CN109856408A - 一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法,可以方便一起携带检测卡和样本稀释液,且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中,所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条,可以重复利用,既节约成本,也符合环保的要求;所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
Description
技术领域
发明涉及体外诊断技术领域。
具体地说,是涉及一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种婴幼儿人群常见的急性传染病,是以发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡为临床表现的传染性疾病,多发于5岁以下儿童。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状的严重并发症,严重者可导致死亡。自2008年我国HFMD大流行后,HFMD已成为我国严重的公共卫生问题之一。截至2018年4月,全国已报道HFMD发病1644.8万例,婴幼儿死亡3545例。
近年来,中国大陆地区引起手足口病的主要病原体是肠道病毒71(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)。然而,自2008年开始,柯萨奇病毒A6(CoxA6)在部分地区逐渐出现并成为引发手足口病暴发流行的优势菌株。CoxA6和CoxA10均属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为二十面立体结构的球形或卵圆形,直径22~30nm,呈圆形颗粒状。
自2008年在新加坡的暴发流行,CoxA6和CoxA10成为手足口病的主要致病血清型,共占该病的35.3%。2010年中国台湾和日本手足口病大暴发的主要病原是CoxA6。2012年印度手足口病的主要病原是CoxA6和CoxA16,而EV71和CoxA10则次之。2013年以前,中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CoxA16为主,CoxA6和CoxA10次之。2013年以后,CoxA6和CoxA10相关的手足口病的比例逐渐上升,成为国内手足口病感染的优势病原体。
目前,我国的手足口病病原诊断市场,仍然以检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型为主,也出现了检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒,如专利《一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒》,专利号(201410012004.1)。虽然聚合酶链反应(PCR)检测快速、特异性和敏感性高,但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求比较高,存在着技术条件要求高、操作复杂、不易普及的问题,一般基层实验室难以开展,且价格也相对较高。同时,由于手足口病的易感人群为5岁以下儿童,检测抗原需要取咽拭子,检测抗体需取全血,对于幼儿来说,明显取指尖血更易操作,但指尖取血量最多不超过40µL。因此,对IgM抗体检测试剂盒的要求必须灵敏度高、取血量少。由于乳胶颗粒粒径大可提高灵敏度,对样品垫处理以过滤红细胞实现全血检测,同时样本稀释液中加入消除假阳成分,最终设计开发出一种特异针对柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的快速检测试剂。
发明内容
发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处,提供一种能同时检测柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体,检测灵敏度高、全血用量少,满足幼儿快速检测需要的一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法。
发明的目的是通过以下技术措施来达到的:一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有第一凹槽,所述第一凹槽放置检测卡,所述盒体内设有第二凹槽,所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体;所述检测卡包括卡盖,与所述卡盖卡接的卡体,以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条;其特征在于:所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔,所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置;所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置,所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。
作为一种改进,所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽,所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱;所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起,所述卡体上设有若干圆柱体,所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。
作为进一步的改进,所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板,两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度;所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板;所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识,所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。
作为进一步的改进,所述试纸条包括基层,所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层,所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条,所述乳胶层的上方覆盖设有白贴,所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应;所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应,所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。
作为进一步的改进,所述样品垫层包括第一样品垫层,设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层;所述第一样品垫层为滤血膜,所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层;所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜;所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线,所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
本发明的另一个目的是:一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述制备方法包括以下步骤:
步骤一、样本稀释液的制备;
步骤二、样品垫层的制备
(1)样品垫层预处理液的配制
(2)第二样品垫层预处理
将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤(1)的样品垫层预处理液中,静置5~8分钟取出,经过干燥处理后封存备用;
(3)第一样品垫层的处理
将购买的滤血膜裁成宽长30cm,宽0.7cm的长条;
步骤三、乳胶层的制备
(1)微球活化;
(2)将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球;
步骤四、硝酸纤维素膜的制备
(1)包被重组柯萨奇病毒A6型抗原:用pH7.2~7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2~0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上,形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线;
(2)包被重组柯萨奇病毒A10型抗原:用pH7.2~7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3~0.5mg/mL固相于步骤(1)相应的硝酸纤维素膜上,形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线;
(3)包被羊抗鼠IgG抗体:用pH8.0~8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4~1.6mg/mL,并分别喷于所述步骤(2)相应的硝酸纤维素膜上,形成羊抗鼠IgG抗体质控线;
五、试纸条的制备
(1)在基层(作为支持物)中间位置粘贴硝酸纤维素膜;
(2)在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层,吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0~2.0mm;
(3)吸水层上覆盖专用标签条;
(4)在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层(鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜),乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0~2.0mm;
(5)在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层滤血膜,宽度约7.0~7.5mm;
(6)在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层,第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面,第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0~2.0mm;
(7)在乳胶层上方粘贴白贴,白贴完全覆盖乳胶层,白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0~3.0mm;
(8)将上述步骤(7)得到的产品压平整后,在切条机上切成3.0~4.0mm宽的试纸条。
作为一种改进,所述样本稀释液的制备:将3~5mg/mL酪蛋白、15~20mg/mL蔗糖、8~9µg/mL氯化钠和1~1.5mg/mL叠氮钠,用15~25mM缓冲液定容至100mL,调pH值为7.2~7.5。
作为进一步的改进,所述样品垫层预处理液的配制:将0.1~0.2mg/mL的兔抗RBC,10~20g的PEG20000和0.3~0.5mg/mL的Tween20,用15~25mMPBS缓冲液定容至1L,调pH值为7.2~7.5。
作为进一步的改进,步骤三中所述微球活化的步骤为:
①分别称取1-乙基-3(3-二甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各10mg,分别装于两个干净离心管中;
②取羧基乳胶微球悬浊液1~1.5mL,移至干净离心管中,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清;
③用80~100µL活化缓冲液洗涤微球,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清,共洗涤2次;
④在离心管底部轻轻地加80~100µL活化缓冲液,不必吹打微球;
⑤将离心管置于超声波下,声浴60~70秒;
⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50~60mg/mL的溶液,分别取10~15µLNHS溶液和10~15µLEDC溶液,加入到乳胶微球悬浊液中,暗室孵浴15~20分钟;
⑦再以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清;
所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为:
①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90~100µg/mL的溶液,配500~600µL;
②用500~600µL配对缓冲液重悬微球,震荡;
③用500~600µL配对缓冲液洗涤微球,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清,共洗涤2次;
④用500~600µL配对缓冲液重悬微球,震荡;
⑤将之前配好的500~600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管;
⑥将离心管置水平振荡器上,室温,暗室,轻轻振荡2小时;
⑦用PBS/BSA洗涤微球2次;
⑧用PBS/BSA重悬微球,如需较长时间保存,可用0.5~0.6mg/mL叠氮钠保存。
由于采用了上述技术方案,与现有技术相比,发明的优点是:
1、本发明可以方便一起携带检测卡和样本稀释液,且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中,所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条,可以重复利用,既节约成本,也符合环保的要求;所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
2、本发明提供的样本稀释液,可以稀释全血,有利于全血更好的爬升、层析。同时样本稀释液成分中的酪蛋白、蔗糖,可以起到封闭、保护作用,使类风湿因子等干扰物质不与胶体金层上的金标抗体反应,避免干扰物质到达检测线发生非特异性反应而出现假阳性检测结果,有效消除假阳性干扰。
3、本发明提供的第一样品垫层为滤血膜,滤血膜表面凹凸不平,通过物理吸附作用滞留红细胞;再经过第二样品垫层,其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体,可与人红细胞特异结合,进一步消除全血样本中的红细胞,实现了全血样本的检测。
4、本发明提供乳胶颗粒标记鼠抗人IgM单克隆抗体,乳胶颗粒比胶体金颗粒平均粒径大10倍,与蛋白结合吸附的能力强,吸附血样中抗体的效果好,显色更明显,提高了检测灵敏度,使得血样用量少,只需要10µL全血即可进行检测,完全可以对婴幼儿采取指尖采血方式进行检测,解决婴幼儿采血难的问题,具有重要的医学实践意义。
5、本发明使用全血即可进行检测,无需对血液进行血清和血浆分离处理,方便、快捷、直观,不需特殊仪器也不需专业培训,按说明书即可完成操作,全过程只需20分钟,降低了使用成本,适合医院等基层单位。
下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步说明。
附图说明
附图1是本发明的结构示意图。
附图2是本发明所述检测卡的结构示意图。
附图3是本发明所述卡盖的结构示意图。
附图4是本发明所述卡体的结构示意图。
附图5是附图4A-A向剖视图。
附图6是本发明所述试纸条的结构示意图。
附图7是附图6中B-B向剖视图。
1-盒体;11-第一凹槽;12-第二凹槽;13-取出槽;2-检测卡;21-卡盖;211-稀释液加样孔;212-样本加样孔;213-观测孔;214-安装标示孔;215-第一卡接装置;2151-卡接凹槽;2152-卡接圆柱;22-卡体;221-第二卡接装置;2211-卡接凸起;2212-圆柱体;2213-圆柱凹槽;222-试纸卡槽;2221-第一试纸条限位板;2222-第二试纸条限位板;2223-固定挡板;2224-调节板;2225-第一试纸条放置标识;2226-第二试纸条放置标识;3-瓶体;4-试纸条;41-基层;42-样品垫层;421-第一样品垫层;422-第二样品垫层;43-乳胶层;44-硝酸纤维素膜;441-检测线;442-质控线;45-吸水层;46-专用标签条;47-白贴。
具体实施方式
实施例一:如附图1-附图7所示,一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体1,所述盒体1内设有第一凹槽11,所述第一凹槽11放置检测卡2,所述盒体1内设有第二凹槽12,所述第二凹槽12放置样本稀释液的瓶体3,所述第一凹槽11设有取出槽13;所述取出槽13的设置可以方便所述检测卡2的取出。
所述检测卡2包括卡盖21,与所述卡盖21卡接的卡体22,以及能更换的位于所述卡盖21与所述卡体22之间的试纸条4;所述卡盖21上依次设有稀释液加样孔211、样本加样孔212、观测孔213和安装标示孔214,所述卡盖21上设有与所述卡体22卡接的第一卡接装置215;所述卡体22上设有与所述第一卡接装置215卡接的第二卡接装置221,所述卡体22上还设有放置所述试纸条4的试纸卡槽222。
所述第一卡接装置215包括所述卡盖21周边与所述卡体22接触的一面设有卡接凹槽2151,所述卡盖21内朝向所述卡体22的一面设有若干卡接圆柱2152。
所述第二卡接装置221包括所述卡体22周边朝向所述卡盖21的一面上设有与所述卡接凹槽2151配合的卡接凸起2211,所述卡体22上设有若干圆柱体2212,所述圆柱体2212内设有与所述卡接圆柱2152配合的圆柱凹槽2213。
所述卡接圆柱2152插入所述圆柱凹槽2213中,所述卡接凸起2211卡入所述卡接凹槽2151中,将所述卡盖21与所述卡体22卡接为一体,所述第一卡接装置215与所述第二卡接装置221的设置可以方便快速的打开所述卡盖21与所述卡体22,方便更换所述试纸条4。
所述试纸卡槽222包括第一试纸条限位板2221和第二试纸条限位板2222,所述第一试纸条限位板2221与所述第二试纸条限位板2222之间的距离为所述试纸条4的宽度,所述第一试纸条限位板2221与所述第二试纸条限位板2222的两端分别设有固定挡板2223,两所述固定挡板2223之间的距离为所述试纸条4的长度;所述试纸卡槽222还包括若干保持所述试纸条4水平的调节板2224。第一试纸条限位板2221和第二试纸条限位板2222的高度逐渐降低,为了适应所述试纸条4的不同的厚度。
所述试纸卡槽222还包括第一试纸条放置标识2225和第二试纸条放置标识2226,所述第一试纸条放置标识2225与所述第二试纸条放置标识2226位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识2225、所述第二试纸条放置标识2226的两个相近端之间的距离为所述试纸条4的宽度。
所述试纸卡槽222的设置可以快速、精准的将所述试纸条4放放置到所述卡体22中,所述调节板2224的设置可以保持所述试纸条4在所述卡体22中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
所述试纸条4包括基层41,所述基层41为PVC板,所述基层41上依次设有样品垫层42、乳胶层43、硝酸纤维素膜44和吸水层45;所述吸水层45的上方覆盖设有专用标签条46,所述乳胶层43的上方覆盖设有白贴47,所述样品垫层42与所述稀释液加样孔211和所述样本加样孔212相对应;所述硝酸纤维素膜44与所述观测孔213相对应,所述专用标签条46与所述安装标示孔214相对应。
所述样品垫层42包括第一样品垫层421,设置在所述第一样品垫层421上方的第二样品垫层422;所述第一样品垫层421为滤血膜,所述第二样品垫层422为经过样品垫层预处理液处理的垫层。
所述乳胶层43为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜。
所述硝酸纤维素膜44上设有检测线441和质控线442,所述检测线441为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线442为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
本发明的使用方法:
(1)检测
a、从盒体中拿出检测卡2,打开铝箔袋,取出检测卡2,放在台面上。
b、用吸管吸取待检的血清或血浆样本1滴(5μL),全血样本2滴(10μL),加入至有样本稀释液的瓶体3中充分混匀。
c、在检测卡2稀释液加样孔211处加入80μL样本稀释液,15~20分钟时观察结果,20分钟后结果无效。
(2)结果判断
a、阴性:
仅质控线C处出现一条红色条带,在检测线T1、检测线T2处无红色条带出现。阴性结果表明:样本中不含待测抗体;
b、阳性:
1、三条红色条带出现。两条红色条带分别出现于检测线T1、检测线T2处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体;
2、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T1处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A6型IgM抗体;
3、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T2处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A10型IgM抗体;
c、无效:
质控线C处未出现红色条带,表明操作过程不正确或检测卡2已损坏。
实施例二:
一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
一、样本稀释液的制备
将5mg/mL酪蛋白、20mg/mL蔗糖、8.775µg/mL氯化钠和1mg/mL叠氮钠,用20mM缓冲液定容至100mL,调pH值为7.4。
二、样品垫的制备
(1)样品垫预处理液的配制
将0.1mg/mL的兔抗RBC,10g的PEG20000和0.5mg/mL的Tween20,用20mMPBS缓冲液定容至1L,调pH值为7.4。
(2)第二样品垫层的预处理
将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤(1)的样品垫预处理液中,静置5分钟取出,经过干燥处理后封存备用。
(3)第一样品垫层的处理
将购买的滤血膜裁成宽长30cm,宽0.7cm的长条。
三、乳胶层的制备
(1)微球活化
①分别称取1-乙基-3(3-二甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各10mg,分别装于两个干净离心管中。
②取羧基乳胶微球悬浊液1mL,移至干净离心管中,以10000转/分,离心5分钟,小心弃去上清。
③用80µL活化缓冲液洗涤微球,以10000转/分,离心5分钟,小心弃去上清。共洗涤2次。
④在离心管底部轻轻地加80µL活化缓冲液,不必吹打微球。
⑤将离心管置于超声波下,声浴60秒。
⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50mg/mL的溶液。分别取10µLNHS溶液和10µLEDC溶液,加入到乳胶微球悬浊液中,暗室孵浴20分钟。
⑦再以10000转/分,离心5分钟,小心弃去上清。
(2)将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球
①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为100µg/mL的溶液,配500µL。
②用500µL配对缓冲液重悬微球,震荡。
③用500µL配对缓冲液洗涤微球,以10000转/分,离心5分钟,小心弃去上清。共洗涤2次。
④用500µL配对缓冲液重悬微球,震荡。
⑤将之前配好的500µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管。
⑥将离心管置水平振荡器上,室温,暗室,轻轻振荡2小时。
⑦用PBS/BSA洗涤微球2次。
⑧用PBS/BSA重悬微球,如需较长时间保存,可用0.5mg/mL叠氮钠保存。
四、硝酸纤维素膜的制备
(1)包被重组柯萨奇病毒A6型抗原:用pH7.4的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.3mg/mL固相于硝酸纤维素膜44上,形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线。
(2)包被重组柯萨奇病毒A10型抗原:用pH7.4的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.4mg/mL固相于步骤(1)相应的硝酸纤维素膜44上,形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线。
(3)包被羊抗鼠IgG抗体:用pH8.0的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.5mg/mL,并分别喷于所述步骤(2)相应的硝酸纤维素膜44上,形成羊抗鼠IgG抗体质控线442。
五、试纸条的制备
(1)在PVC板(作为支持物)中间位置粘贴硝酸纤维素膜44。
(2)在PVC板上固定硝酸纤维素膜44位置的顶端,粘贴吸水层45,吸水层45覆盖硝酸纤维素膜44边沿约1.0mm。
(3)吸水层45上覆盖专用标签条46。
(4)硝酸纤维素膜44下方粘贴标有乳胶-鼠抗人IgM单克隆抗体的玻璃纤维,乳胶层覆盖硝酸纤维素膜44约1.0mm。
(5)在PVC板底端粘贴第一样品垫层滤血膜,宽度约7.0mm。
(6)在乳胶层下方粘贴第二样品垫层,至PVC板底端,第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0mm。
(7)在硝酸纤维素膜44下方粘贴白贴,至完全覆盖乳胶层,白贴上方覆盖硝酸纤维素膜44约2.0mm。
(8)将上述步骤(7)得到的产品压平整后,在切条机上切成4.0mm宽的试纸条4。
通过医院确诊的手足口病例,分别使用上市的肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体胶体金法试剂盒,和本专利制备的柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒分别检测,对结果进行统计,证明本专利制备试剂盒的有效性。
选择确诊手足口病患儿460例,诊断标准依据《手足口病诊疗指南(2010年版)》。年龄1~5岁,平均(2.18±1.02)岁。
使用上市的胶体金法肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体检测试剂盒,结果如下:
表1柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型例数统计表。
以上结果可以看出,由柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型导致的手足口病例仅有229例,不到总例数的50%。
使用本专利制备的检测试剂盒,结果如下:
表2柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型例数统计表
以上结果可以看出,有柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型导致的手足口病例有205例,且柯萨奇病毒A6型引发的病例数为156例,比例最高,为33.91%。
本专利不局限于上述具体的实施方式,本领域的普通技术人员从上述构思出发,不经过创造性的劳动,所作出的种种变换,均落在本专利的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有第一凹槽,所述第一凹槽放置检测卡,所述盒体内设有第二凹槽,所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体;所述检测卡包括卡盖,与所述卡盖卡接的卡体,以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条;其特征在于:所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔,所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置;所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置,所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。
2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽,所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱;所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起,所述卡体上设有若干圆柱体,所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。
3.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板,两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度;所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板;所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识,所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。
4.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述第一凹槽设有取出槽。
5.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述试纸条包括基层,所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层,所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条,所述乳胶层的上方覆盖设有白贴,所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应;所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应,所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。
6.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述样品垫层包括第一样品垫层,设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层;所述第一样品垫层为滤血膜,所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层;所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜;所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线,所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
7.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:
所述制备方法包括以下步骤:
步骤一、样本稀释液的制备;
步骤二、样品垫层的制备
(1)样品垫层预处理液的配制
(2)第二样品垫层预处理
将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤(1)的样品垫层预处理液中,静置5~8分钟取出,经过干燥处理后封存备用;
(3)第一样品垫层的处理
将购买的滤血膜裁成宽长30cm,宽0.7cm的长条;
步骤三、乳胶层的制备
(1)微球活化;
(2)将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球;
步骤四、硝酸纤维素膜的制备
(1)包被重组柯萨奇病毒A6型抗原:用pH7.2~7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2~0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上,形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线;
(2)包被重组柯萨奇病毒A10型抗原:用pH7.2~7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3~0.5mg/mL固相于步骤(1)相应的硝酸纤维素膜上,形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线;
(3)包被羊抗鼠IgG抗体:用pH8.0~8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4~1.6mg/mL,并分别喷于所述步骤(2)相应的硝酸纤维素膜上,形成羊抗鼠IgG抗体质控线;
五、试纸条的制备
(1)在基层中间位置粘贴硝酸纤维素膜;
(2)在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层,吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0~2.0mm;
(3)吸水层上覆盖专用标签条;
(4)在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层(鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜),乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0~2.0mm;
(5)在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层(滤血膜),宽度约7.0~7.5mm;
(6)在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层,第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面,第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0~2.0mm;
(7)在乳胶层上方粘贴白贴,白贴完全覆盖乳胶层,白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0~3.0mm;
(8)将上述步骤(7)得到的产品压平整后,在切条机上切成3.0~4.0mm宽的试纸条。
8.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述样本稀释液的制备:将3~5mg/mL酪蛋白、15~20mg/mL蔗糖、8~9µg/mL氯化钠和1~1.5mg/mL叠氮钠,用15~25mM缓冲液定容至100mL,调pH值为7.2~7.5。
9.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述样品垫层预处理液的配制:将0.1~0.2mg/mL的兔抗RBC,10~20g的PEG20000和0.3~0.5mg/mL的Tween20,用15~25mMPBS缓冲液定容至1L,调pH值为7.2~7.5。
10.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:
所述步骤三中微球活化的步骤为:
①分别称取1-乙基-3(3-二甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各10mg,分别装于两个干净离心管中;
②取羧基乳胶微球悬浊液1~1.5mL,移至干净离心管中,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清;
③用80~100µL活化缓冲液洗涤微球,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清,共洗涤2次;
④在离心管底部轻轻地加80~100µL活化缓冲液,不必吹打微球;
⑤将离心管置于超声波下,声浴60~70秒;
⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50~60mg/mL的溶液;
分别取10~15µL NHS溶液和10~15µL EDC溶液,加入到乳胶微球悬浊液中,暗室孵浴15~20分钟;
⑦再以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清;
所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为:
①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90~100µg/mL的溶液,配500~600µL;
②用500~600µL配对缓冲液重悬微球,震荡;
③用500~600µL配对缓冲液洗涤微球,以10000~12000转/分,离心5~8分钟,小心弃去上清,共洗涤2次;
④用500~600µL配对缓冲液重悬微球,震荡;
⑤将之前配好的500~600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管;
⑥将离心管置水平振荡器上,室温,暗室,轻轻振荡2小时;
⑦用PBS/BSA洗涤微球2次;
⑧用PBS/BSA重悬微球,如需较长时间保存,可用0.5~0.6mg/mL叠氮钠保存。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117783524A (zh) * | 2024-02-26 | 2024-03-29 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 一种双抗体夹心法间接定量检测柯萨奇a10型病毒抗原的建立与应用 |
Citations (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1632583A (zh) * | 2004-12-30 | 2005-06-29 | 上海美康生物工程有限公司 | 毒品多合一联合检测试剂盒,其制备工艺,及其封闭试剂 |
CN101738474A (zh) * | 2009-12-16 | 2010-06-16 | 杨致亭 | 一种巨细胞病毒、风疹病毒联合检测试剂检测卡 |
CN102043052A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 陈洁 | 毒品两项联检快速检测试剂盒 |
CN102393456A (zh) * | 2011-08-24 | 2012-03-28 | 北京正旦国际科技有限责任公司 | 一种用于检测hps的试剂盒 |
CN102680681A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-09-19 | 北京金豪制药股份有限公司 | 一种i型人类免疫缺陷病毒(hiv-1)新发感染酶免检测试剂盒 |
CN103267839A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-08-28 | 上海快灵生物科技有限公司 | 封闭式的层析试纸塑料卡盒 |
CN203287379U (zh) * | 2013-05-13 | 2013-11-13 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种用于安放试纸条的检测板 |
CN203310838U (zh) * | 2013-06-27 | 2013-11-27 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 甲型肝炎病毒抗体胶体金检测盒 |
CN103789451A (zh) * | 2014-01-12 | 2014-05-14 | 浙江大学 | 一种检测柯萨奇病毒a6、a10型的荧光定量试剂盒 |
CN204008659U (zh) * | 2014-03-20 | 2014-12-10 | 普迈德(北京)科技有限公司 | 一种新型免疫层析装置 |
CN104195264A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 江苏硕世生物科技有限公司 | 一种快速检测柯萨奇病毒a6型/a10型的核酸检测试剂盒及其应用 |
CN105044362A (zh) * | 2015-04-04 | 2015-11-11 | 吉林双正医疗科技有限公司 | 柯萨奇病毒A16和肠道病毒71的IgM抗体联合检测装置及制法 |
CN105424932A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-23 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 一种同时定量检测saa/pct/crp的检测装置 |
CN105866422A (zh) * | 2015-02-09 | 2016-08-17 | 厦门大学 | 用于评估机体发生人巨细胞病毒活动性感染风险的方法及相关的试剂盒 |
CN106046124A (zh) * | 2016-07-19 | 2016-10-26 | 兰州雅华生物技术有限公司 | 一种柯萨奇病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测柯萨奇病毒抗体的快速检测试剂盒 |
CN206618762U (zh) * | 2017-03-30 | 2017-11-07 | 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 | 一种人全血中n端脑钠肽前体免疫层析定量检测试纸条 |
CN107870234A (zh) * | 2017-10-19 | 2018-04-03 | 施康培医疗科技(武汉)有限公司 | 一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法 |
CN107881257A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-06 | 杨兴林 | 柯萨奇病毒a6型和a10型联合检测试剂盒及其应用 |
CN108061727A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-05-22 | 施康培医疗科技(武汉)有限公司 | 一种甲状腺球蛋白定量检测试纸条及其制备方法 |
CN207894939U (zh) * | 2018-02-09 | 2018-09-21 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 一种免疫层析试剂卡 |
CN108761103A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 一种检测叶酸的免疫荧光法试剂盒 |
CN208520880U (zh) * | 2018-05-10 | 2019-02-19 | 德康润生物科技(北京)有限公司 | 检测amh的试纸条和检测装置 |
-
2019
- 2019-04-09 CN CN201910278264.6A patent/CN109856408A/zh active Pending
Patent Citations (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1632583A (zh) * | 2004-12-30 | 2005-06-29 | 上海美康生物工程有限公司 | 毒品多合一联合检测试剂盒,其制备工艺,及其封闭试剂 |
CN102043052A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 陈洁 | 毒品两项联检快速检测试剂盒 |
CN101738474A (zh) * | 2009-12-16 | 2010-06-16 | 杨致亭 | 一种巨细胞病毒、风疹病毒联合检测试剂检测卡 |
CN102393456A (zh) * | 2011-08-24 | 2012-03-28 | 北京正旦国际科技有限责任公司 | 一种用于检测hps的试剂盒 |
CN102680681A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-09-19 | 北京金豪制药股份有限公司 | 一种i型人类免疫缺陷病毒(hiv-1)新发感染酶免检测试剂盒 |
CN103267839A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-08-28 | 上海快灵生物科技有限公司 | 封闭式的层析试纸塑料卡盒 |
CN203287379U (zh) * | 2013-05-13 | 2013-11-13 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种用于安放试纸条的检测板 |
CN203310838U (zh) * | 2013-06-27 | 2013-11-27 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 甲型肝炎病毒抗体胶体金检测盒 |
CN103789451A (zh) * | 2014-01-12 | 2014-05-14 | 浙江大学 | 一种检测柯萨奇病毒a6、a10型的荧光定量试剂盒 |
CN204008659U (zh) * | 2014-03-20 | 2014-12-10 | 普迈德(北京)科技有限公司 | 一种新型免疫层析装置 |
CN104195264A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-12-10 | 江苏硕世生物科技有限公司 | 一种快速检测柯萨奇病毒a6型/a10型的核酸检测试剂盒及其应用 |
CN105866422A (zh) * | 2015-02-09 | 2016-08-17 | 厦门大学 | 用于评估机体发生人巨细胞病毒活动性感染风险的方法及相关的试剂盒 |
CN105044362A (zh) * | 2015-04-04 | 2015-11-11 | 吉林双正医疗科技有限公司 | 柯萨奇病毒A16和肠道病毒71的IgM抗体联合检测装置及制法 |
CN105424932A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-23 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 一种同时定量检测saa/pct/crp的检测装置 |
CN106046124A (zh) * | 2016-07-19 | 2016-10-26 | 兰州雅华生物技术有限公司 | 一种柯萨奇病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测柯萨奇病毒抗体的快速检测试剂盒 |
CN206618762U (zh) * | 2017-03-30 | 2017-11-07 | 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 | 一种人全血中n端脑钠肽前体免疫层析定量检测试纸条 |
CN107870234A (zh) * | 2017-10-19 | 2018-04-03 | 施康培医疗科技(武汉)有限公司 | 一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法 |
CN107881257A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-06 | 杨兴林 | 柯萨奇病毒a6型和a10型联合检测试剂盒及其应用 |
CN108061727A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-05-22 | 施康培医疗科技(武汉)有限公司 | 一种甲状腺球蛋白定量检测试纸条及其制备方法 |
CN207894939U (zh) * | 2018-02-09 | 2018-09-21 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 一种免疫层析试剂卡 |
CN208520880U (zh) * | 2018-05-10 | 2019-02-19 | 德康润生物科技(北京)有限公司 | 检测amh的试纸条和检测装置 |
CN108761103A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 一种检测叶酸的免疫荧光法试剂盒 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117783524A (zh) * | 2024-02-26 | 2024-03-29 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 一种双抗体夹心法间接定量检测柯萨奇a10型病毒抗原的建立与应用 |
CN117783524B (zh) * | 2024-02-26 | 2024-05-03 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 一种双抗体夹心法间接定量检测柯萨奇a10型病毒抗原的建立与应用 |
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