CN112763730A - 一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法，本发明提供的胶体金免疫层析微量全血检测试纸在前端加样，有别于传统的后端加样技术，同时在前端硝酸纤维素膜上增加微量全血滤膜，加微量全血后，微量全血通过处理的全血滤膜，血清渗入到硝酸纤维素膜上，红细胞等滞留在全血滤膜上，起到快速分离红细胞的作用，本发明试纸拓宽了微量全血的使用范围和检测效果，同时对血清、血浆亦可使用；本发明方法采集末梢血非常容易，创伤小，供血者的体验也轻松，检测方法简便快速且结果准确可靠。

Description

一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法
技术领域
本发明属于检疫检验测试领域，具体涉及一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法。
背景技术
免疫胶体金技术的基本原理是：氯金酸在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成疏水胶体溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。其吸附原理一般认为由于金颗粒表面的负电荷与蛋白质的正电荷基团之间的静电作用-非共价键的范德华引力而相互吸收，而且这种静电引力较小而一般不影响蛋白质的活性。
用化学还原法可以方便地制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与单克隆抗体、多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白、多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床检测中成为非常有用的工具。疫胶体金技术与放射免疫和酶联免疫相比有着许多优越性。首先，它不需要酶联免疫法中所要求的底物，因而可省去一些操作步骤，如洗涤、终止等，使操作简单化；其次，胶体金无污染，不会危害操作者、以及污染环境，而这些问题在酶免疫法与放免法中常遇到；再次胶体金检测试剂通常室温储存相当稳定，即该类制品储存条件温和，效期远长于酶免法和放免法；此外胶体金技术还具有检测迅速、不需要复杂仪器设备、产物显色永久等优点。
在传统的检测过程中，血样的检测样本往往在50μL以上，如采用末梢血取50μL及以上，往往挤压末梢部位造成采样人的痛苦。而采用抽取静脉血，则需要专业的护士，相对末梢血的取样创伤性和可操作性都有所增加。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，它由PVC底板、玻璃纤维素膜、金结合垫、T线、C线、硝酸纤维素膜、微量全血滤膜和吸水纸组成，所述玻璃纤维素膜位于PVC底板的左侧，吸水纸位于PVC底板的右侧，硝酸纤维素膜位于PVC底板上，金结合垫的右侧位于硝酸纤维素膜上表面的左侧，金结合垫的左侧延伸到玻璃纤维素膜的右下方，吸水纸的左侧位于硝酸纤维素膜上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜的上表面从左到右依次设置有T线和C线，硝酸纤维素膜上设置有微量全血滤膜，微量全血滤膜位于金结合垫和T线之间且左侧延伸至金结合垫的右下方，微量全血滤膜是采用以下处理液处理的孔径为4-8μm无背衬的硝酸纤维素膜，所述处理液包括下述重量份的原料：磷酸氢二钠：0.29-1.16，磷酸二氢钾：0.026-0.104，氯化钠：1.5-6；表面活性剂S9：0.25-1。
进一步地，所述微量全血滤膜(8)为Millipore135型号。
进一步地，所述C线使用1-2mg/mL的鼠抗人二抗划线。
进一步地，所述微量全血滤膜采用以下方法处理：
S1.称量：按上述配方比例称取各原料，并将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾均分为两份，备用；
S2.制备处理液：包括处理液1的制备和处理液2的制备；
处理液1的制备：PB溶液中加入氯化钠和表面活性剂S9并混合均匀；
处理液2的制备：取磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制成PB溶液；
S3.处理：先取处理液1浸润滤膜，然后将处理液1处理的滤膜平铺在玻璃底板上放置在烘箱中烘干；处理液2将抗人红细胞抗体稀释至0.2mg/mL，再次浸润处理液1处理后的滤膜，及时用鼓风干燥箱烘干；
S4.后处理：将烘干的滤膜加玻璃板压4h以上，使用时裁剪成1cm宽的长条，小心取下后组装在试纸条上。
进一步地，步骤S3中所述的烘干温度为35-42℃。
一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸的检测方法，它包括以下步骤：
S1.取全血、血清或血浆，加入到微量全血检测试纸的微量全血滤膜上，其中，全血4-5μL，血清或血浆2-3μL；
S2.从微量全血检测试纸的后端滴加缓冲液，由缓冲液推动从金标结合垫释放的胶体金、渗入到硝酸纤维素膜上的血清向吸水纸方向移动，红细胞滞留在微量全血滤膜上不移动；
S3.若含有被测物质，则显示阳性，若不含被测物质，则显示阴性。
本发明微量全血检测试纸的检测原理为：当全血加入到微量全血滤膜上，血细胞滞留在微量全血滤膜，其他可透过全血滤膜的液体渗入到硝酸纤维素膜上；再滴加缓冲液后，由缓冲液推动从金标结合垫释放的胶体金、渗入到硝酸纤维素膜上的血清向吸水纸方向移动，红细胞滞留在微量全血滤膜上不移动，含有被测物质(如：TB-SA抗体)，则显示阳性(T线和C线均显线)，如不含被测物质(如：TB-SA抗体)，则显示阴性(T线不显线和C线显线)；如果加入的是血清或血浆，在微量全血滤膜上直接加入2-3μL，随着缓冲液的加入，渗入到硝酸纤维素膜上的血清或血浆随之移动，检测结果同滴加全血的相同。
本发明具有以下优点：本发明提供的胶体金免疫层析微量全血检测试纸在前端(硝酸纤维素膜上)加样，有别于传统的后端加样技术，同时在前端硝酸纤维素膜上增加微量全血滤膜，加微量全血后，微量全血通过处理的全血滤膜，血清渗入到硝酸纤维素膜上，红细胞等滞留在全血滤膜上，起到快速分离红细胞的作用，本发明试纸拓宽了微量全血(5μL以内)的使用范围和检测效果，同时对血清、血浆亦可使用；本发明方法采集末梢血非常容易，创伤小，供血者的体验也轻松，检测方法简便快速且结果准确可靠。
附图说明
图1为本发明的胶体金免疫层析微量全血检测试纸结构图，
图中，1-PVC底板，2-玻璃纤维素膜，3-金结合垫，4-硝酸纤维素膜，5-吸水纸，6-T线，7-C线，8-微量全血滤膜。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
实施例1：一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，结构如图1所示，它由PVC底板1、玻璃纤维素膜2、金结合垫3、T线6、C线7、硝酸纤维素膜4、微量全血滤膜)和吸水纸5组成，所述玻璃纤维素膜2位于PVC底板1的左侧，吸水纸5位于PVC底板1的右侧，硝酸纤维素膜4位于PVC底板1上，金结合垫3的右侧位于硝酸纤维素膜4上表面的左侧，金结合垫3的左侧延伸到玻璃纤维素膜2的右下方，吸水纸5的左侧位于硝酸纤维素膜4上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜4的上表面从左到右依次设置有T线6和C线7，所述C线7使用1mg/mL的鼠抗人二抗划线，硝酸纤维素膜4上设置有微量全血滤膜8，微量全血滤膜8位于金结合垫3和T线6之间且左侧延伸至金结合垫3的右下方，微量全血滤膜8是采用以下处理液处理的孔径8μm无背衬的硝酸纤维素膜，如Millipore135型号。
所述处理液包括下述重量份的原料：磷酸氢二钠：1.16，磷酸二氢钾：0.104，氯化钠：6；表面活性剂S9：1。
上述的胶体金免疫层析微量全血检测试纸所述微量全血滤膜8采用以下方法处理：S1.称量：按上述配方比例称取各原料，并将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾均分为两份，备用；S2.制备处理液：包括处理液1的制备和处理液2的制备；
处理液1的制备：PB溶液中加入氯化钠和表面活性剂S9并混合均匀；
处理液2的制备：取磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制成PB溶液；
S3.处理：先取处理液1浸润滤膜，然后将处理液1处理的滤膜平铺在玻璃底板上放置在35℃的烘箱中烘干；处理液2将抗人红细胞抗体稀释至0.2mg/mL，再次浸润处理液1处理后的滤膜，及时用鼓风干燥箱烘干；
S4.后处理：将烘干的滤膜加玻璃板压4h以上，使用时裁剪成1cm宽的长条，小心取下，压在硝酸纤维素膜之上，金标结合垫之下，然后裁切成宽0.4cm的胶体金试纸条。
实施例2：一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，结构如图1所示，它由PVC底板1、玻璃纤维素膜2、金结合垫3、T线6、C线7、硝酸纤维素膜4、微量全血滤膜)和吸水纸5组成，所述玻璃纤维素膜2位于PVC底板1的左侧，吸水纸5位于PVC底板1的右侧，硝酸纤维素膜4位于PVC底板1上，金结合垫3的右侧位于硝酸纤维素膜4上表面的左侧，金结合垫3的左侧延伸到玻璃纤维素膜2的右下方，吸水纸5的左侧位于硝酸纤维素膜4上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜4的上表面从左到右依次设置有T线6和C线7，所述C线7使用2mg/mL的鼠抗人二抗划线，硝酸纤维素膜4上设置有微量全血滤膜8，微量全血滤膜8位于金结合垫3和T线6之间且左侧延伸至金结合垫3的右下方，微量全血滤膜8是采用以下处理液处理的孔径4μm无背衬的硝酸纤维素膜，
所述处理液包括下述重量份的原料：磷酸氢二钠：0.29，磷酸二氢钾：0.026，氯化钠：1.5；表面活性剂S9：0.25。
上述的胶体金免疫层析微量全血检测试纸所述微量全血滤膜8采用以下方法处理：
S1.称量：按上述配方比例称取各原料，并将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾均分为两份，备用；
S2.制备处理液：包括处理液1的制备和处理液2的制备；
处理液1的制备：PB溶液中加入氯化钠和表面活性剂S9并混合均匀；
处理液2的制备：取磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制成PB溶液；
S3.处理：先取处理液1浸润滤膜，然后将处理液1处理的滤膜平铺在玻璃底板上放置在42℃的烘箱中烘干；处理液2将抗人红细胞抗体稀释至0.2mg/mL，再次浸润处理液1处理后的滤膜，及时用鼓风干燥箱烘干；
S4.后处理：将烘干的滤膜加玻璃板压4h以上，使用时裁剪成1cm宽的长条，小心取下，压在硝酸纤维素膜之上，金标结合垫之下，然后裁切成宽0.4cm的胶体金试纸条。
实施例3：一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，结构如图1所示，它由PVC底板1、玻璃纤维素膜2、金结合垫3、T线6、C线7、硝酸纤维素膜4、微量全血滤膜)和吸水纸5组成，所述玻璃纤维素膜2位于PVC底板1的左侧，吸水纸5位于PVC底板1的右侧，硝酸纤维素膜4位于PVC底板1上，金结合垫3的右侧位于硝酸纤维素膜4上表面的左侧，金结合垫3的左侧延伸到玻璃纤维素膜2的右下方，吸水纸5的左侧位于硝酸纤维素膜4上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜4的上表面从左到右依次设置有T线6和C线7，所述C线7使用1.5mg/mL的鼠抗人二抗划线，硝酸纤维素膜4上设置有微量全血滤膜8，微量全血滤膜8位于金结合垫3和T线6之间且左侧延伸至金结合垫3的右下方，微量全血滤膜8是采用以下处理液处理的孔径6μm无背衬的硝酸纤维素膜，
所述处理液包括下述重量份的原料：磷酸氢二钠：0.58，磷酸二氢钾：0.052，氯化钠：3；表面活性剂S9：0.5。
上述的胶体金免疫层析微量全血检测试纸所述微量全血滤膜8采用以下方法处理：
S1.称量：按上述配方比例称取各原料，并将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾均分为两份，备用；
S2.制备处理液：包括处理液1的制备和处理液2的制备；
处理液1的制备：PB溶液中加入氯化钠和表面活性剂S9并混合均匀；
处理液2的制备：取磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制成PB溶液；
S3.处理：先取处理液1浸润滤膜，然后将处理液1处理的滤膜平铺在玻璃底板上放置在38℃的烘箱中烘干；处理液2将抗人红细胞抗体稀释至0.2mg/mL，再次浸润处理液1处理后的滤膜，及时用鼓风干燥箱烘干；
S4.后处理：将烘干的滤膜加玻璃板压4h以上，使用时裁剪成1cm宽的长条，小心取下，压在硝酸纤维素膜之上，金标结合垫之下，然后裁切成宽0.4cm的胶体金试纸条。
实施例4：一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸的检测方法，它包括以下步骤：
S1.取含有结核分枝杆菌IgG抗体(标号1)和不含有结核分枝杆菌IgG(标号2)的全血各4μL分别加入到不同的微量全血检测试纸的微量全血滤膜上；
S2.从微量全血检测试纸的后端滴加3滴缓冲液，所述缓冲液为PBS缓冲液加tween20，由缓冲液推动从金标结合垫释放的胶体金渗入到硝酸纤维素膜上的血清向吸水纸方向移动，红细胞滞留在微量全血滤膜上不移动；
S3.标号1则显示阳性(T线和C线均显线)标号2则显示阴性(T线不显线和C线显线)；
以下通过实验说明本发明的有益效果：
1.检测结核分枝杆菌IgG抗体
采用本发明的方法和试纸分别检测含有结核分枝杆菌IgG抗体全血、血清和血浆各10份，不含有有结核分枝杆菌IgG抗体全血、血清和血浆各10份，实验结果如表1所示：
表1：检测结核分枝杆菌IgG抗体的结果
Figure BDA0002868871540000061
2.检测人心肌钙蛋白(cTnI)
采用本发明的方法和试纸分别检测含有人心肌钙蛋白(cTnI)全血、血清和血浆各10份，不含有人心肌钙蛋白(cTnI)全血、血清和血浆各10份，实验结果如表2所示：
表2：检测人心肌钙蛋白(cTnI)的结果
Figure BDA0002868871540000062
3.检测犬瘟热病毒
采用本发明的方法和试纸分别检测含有犬瘟热病毒全血、血清和血浆各10份，不含有有犬瘟热病毒全血、血清和血浆各10份，实验结果如表1所示：
表3：检测犬瘟热病毒的结果
Figure BDA0002868871540000063
从表1、表2和表3可以看出，本发明前端加样技术确保了微量检测技术的可行性，增加微量全血滤膜，可以方便快捷的检测微量全血，血清和血浆亦可使用，检测的效果相同。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，其特征在于，它由PVC底板（1）、玻璃纤维素膜（2）、金结合垫（3）、T线（6）、C线（7）、硝酸纤维素膜（4）、微量全血滤膜（8）和吸水纸（5）组成，所述玻璃纤维素膜（2）位于PVC底板（1）的左侧，吸水纸（5）位于PVC底板（1）的右侧，硝酸纤维素膜（4）位于PVC底板（1）上，金结合垫（3）的右侧位于硝酸纤维素膜（4）上表面的左侧，金结合垫（3）的左侧延伸到玻璃纤维素膜（2）的右下方，吸水纸（5）的左侧位于硝酸纤维素膜（4）上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜（4）的上表面从左到右依次设置有T线（6）和C线（7），硝酸纤维素膜（4）上设置有微量全血滤膜（8），微量全血滤膜（8）位于金结合垫（3）和T线（6）之间且左侧延伸至金结合垫（3）的右下方，微量全血滤膜（8）是采用以下处理液处理的孔径为4-8μm无背衬的硝酸纤维素膜，所述处理液包括下述重量份的原料：磷酸氢二钠：0.29-1.16，磷酸二氢钾：0.026-0.104，氯化钠：1.5-6；表面活性剂S9：0.25-1。
2.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，其特征在于，所述微量全血滤膜（8）为Millipore135型号。
3.根据权利要求1或2所述的一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，其特征在于，所述C线（7）使用1-2mg/mL的鼠抗人二抗划线。
4.根据权利要求1或2所述的一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，其特征在于，所述微量全血滤膜（8）采用以下方法处理：
S1. 称量：按上述配方比例称取各原料，备用；
S2. 制备处理液：包括处理液1的制备和处理液2的制备；
处理液1的制备：PB溶液中加入氯化钠和表面活性剂S9并混合均匀；
处理液2的制备：取磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制成PB溶液；
S3. 处理：先取处理液1浸润滤膜，然后将处理液1处理的滤膜平铺在玻璃底板上放置在烘箱中烘干；处理液2将抗人红细胞抗体稀释至0.2mg/mL，再次浸润处理液1处理后的滤膜，及时用鼓风干燥箱烘干；
S4. 后处理：将烘干的滤膜加玻璃板压4h以上，使用时裁剪成1cm宽的长条，小心取下后组装在试纸条上。
5.根据权利要求4所述的一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸，其特征在于，步骤S3中所述的烘干温度为35-42℃。
6.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸的检测方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 取全血、血清或血浆，加入到微量全血检测试纸的微量全血滤膜上，其中，全血4-5μL，血清或血浆2-3μL；
S2. 从微量全血检测试纸的后端滴加缓冲液，由缓冲液推动从金标结合垫释放的胶体金渗入到硝酸纤维素膜上的血清向吸水纸方向移动，红细胞滞留在微量全血滤膜上不移动；
S3. 若含有被测物质，则显示阳性，若不含被测物质，则显示阴性。
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