CN107884576A - 一种带有错误提示作用的胶体金试纸及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种带有错误提示作用的胶体金试纸及其检测方法，所述胶体金试纸由PVC底板、玻璃纤维素膜、金结合垫、T线、C线、硝酸纤维素膜及吸水纸组成，所述金结合垫为鼠抗人二抗结合垫，所述C线使用鼠抗人二抗划线。检测方法为：取待检测抗体，并用检测抗体对应的抗原划T线，在金结合垫和T线之间加样，并及时在硝酸硝酸纤维素膜的后端加缓冲液，若C线有红色条带出现，提示所加检测样品正确。本发明提供的胶体金试纸适用于所有人的抗体的检测，特别是对含有尿素或更高盐分等不方便标记的抗原，使用双抗原夹心法检测抗体有困难的；本发明的胶体金试纸且带有错误提示作用，规范了操作，防止错误的实验结论；且检测方法操作简单，对操作者的要求低。

Description

一种带有错误提示作用的胶体金试纸及其检测方法
技术领域
本发明属于检疫检验测试领域，具体涉及一种带有错误提示作用的胶体金试纸及其检测方法。
背景技术
1971年Faulk 和Taytor将胶体金引入免疫化学领域，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法和快速免疫金渗滤法，用于检测HBsAg、HCG和细菌、病毒等病原体，具有简单、快速、准确和无污染等优点。胶体金免疫层析方法是在免疫渗滤的基础上发展起来的快速检测方法，该方法操作简单、重复性好、灵敏度高，结果快速直观、并可大量制备，工艺简单、成本低廉，适合基层大批量现场检测。
免疫胶体金技术的基本原理是：氯金酸在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成疏水胶体溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。其吸附原理一般认为由于金颗粒表面的负电荷与蛋白质的正电荷基团之间的静电作用-非共价键的范德华引力而相互吸收，而且这种静电引力较小而一般不影响蛋白质的活性。
用化学还原法可以方便地制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与单克隆抗体、多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床检测中成为非常有用的工具。疫胶体金技术与放射免疫和酶联免疫相比有着许多优越性。首先，它不需要酶联免疫法中所要求的底物，因而可省去一些操作步骤，如洗涤、终止等，使操作简单化；其次，胶体金无污染，不会危害操作者、以及污染环境，而这些问题在酶免疫法与放免法中常遇到；再次胶体金检测试剂通常室温储存相当稳定，即该类制品储存条件温和，效期远长于酶免法和放免法；此外胶体金技术还具有检测迅速、不需要复杂仪器设备、产物显色永久等优点。
但是，检测不同的抗体需要相应的胶体金试纸，特别是对抗原含有尿素或更高盐分等，现有的胶体金试纸不方便标记。且现有的胶体金试纸在检测中如果操作者漏加、加样量过少或超量加样，均会出现质控线出线的效果，没有错误提示作用，导致错误的实验操作未发现，实验结论错误。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种带有错误提示作用的胶体金试纸；
本发明的另一目的在于提供此种胶体金试纸的检测方法，该方法操作简单、对操作者的要求低，具有提示操作错误的功能。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种带有错误提示作用的胶体金试纸，它由PVC底板、玻璃纤维素膜、金结合垫、T线、C线、硝酸纤维素膜及吸水纸组成，所述金结合垫为鼠抗人二抗结合垫，所述C线使用鼠抗人二抗划线。
进一步地，所述玻璃纤维素膜位于PVC底板的左侧，吸水纸位于PVC底板的右侧，硝酸纤维素膜位于PVC底板上，金结合垫的右侧位于硝酸纤维素膜上表面的左侧，金结合垫的左侧延伸到玻璃纤维素膜的右下方，吸水纸的左侧位于硝酸纤维素膜上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜的上表面从左到右依次设置有T线和C线。
进一步地，所述C线使用1～2mg/mL的鼠抗人二抗划线。
进一步地，所述金结合垫采用以下方法制备：
S1. 制备胶体金：取质量百分比浓度为0.01%的四氯金酸水溶液置于烧杯中，加热至煮沸，保持沸腾状态并处于搅拌状态，烧杯中加入质量百分比为1%的枸橼酸三钠水溶液，继续加热煮沸4～7min，至溶液呈橙红色，自然冷却至常温；
S2. 制备胶体金浓缩液：将上述烧杯中的溶液进行搅拌，用0.2M的碳酸钾溶液调节pH值至7.5～8.5，缓慢滴加浓度为0.5mg/mL的鼠抗人二抗溶液，滴加完毕后静置8～14min，再将质量百分比浓度为10%的牛血清溶液在搅拌状态下滴加至烧杯中进行封闭，封闭结束后将烧杯中的胶体金装入试管中进行离心处理，离心后收集沉淀、定容，再加入蔗糖；
S3. 制备金结合垫： 取聚酯膜，用质量百分比浓度为1%的tween-20浸泡处理后，烘干，将步骤S2制备的胶体金浓缩液喷涂至烘干的聚酯膜上，烘干，即为金结合垫。
进一步地，步骤S2中所述离心的离心机转速为15000rpm，离心时间为30min。
一种带有错误提示作用的胶体金试纸的检测方法，取待检测人的血液抗体，并用检测抗体对应的抗原划T线，在金结合垫和T线之间加样2～5μL，样本将扩散至硝酸纤维素膜上，并及时在玻璃纤维素膜的后端加缓冲液，若C线为红色条带，提示所加检测样品操作正确；其中，所述缓冲液为含有质量百分比浓度0.5% Tween-20的PBS缓冲液。
本发明具有以下优点：本发明提供一种胶体金试纸，该胶体金试纸适用于所有抗体的检测，特别是对含有尿素或更高盐分等不方便标记的抗原；本发明的胶体金试纸且带有错误提示作用，如果漏加样本、滴加了缓冲液，结果是无人的IgG形成夹心，本发明胶体金的C线不会出现；若加入量过少（1μL以下），C线也因夹心量过少显色极弱；若果加入量超过5μL，因血清的粘滞作用，难以移动，以至C线极弱或不出线，因此，本发明的胶体金试纸具有提示操作错误的作用，规范了操作，防止错误的实验结论；且本发明提供的检测方法操作简单，对操作者的要求低。
附图说明
图1为本发明的胶体金试纸结构；
图中，1-PVC底板，2-玻璃纤维素膜，3-金结合垫，4-硝酸纤维素膜，5-吸水纸，6-T线、7-C线。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
一种带有错误提示作用的胶体金试纸，如图1所示，它由PVC底板1、玻璃纤维素膜2、金结合垫3、T线6、C线7、硝酸纤维素膜4及吸水纸5组成，所述金结合垫3为鼠抗人二抗结合垫，所述C线7使用1～2mg/mL的鼠抗人二抗划线。所述玻璃纤维素膜2位于PVC底板1的左侧，吸水纸5位于PVC底板1的右侧，硝酸纤维素膜4位于PVC底板1上，金结合垫3的右侧位于硝酸纤维素膜4上表面的左侧，金结合垫3的左侧延伸到玻璃纤维素膜2的右下方，吸水纸5的左侧位于硝酸纤维素膜4上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜4的上表面从左到右依次设置有T线6和C线7。
其中，所述金结合垫（3）采用以下方法制备：
S1. 制备胶体金：取质量百分比浓度为0.01%的四氯金酸水溶液100mL置于烧杯中，加热至煮沸，保持沸腾状态并处于搅拌状态，烧杯中加入质量百分比为1%的枸橼酸三钠水溶液1.5mL，继续加热煮沸4～7min，至溶液呈橙红色，自然冷却至常温；
S2. 制备胶体金浓缩液：将上述烧杯中的溶液进行搅拌，用0.2M的碳酸钾溶液调节pH值至7.5～8.5，缓慢滴加浓度为0.5mg/mL的鼠抗人二抗溶液1mL，滴加完毕后静置8～14min，再将质量百分比浓度为10%的牛血清溶液5mL在搅拌状态下滴加至烧杯中进行封闭，封闭结束后将烧杯中的胶体金装入试管中进行离心处理，所述离心的离心机转速为15000rpm，离心时间为30min，离心后收集沉淀、定容至5mL，再加入蔗糖0.1g；
S3. 制备金结合垫： 取上海杰一公司的8964聚酯膜，用质量百分比浓度为1%的tween-20浸泡处理后，烘干，将步骤S2制备的胶体金浓缩液喷涂至烘干的聚酯膜上，37℃烘干，即为金结合垫。
上述带有错误提示作用的胶体金试纸的检测方法，以检测人结核抗体为例，取待检测抗体，并用检测抗体对应的抗原划T线，在金结合垫和T线之间加样2～5μL，样本将扩散至硝酸纤维素膜上，并及时在玻璃纤维素膜的后端加缓冲液，所述缓冲液为含有质量百分比浓度0.5% Tween-20的PBS缓冲液，标本和缓冲液等在毛细效应下向吸水纸方移动，标本中的成分（IgG）流经质控区，正确的操作，标本中的成分（IgG）会被C线上的抗人二抗捕获，随后而来的胶体金标记鼠抗人二抗与被捕获的结核抗体（IgG）再次结合，形成C线，为红色条带。
另取一胶体金试纸，以上述同样的方法进行实验，将样本换为缓冲液，实验发现无红色条带的形成。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种带有错误提示作用的胶体金试纸，其特征在于，它由PVC底板（1）、玻璃纤维素膜（2）、金结合垫（3）、T线（6）、C线（7）、硝酸纤维素膜（4）及吸水纸（5）组成，所述金结合垫（3）为鼠抗人二抗结合垫，所述C线（7）使用鼠抗人二抗划线。
2.根据权利要求1所述的一种带有错误提示作用的胶体金试纸，其特征在于，所述玻璃纤维素膜（2）位于PVC底板（1）的左侧，吸水纸（5）位于PVC底板（1）的右侧，硝酸纤维素膜（4）位于PVC底板（1）上，金结合垫（3）的右侧位于硝酸纤维素膜（4）上表面的左侧，金结合垫（3）的左侧延伸到玻璃纤维素膜（2）的右下方，吸水纸（5）的左侧位于硝酸纤维素膜（4）上表面的右侧，所述硝酸纤维素膜（4）的上表面从左到右依次设置有T线（6）和C线（7）。
3.根据权利要求1或2所述的一种带有错误提示作用的胶体金试纸，其特征在于，所述C线（7）使用1～2mg/mL的鼠抗人二抗划线。
4.根据权利要求1或2所述的一种带有错误提示作用的胶体金试纸，其特征在于，所述金结合垫（3）采用以下方法制备：
S1. 制备胶体金：取质量百分比浓度为0.01%的四氯金酸水溶液置于烧杯中，加热至煮沸，保持沸腾状态并处于搅拌状态，烧杯中加入质量百分比为1%的枸橼酸三钠水溶液，继续加热煮沸4～7min，至溶液呈橙红色，自然冷却至常温；
S2. 制备胶体金浓缩液：将上述烧杯中的溶液进行搅拌，用0.2M的碳酸钾溶液调节pH值至7.5～8.5，缓慢滴加浓度为0.5mg/mL的鼠抗人二抗溶液，滴加完毕后静置8～14min，再将质量百分比浓度为10%的牛血清溶液在搅拌状态下滴加至烧杯中进行封闭，封闭结束后将烧杯中的胶体金装入试管中进行离心处理，离心后收集沉淀、定容，再加入蔗糖；
S3. 制备金结合垫：取聚酯膜，用质量百分比浓度为1%的tween-20浸泡处理后，烘干，将步骤S2制备的胶体金浓缩液喷涂至烘干的聚酯膜上，烘干，即为金结合垫。
5.根据权利要求4所述的一种带有错误提示作用的胶体金试纸，其特征在于，步骤S2中所述离心的离心机转速为15000rpm，离心时间为30min。
6.根据权利要求1所述的一种带有错误提示作用的胶体金试纸的检测方法，其特征在于，取待检测人的血液抗体，并用检测抗体对应的抗原划T线，在金结合垫和T线之间加样2～5μL，样本将扩散至硝酸纤维素膜上，并及时在玻璃纤维素膜的后端加缓冲液，若C线为红色条带，提示所加检测样品操作正确；其中，所述缓冲液为含有质量百分比浓度0.5%Tween-20的PBS缓冲液。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112763730A (zh) * 2020-12-29 2021-05-07 成都永安制药有限公司 一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN203385721U (zh) * 2013-10-11 2014-01-08 重庆奥创生物技术开发有限责任公司 一种灵敏度高的试纸条
CN204964520U (zh) * 2015-09-10 2016-01-13 刘雄 一种用于快速检测病毒抗体的检测卡

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN203385721U (zh) * 2013-10-11 2014-01-08 重庆奥创生物技术开发有限责任公司 一种灵敏度高的试纸条
CN204964520U (zh) * 2015-09-10 2016-01-13 刘雄 一种用于快速检测病毒抗体的检测卡

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郭焱等: "《免疫学教程》", 31 December 2015, 清华大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112763730A (zh) * 2020-12-29 2021-05-07 成都永安制药有限公司 一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法

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