定方法具有良好的重复性；结果见表 22。

表22重复性试验结果

9.4.2.7稳定性试验

按9.4.2.2项下方法制备供试品溶液一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为,1.6％，表明马兜铃酸I在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表23。

表23稳定性试验结果

编号	0h	2h	4h	6h	8h	10h	平均值	RSD％
									峰面积(I)	2.9908	3.0113	3.0075	2.9310	2.8936	2.9897	2.97065	1.6

9.4.2.8回收试验

采用加样回收法。取已知含量的样品批号171101(含量： 0.0044mg/·g)6份，每份精密称取约0.25g，分别加入马兜铃酸I对照品溶液(1.20μg·ml-1)1ml，按照9.4.2.2项下制备方法制备。在上述色谱条件下测定，测得其平均回收率为99.91％，RSD％为1.10％，结果见表24。

回收率＝(测得总含量-样品中原含量)*100％÷对照品加入量

表24加样回收试验结果表

9.4.2.8样品含量测定

按正文收载的方法对十批大青木香饮片进行马兜铃酸I限量测定，结果见表25。

表25十批大青木香饮片

结论：从上表数据可以得出大青木香中含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)平均值为0.0003％。其中龙州171108含量未检出，广西靖西171110含量为0.0005 最高；平均测定值为0.0003％。因大青木香中引起肾毒性的成分马兜铃酸I 制定其限度，以期科学、有效地控制药材质量，保证其临床疗效和安全性。且与药典中细辛的检查限量相同，故暂定本品含马兜铃酸I不得过0.001％。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

10、【浸出物】醇溶性浸出物 照醇溶性浸出物测定法(通则2201) 项下的热浸法测定，实测十个不同产地样品各1批，平均值2.3％(见表7.2)，最低测定值为1.5％，最高值3.1％，以平均测定值的70％设限，为1.6％。炮制后醇溶性浸出物过低，故暂不列入正文。

表26十批大青木香饮片醇溶性浸出物

【性味与归经】苦，寒。心，胃，大肠经。

【功能与主治】活血通络，行气止痛，化湿消肿。用于胃痛，腹痛，喉痛，跌扑损伤，风湿疼痛。

【用法与用量】1-3g；或研末吞服。

【注意】(1)本品含有马兜铃酸，马兜铃酸有引起肾脏损害等不良反应的报道，用药时间不能超过2个周期。

(2)儿童及老人慎用。

(3)肾脏病患者、孕妇及新生儿禁用。

【贮藏】置通风干燥处。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种用于止痛的大青木香药物，其特征在于：大青木香质量检测方法为检查性状，用显微及薄层色谱法鉴别，检测水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物。

2.根据权利要求1所述用于止痛的大青木香药物，其特征在于：所述性状检测方法为大青木香呈长纺锤形，或不规则片块，棕褐色，表面粗糙，栓皮常见不规则裂纹，常因摩擦而部分脱落，断面皮部较厚，形成层明显，黄白色或灰白色，木部具部分放射状纹理，体重，质硬，具粉性，气微香，味苦。

3.根据权利要求2所述用于止痛的大青木香药物，其特征在于：所述用显微鉴别大青木香方法为本品粉末棕色，淀粉粒众多，类圆形、类球形或不规则形，单粒或复粒，直径6-36μm，层纹明显，石细胞众多，类方形，黄色，单个散在，草酸钙簇晶常见，直径5-12μm，纤维多成束或单个散在，木栓细胞类方形，内含棕色物，直径8～15μm。

4.根据权利要求3所述用于止痛的大青木香药物，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别大青木香的方法为取本品粉末0.5-5g，加60-90℃的石油醚20-60ml，超声提取12-45min，滤过，残渣加甲醇20-40ml，再超声提取15-40min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.根据权利要求4所述用于止痛的大青木香药物，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别大青木香的方法为取本品粉末1g，加60-90℃石油醚50ml，超声提取30min，滤过，残渣加甲醇30ml，再超声提取30min，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大青木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马兜铃酸I对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照2015年版中国药典第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-乙酸为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.根据权利要求1所述用于止痛的大青木香药物，其特征在于：所述水分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则0832水分测定法第二法测定，不得过15.0％，所述总灰分检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2302测定不得过8.0％、酸不溶灰分不得过3.0％，所述浸出物检查方法为照2015年版中国药典第四部通则2201照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，不得少于6.0％。

7.一种用于止痛的大青木香药物，其特征在于：大青木香饮片炮制方法为：除去杂质，打碎成粗颗粒，用5-15倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡20-30小时，弃去浸泡液，用清水冲洗2-4次，再用清水浸泡2-5小时，弃去水液；再用5-15倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡15-30小时，同法反复5-12次，干燥，即可。

8.一种用于止痛的大青木香药物，其特征在于：大青木香饮片炮制方法为：除去杂质，打碎成粗颗粒，用10倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡24小时，弃去浸泡液，用清水冲洗三次，再用清水浸泡3小时，弃去水液；再用10倍量的0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡24小时，同法反复7-10次，干燥，即可。

9.一种用于止痛的大青木香药物，其特征在于：大青木香饮片中马兜铃酸I限量测定方法为：马兜铃酸I限量照高效液相色谱法(2015年版中国药典第四部通则0512)测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照时间为0-40分钟、流动相A为：30-100％、流动相B为0-70％条件进行梯度洗脱，检测波长为260nm，理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品粉末0.5-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80％甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-50分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。

10.根据权利要求9所述的一种用于止痛的大青木香药物，其特征在于：大青木香饮片中马兜铃酸I限量测定方法为：马兜铃酸I限量照2015年版中国药典第四部通则0512高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照时间为0-40分钟、流动相A为：30-100％、流动相B为0-70％条件进行梯度洗脱，检测波长为260nm，理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，含马兜铃酸I(C₁₇H₁₁NO₇)不得过0.001％。