CN1631105A - 一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法 - Google Patents

Abstract

一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法，涉及一种通过克隆技术繁殖优良罗汉果种苗的方法。按以下步骤进行：从产地取健康罗汉果植株的嫩枝，经表面灭菌处理后接种到培养基中培养，诱导出愈伤组织和丛生芽，在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于培养基中培养，新的丛生芽生成后，再在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织，如此反复5次以上，进一步培养得到优质的罗汉果种苗，将其移栽到不能进行生殖生长的环境中，生长3－6个月，得到健壮的罗汉果种薯，具有较强的抗病毒侵染能力。采用本方法生产的罗汉果种薯移栽成活率、上棚率、座果率都在95％以上，产量高，果实品质优，收获的罗汉果提取的罗汉果甜甙比传统栽培方式收获的罗汉果提取率高5％以上。

Description

一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法

技术领域  本发明涉及一种通过克隆技术繁殖优良罗汉果种苗的方法。

背景技术  压蔓繁殖一直是罗汉果传统的繁殖方法，一年薯少量结果或几乎不结果，多数第二年开始结果，第三年才是盛果期，不但繁殖系数太低，而且随着繁殖代数的增加还会导致种质退化。由于长期延用传统压蔓繁殖，使得一些罗汉果病害不断蔓延，以致于罗汉果每年因病害而减产30-50％，有的甚至绝收。

我国80年代初，开始罗汉果组织培养研究，但多处于实验初期，如1981年林荣等首次开展罗汉果叶组织培养的研究。“罗汉果茎段离体培养研究”(广西植物.1985，5(3).-273-278)，主要论述了罗汉果茎段离体培养在MS基本培养基中，植物激素对器官形成的影响。“罗汉果组织培养中愈伤组织和腋生枝的形成”(广西植物.1989，9(2).-103-104)，提出用罗汉果茎段为外植体.培养在MS十BA1.0+IBA0.1毫克/升培养基上，诱导愈伤组织和芽形成。“罗汉果组培苗的栽培研究”(广西植物.1990，10(4).-359-36)，报导培育的罗汉果组培苗当年平均单株结果14.40个，最高单株结果32个，第二年平均单株结果26.10个，最高单株结果68个，第三年平均单株结果37个，最高单株结果78个；第四年平均单株结果49.40个，最高单株结果124个，与传统的压蔓繁殖并没有多大差异。“罗汉果茎尖脱毒快繁技术”(西南农业学报.1999，12(3).-125-127)，则介绍切取0.5-1.0mm的罗汉果茎尖分生组织，采用BA 0.1mg/L-0.5十NAA 0.1mg/L培养基可以在较短时间内诱导出绿苗，经38℃热处理后，用2mm茎尖培养的组培苗，用指示植物鉴定，脱毒率可达100％。

利用现代生物技术对罗汉果无性系进行克隆繁殖，既可定向培育优良种苗，又可控制苗的性别，而且还具有取材方便、繁殖速度快、繁殖系数高、育苗不受季节限制等方面的优点，是使罗汉果苗生产工厂化、良种化，迅速扩大优质罗汉果苗生产的一条重要途径。

罗汉果原产地在广西，武汉的气候条件与广西的气候条件相比，在空气湿度、气温、昼夜温差、光照等条件有明显差异，故罗汉果克隆苗在武汉地区可以进行营养生长，但不能进行生殖生长，即不开花结果。如能将罗汉果克隆苗在武汉或其它不适于其生殖生长的地区种植，使之只进行营养生长不进行生殖生长，可培育出优良健壮的罗汉果克隆种苗。

发明内容  本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种通过克隆技术获得的罗汉果组培苗先在不能进行生殖生长的环境中培育3-6个月、然后适时移栽到产区能够稳产高产的罗汉果优良种苗的繁殖方法。

本发明目的的实现方式为，一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法，按以下步骤进行：从产地取健康罗汉果植株的嫩枝，经表面灭菌处理后接种到培养基中培养，诱导出丛生芽，在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于培养基中培养，新的丛生芽生成后再在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于培养基中培养，如此反复5次以上，将完全不带病毒的丛生芽作继代培养，当丛生芽长至4-6片叶或高3-4cm时，转入生根培养基中诱导生根，健壮的生根苗逐一移载到营养钵中，在25-28℃下培养25-30天，可得有6-8片真叶，6-10cm高的罗汉果克隆种苗，这种罗汉果克隆种苗可移栽到不能进行生殖生长的环境条件下培育3-6个月，使其只进行营养生长不进行生殖生长，则可获得优良健壮的罗汉果克隆种薯。

本发明具有以下特点：

1、将罗汉果克隆种苗移栽到不能进行生殖生长的环境条件下培育3-6个月，使其只进行营养生长不进行生殖生长，可培育出优良健壮的克隆罗汉果种薯，然后适时移栽到产区其种苗移栽成活率、上棚率、开花率、座果率均达到95％，单株结果最高达170多个，平均单株结果80多个，能达到当年稳产高产效果；

2、罗汉果克隆种苗具有效强的抗枯萎病能力，克服了传统压蔓繁殖容易传播母株病害的严重缺陷，在原严重的枯萎病发病区，间种或套种罗汉果脱毒克隆苗，都不感染发病，并当年达到丰产效果；

3、克隆苗品质较压蔓苗明显提高，种植克隆苗收获的罗汉果较之栽培压蔓苗收获罗汉果的甜甙提取收率高5％以上；

4、用本法生产罗汉果优良种苗，不受时间和地域限制，一年四季均可生产，适于罗汉果种苗工业化、产业化规模生产。

具体实施方式  本发明根据罗汉果克隆苗在武汉地区可以进行营养生长、不能进行生殖生长的特点，将罗汉果克隆苗种植在武汉地区，培育3-6个月，将获得的优良健壮的克隆罗汉果种薯适时移栽到产区。罗汉果克隆苗的母体材料，采自罗汉果产区生物学和经济学性状均很优良、且正处于盛果期的单株植物，以确保罗汉果克隆苗移栽的当年就能进入生殖生长期，达到当年丰产的目的，比较传统压蔓苗具有绝对的优势。

本发明克隆繁殖罗汉果品种有青皮果、长滩果、冬瓜果、拉江果、红毛果等。

以本发明获得的罗汉果优良克隆种苗在清明节前后定植，5月中下旬上棚，6月下旬7月上旬现初花，7月下旬进入盛花期，10-11月收果。其栽培过程的成活率、上棚率和座果率均可达95％以上。

下面举出本发明的具体实施例：

例1.取挂果多果形好有效含量较高的优良罗汉果植株嫩枝10cm，除去叶片并剪得带节茎段，先用70％酒精灭菌30秒，无菌水冲洗3-4次，再用0.1％升汞灭菌8-10分钟，无菌水冲洗3-4次，用剪刀将灭好菌的嫩枝剪成1cm长的节段，转入含激素的MS培养基上培养，20-30天便有愈伤组织形成，再过20-30天长出丛生芽，将丛生芽在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于含激素的MS培养基中培养，如此反复脱毒5次，脱毒后的丛生芽作继代培养。当脱毒后的丛生芽长至4-6片叶或3-4cm高时，转入1/2MS生根培养基上诱导生根，经培养25-30天，苗高达到4-6cm，4-6片叶，根系长3-6cm，移栽到土钵中，25-30天后苗高达到6-10cm，6-8片叶。将该批组培苗移植到武汉地区室外培育，越冬后得到罗汉果种薯500株，并分别于1999年4月5日和4月28日在广西桂平市垌心乡王举林场定植，成活率、上棚率、座果率均大于95％。

例2.取武汉越冬的罗汉果克隆苗种薯(直径2.5-5cm)2000株，于2000年4月下旬在广西永福县龙江乡龙山村定植，6月中旬上棚，7月20日现初花，8月上中旬进入盛花期，成活率100％，座果率98％，单株结果50-175个，平均单株结果89个。

例3.2001年4月5-10日，将武汉越冬的4000株罗汉果克隆种苗，在灵川县九屋乡定植，成活率、上棚率、座果率均达95％，无病害现象发生，7月中旬现初花，10月上旬仍有花开，单株结果45-155个，平均单株结果78个。

例4.取武汉越冬的罗汉果克隆种苗1200株，于2001年3月29日种植于广西永福县龙江乡拖江村6亩头年种植罗汉果压蔓薯频发枯萎病的病区中。这块地由于发生严重的枯萎病头年几乎绝收，开春后，除20株留作对照试验外，其余病薯全部被铲除，土壤也未作任何处理，直接种植罗汉果克隆种苗，移载成活率、座果率达95％以上，无发病植株，单株挂果量最多的达到174多个，平均挂果68个；而对照病株上棚率80％，座果率50％，单株结果2-15个。

Claims (3)

1、一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法，其特征在于按以下步骤进行：从产地取健康罗汉果植株的嫩枝，经表面灭菌处理后接种到培养基中培养，诱导出丛生芽，在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于培养基中培养，新的丛生芽生成后再在解剖镜下切取小于0.5mm带有叶原基的茎尖组织于培养基中培养，如此反复5次以上，将完全不带病毒的丛生芽作继代培养，当丛生芽长至4-6片叶或高3-4cm时，转入生根培养基中诱导生根，健壮的生根苗逐一移载到营养钵中，在25-28℃下培养25-30天，可得有6-8片真叶，苗高6-10cm的罗汉果克隆种苗，种苗移栽到不能进行生殖生长的环境条件下，培育优良的克隆罗汉果种薯。

2、根据权利要求1所述的一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法，其特征在于罗汉果品种有青皮果、长滩果、冬瓜果、拉江果、红毛果。

3、根据权利要求1所述的一种克隆繁殖罗汉果种苗的方法，其特征在于罗汉果克隆苗在不能进行生殖生长的环境条件下培育3-6个月，使其只进行营养生长不进行生殖生长，从而获得健壮的克隆罗汉果种苗，适时在产区种植，其成活率、当年上棚率、开花率、座果率均达到95％以上，单株结果最高达170多个，平均单株结果80多个，能达到当年稳产高产效果。