CN110506630A - 藜麦茎段组培快速繁殖方法 - Google Patents

藜麦茎段组培快速繁殖方法 Download PDF

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

藜麦茎段组培快速繁殖方法，属于农业领域，包括（1）外植体准备；（2）外植体消毒；（3）诱导腋芽萌发；（4）增殖培养；（5）生根诱导；（6）驯化移栽。本发明藜麦诱导率达90.0%，且芽萌发最快，芽体饱满，色泽绿。藜麦不定芽增殖系数最高，为4.9，芽苗健壮，长势良好。

Description

藜麦茎段组培快速繁殖方法
技术领域
本发明属于农业技术领域，具体涉及藜麦茎段组培快速繁殖方法。
背景技术
藜麦为异源四倍体(2n=4x=36)(宋娇，2018)，自然异交率为10%～17%，群体的基因组成多为杂合型，遗传不稳定。目前，国内有关藜麦组培快繁的研究报道较少，如俞涵译等(俞涵译等，2015)研究了藜麦茎段愈伤组织的诱导及优化体系，曹宁等研究了藜麦茎段愈伤组织分化和不定芽增殖。其他系统全面的有关藜麦组织培养研究报道未见。
发明内容
为了保持藜麦母本的遗传性状，解决藜麦优良品种有性繁殖性状分离的问题，本发明提供藜麦茎段组培快速繁殖方法。
本发明的技术方案：
藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体，其特征是包括下述步骤：
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基以MS培养基+生长素NAA为基础，每升MS培养基中添加0.2mg的生长素NAA、0.5 mg—2mg细胞分裂素6-BA，每升MS培养基中添加0.5 mg—2 mg6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升MS培养基中添加0.5 mg~1.0 mg的生长素IBA和0.5 mg~1.0 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
各步骤中培养基的培养条件：
在各步骤的培养基+蔗糖+琼脂；培养基：蔗糖：琼脂=1升：30 g：8 g，pH5.8。培养温度(20±2)℃，空气湿度70%～80%，光照强度2000 lx，光照时间13 h/d。
1/2 MS培养基就是50%MS培养基+50%水。比如要配1L的1/2MS，就先配500mlMS，再加500ml水。
本发明藜麦诱导率达90.0%，且芽萌发最快，芽体饱满，色泽绿。
藜麦不定芽增殖系数最高，为4.9，芽苗健壮，长势良好。
具体实施方式
实施例1：藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体。
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基为MS培养基+生长素NAA +分裂素6-BA+6-糖基氨基嘌呤，每升MS培养基中添加0.2mg生长素NAA、1.5mg细胞分裂素6-BA和0.5 mg 6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升1/2MS培养基中添加1.0 mg的生长素IBA和1.0 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
实施例2：藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体。
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基为MS培养基+生长素NAA +分裂素6-BA+6-糖基氨基嘌呤，每升MS培养基中添加0.2mg生长素NAA、0.5 mg细胞分裂素6-BA和0.5 mg 6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升1/2MS培养基中添加0.5 mg的生长素IBA和0.5 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
实施例3：藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体。
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基为MS培养基+生长素NAA +分裂素6-BA+6-糖基氨基嘌呤，每升MS培养基中添加0.2mg生长素NAA、2mg细胞分裂素6-BA和1.5 mg 6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升1/2MS培养基中添加1.0 mg的生长素IBA和1.0 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
实施例4：藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体。
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基为MS培养基+生长素NAA +分裂素6-BA+6-糖基氨基嘌呤，每升MS培养基中添加0.2mg生长素NAA、1.5 mg细胞分裂素6-BA和1.5 mg 6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升1/2MS培养基中添加0.8 mg的生长素IBA和1.0 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
实施例5：藜麦品种HQ1，由山西华青藜麦产品开发有限公司提供。
藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体。
1、外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
2、外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
3、诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
4、增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基为MS培养基+生长素NAA +分裂素6-BA+6-糖基氨基嘌呤，每升MS培养基中添加0.2mg生长素NAA、2.3mg细胞分裂素6-BA和2.5 mg 6-糖基氨基嘌呤（或N6-呋喃甲基腺嘌呤）；
5、生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升1/2 MS培养基中添加1.0 mg的生长素IBA和1.0 mg的生长素NAA；
6、驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。

Claims (2)

1.藜麦茎段组培快速繁殖方法，以藜麦幼苗期生长健壮、无病虫害的植株为母本，切取直径0.3 cm~0.7cm茎段为外植体，其特征是包括下述步骤：
（1）外植体准备：将外植体材料去除叶片，用软毛笔蘸饱和洗衣粉水清洗干净，然后流水冲洗30 min；剪成长度是1.5 cm~2 cm的带腋芽茎段，腋芽上、下至少保留0.5～1cm；
（2）外植体消毒：在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1% HgCl2进行常规消毒处理，消毒时间为9 min，然后用无菌水漂洗6次，每次3min；消毒处理完立刻接种于MS培养基上；接种7~10 天；
（3）诱导腋芽萌发：将生长状态良好的无菌单芽茎段，接种至初代诱导培养基上，接种一周为腋芽萌发的初代苗；
所述初代诱导培养基为MS培养基+细胞分裂素6-BA+生长素NAA；每升MS培养基中添加0.5 mg—1.5mg细胞分裂素6-BA，0.1mg—1.0 mg的生长素NAA；
（4）增殖培养：将初代苗切成带1~2个叶片的茎段，接种于增殖培养基上，培养8～10天成为芽苗；
所述增殖培养基以MS培养基+生长素NAA为基础，每升MS培养基中添加0.2mg的生长素NAA、0.5 mg—2mg细胞分裂素6-BA，每升MS培养基中添加0.5 mg—2 mg6-糖基氨基嘌呤或N6-呋喃甲基腺嘌呤；
（5）生根诱导：将高度3~5 cm的健壮芽苗转接至生根培养基中进行生根培养；
所述生根培养基为1/2 MS培养基+生长素IBA+生长素NAA；
每升MS培养基中添加0.5 mg~1.0 mg的生长素IBA和0.5 mg~1.0 mg的生长素NAA；
（6）驯化移栽：选择根长2~4 cm、株高5 cm以上，长势健壮、根系良好的藜麦生根组培苗，温室中炼苗1～2周，洗净根部的培养基，移栽至已充分消毒的移栽基质中，所述移栽基质为蛭石：草炭土=3:1；移栽后置于通风、散光环境中养护20 天，保持温度20~23 ℃，空气湿度80%～100%。
2.根据权利要求1所述藜麦茎段组培快速繁殖方法，其特征是培养条件是培养基：蔗糖：琼脂=1升：30 g：8 g，pH5.8；培养温度是20±2℃，空气湿度70%～80%，光照强度2000lx，光照时间13 h/d。
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Application publication date: 20191129

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