CN110746421B - 吲哚单萜类化合物的提取方法及应用 - Google Patents

吲哚单萜类化合物的提取方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110746421B
CN110746421B CN201910961533.9A CN201910961533A CN110746421B CN 110746421 B CN110746421 B CN 110746421B CN 201910961533 A CN201910961533 A CN 201910961533A CN 110746421 B CN110746421 B CN 110746421B
Authority
CN
China
Prior art keywords
indole
compound
methanol
water
ethyl acetate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910961533.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110746421A (zh
Inventor
孙成鹏
马骁驰
王超
霍晓奎
田象阁
冯磊
宁静
于振龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Medical University
Original Assignee
Dalian Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Medical University filed Critical Dalian Medical University
Publication of CN110746421A publication Critical patent/CN110746421A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110746421B publication Critical patent/CN110746421B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants

Abstract

吲哚单萜类化合物的提取方法及应用，其属于中药提取技术领域。明确了钩藤中对5‑HT1A受体具有显著激动作用的药效物质，发现化合物1和2对5‑HT1A受体具有强效的激动作用。提取得到的吲哚单萜类化合物能有效地激动5‑HT1A受体，提示本发明化合物可作为5‑HT1A受体激动剂药物。

Description

吲哚单萜类化合物的提取方法及应用
技术领域
本发明涉及中药提取领域，涉及一种吲哚单萜类化合物、提取方法及用途。
背景技术
钩藤始载于《名医别录》，并将其列为下品，具有清热平肝，息风定惊等功效。2015年版《中国药典》规定，中药钩藤为茜草科植物钩藤Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. exHavil.、华钩藤Uncariasinens (Oliv.) Havil.、大叶钩藤Uncaria macrophylla Wall.、毛钩藤Uncaria hirsuteHavil.和无柄果钩藤UncariasessilifructusRoxb.的干燥带钩茎枝。通过体内、体外实验证实了钩藤的降压（Ndagijimana, A.;et al. A review onindole alkaloids isolated from Uncariarhynchophyllaand their pharmacologicalstudies.Fitoterapia, 2013, 86, 35-47.）、镇静（Sakakibara, I.; et al. Effect onlocomotion ofindole alkaloids from the hooks of Uncaria plant. Phytomedicine,1999, 6, 163-168.）、抗惊厥（Lin, Y. W.;et al. Oral Uncariarhynchophylla, (UR)reduces kainic acid-induced epileptic seizures and neuronal death accompaniedby attenuating glial cell proliferation and S100B proteins in rats. Journalof Ethnopharmacology, 2011, 135(2), 313-320.）和神经保护（Lee, J.; et al.Alkaloid fraction of Uncariarhynchophylla, protects against N-methyl-d-aspartate-induced apoptosis in rat hippocampal slices. Neuroscience Letters,2003, 348(1), 51-55.）等药理活性。
但从钩藤中提取吲哚单萜类化合物、提取方法及用途尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供吲哚单萜类化合物。
本发明的第二个目的是提供吲哚单萜类化合物的提取方法。
本发明的第三个目的是提供吲哚单萜类化合物的用途。
本发明的第四个目的是提供包含吲哚单萜类化合物的钩藤提取物。
本发明的第五个目的是提供钩藤提取物的用途。
本发明的第六个目的是提供含吲哚单萜类化合物的药物组合物。
本发明的第七个目的是提供上述药物组合物的用途。
本发明的技术方案概述如下：
吲哚单萜类化合物，具有式（I）的结构：
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE001
其中：
R为CH2CH3或CH=CH2。
上述化合物，优选的结构式为：
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE002
。
上述化合物的提取方法，包括如下步骤：
（1）以钩藤的带钩茎枝为原料，加入原料5-10质量倍的体积分数为75%-95%乙醇水溶液，回流提取2-3次，每次提取2-3小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；
（2）将总浸膏分散到4-3质量倍的水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏；
（3）乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，以体积比分别为100:1、50:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷－甲醇为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 1、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4、Fr. 5、Fr. 6和Fr. 7；
（4）馏分Fr. 4经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、7:3和9:1的甲醇−水为洗脱剂等度洗脱，得到馏分Fr. 6-1、Fr. 6-2、Fr. 6-3、Fr. 6-4和Fr.6-5；
（5）馏分Fr. 6-1经制备HPLC色谱，以体积比为7:3的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
（6）馏分Fr. 7经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、8:2和9:1的甲醇−水为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-1、Fr. 7-2、和Fr. 7-3；
（7）馏分Fr. 7-3经硅胶柱色谱，以体积比分别为4:1、3:1、2:1和1:1的二氯甲烷－丙酮为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-3-1、Fr. 7-3-2、Fr. 7-3-3、Fr. 7-3-4、Fr. 7-3-5和Fr. 7-3-6；
（8）馏分Fr. 7-3-6经制备HPLC色谱，以体积比为6:4的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物1；
吲哚单萜类化合物在制备5-HT1A受体激动剂药物中的用途。
包含吲哚单萜类化合物的钩藤提取物。
钩藤提取物在制备5-HT1A受体激动剂药物中的用途。
一种药物组合物，是包含吲哚单萜类化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
上述药物组合物在制备5-HT1A受体激动剂药物中的用途。
本发明的优点：明确了钩藤中对5-HT1A受体具有显著激动作用的药效物质， 5-羟色胺的半数有效浓度为1.84μM，化合物1的半数有效浓度为2.18μM，化合物2的半数有效浓度为0.12μM；发现化合物1和2对5-HT1A受体具有强效的激动作用。本发明的吲哚单萜类化合物能有效地激动5-HT1A受体，提示本发明化合物可作为抗抑郁的药物。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
吲哚单萜类化合物的提取方法，包括如下步骤：
（1）以钩藤（Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.）（18kg）为原料，加入原料6质量倍的体积分数为95%乙醇水溶液，回流提取2次，每次提取2小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏（1360g）；
（2）将总浸膏分散到5质量倍的水中，依次用等体积石油醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏300 g；
（3）乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，以体积比分别为100:1、50:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷－甲醇为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 1、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4、Fr. 5、Fr. 6（27g）和Fr. 7（35g）；
（4）馏分Fr. 6经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、7:3和9:1的甲醇−水为洗脱剂等度洗脱，得到馏分Fr. 6-1（6g）、Fr. 6-2、Fr. 6-3、Fr. 6-4和Fr.6-5；
（5）馏分Fr. 6-1经制备HPLC色谱，以体积比为7:3的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物2（2.7mg）；
（6）馏分Fr. 7经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、8:2和9:1的甲醇−水为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-1、Fr. 7-2、和Fr. 7-3（10g）；
（7）馏分Fr. 7-3经硅胶柱色谱，以体积比分别为4:1、3:1、2:1和1:1的二氯甲烷－丙酮为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-3-1、Fr. 7-3-2、Fr. 7-3-3、Fr. 7-3-4、Fr. 7-3-5和Fr. 7-3-6（2g）；
（8）馏分Fr. 7-3-6经制备HPLC色谱，以体积比为6:4的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物1（11.4mg）。
各化合物的物理化学和常数如下：
化合物1：无定型粉末；[α]
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE003
-92.0 (c 0.1, MeOH)；UV (MeOH) λ max (log ε) 227(3.9)，282 (3.5) nm；ECD (MeOH) nm (Δε) 212 (+4.85)，233 (-3.97)，271 (-2.20)；HRESIMS m/z357.2171 [M + H]+ (calcd for C21H29N2O3, 357.2178)；1H (600 MHz, MeOH-d 4)和13C NMR (150 MHz, MeOH-d 4)数据见表1。
化合物2：无定型粉末；[α]
Figure RE-82363DEST_PATH_IMAGE003
-42.0 (c 0.1, MeOH)；UV (MeOH) λ max (log ε) 225(3.9) nm；ECD (MeOH) nm (Δε) 212 (+3.73)，232 (-2.01)，269 (-1.24)；HRESIMS m/ z355.2010 [M + H]+ (calcd for C21H27N2O3, 355.2022)；1H (600 MHz, MeOH-d 4)和13CNMR (150 MHz, MeOH-d 4)数据见表1。
表1化合物1和2的氢谱（600 MHz, MeOH-d 4）和碳谱（150 MHz, MeOH-d 4）数据
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE004
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE005
各化合物的结构为：
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE006
。
实施例2
吲哚单萜类化合物的提取方法，包括如下步骤：
（1）以钩藤的带钩茎枝为原料，加入原料7质量倍的体积分数为85%乙醇水溶液，回流提取3次，每次提取2小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；
（2）将总浸膏分散到5质量倍的水中，依次用等体积石油醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏；
（3）-（8）同实施例1（3）-（8）。
实施例3
吲哚单萜类化合物的提取方法，包括如下步骤：
（1）以钩藤的带钩茎枝为原料，加入原料10质量倍的体积分数为75%乙醇水溶液，回流提取3次，每次提取2小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；
（2）将总浸膏分散到10质量倍的水中，依次用等体积石油醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏；
（3）-（8）同实施例1（3）-（8）。
实施例4
吲哚单萜类化合物对5-HT1A受体的激动活性测试
仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1培养于10%灭活（56 ℃，30 min）胎牛血清（Gibco，USA）、100 U/mL青霉素钠（Gibco，USA）、100 μg/mL链霉素（Gibco，USA）的DMEM-F12（Gibco，USA）培养液中，37 ℃，5% CO2的恒温培养箱中孵育生长。用完全培养液将细胞稀释至5×105cells/mL浓度，接种于96孔细胞培养板中，每孔加入100 μL培养液。细胞生长至汇合度大于80%时，更换无血清无双抗培养基，并使用lipofactamin3000 （Thermofisher，China）共转染5-HT1A受体表达质粒、CRE-luc荧光素酶报告基因载体和内参pGL4.74海肾荧光素酶报告基因载体进入细胞。转染6小时后，更换完全培养基，并使用不同浓度化合物1和2处理细胞16小时，每个浓度设4个平行副孔。随后使用5 μM福斯科林（Forskolin）活化细胞2小时。收集和裂解细胞，并使用双荧光素报告系统试剂盒（Promega, China）检测荧光素酶活性。活性检测具体操作为：96孔板中每孔加入30 μL裂解液（Passive Lysis Buffer），细胞摇床上裂解30分钟；加入萤火虫荧光素酶检测缓冲液100 μL，混合均匀后，酶标仪检测560 nm处自发荧光值；加入海肾荧光素酶检测缓冲液100 μL，混合均匀后，酶标仪检测465 nm处自发荧光值。对照组为无药物处理但使用福斯科林（Forskolin）活化后的细胞。萤火虫荧光素酶活性经海肾荧光素酶活性校准后，计算不同浓度下的荧光素酶活性。
表2 化合物对5-HT1A受体的激动实验结果
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE007
。
含有本发明所述化合物的组合物的5-HT1A受体激动剂药物可以为适用于口服或注射等应用形式，例如，按常规技术，加入药物可接受的载体和/或赋形剂制成片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂、针剂等。
化合物具有药理活性，因此，含有该化合物的组合物也具有药理活性。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。
本发明的吲哚单萜类化合物、含吲哚单萜类化合物的提取物、含吲哚单萜类化合物的组合物能制备治疗与5-HT1A相关联疾病的药物。

Claims (1)

1.吲哚单萜类化合物的提取方法，其特征在于，所述吲哚单萜类化合物的结构如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
提取方法包括如下步骤：
（1）以钩藤的带钩茎枝为原料，加入原料5-10质量倍的体积分数为75%-95%乙醇水溶液，回流提取2-3次，每次提取2-3小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；
（2）将总浸膏分散到3-4质量倍的水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏；
（3）乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，以体积比分别为100:1、50:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷－甲醇为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 1、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4、Fr. 5、Fr. 6和Fr. 7；
（4）馏分Fr. 4经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、7:3和9:1的甲醇−水为洗脱剂等度洗脱，得到馏分Fr. 6-1、Fr. 6-2、Fr. 6-3、Fr. 6-4和Fr.6-5；
（5）馏分Fr. 6-1经制备HPLC色谱，以体积比为7:3的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
（6）馏分Fr. 7经ODS柱色谱分离，以体积比分别为1:9、3:7、5:5、8:2和9:1的甲醇−水为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-1、Fr. 7-2、和Fr. 7-3；
（7）馏分Fr. 7-3经硅胶柱色谱，以体积比分别为4:1、3:1、2:1和1:1的二氯甲烷－丙酮为洗脱剂梯度洗脱，得到馏分Fr. 7-3-1、Fr. 7-3-2、Fr. 7-3-3、Fr. 7-3-4、Fr. 7-3-5和Fr. 7-3-6；
（8）馏分Fr. 7-3-6经制备HPLC色谱，以体积比为6:4的甲醇−水为流动相，进行纯化，得到化合物1。
CN201910961533.9A 2019-06-27 2019-10-11 吲哚单萜类化合物的提取方法及应用 Active CN110746421B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019105661713 2019-06-27
CN201910566171 2019-06-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110746421A CN110746421A (zh) 2020-02-04
CN110746421B true CN110746421B (zh) 2022-02-08

Family

ID=69277946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910961533.9A Active CN110746421B (zh) 2019-06-27 2019-10-11 吲哚单萜类化合物的提取方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110746421B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113105388B (zh) * 2021-04-07 2023-02-28 沈阳药科大学 一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用
CN116854690A (zh) * 2023-06-28 2023-10-10 河南中医药大学 吲哚类钩藤生物碱物质提取方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101491562A (zh) * 2007-04-18 2009-07-29 北京和润创新医药科技发展有限公司 一种从中药长春花提取液中分离长春花总生物碱的方法
CN103446140A (zh) * 2013-09-16 2013-12-18 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 钩藤碱在制备具有抗焦虑、抗抑郁作用药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101491562A (zh) * 2007-04-18 2009-07-29 北京和润创新医药科技发展有限公司 一种从中药长春花提取液中分离长春花总生物碱的方法
CN103446140A (zh) * 2013-09-16 2013-12-18 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 钩藤碱在制备具有抗焦虑、抗抑郁作用药物中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《中国药典》收载的钩藤基原植物吲哚生物碱研究进展;张建钢等;《中国中药杂志》;20190228;第44卷(第4期);685-695 *
SYNTHESIS OF CORYNANTHE ALKALOIDS CORYNANTHEINE, HTRSUTEINE, AND THE ISOSITSIRIKlNES;Ichiya Ninomiya等;《HETEROCYCLES》;19901231;第30卷(第2期);1031-1077 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110746421A (zh) 2020-02-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105362315B (zh) 一种东革阿里提取物及其制备方法
CN109912680B (zh) 一种齐墩果烷型三萜皂苷及其提取分离方法和应用
CN110746421B (zh) 吲哚单萜类化合物的提取方法及应用
CN109912604B (zh) 喹唑啉酮生物碱类化合物及其制备方法和在制备肝x受体激动剂中的应用
WO2015035778A1 (zh) 苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤维化的用途
CN107698510B (zh) 从青竹标中提取的生物碱类化合物及提取方法
CN112915096B (zh) 刺囊酸-28-O-β-D-葡萄糖苷的制药用途
CN114874098B (zh) 一种从宿萼木中提取分离的化合物及其制备方法和应用
CN113861114A (zh) 吗啡烷类和双苄基异喹啉类生物碱化合物及其制备方法和用途
CN111377933B (zh) 诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用
CN103183597A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的二芳基庚酮类化合物的制备和用途
CN116003371B (zh) 一种萜类化合物及其提取方法和用途
CN110698443A (zh) 一种shp2小分子选择性抑制剂及其在制备抗肺癌药物中的应用
CN116003238B (zh) 茉莉根中倍半萜类化合物及其提取方法和用途
CN114956967B (zh) 一种从山橿中提取的化合物Reflexanbene E和F及其制备方法与应用
CN111303185B (zh) 一种具有抑制肿瘤活性的化合物及其提取方法
WO2023240679A1 (zh) 一对具有抗炎活性的聚酮类化合物及其制备方法和应用
CN112300185B (zh) 肝毒性降低的生物碱类化合物及其制备方法和用途
CN114853712B (zh) 一种色烷型或色烯型杂萜类化合物及其提取方法和应用
CN115710172B (zh) 大果大戟中二萜类化合物及其提取方法和应用
CN114702388B (zh) 一种淡黄香茶菜中的化合物及其提取分离方法和应用
CN115772076B (zh) 大果大戟中具有抗炎活性的二萜化合物及其提取方法和应用
CN114315928B (zh) 裂环环烯醚萜苷类化合物
CN113004365B (zh) 一种睡茄交酯iii类化合物及其提取方法和应用
CN111410645B (zh) 一种木脂素类化合物及其制备与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant