CN110199884B - 一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，包括如下步骤：藜麦种子消毒处理接种于1/2MS+0.5mg/L CCC的培养基上制备实生苗，获得藜麦无菌实生苗；切割藜麦无菌实生苗进行不定芽增殖培养；将增殖的不定芽转入MS+1mg/L CCC的培养基进行诱导结籽。本发明可实现无菌条件下藜麦周年结籽的目的，同时，通过本发明的技术方案可以实现纯化种子。在培养过程中，培养基中始终有矮壮素(CCC)存在，从一颗种子到无菌苗结籽所需的时间与藜麦的整个生育期一致，约100‑120d,在不定芽增殖阶段增殖无限多的不定芽用于诱导结籽，可在组培条件下周年生产无菌、纯系的种子用于研究。
Description
技术领域
本发明涉及无菌快速繁殖技术领域，具体为一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法。
背景技术
藜麦又称藜谷、南美藜等，是苋科藜属一年生双子叶植物。藜麦是药食兼用作物，且无麸质、含高蛋白、氨基酸、黄酮、皂苷等元素，因此被称为“黄金谷物”，被认为是可确保未来全球粮食安全的作物之一。
藜麦在安徽、甘肃、贵州、四川云南等20余省市均已引进栽培。然而，不同地区、不同年份和地理条件下籽实产量和生物量差异较大，主要因为藜麦的品种选择、品种搭配、作物搭配、杂草控制、收割和收割期的管理等环节尚未完善。
目前，国内外研究多限于营养成分测定分析和产品的加工与开发，对品种一致性、稳定性和特异性等品种选育方面的特征特性和形态学特征报道较少、对其进行系统选择和品种纯化培育工作开展的较少。
藜麦属于小花植物(花较小、较多)，人工去雄较难，因此藜麦杂交进程缓慢。不同的藜麦个体有圆锥花序、穗状花序等类型，但以穗状花序为主。同一藜麦植株上有1主花枝，并着生二级至三级分枝，花序为有限生长型，两性花出现后分枝终止。因其同时分布有雌花、雄性败育花和两性花，在盛花期，有少量花丝伸出花被之外，藜麦有10-15％的异花授粉特性。因为无菌苗在组培瓶中是密封的，没有传粉媒介，加上接种茎段都来自一个品系，可以纯化种子，并且周年进行。因此，藜麦在无菌条件下培养进行结籽培育的方法对藜麦生物学特性研究有重要意义。
发明内容
针对以上问题，本发明提供了一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，包括如下步骤：
S1，藜麦种子处理：
将藜麦种子于超净台上用75％的酒精浸泡30S，再用0.1％的氯化汞溶液浸泡12min，接着用无菌水清洗3-5遍；
S2，获取无菌实生苗
将上述处理好的藜麦种子接种于1/2MS+0.5mg/L CCC的培养基上制备无菌实生苗，在无光照条件下萌发至子叶长出，
其中：子叶长出后培养条件为：置于光照下培养，温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
12天后获得藜麦无菌实生苗；
S3，对藜麦实生苗进行切割，以诱导不定芽增殖
将上述获取藜麦实生苗于超净台上切割成段，每个茎段带有腋芽，并将茎段接种在MS+6BA1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基上进行不定芽增殖培养；
培养条件：温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
30天后获得增殖的藜麦组培苗；
S4，不定芽结籽诱导
将增殖的藜麦组培苗再次切割成带芽茎段转入MS+1mg/LCCC的培养基进行诱导结籽，其中，
培养条件为：温度25±2℃，相对湿度70-80％，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；
经过50-60天的培养，藜麦在培养瓶中开花，并结籽。
进一步地，选取上述获取的高5-6cm、有2-3对真叶的藜麦组培苗于超净台上切割成段。
进一步地，S3中可将茎段接入MS+6BA1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基进行不定芽的无限增殖，或者，将茎段接入MS+1mg/LCCC的培养基进行诱导结籽。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，可实现无菌条件下藜麦周年结籽的目的，同时，通过本发明的技术方案可以实现纯化种子。在培养过程中，培养基中始终有矮壮素(CCC)存在，从一颗种子到无菌苗结籽所需的时间与藜麦的整个生育期一致，约100-120d,在不定芽增殖阶段增殖无限多的不定芽用于诱导结籽，可在组培条件下周年生产无菌、纯系的种子用于研究。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，包括如下步骤：
S1，藜麦种子处理：
将藜麦种子于超净台上用75％的酒精浸泡30S，再用0.1％的氯化汞溶液浸泡12min，接着用无菌水清洗3-5遍；
S2，获取无菌实生苗
将上述处理好的藜麦种子接种于1/2MS+0.5mg/L CCC的培养基上制备无菌实生苗，在无光照条件下萌发至子叶长出，
其中：子叶长出后培养条件为：置于光照下培养，温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
12天后获得藜麦无菌实生苗；
S3，对藜麦实生苗进行切割，以诱导不定芽增殖
将上述获取的高5-6cm、有2-3对真叶的藜麦组培苗于超净台上切割成段，每个茎段带有腋芽，并将茎段接种在MS+6BA1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基上进行不定芽增殖培养；
可将茎段接入MS+6BA1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基进行不定芽的无限增殖，或者，将茎段接入MS+1mg/LCCC的培养基进行诱导结籽。
培养条件：温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
30天后获得增殖的藜麦组培苗；
S4，不定芽结籽诱导
将增殖的藜麦组培苗再次切割成带芽茎段转入MS+1mg/LCCC的培养基进行诱导结籽，其中，
培养条件为：温度25±2℃，相对湿度70-80％，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；
经过50-60天的培养，藜麦在培养瓶中开花，并结籽。
培养基中始终有矮壮素(CCC)存在，从一颗种子到无菌苗结籽所需的时间与藜麦的整个生育期一致，约100-120d,可以在不定芽增殖阶段增殖无限多的不定芽用于诱导结籽，而且在最后一步诱导结籽的时候，只要有顶端的都能诱导结籽，即切割成几段的也能在发出的侧枝结籽。
无菌条件下结实的籽粒可以正常无菌萌发：一部分在无意晃动培养瓶时候掉落在培养基上的籽粒就萌发成苗，还有的需要人为获取种子，取下后直接播种在无菌培养基上，有的顺利萌发，个别不能萌发。说明成熟度不一致会影响其萌发，与自然条件下结籽类似。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，藜麦种子处理：
将藜麦种子于超净台上用75％的酒精浸泡30S，再用0.1％的氯化汞溶液浸泡12min，接着用无菌水清洗3-5遍；
S2，获取无菌实生苗
将上述处理好的藜麦种子接种于1/2MS+0.5mg/L CCC的培养基上制备无菌实生苗，在无光照条件下萌发至子叶长出，
其中：子叶长出后培养条件为：置于光照下培养，温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
12天后获得藜麦无菌实生苗；
S3，对藜麦实生苗进行切割，以诱导不定芽增殖
将藜麦实生苗于超净台上切割成段，每个茎段带有腋芽，并将茎段接种在MS+6BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基上进行不定芽增殖培养；
培养条件：温度25±2℃、相对湿度70-80％、光照强度2500Lx、光照时间14h/d；
30天后获得增殖的藜麦组培苗；
S4，不定芽结籽诱导
将增殖的藜麦组培苗再次切割成带芽茎段转入MS+1mg/L CCC的培养基进行诱导结籽，其中，
培养条件为：温度25±2℃，相对湿度70-80％，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；
经过50-60天的培养，藜麦在培养瓶中开花，并结籽。
2.根据权利要求1所述的一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，其特征在于，S3中，选取上述获取的高5-6cm、有2-3对真叶的藜麦组培苗于超净台上切割成段。
3.根据权利要求1或2所述的一种藜麦组培苗无菌条件下的结籽培育方法，其特征在于，S3中可将茎段接入MS+6BA 1.5 mg/L+NAA 0.2mg/L+0.5mg/L CCC的培养基进行不定芽的无限增殖，或者，将茎段接入MS+1mg/L CCC的培养基进行诱导结籽。
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