CN209656716U - 一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒 - Google Patents
一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型公开了一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒,可以方便一起携带检测卡和样本稀释液,且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中,所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条,可以重复利用,既节约成本,也符合环保的要求;所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
Description
技术领域
本实用新型涉及体外诊断技术领域。
具体地说,是涉及一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒。
背景技术
手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种婴幼儿人群常见的急性传染病,是以发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡为临床表现的传染性疾病,多发于5岁以下儿童。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状的严重并发症,严重者可导致死亡。自2008年我国HFMD大流行后,HFMD已成为我国严重的公共卫生问题之一。截至2018年4月,全国已报道HFMD发病1644.8万例,婴幼儿死亡3545例。
近年来,中国大陆地区引起手足口病的主要病原体是肠道病毒71(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)。然而,自2008年开始,柯萨奇病毒A6(CoxA6)在部分地区逐渐出现并成为引发手足口病暴发流行的优势菌株。CoxA6和CoxA10均属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为二十面立体结构的球形或卵圆形,直径22~30nm,呈圆形颗粒状。
自2008年在新加坡的暴发流行,CoxA6和CoxA10成为手足口病的主要致病血清型,共占该病的35.3%。2010年中国台湾和日本手足口病大暴发的主要病原是CoxA6。2012年印度手足口病的主要病原是CoxA6和CoxA16,而EV71和CoxA10则次之。2013年以前,中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CoxA16为主,CoxA6和CoxA10次之。2013年以后,CoxA6和CoxA10相关的手足口病的比例逐渐上升,成为国内手足口病感染的优势病原体。
目前,我国的手足口病病原诊断市场,仍然以检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型为主,也出现了检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒,如专利《一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒》,专利号(201410012004.1)。虽然聚合酶链反应(PCR)检测快速、特异性和敏感性高,但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求比较高,存在着技术条件要求高、操作复杂、不易普及的问题,一般基层实验室难以开展,且价格也相对较高。同时,由于手足口病的易感人群为5岁以下儿童,检测抗原需要取咽拭子,检测抗体需取全血,对于幼儿来说,明显取指尖血更易操作,但指尖取血量最多不超过40µL。因此,对IgM抗体检测试剂盒的要求必须灵敏度高、取血量少。由于乳胶颗粒粒径大可提高灵敏度,对样品垫处理以过滤红细胞实现全血检测,同时样本稀释液中加入消除假阳成分,最终设计开发出一种特异针对柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的快速检测试剂。
实用新型内容
本实用新型的目的在于克服上述传统技术的不足之处,提供一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒。
本实用新型的目的是通过以下技术措施来达到的:一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有第一凹槽,所述第一凹槽放置检测卡,所述盒体内设有第二凹槽,所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体;所述检测卡包括卡盖,与所述卡盖卡接的卡体,以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条;其特征在于:所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔,所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置,所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置,所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。
作为一种改进,所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽,所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱。
作为进一步的改进,所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起,所述卡体上设有若干圆柱体,所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。
作为进一步的改进,所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板,两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度;所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板。
作为进一步的改进,所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识,所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。
作为进一步的改进,所述试纸条包括基层,所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层,所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条,所述乳胶层的上方覆盖设有白贴,所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应;所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应,所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。
作为进一步的改进,所述样品垫层包括第一样品垫层,设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层;所述第一样品垫层为滤血膜,所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。
作为进一步的改进,所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜。
作为进一步的改进,所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线,所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
由于采用了上述技术方案,与现有技术相比,本实用新型的优点是:
1、本实用新型可以方便一起携带检测卡和样本稀释液,且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中,所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条,可以重复利用,既节约成本,也符合环保的要求;所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
2、本实用新型提供的第一样品垫层为滤血膜,滤血膜表面凹凸不平,通过物理吸附作用滞留红细胞;再经过第二样品垫层,其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体,可与人红细胞特异结合,进一步消除全血样本中的红细胞,实现了全血样本的检测。
3、本实用新型提供乳胶层标记鼠抗人IgM单克隆抗体,乳胶颗粒比胶体金颗粒平均粒径大10倍,与蛋白结合吸附的能力强,吸附血样中抗体的效果好,显色更明显,提高了检测灵敏度,使得血样用量少,只需要10µL全血即可进行检测,完全可以对婴幼儿采取指尖采血方式进行检测,解决婴幼儿采血难的问题,具有重要的医学实践意义。
4、本实用新型使用全血即可进行检测,无需对血液进行血清和血浆分离处理,方便、快捷、直观,不需特殊仪器也不需专业培训,按说明书即可完成操作,全过程只需20分钟,降低了使用成本,适合医院等基层单位。
下面结合附图和具体实施方式对本实用新型作进一步说明。
附图说明
附图1是本实用新型的结构示意图。
附图2是本实用新型所述检测卡的结构示意图。
附图3是本实用新型所述卡盖的结构示意图。
附图4是本实用新型所述卡体的结构示意图。
附图5是附图4A-A向剖视图。
附图6是本实用新型所述试纸条的结构示意图。
附图7是附图6中B-B向剖视图。
1-盒体;11-第一凹槽;12-第二凹槽;13-取出槽;2-检测卡;21-卡盖;211-稀释液加样孔;212-样本加样孔;213-观测孔;214-安装标示孔;215-第一卡接装置;2151-卡接凹槽;2152-卡接圆柱;22-卡体;221-第二卡接装置;2211-卡接凸起;2212-圆柱体;2213-圆柱凹槽;222-试纸卡槽;2221-第一试纸条限位板;2222-第二试纸条限位板;2223-固定挡板;2224-调节板;2225-第一试纸条放置标识;2226-第二试纸条放置标识;3-瓶体;4-试纸条;41-基层;42-样品垫层;421-第一样品垫层;422-第二样品垫层;43-乳胶层;44-硝酸纤维素膜;441-检测线;442-质控线;45-吸水层;46-专用标签条;47-白贴。
具体实施方式
实施例:如附图1-附图7所示,一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体1,所述盒体1内设有第一凹槽11,所述第一凹槽11放置检测卡2,所述盒体1内设有第二凹槽12,所述第二凹槽12放置样本稀释液的瓶体3,所述第一凹槽11上设有取出槽13;所述取出槽13的设置可以方便所述检测卡2的取出。
所述检测卡2包括卡盖21,与所述卡盖21卡接的卡体22,以及能更换的位于所述卡盖21与所述卡体22之间的试纸条4;所述卡盖21上依次设有稀释液加样孔211、样本加样孔212、观测孔213和安装标示孔214,所述卡盖21上设有与所述卡体22卡接的第一卡接装置215;所述卡体22上设有与所述第一卡接装置215卡接的第二卡接装置221,所述卡体22上还设有放置所述试纸条4的试纸卡槽222。
所述第一卡接装置215包括所述卡盖21周边与所述卡体22接触的一面设有卡接凹槽2151,所述卡盖21内朝向所述卡体22的一面设有若干卡接圆柱2152。
所述第二卡接装置221包括所述卡体22周边朝向所述卡盖21的一面上设有与所述卡接凹槽2151配合的卡接凸起2211,所述卡体22上设有若干圆柱体2212,所述圆柱体2212内设有与所述卡接圆柱2152配合的圆柱凹槽2213。
所述卡接圆柱2152插入所述圆柱凹槽2213中,所述卡接凸起2211卡入所述卡接凹槽2151中,将所述卡盖21与所述卡体22卡接为一体,所述第一卡接装置215与所述第二卡接装置221的设置可以方便快速的打开所述卡盖21与所述卡体22,方便更换所述试纸条4。
所述试纸卡槽222包括第一试纸条限位板2221和第二试纸条限位板2222,所述第一试纸条限位板2221与所述第二试纸条限位板2222之间的距离为所述试纸条4的宽度,所述第一试纸条限位板2221与所述第二试纸条限位板2222的两端分别设有固定挡板2223,两所述固定挡板2223之间的距离为所述试纸条4的长度;所述试纸卡槽222还包括若干保持所述试纸条4水平的调节板2224。第一试纸条限位板2221和第二试纸条限位板2222的高度逐渐降低,为了适应所述试纸条4的不同的厚度。
所述试纸卡槽222还包括第一试纸条放置标识2225和第二试纸条放置标识2226,所述第一试纸条放置标识2225与所述第二试纸条放置标识2226位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识2225、所述第二试纸条放置标识2226的两个相近端之间的距离为所述试纸条4的宽度。
所述试纸卡槽222的设置可以快速、精准的将所述试纸条4放放置到所述卡体22中,所述调节板2224的设置可以保持所述试纸条4在所述卡体22中水平,有利于全血更好的爬升、层析。
所述试纸条4包括基层41,所述基层41为PVC板,所述基层41上依次设有样品垫层42、乳胶层43、硝酸纤维素膜44和吸水层45;所述吸水层45的上方覆盖设有专用标签条46,所述乳胶层43的上方覆盖设有白贴47,所述样品垫层42与所述稀释液加样孔211和所述样本加样孔212相对应;所述硝酸纤维素膜44与所述观测孔213相对应,所述专用标签条46与所述安装标示孔214相对应。
所述样品垫层42包括第一样品垫层421,设置在所述第一样品垫层421上方的第二样品垫层422;所述第一样品垫层421为滤血膜,所述第二样品垫层422为经过样品垫层预处理液处理的垫层。
所述乳胶层43为固相有鼠抗人鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜。
所述硝酸纤维素膜44上设有检测线441和质控线442,所述检测线441为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线442为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
本新型中,所述样本稀释液为酪蛋白、蔗糖、叠氮钠、氯化钠和15-25mM的磷酸盐缓冲液配制的pH为7.2~7.5的样本稀释液。
所述样品垫层预处理液为兔抗人红细胞多克隆抗体(兔抗RBC)、聚乙二醇20000(PEG20000)、吐温20(Tween20)和15~25mM的磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)配制的pH为7.2~7.5的预处理液。
本实用新型使用方法:
(1)检测
a、从盒体1中拿出检测卡2,打开铝箔袋,取出检测卡2,放在台面上。
b、用吸管吸取待检的血清或血浆样本1滴(5μL),全血样本2滴(10μL),加入至有样本稀释液的瓶体3中充分混匀。
c、在检测卡2稀释液加样孔211处加入80μL样本稀释液,15~20分钟时通过所述观测孔213观察结果,20分钟后结果无效。
(2)结果判断
a、阴性:
仅质控线C处出现一条红色条带,在检测线T1、检测线T2处无红色条带出现。阴性结果表明:样本中不含待测抗体。
b、阳性:
1、三条红色条带出现。两条红色条带分别出现于检测线T1、检测线T2处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体。
2、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T1处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A6型IgM抗体。
3、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T2处,另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明:样本中同时含有柯萨奇病毒A10型IgM抗体。
c、无效:
质控线C处未出现红色条带,表明操作过程不正确或检测卡2已损坏。
通过医院确诊的手足口病例,分别使用上市的肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体胶体金法试剂盒,和本专利制备的柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒分别检测,对结果进行统计,证明本专利制备试剂盒的有效性。
选择确诊手足口病患儿460例,诊断标准依据《手足口病诊疗指南(2010年版)》。年龄1~5岁,平均(2.18±1.02)岁。
使用上市的胶体金法肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体检测试剂盒,结果如下:
表1柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型例数统计表。
以上结果可以看出,由柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型导致的手足口病例仅有229例,不到总例数的50%。
使用本专利制备的检测试剂盒,结果如下:
表2柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型例数统计表。
以上结果可以看出,有柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型导致的手足口病例有205例,且柯萨奇病毒A6型引发的病例数为156例,比例最高,为33.91%。
本专利不局限于上述具体的实施方式,本领域的普通技术人员从上述构思出发,不经过创造性的劳动,所作出的种种变换,均落在本专利的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有第一凹槽,所述第一凹槽放置检测卡,所述盒体内设有第二凹槽,所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体;所述检测卡包括卡盖,与所述卡盖卡接的卡体,以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条;其特征在于:所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔,所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置;所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置,所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。
2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽,所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱。
3.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起,所述卡体上设有若干圆柱体,所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。
4.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度,所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板,两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度;所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板。
5.如权利要求4所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识,所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上,且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。
6.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述第一凹槽设有取出槽。
7.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述试纸条包括基层,所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层,所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条,所述乳胶层的上方覆盖设有白贴,所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应;所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应,所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。
8.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述样品垫层包括第一样品垫层,设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层;所述第一样品垫层为滤血膜,所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。
9.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜。
10.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒,其特征在于:所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线,所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2;所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。
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