WO2015035778A1 - 苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤维化的用途 - Google Patents

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benzopyran
benzopyran compound
hydrogen
methanol
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徐岷涓
徐俊
张志刚
王亚辉
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上海交通大学
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    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Definitions

  • the invention belongs to the field of natural medicinal chemistry, and particularly relates to a preparation method of a benzopyran compound and a use for anti-pulmonary fibrosis.
  • benzopyran benzopyran compound namely, Xiamenmycin, such as Japanese special U [Kawamura, N.; Tsuj i, E.; Watanabe, Y.; Tsuchihashi, K.; Takako , T. Benzopyran derivatives, their manufacture with Streptomyces species, and their use for treatment of asthma and rheumatoid arthritis. Dai ichi Seiyaku Co. , Ltd.; Mercian Corp.: Kyoto, Japan, 7 March 2000.
  • the genetically engineered strain CGMCC No. 5675 is Streptomyces xiamenensis carrying rifamycin and streptomycin resistance, and no literature reports on the isolation of benzopyrans from this strain have been reported. Since Xiamenmycin C (common name of the benzopyran compound of the present invention) loses the amino acid side chain compared to the Xiamenmycin itself, it is a novel structural compound. For the first time, the anti-pulmonary fibrosis activity of the compound was measured and found to be superior to the known compound Xiamenmycin. Summary of the invention
  • the invention first discovered genetic engineering
  • the benzopyran compound can be produced in the extract of the strain - Streptomyces xiamenensis) CGMCC No. 5675.
  • the Streptomyces sinensis iStreptomyces xiamenensis was deposited on December 29, 2011 with the CGMCC China Microbial Culture Collection Management Committee General Microbiology Center. The deposit address is No. 3, No. 1 Beichen West Road, Chaoyang District, Beijing, China. Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences , The strain collection number is CGMCC No. 5675.
  • the present invention relates to a benzopyran compound having the formula: (I):
  • R1 is selected from the group consisting of hydrogen, C1 ⁇ C4 fluorenyl, one of the remaining groups after removal of the amino moiety from various amino acids
  • R2 is selected from hydrogen, C1 ⁇ C4 thiol, and various amino acids are removed from the amino moiety.
  • One of the remaining groups, R3 is selected from hydrogen, one of C1 to C4 fluorenyl groups, and n is any integer from 1 to 4.
  • R1 is selected from hydrogen or methyl
  • R2 is selected from hydrogen or methyl
  • R3 is selected from hydrogen or methyl
  • n 1 or 2.
  • the structural formula of the benzopyran compound is as shown in the following formula ( ⁇ ):
  • the present invention relates to a method for preparing the above benzopyran compound, which is obtained by extracting, separating and purifying a fermentation broth of Strep tomyces xiamenensis CGMCC No. 5675 to obtain the benzopyran. Compound.
  • the method specifically includes the following steps:
  • the Streptomyces xiamenensis CGMCC No. 5675 is subjected to liquid fermentation culture, and the fermentation broth is extracted and concentrated to obtain a total extract;
  • the total extract is eluted by a silica gel column chromatography gradient; the volume ratio of the chloroform to methanol used in the gradient elution is 100:1, 70:1, 60: 1, 50:1, 30:1, 15:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1; the flow rate is 15 seconds/drop, and each elution fraction receives 200 ml;
  • the fraction of the eluted chloroform to methanol in the step B is 15:1, and the gel fraction is eluted by a gel column, and the flow rate is 70 ⁇ 90 sec/drop, and purified. That is, the benzopyran compound is obtained.
  • step C further comprises: arranging adjacent groups of the eluted components having a volume ratio of chloroform to methanol of 15:1 Performing high performance liquid chromatography analysis, combining the ultraviolet absorption at 206 nm and 260 nm of the benzopyran compound, and combining the components having the same absorption; the combined components are further purified to obtain the benzopyran Compound.
  • the extraction is specifically: after the fermentation liquid is centrifuged, the supernatant is extracted with ethyl acetate, and the residue is extracted with an equal volume of the mixed solvent, and the extract of the supernatant and the extract of the residue are combined.
  • the mixed solvent is a mixture of ethyl acetate, methanol, and formic acid in a volume ratio of 80:15:5.
  • the purification is specifically: collecting the eluted components, purifying with a high-performance liquid phase, using an acetonitrile/water solution as a mobile phase, and eluting a gradient of acetonitrile to water in a volume ratio of 35 minutes. Within 45: 55 becomes 55: 45.
  • the present invention also relates to the use of the aforementioned benzopyran compound for the preparation of an anti-pulmonary fibrosis drug.
  • the anti-pulmonary fibrosis drug is for the treatment of acute respiratory distress syndrome, acute interstitial pneumonia or acute exacerbation of chronic idiopathic pulmonary fibrosis.
  • the present invention relates to an anti-pulmonary fibrosis pharmaceutical composition
  • an anti-pulmonary fibrosis pharmaceutical composition comprising the aforementioned benzopyran compound, or a pharmaceutically acceptable acid or base salt thereof, or a solvent compound as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition is an oral preparation or an injection preparation.
  • the present invention is a benzopyran compound obtained from an extract of a genetically engineered strain, Streptomyces xiaensis genus CGMCC No. 5675, and the pharmaceutical composition is natural;
  • the benzopyran compound of the present invention has the function of inhibiting proliferation and viability of normal human lung fibroblasts, and the effective concentration of anti-fibrotic activity is as high as 15 g/ml, and the toxicity is low;
  • Figure 1 is a structural diagram of the benzopyran compound - Xiamenmycin C of the present invention
  • Fig. 2 is a quantitative diagram showing the staining of CCK-8 reagent in the proliferation test of benzopyran compound-Xiamycinmycin C in human lung fibroblasts.
  • Figure 3 is a quantitative diagram showing the staining of CCK-8 reagent in the inhibition of human lung fibroblast proliferation by Xiamenmycin. detailed description
  • the total extract was dissolved in an appropriate amount of chloroform-methanol mixed solvent, and then 10 g of 200-300 mesh silica gel G (Qingdao Ocean Chemical Group Co., Ltd.) was added and mixed, and loaded onto a 50 g normal phase silica gel glass column, with chloroform.
  • the fractions with a chloroform-methanol volume ratio of 15:1 were separated by gel column chromatography using S-printed hadex LH-20 as a filler and methanol as an eluent at a flow rate of 70-90 sec/drop, 5 ⁇ 6 ml/tube receiving, combining the obtained components, using high-performance liquid phase separation, using acetonitrile/water solution as mobile phase, eluting gradient of 45% acetonitrile-water solution into 55% acetonitrile-water solution in 35 minutes (volume ratio), using a semi-prepared C18 column to give compound 1.
  • the remaining components except the chloroform-methanol volume ratio of 15:1 were analyzed by high performance liquid chromatography.
  • the components having the same absorption were combined with the ultraviolet absorption of the compound at 206 nm and 260 nm.
  • the combined components were also purified by high-performance liquid phase using an acetonitrile/water solution as an eluent, and the elution gradient of 45% acetonitrile-water solution became 55% acetonitrile-water solution (volume ratio) in 35 minutes.
  • this step is a key step.
  • the signal of Table 1 is based on the DEPT, 3 ⁇ 4-3 ⁇ 4 COSY, HMQC and HMBC map analysis results. More carbon signals The DEPT method was used to determine and use C (single peak), CH (doublet), CH 2 (triplet) and CH 3 (quadruple).
  • Example 2 Inhibition of proliferation and viability of human lung fibroblasts by benzopyran compounds
  • Compound 1 (Xiamenmycin C), Compound 2 (Xiamenmycin) Among them, Compound 1 was used as the drug treatment experimental group, and Compound 2 was used as the drug treatment comparison group.
  • the final concentration of the compound 1 in the drug treatment experimental group was 15 g/ml, the concentration of the solvent DMS0 was 1/1000, and the control group was DMS0, and the final concentration was 1/1000.
  • the drug treatment comparison group compound 2 had a final concentration of 30 ⁇ ⁇ / ⁇ 1 , the solvent DMS0 concentration was 1/1000, and the control group was DMS0, and the final concentration was 1/1000.
  • Cell viability was measured after dosing for 0, 1, 2, 3, 4, 5, and 6 days.
  • the method is as follows: aspirate the medium, add 100 ⁇ of complete medium and 10 ⁇ l of CCK-8 reagent per well, and incubate for 60 minutes in the incubator to measure the light absorption value at a wavelength of 450 nm. The experiment was repeated three times.
  • Fig. 2 The experimental results are shown in Fig. 2. It can be seen from the drawings that Compound 1 can inhibit the proliferation of human lung fibroblasts.
  • the administration group showed a significant difference compared with the control group after one day of administration, and the inhibition rate reached 13.8%. After six days of administration, the inhibition rate was 38%. Therefore, the benzopyran compound of the present invention can be used for the preparation of an anti-pulmonary fibrosis drug.
  • the effective concentration of Compound 1 was doubled, and the inhibition rate was increased by nearly 10% compared with Compound 2, so the activity was much better than that of the known compound.
  • both Compound 1 and Xiamenmycin were characterized by low toxicity. It is a difficult problem in the art to change the structure of the side chain to increase the activity of the compound 1 and the toxicity is relatively low. According to the results of the activity test of the compound 1, it is known to those skilled in the art that the compound produced by modifying the amino group of the compound 1 and the compound formed by the extension of the carbon chain represented by n (SP: the compound defined by the weight 1) are also inevitably quite active. .
  • Fig. 3 The experimental results of the comparative group are shown in Fig. 3. It can be seen from the drawings that the compound 2 can inhibit the proliferation of human lung fibroblasts. However, the dose was 30 g/ml, and after one day of administration, the administration group had a significant difference in inhibition rate of 10% compared with the control group. After six days of administration, the inhibition rate was 28.5%.

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Abstract

本发明公开了一种苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤维化的用途。苯并吡喃化合物结构式如式（I）所示。其中，R1选自氢、C1～C4烷基、各种氨基酸去掉氨基部分后余下的基团中的一种，R2选自氢、C1～C4烷基、各种氨基酸去掉氨基部分后余下的基团中的一种，R3选自氢、C1～C4烷基中的一种，n为1～4中任一整数。该苯并吡喃化合物是由厦门链霉菌（Streptomyces xiamenensis）CGMCC No.5675的发酵液经提取，分离，纯化而得。本发明制得的厦门霉素衍生物具有更高的抑制正常人肺成纤维细胞的增殖和活力的性能，可用于制备抗肺纤维化药物。

Description

说 明 书 苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤维化的用途 技术领域
本发明属于天然药物化学领域， 具体涉及一种苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤 维化的用途。
背景技术
目前， 关于苯并吡喃 benzopyran类化合物， 即厦门霉素， 已有一些文献报道， 如 日文专禾 U [Kawamura, N.； Tsuj i, E.； Watanabe, Y.； Tsuchihashi, K.； Takako, T. Benzopyran derivatives, their manufacture with Streptomyces species, and their use for treatment of asthma and rheumatoid arthritis. Dai ichi Seiyaku Co. , Ltd.； Mercian Corp.： Kyoto, Japan, 7 March 2000. ] 禾口文献 [Xu, M. J.； Liu, X. J.； Zhao, Y. L.； Liu, D.； Xu, Z. H.； Lang, X. M.； Ao， P.； Lin, W. H.； Yang, S. L.； Zhang, Z. G.； Xu, J. , Identification and characterization of an anti-f ibrotic benzopyran compound isolated from mangrove-derived Streptomyces xiamenensis. Mar Drugs 2012, 10， （3)， 639—54; Liu, X. J.； Xu, M. J.； Fan, S. T.； Wu, Z.； Li, J.； Yang, X. M.； Wang, Y. H.； Xu, J.； Zhang, Z. G.， Xiamenmycin attenuates hypertrophic scars by suppressing local inflammation and the effects of mechanical stress. Invest Derma tol 2013, 133， （5)， 1351—60· ] 中， 曾报道了 厦门霉素的提取分离和结构鉴定， 并报道了其具有抗炎、 抗纤维化活性和抗增生性瘢痕 活性的报道。
基因工程菌株 CGMCC No. 5675 为携带利福霉素和链霉素抗性的 Streptomyces xiamenensis,未见从该菌株中分离得到苯并吡喃类化合物的文献报道。由于厦门霉素 C (本发明的苯并吡喃化合物的俗称）相比厦门霉素本身， 失去了氨基酸侧链， 为新颖结 构化合物。首次对该化合物的抗肺纤维化活性进行测定，发现优于已知化合物厦门霉素。 发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制正常人肺成纤维细胞的增殖能力更强、抗肺纤维化 活性更高的苯并吡喃化合物的制备方法和抗肺纤维化的用途。本发明首次发现基因工程 菌株 -厦门链霉菌 Streptomyces xiamenensis) CGMCC No. 5675的提取物中能够产生 该苯并吡喃化合物。
所述厦门链霉菌 iStreptomyces xiamenensis 已于 2011年 12月 29日递交 CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西 路 1号院 3号， 中国科学院微生物研究所， 菌种保藏编号为 CGMCC No. 5675。
本发明目的是通过以下技术方案来实现的：
第一方面， 本发明涉及一种苯并吡喃化合物， 其结构式如下式 （ I ) 所示：
Figure imgf000004_0001
( I )； 其中， Rl选自氢、 C1〜C4垸基、 各种氨基酸 去掉氨基部分后余下的基团中的一种， R2选自氢、 C1〜C4垸基、 各种氨基酸去掉氨基 部分后余下的基团中的一种， R3选自氢、 C1〜C4垸基中的一种， n为 1〜4中任一整数。
优选地， R1选自氢或者甲基， R2选自氢或者甲基， R3选自氢或者甲基， n=l或 2。 优选地， 所述苯并吡喃化合物的结构式如下式 （Π)所示：
Figure imgf000004_0002
(Π)。
第二方面， 本发明涉及一种上述的苯并吡喃化合物的制备方法， 厦门链霉菌 ( Strep tomyces xiamenensis) CGMCC No. 5675的发酵液经提取， 分离， 纯化， 制得所 述苯并吡喃化合物。
优选地， 所述方法具体包括如下步骤：
A、 所述厦门链霉菌 (.Streptomyces xiamenensis) CGMCC No. 5675进行液体发酵 培养， 发酵液经提取， 浓缩， 得总提物；
B、 以氯仿-甲醇为洗脱剂， 所述总提物经硅胶柱层析梯度洗脱； 所述梯度洗脱采用 的氯仿与甲醇的体积比依次为 100:1、 70:1、 60:1、 50:1、 30:1、 15:1、 10:1、 5:1、 2:1、 1:1; 流速为 15 秒 /滴， 每个洗脱流份分别接收 200毫升；
C、 以甲醇为洗脱剂， 将所述步骤 B中氯仿与甲醇的体积比为 15:1时洗脱得到的组 分凝胶柱层析分离， 流速为 70〜90 秒 /滴， 纯化， 即得所述苯并吡喃化合物。
优选地， 步骤 C还包括： 将所述氯仿与甲醇的体积比为 15:1的洗脱组分的相邻组 分进行高效液相色谱分析， 以所述苯并吡喃化合物在 206nm， 260nm的紫外吸收为准， 合并具有相同吸收的组分； 合并后的组分继续纯化， 即得所述苯并吡喃化合物。
优选地， 步骤 A中， 所述提取具体为： 发酵液离心后上清液用乙酸乙酯萃取， 残渣 用等体积的混合溶剂提取， 合并所述上清液的萃取液和残渣的提取液， 即可； 所述混合 溶剂是体积比为 80 : 15 : 5的乙酸乙酯、 甲醇、 甲酸的混合物。
优选地， 步骤 C中， 所述纯化具体为： 将洗脱下来的组分收集， 用高效液相进行纯 化， 以乙腈 /水溶液为流动相， 洗脱梯度为乙腈与水的体积比在 35分钟内由 45 : 55变成 55 : 45。
第三方面，本发明还涉及一种前述的苯并吡喃化合物在制备抗肺纤维化药物中的用 途。
优选地， 所述抗肺纤维化药物用于治疗急性呼吸窘迫综合征、 急性间质性肺炎或特 发性肺纤维化慢性型的急性恶化症。
第四方面， 本发明还涉及一种抗肺纤维化药物组合物， 其中含有前述的苯并吡喃化 合物， 或者其药学上可接受的酸或碱的盐， 或者溶剂化合物作为有效成分。
优选地， 所述药物组合物为口服制剂或注射制剂。
本发明具有如下的有益效果：
1、 本发明是从基因工程菌株 -厦门链霉菌 Streptomyces xia垂 ensis CGMCC No. 5675的提取物制得苯并吡喃化合物， 且药物成分天然；
2、 本发明的苯并吡喃化合物具有可抑制正常人肺成纤维细胞的增殖和活力， 其抗 纤维化活性的有效浓度高达 15 g/ml， 且毒性较低；
3、 现有抗纤维化药物多为激素类， 长期使用具有很大的副作用， 而本发明的苯并 吡喃化合物是区别于激素类药物的活性小分子， 具有良好的市场应用和推广前景。 附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述， 本发明的其它特 征、 目的和优点将会变得更明显：
图 1为本发明的苯并吡喃化合物-厦门霉素 C的结构图；
图 2为在苯并吡喃化合物-厦门霉素 C抑制人肺成纤维细胞增殖实验中的 CCK-8试 剂染色后的定量示意图。
图 3为在厦门霉素抑制人肺成纤维细胞增殖实验中的 CCK-8试剂染色后的定量示意 图。 具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。 以下实施例将有助于本领域的 技术人员进一步理解本发明， 但不以任何形式限制本发明。 应当指出的是， 对本领域的 普通技术人员来说， 在不脱离本发明构思的前提下， 还可以做出若干变形和改进。 这些 都属于本发明的保护范围。
实施例 1、 苯并吡喃化合物的分离精制
耳又 S. xiamenensis M6菌株 (即厦门链霉菌 ( Streptomyces xiamenensis) CGMCC No. 5675) 进行液体发酵培养 （30升）， 7天， 离心后上清液用乙酸乙酯萃取 3次， 残渣用 等体积的乙酸乙酯： 甲醇： 甲酸 =80: 15： 5 (体积比） 的混合溶剂提取 3次， 每次 12 小时。 将提取液合并， 浓缩， 得总提物 13.4克。 取总提取物用适量氯仿-甲醇混合溶剂 溶解后加 10克 200-300 目硅胶 G (青岛海洋化工集团公司产品） 拌样， 上到装填有 50 克正相硅胶玻璃减压柱上， 以氯仿 -甲醇 〔100:1， 70:1， 60:1， 50:1， 30:1， 15:1， 10:1， 5:1， 2:1， 1:1， （体积比） 至甲醇〕 梯度洗脱， 流速为 15 秒 /滴， 150〜100 毫升 /瓶接 收，洗脱溶剂的极性通过提高氯仿中甲醇的用量来梯度递增，每个洗脱流份分别接收 200 毫升， 根据薄层层析检测合并流份。 取氯仿-甲醇体积比为 15:1的组分继续用凝胶柱层 析进行分离， 采用 S印 hadex LH-20为填料， 甲醇为洗脱剂， 流速为 70〜90 秒 /滴， 5〜 6 毫升 /管 接收， 将得到的组分进行合并后， 采用高效液相进行分离， 采用乙腈 /水溶 液为流动相， 洗脱梯度为 45%乙腈-水溶液在 35分钟内变成 55%乙腈-水溶液（体积比）， 采用半制备 C18色谱柱， 得化合物 1。 然后将除氯仿-甲醇体积比为 15:1的组分外的其 余组分（尤其是氯仿-甲醇体积比为 15:1对应的洗脱组分的相邻组分）进行高效液相色 谱分析， 以该化合物在 206nm， 260 nm的紫外吸收为准， 合并具有相同吸收的组分。 最 后， 将合并后的组分同样采用高效液相进行纯化， 采用乙腈 /水溶液为洗脱剂， 洗脱梯 度为 45%乙腈-水溶液在 35分钟内变成 55%乙腈-水溶液 （体积比）， 采用半制备 C18色 谱柱， 该步骤为关键步骤， 由于厦门霉素 C与其类似物厦门霉素的色谱特点非常相似， 因此分离具有难度， 须采用如上半制备高效液相的方法才能得到纯品。 得到如图 1所示 的苯并吡喃化合物 （化合物 1， 厦门霉素 C) 1.5毫克。
化合物 1 的理化性质： 黄色无定型粉末； [ct ]26 D+28.45° (c 0.0034， MeOH)； UV (MeOH) λΜΧ = 206, 260 nm; CD (c 0.0024, MeOH) Δ ε 201 +12.3, Δ ε 202 +9.6, Δ ε +8.0， Δ ε 4 +7.1， Δ ε 213·6 +0.14， Δ ε 217—1· 2， Δ ε 245·2 +2.0， Δ ε 259.8 + 3.14， Δ ε 283 +0.03; ¾ and 13C匪 R data, see Table 2; HRESIMS m/z 290.1768 [M + H]+， (calcd C17H24N03， m/z 290. 1756 )， 288. 1610 [M (calcd for C17H22N03 2073 ).
表 1
化合物 1
δ„ (/ in Hz) δ c, type HMBC相关
1
2 79.7 C
3 3.74， dd (7.4， 5.2) 66.3， CH 4a, 2, 9， 15
2.66， dd (17.3， 7.4) 8a, 5， 4a, 2, 3， 6
4 31.3， CH2
2.93， dd (17.3， 5.2)
4a 120.4， C
5 7.63, d (1.8) 130.2, CH 7， 8a, 4， 1' 6 126.3， C
7 7.60, dd (8.4, 1.8) 127.4， CH 5， 8a, 1' 8 74, d (8. 116.5， CH 4a, 8a, 6
8a 156.0, C
9 1. 59， m 38.0， CH2 11， 12, 2, 3， 10 2. 10, m 21.6， CH2 11， 12, 2, 9 11 10, t (7. 124.8， CH 13， 10， 14， 12 131.3, C
13 1. 56， s 18.0， CH3 11， 12, 14 14 1. 63， s 25.9， CH3 11， 12, 13 15 1. 16， s 18.8， CH3
1' 168.0, C
2'
3'
4'
5'
6'
本表 1信号归属基于 DEPT、 ¾-¾ COSY, HMQC及 HMBC图谱解析结果。 碳信号的多 重度利用 DEPT方法确定并分别用 C (单重峰）、 CH (二重峰）、 CH2 (三重峰)和 CH3 (四 重峰)表示。
实施例 2、 苯并吡喃化合物抑制人肺成纤维细胞的增殖和活力实验
材料如下：
细胞： 人肺成纤维细胞 （human lung fibroblasts, WI26 药物： 由上述实
施例得到的化合物 1 (厦门霉素 C)， 化合物 2 (厦门霉素）
Figure imgf000008_0001
其 中， 采用化合物 1的为药物处理实验组， 采用化合物 2为药物处理对比组。
方法： 将生长至 70-80%融合之 WI26细胞 0. 25%胰酶消化后接种于 96孔板， 每孔 1 X 103个细胞。 24小时后换液并加药， 药物处理实验组化合物 1终浓度为 15 g/ml， 溶 剂 DMS0浓度为 1/1000， 对照组为 DMS0, 终浓度为 1/1000。 药物处理对比组化合物 2 终浓度为 30 μδ/πι1 , 溶剂 DMS0浓度为 1/1000， 对照组为 DMS0, 终浓度为 1/1000。 加 药 0， 1， 2 , 3， 4， 5， 6天后分别测量细胞活力。 测量方法为， 吸出培养基， 每孔加入 完全培养基 100 μΐ及 CCK-8试剂 10 μ1， 培养箱孵育 60分钟后酶标仪测量光吸收值， 波长为 450nm。 实验重复 3次。
实验结果如图 2所示， 由附图可得知： 化合物 1能够抑制人肺成纤维细胞的增殖。 当给药量为 15 g/ml , 给药一天后， 给药组与对照组相比具有显著性的差异， 抑制率 达到 13. 8%。 给药六天后， 抑制率为 38%。 因此， 本发明的苯并吡喃化合物可用于制备 抗肺纤维化药物。 实验组与对比组相比， 化合物 1的有效浓度降低一倍， 同时抑制率比 化合物 2提高近 10%， 因此活性大大优于已知化合物。 此外， 从化合物 1对于人肺成纤 维细胞的增殖抑制效果的时间曲线上判断， 化合物 1与厦门霉素均具有低毒性的特点。 通过改变侧链的结构， 使得化合物 1的活性提升而毒性相对较低， 属于本领域的难点。 根据化合物 1的活性实验结果， 本领域技术人员可知， 对该化合物 1氨基进行修饰产生 的化合物以及 n指代的碳链加长形成的化合物（SP : 权 1限定的化合物）也必然具有相 当的活性。
对比组实验结果如图 3所示， 由附图可得知： 化合物 2虽然能够抑制人肺成纤维细 胞的增殖。 但药量为 30 g/ml , 给药一天后， 给药组与对照组相比具有显著性的差异 抑制率达到 10%。 给药六天后， 抑制率为 28. 5%。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。 需要理解的是， 本发明并不局限于上述特 定实施方式， 本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改， 这并不影 响本发明的实质内容。 中謁 H生物菌种保藏管理委、¾会
普通黴生物中心

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种苯并吡喃化合物， 其结构式如下式 （ I ) 所示:
Figure imgf000010_0001
( I )； 其中， R1选自氢、 C1〜C4烷基、 各种氨基酸 去掉氨基部分后余下的基团中的一种， R2选自氢、 C1〜C4烷基、 各种氨基酸去掉氨基 部分后余下的基团中的一种， R3选自氢、 C1〜C4烷基中的一种， n为 1〜4中任一整数。
2、 如权利要求 1所述的苯并吡喃化合物， 其特征在于， R1选自氢或者甲基， R2选 自氢或者甲基， R3选自氢或者甲基， n=l或 2。
3、 如权利要求 2所述的苯并吡喃化合物， 其特征在于， 所述苯并吡喃化合物的结 构式如下式 （ II ) 所示：
Figure imgf000010_0002
4、 一种如权利要求 1、 2或 3所述的苯并吡喃化合物的制备方法， 其特征在于， 厦 门链霉菌 treptomyces xiamenensis CGMCC No. 5675的发酵液经提取， 分离， 纯化， 制得所述苯并吡喃化合物。
5、 如权利要求 4所述的苯并吡喃化合物的制备方法， 其特征在于， 所述方法具体 包括如下步骤：
A、 所述厦门链霉菌 Streptomyces xia誦 ensis CGMCC No. 5675进行液体发酵 培养， 发酵液经提取， 浓缩， 得总提物；
B、 以氯仿-甲醇为洗脱剂， 所述总提物经硅胶柱层析梯度洗脱； 所述梯度洗脱采用 的氯仿与甲醇的体积比依次为 100:1、 70:1、 60:1、 50:1、 30:1、 15:1、 10:1、 5:1、 2:1、 1:1; 流速为 15 秒 /滴， 每个洗脱流份分别接收 200毫升；
C、 以甲醇为洗脱剂， 将所述步骤 B中氯仿与甲醇的体积比为 15:1时洗脱得到的组 分凝胶柱层析分离， 流速为 70〜90 秒 /滴， 纯化， 即得所述苯并吡喃化合物。
6、 如权利要求 5所述的苯并吡喃化合物的制备方法， 其特征在于， 步骤 C还包括: 将所述氯仿与甲醇的体积比为 15:1 的洗脱组分的相邻组分进行高效液相色谱分析， 以 所述苯并吡喃化合物在 206nm， 260nm的紫外吸收为准， 合并具有相同吸收的组分； 合 并后的组分继续纯化， 即得所述苯并吡喃化合物。
7、 如权利要求 5或 6所述的苯并吡喃化合物的制备方法， 其特征在于， 步骤 A中， 所述提取具体为：发酵液离心后上清液用乙酸乙酯萃取，残渣用等体积的混合溶剂提取， 合并所述上清液的萃取液和残渣的提取液， 即可； 所述混合溶剂是体积比为 80 : 15 : 5的 乙酸乙酯、 甲醇、 甲酸的混合物。
8、 如权利要求 5或 6所述的苯并吡喃化合物的制备方法， 其特征在于， 步骤 C中， 所述纯化具体为： 将洗脱下来的组分收集， 用高效液相进行纯化， 以乙腈 /水溶液为流 动相， 洗脱梯度为乙腈与水的体积比在 35分钟内由 45 : 55变成 55 : 45。
9、 一种如权利要求 1、 2或 3所述的苯并吡喃化合物在制备抗肺纤维化药物中的用 途。
10、 如权利要求 9所述的用途， 其特征在于， 所述抗肺纤维化药物用于治疗急性呼 吸窘迫综合征、 急性间质性肺炎或特发性肺纤维化慢性型的急性恶化症。
11、 一种抗肺纤维化药物组合物， 其中含有如权利要求 1、 2或 3所述的苯并吡喃 化合物， 或者其药学上可接受的酸或碱的盐， 或者溶剂化合物作为有效成分。
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