CN109917140A - 一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试剂条及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法，第一样品垫层为滤血膜，滤血膜表面凹凸不平，通过物理吸附作用滞留红细胞；再经过第二样品垫层，其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体，可与人红细胞特异结合，进一步消除全血样本中的红细胞，实现了全血样本的检测。

Description

一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试剂条及其 制备方法

技术领域

发明涉及体外诊断技术领域。

具体地说，是涉及一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法。

背景技术

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是一种婴幼儿人群常见的急性传染病，是以发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡为临床表现的传染性疾病，多发于５岁以下儿童。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状的严重并发症，严重者可导致死亡。自2008年我国HFMD大流行后，HFMD已成为我国严重的公共卫生问题之一。截至2018年4月，全国已报道HFMD发病1644.8万例，婴幼儿死亡3545例。

近年来，中国大陆地区引起手足口病的主要病原体是肠道病毒71(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)。然而，自2008年开始，柯萨奇病毒A6(CoxA6)在部分地区逐渐出现并成为引发手足口病暴发流行的优势菌株。CoxA6和CoxA10均属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为二十面立体结构的球形或卵圆形，直径22～30nm，呈圆形颗粒状。

自2008年在新加坡的暴发流行，CoxA6和CoxA10成为手足口病的主要致病血清型，共占该病的35.3%。2010年中国台湾和日本手足口病大暴发的主要病原是CoxA6。2012年印度手足口病的主要病原是CoxA6和CoxA16，而EV71和CoxA10则次之。2013年以前，中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CoxA16为主，CoxA6和CoxA10次之。2013年以后，CoxA6和CoxA10相关的手足口病的比例逐渐上升，成为国内手足口病感染的优势病原体。

目前，我国的手足口病病原诊断市场，仍然以检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型为主，也出现了检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，如专利《一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒》，专利号（201410012004.1）。虽然聚合酶链反应（PCR）检测快速、特异性和敏感性高，但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求比较高，存在着技术条件要求高、操作复杂、不易普及的问题，一般基层实验室难以开展，且价格也相对较高。同时，由于手足口病的易感人群为5岁以下儿童，检测抗原需要取咽拭子，检测抗体需取全血，对于幼儿来说，明显取指尖血更易操作，但指尖取血量最多不超过40µL。因此，对IgM抗体检测试剂盒的要求必须灵敏度高、取血量少。由于乳胶颗粒粒径大可提高灵敏度，对样品垫处理以过滤红细胞实现全血检测，同时样本稀释液中加入消除假阳成分，最终设计开发出一种特异针对柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的快速检测试剂。

发明内容

发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种能同时检测柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体，检测灵敏度高、全血用量少，满足幼儿快速检测需要的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法。

发明的目的是通过以下技术措施来达到的：一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，所述试纸条包括基层，其特征在于：所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；且所述乳胶层的上方覆盖设有白贴。

作为一种改进，所述样品垫层包括固定在所述基层上的第一样品垫层，所述第一样品垫层为滤血膜；固定在所述基层上且覆盖在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第二样品垫层的面积大于所述第一样品垫层的面积，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。

作为进一步的改进，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。

作为进一步的改进，所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条。

本发明的另一个目的是：一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

步骤一：在基层中间位置粘贴硝酸纤维素膜；

步骤二：在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层，吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0～2.0mm；

步骤三：吸水层上覆盖专用标签条；

步骤四：在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层，乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0～2.0mm；

步骤五：在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层，宽度约7.0～7.5mm；

步骤六：在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层，第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面，第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0～2.0mm；

步骤七：在乳胶层上方粘贴白贴，白贴完全覆盖乳胶层，白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0～3.0mm；

步骤八：将上述步骤七得到的产品压平整后，在切条机上切成3.0～4.0mm宽的试纸条。

作为一种改进，所述步骤一中硝酸纤维素膜的制备步骤如下：

（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；

（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3～0.5mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线；

（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线。

作为进一步的改进，步骤四中乳胶层的制备方法如下：

（1）微球活化；

（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球。

作为进一步的改进，所述微球活化步骤为：

①分别称取1-乙基-3（3-二甲氨丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）各10mg，分别装于两个干净离心管中；

②取羧基乳胶微球悬浊液1～1.5mL，移至干净离心管中，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清；

③用80～100µL活化缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次；

④在离心管底部轻轻地加80～100µL活化缓冲液，不必吹打微球；

⑤将离心管置于超声波下，声浴60～70秒；

⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50～60mg/mL的溶液，分别取10～15µL NHS溶液和10～15µL EDC溶液，加入到乳胶微球悬浊液中，暗室孵浴15～20分钟；

⑦再以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清。

作为进一步的改进，所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为：

①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90～100µg/mL的溶液，配500～600µL；

②用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡；

③用500～600µL配对缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次；

④用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡；

⑤将之前配好的500～600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管；

⑥将离心管置水平振荡器上，室温，暗室，轻轻振荡2小时；

⑦用PBS/BSA洗涤微球2次；

⑧用PBS/BSA重悬微球，如需较长时间保存，可用0.5～0.6mg/mL叠氮钠保存。

作为进一步的改进，所述步骤五、步骤六中第一样品垫层与第二样品垫层的制备方法如下：

（1）样品垫层预处理液的配制；将0.1～0.2mg/mL的兔抗RBC，10～20g的PEG20000和0.3～0.5mg/mL的Tween20，用15～25mMPBS缓冲液定容至1L，调pH值为7.2～7.5；

（2）第二样品垫层的预处理：将裁切好的玻璃纤维至浸泡于上述制作的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；

（3）第一样品垫层（滤血膜）的处理：将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，发明的优点是：

1、本发明提供的第一样品垫层为滤血膜，滤血膜表面凹凸不平，通过物理吸附作用滞留红细胞；再经过第二样品垫层，其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体，可与人红细胞特异结合，进一步消除全血样本中的红细胞，实现了全血样本的检测。

2、本发明提供乳胶颗粒标记鼠抗人IgM单克隆抗体，乳胶颗粒比胶体金颗粒平均粒径大10倍，与蛋白结合吸附的能力强，吸附血样中抗体的效果好，显色更明显，提高了检测灵敏度，使得血样用量少，只需要10µL全血即可进行检测，完全可以对婴幼儿采取指尖采血方式进行检测，解决婴幼儿采血难的问题，具有重要的医学实践意义。

3、本发明使用全血即可进行检测，无需对血液进行血清和血浆分离处理，方便、快捷、直观，不需特殊仪器也不需专业培训，按说明书即可完成操作，全过程只需20分钟，降低了使用成本，适合医院等基层单位。

下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步说明。

附图说明

附图1是本发明所述试纸条的结构示意图。

附图2是附图1中A-A向剖视图。

1-试纸条；11-基层；12-样品垫层；121-第一样品垫层；122-第二样品垫层；13-乳胶层；14-硝酸纤维素膜；141-检测线；142-质控线；15-吸水层；16-专用标签条；17-白贴。

具体实施方式

实施例一：如附图1-附图2所示，一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，所述试纸条1包括基层11，所述基层11上依次设有样品垫层12、乳胶层13、硝酸纤维素膜14和吸水层15；且所述乳胶层13的上方覆盖设有白贴17；所述吸水层15的上方覆盖设有专用标签条16。

所述乳胶层13为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜。

所述样品垫层12包括固定在所述基层11上的第一样品垫层121，所述第一样品垫层121为滤血膜；固定在所述基层11上且覆盖在所述第一样品垫层121上方的第二样品垫层122；所述第二样品垫层122的面积大于所述第一样品垫层121的面积，所述第二样品垫层122为经过样品垫层预处理液处理的垫层。

所述硝酸纤维素膜14上设有检测线141和质控线142，所述检测线141为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线142为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。

实施例二：

一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，

所述制备方法包括以下步骤：

步骤一：在基层11中间位置粘贴硝酸纤维素膜14；

步骤二：在基层11上固定硝酸纤维素膜14的一端粘贴吸水层15，吸水层15覆盖硝酸纤维素膜14边沿约1.0mm；

步骤三：吸水层15上覆盖专用标签条16；

步骤四：在基层11上硝酸纤维素膜14的另一端粘贴乳胶层13，乳胶层13覆盖硝酸纤维素膜14约1.0mm；

步骤五：在基层11靠近端面的位置粘贴第一样品垫层121，宽度约7.0mm；

步骤六：在基层11上乳胶层13的自由端粘贴第二样品垫层122，第二样品垫层122覆盖第一样品垫层121并延伸至基层11的端面，第二样品垫层122覆盖乳胶层13约1.0mm；

步骤七：在乳胶层13上方粘贴白贴17，白贴17完全覆盖乳胶层13，白贴17一端覆盖硝酸纤维素膜14约2.0mm；

步骤八：将上述步骤七得到的产品压平整后，在切条机上切成4.0mm宽的试纸条1。

步骤一中所述硝酸纤维素膜14的制备步骤如下：

（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.4的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.3mg/mL固相于硝酸纤维素膜14上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线T1；

（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.4的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.4mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜14上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线T2；

（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.5mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜14上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线C。

步骤四中乳胶层13的制备方法如下：

（1）微球活化；

①分别称取1-乙基-3（3-二甲氨丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）各10mg，分别装于两个干净离心管中。

②取羧基乳胶微球悬浊液1mL，移至干净离心管中，以10000转/分，离心5分钟，小心弃去上清。

③用80µL活化缓冲液洗涤微球，以10000转/分，离心5分钟，小心弃去上清。共洗涤2次。

④在离心管底部轻轻地加80µL活化缓冲液，不必吹打微球。

⑤将离心管置于超声波下，声浴60秒。

⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50mg/mL的溶液。分别取10µL NHS溶液和10µL EDC溶液，加入到乳胶微球悬浊液中，暗室孵浴20分钟。

⑦再以10000转/分，离心5分钟，小心弃去上清。

（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球

①用配对缓冲液将抗人鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为100µg/mL的溶液，配500µL。

②用500µL配对缓冲液重悬微球，震荡。

③用500µL配对缓冲液洗涤微球，以10000转/分，离心5分钟，小心弃去上清。共洗涤2次。

④用500µL配对缓冲液重悬微球，震荡。

⑤将之前配好的500µL抗人鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管。

⑥将离心管置水平振荡器上，室温，暗室，轻轻振荡2小时。

⑦用PBS/BSA洗涤微球2次。

⑧用PBS/BSA重悬微球，如需较长时间保存，可用0.5mg/mL叠氮钠保存。

所述步骤五、步骤六中第一样品垫层121与第二样品垫层122的制备方法如下：

（1）样品垫层预处理液的配制：将0.1mg/mL 的兔抗RBC，10g的PEG20000和0.5 mg/mL的Tween20，用20mM PBS缓冲液定容至1L，调pH值为7.4。

（2）第二样品垫层122的预处理：将裁切好的玻璃纤维至浸泡于上述制作的样品垫层预处理液中，静置5分钟取出，经过干燥处理后封存备用；

（3）第一样品垫层121（滤血膜）的处理：将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条。

本发明使用时的结果判断如下：

a、阴性：

仅质控线C处出现一条红色条带，在检测线T1、检测线T2处无红色条带出现。阴性结果表明：样本中不含待测抗体；

b、阳性：

1、三条红色条带出现。两条红色条带分别出现于检测线T1、检测线T2处，另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明：样本中同时含有柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体；

2、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T1处，另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明：样本中同时含有柯萨奇病毒A6型IgM抗体；

3、两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测线T2处，另一条红色条带出现于质控线C处。阳性结果表明：样本中同时含有柯萨奇病毒A10型IgM抗体；

c、无效：

质控线C处未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。

通过医院确诊的手足口病例，分别使用上市的肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体胶体金法试剂条，和本专利制备的柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试纸条分别检测，对结果进行统计，证明本专利制备试纸条的有效性。

选择确诊手足口病患儿460例，诊断标准依据《手足口病诊疗指南（2010年版）》。年龄1～5岁，平均（2.18±1.02）岁。

使用上市的胶体金法肠道病毒71型IgM抗体、柯萨奇病毒A16型IgM抗体检测试剂条，结果如下：

表1柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型例数统计表。

以上结果可以看出，由柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型导致的手足口病例仅有229例，不到总例数的50%。

使用本专利制备的试纸条，结果如下：

表2柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型例数统计表。

以上结果可以看出，有柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型导致的手足口病例有205例，且柯萨奇病毒A6型引发的病例数为156例，比例最高，为33.91%。

本专利不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本专利的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，所述试纸条包括基层，其特征在于：所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；且所述乳胶层的上方覆盖设有白贴。

2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述样品垫层包括固定在所述基层上的第一样品垫层，所述第一样品垫层为滤血膜；固定在所述基层上且覆盖在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第二样品垫层的面积大于所述第一样品垫层的面积，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。

3.如权利要求1或2所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。

4.如权利要求3所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条。

5.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

步骤一：在基层中间位置粘贴硝酸纤维素膜；

步骤二：在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层，吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0～2.0mm；

步骤三：吸水层上覆盖专用标签条；

步骤四：在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层，乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0～2.0mm；

步骤五：在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层，宽度约7.0～7.5mm；

步骤六：在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层，第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面，第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0～2.0mm；

步骤七：在乳胶层上方粘贴白贴，白贴完全覆盖乳胶层，白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0～3.0mm；

步骤八：将上述步骤七得到的产品压平整后，在切条机上切成3.0～4.0mm宽的试纸条。

6.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：

所述步骤一中硝酸纤维素膜的制备步骤如下：

（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；

（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3～0.5mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线；

（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线。

7.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：

步骤四中乳胶层的制备方法如下：

（1）微球活化；

（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球。

8.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述微球活化步骤为：

①分别称取1-乙基-3（3-二甲氨丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）各10mg，分别装于两个干净离心管中；

②取羧基乳胶微球悬浊液1～1.5mL，移至干净离心管中，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清；

③用80～100µL活化缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次；

④在离心管底部轻轻地加80～100µL活化缓冲液，不必吹打微球；

⑤将离心管置于超声波下，声浴60～70秒；

⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50～60mg/mL的溶液，分别取10～15µL NHS溶液和10～15µL EDC溶液，加入到乳胶微球悬浊液中，暗室孵浴15～20分钟；

⑦再以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清。

9.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为：

①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90～100µg/mL的溶液，配500～600µL；

②用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡；

③用500～600µL配对缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次；

④用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡；

⑤将之前配好的500～600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管；

⑥将离心管置水平振荡器上，室温，暗室，轻轻振荡2小时；

⑦用PBS/BSA洗涤微球2次；

⑧用PBS/BSA重悬微球，如需较长时间保存，可用0.5～0.6mg/mL叠氮钠保存。

10.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤五、步骤六中第一样品垫层与第二样品垫层的制备方法如下：

（1）样品垫层预处理液的配制；将0.1～0.2mg/mL的兔抗RBC，10～20g的PEG20000和0.3～0.5mg/mL的Tween20，用15～25mMPBS缓冲液定容至1L，调pH值为7.2～7.5；

（2）第二样品垫层的预处理：将裁切好的玻璃纤维至浸泡于上述制作的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；

（3）第一样品垫层（滤血膜）的处理：将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条。