CN103389374A - 微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有检测卡,所述检测卡包括壳体和封装于所述壳体内的试剂条,所述试剂条包括底板,所述底板上依次设有首尾相接的吸水滤纸、硝酸纤维素膜和样品垫,所述样品垫由上之下依次包括保护垫和胶体金层。本发明采血量微小、试剂质量稳定,仅需30μL全血即可进行检测,并且减少了许多繁琐的程序,使用全血即可进行检测,无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测,其推广应用前景十分广阔。
Description
技术领域
本发明涉及生物学检测技术领域,具体为一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒。
背景技术
肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,简称MP)是急性呼吸道感染的一种常见病原微生物,是引起小儿下呼吸道感染的重要病原之一。儿童时期感染肺炎支原体,首先引起急性呼吸道感染,并可在呼吸道感染的基础上并发肺外多系统器官的疾病,已引起广泛关注。近年来,婴幼儿支原体肺炎发病率在逐年增加。据统计,支原体肺炎占婴幼儿肺炎的比率也在不断上升,由2006年的10%~20%升至33.16%,在我国社区获得性肺炎中占据着重要地位。
目前常用的诊断方法有代谢抑制试验、补体结合试验和酶联免疫法等,代谢抑制试验、补体结合试验和酶联免疫法操作繁琐,需要一些大型的仪器设备,需专门人员操作实验,使用不方便。
随着胶体金技术的发展,肺炎支原体抗体检测试剂具有快捷方便、安全、结果准确的特点。但是,现有技术胶体金法检测肺炎支原体抗体,一方面检测样本往往需要量多,如国内专利《一种卡式肺炎支原体抗体检测试剂盒》(专利号:ZL 200720021684.9)血清用量为150μL;国内专利《一种肺炎支原体抗体试纸条》(专利号:ZL 200720021685.3)血清用量为80μL,对于婴幼儿来说,只能指尖取血,而指尖取血量最多不超过40μL,但是婴幼儿较成人来说,更易受到肺炎支原体的感染;另一方面,检测人员还需要对血样进行血清和血浆分离处理才能进行检测,这使得检测相对繁琐。因此,开发出一种可以克服胶体金诊断试剂样本量多、采血量较大等缺点的试剂盒是十分必要的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,以解决胶体金法诊断肺炎支原体时使用试剂样本量多、采血量较大等问题。
为解决上述技术问题,本发明提供了以下技术方案:
包括盒体,所述盒体内设有检测卡,所述检测卡包括壳体和封装于所述壳体内的试剂条,所述试剂条包括底板,所述底板上依次设有首尾相接的吸水滤纸、硝酸纤维素膜和样品垫,所述样品垫由上之下依次包括保护垫和胶体金层:
所述硝酸纤维素膜上设有分别包被有MP蛋白的检测线和包被有抗鼠IgG抗体的参照线,所述检测线采用MP蛋白浓度为0.8~1.0mg/mL的包被液进行包被,所述参照线采用抗鼠IgG抗体浓度为1.0~1.5mg/mL的包被液进行包被;
所述胶体金层上的胶体金颗粒粒径为27纳米~30纳米;
所述盒体内还配有样品稀释液。
优选的,在所述样品垫上、所述保护垫和胶体金层之间还设有渗滤层。
更进一步的,所述渗滤层为经表面活性剂浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。
作为一种优选的方式,所述渗滤层为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。
优选的,所述胶体金颗粒采用如下方法制得,先将1wt%氯金酸水溶液加热至沸腾,再按0.7~0.9%的体积比滴加加入1wt%柠檬酸三钠溶液,混匀,继续沸煮,待胶体金溶液颜色由蓝经灰变紫后,停止加热并冷却。
优选的,所所述MP蛋白为基因重组MP蛋白。
优选的,所述抗鼠IgG抗体为羊抗鼠IgG抗体。
优选的,所述样品稀释液为20mM PBS缓冲液。
采用了上述技术方案后,本发明的有益效果是:
1、采血量微小,尤其适合婴幼儿的MP检测,本发明仅需30μL全血即可进行检测,可采取指尖取血,彻底解决了婴幼儿取血困难的问题,推广应用前景广阔;
2、试剂质量稳定,本发明由于采取了增大胶体金颗粒和提高检测线包被浓度的措施,将胶体金颗粒粒径由18纳米~20纳米增加至27纳米~30纳米,MP蛋白包被液浓度由0.4~0.5mg/mL增加至0.8~1.0mg/mL,以增加蛋白的标记量、减少血样用量,但是,这会导致结果出现假阳性,所以本发明同时配备全血稀释液,以消除假阳性干扰,确保了试剂的准确性;
3、本发明检测的是MP-IgM抗体,MP-IgM是感染肺炎支原体早期出现的抗体,而MP-IgG是晚于MP-IgM出现的抗体且持续时间相对较长,IgM抗体仅与急性感染有关,一旦检测出特异性IgM抗体阳性,可立即采取措施,做到临床早期诊断,早期预防,早期治疗;
4、本发明减少了许多繁琐的程序,使用全血即可进行检测,无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测,因此使用方便、快捷、直观,并且具有特异性强、灵敏度高的特点,不需特殊仪器也不需专业培训,按说明书即可完成操作,全过程只需20分钟,适合医院等基层单位。因此,本发明具有较高的社会价值和经济价值。
更进一步地,由于本发明在所述样品垫上、所述保护垫和胶体金层之间还设有渗滤层,所述渗滤层为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫,所述渗滤层可准确、快速地辅助过滤血细胞,因此,极大的提高了检测效果。
附图说明
附图1为本发明具体实施方式中检测条的侧面结构示意图;
其中:1、底板;2、吸水滤纸;3、硝酸纤维素膜;4、样品垫;5、保护垫;6、胶体金层;7、渗滤层;8、检测线;9、参照线。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细说明。
实施例1
如图1所示的一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,包括盒体和采血管,盒体内设有检测卡,检测卡包括壳体和封装于壳体内的试剂条,试剂条包括底板1,底板1上依次设有首尾相接的吸水滤纸2、硝酸纤维素膜3和样品垫4,样品垫4由上之下依次包括保护垫5、胶体金层6和渗滤层7,保护垫5为胶带;
硝酸纤维素膜3上设有包被有基因重组MP蛋白的检测线8和包被有羊抗鼠IgG抗体的参照线9,检测线8采用基因重组MP蛋白浓度为1.0mg/mL的包被液进行包被,参照线9采用抗鼠IgG抗体浓度为1.5mg/mL的包被液进行包被;
胶体金层6上的胶体金颗粒粒径为27纳米~30纳米,胶体金颗粒采用如下方法制得,先将1wt%氯金酸水溶液加热至沸腾,再按0.7~0.9%的体积比滴加加入1wt%柠檬酸三钠溶液,混匀,继续沸煮,待胶体金溶液颜色由蓝经灰便紫后,停止加热并冷却;
盒体内还配有样品稀释液,样品稀释液为20mM PBS缓冲液。
渗滤层7均为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。
试剂的使用方法包括以下步骤:
(1)检测
a、取出检测卡,放在台面上;
b、取30μL全血滴加于加样孔中;
c、随即滴加2滴(80μL)标本稀释液于加样孔中,10~20分钟时观察结果,20分钟后结果无效。
(2)结果判断
a、阴性:
反应后,在参照线上形成一个红色沉积反应线,在检测线上无反应线出现,表明被测样品中无肺炎支原体抗体,为阴性结果;
b、阳性:
反应后,在参照线上形成一个红色沉积反应线,同时在检测线上形成一个红色沉积反应线,表明被测样品中有肺炎支原体抗体,为阳性结果;
c、无效:
反应后,在参照线上不显色,表明本次检测无效。
实施例2
检测线采用基因重组MP蛋白浓度为0.8mg/mL的包被液进行包被,参照线采用抗鼠IgG抗体浓度为1.0mg/mL的包被液进行包被,其余同实施例1。
本发明采血量微小、试剂质量稳定,仅需30μL全血即可进行检测,尤其适合婴幼儿的MP检测,可采取指尖取血,彻底解决了婴幼儿取血困难的问题,并且减少了许多繁琐的程序,使用全血即可进行检测,无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测,其推广应用前景十分广阔。
本发明不局限于上述具体的实施方式,本领域的普通技术人员从上述构思出发,不经过创造性的劳动,所作出的种种变换,均落在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,包括盒体,所述盒体内设有检测卡,所述检测卡包括壳体和封装于所述壳体内的试剂条,所述试剂条包括底板,所述底板上依次设有首尾相接的吸水滤纸、硝酸纤维素膜和样品垫,所述样品垫由上之下依次包括保护垫和胶体金层,其特征在于:
所述硝酸纤维素膜上分别设有包被有MP蛋白的检测线和包被有抗鼠IgG抗体的参照线,所述检测线采用MP蛋白浓度为0.8~1.0mg/mL的包被液进行包被,所述参照线采用抗鼠IgG抗体浓度为1.0~1.5mg/mL的包被液进行包被;
所述胶体金层上的胶体金颗粒粒径为27纳米~30纳米;
所述盒体内还配有样品稀释液。
2.如权利要求1所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:在所述样品垫上、所述保护垫和胶体金层之间还设有渗滤层。
3.如权利要求2所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述渗滤层为经表面活性剂浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。
4.如权利要求3所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述渗滤层为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic 1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。
5.如权利要求1所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述胶体金颗粒采用如下方法制得,先将1wt%氯金酸水溶液加热至沸腾,再按0.7~0.9%的体积比滴加加入1wt%柠檬酸三钠溶液,混匀,继续沸煮,待胶体金溶液颜色由蓝经灰变紫后,停止加热并冷却。
6.如权利要求1所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述MP蛋白为基因重组MP蛋白。
7.如权利要求1所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述抗鼠IgG抗体为羊抗鼠IgG抗体。
8.如权利要求1所述的微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒,其特征在于:所述样品稀释液为20mM PBS缓冲液。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104316703A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-01-28 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种牛支原体检测试纸条及其制备方法 |
CN105823875A (zh) * | 2016-03-15 | 2016-08-03 | 威尚生物技术(合肥)有限公司 | 肺炎支原体抗体免疫胶体金检测试纸条及其制备方法 |
CN106053802A (zh) * | 2016-06-03 | 2016-10-26 | 无锡市人民医院 | 一种肺炎支原体抗体双标记纳米时间分辨荧光免疫层析定量试纸及其制备方法 |
CN112763730A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-07 | 成都永安制药有限公司 | 一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN2442272Y (zh) * | 2000-09-18 | 2001-08-08 | 王冰 | Torch病原体检测生物芯片 |
CN2831121Y (zh) * | 2005-09-20 | 2006-10-25 | 深圳市博卡生物技术有限公司 | 肺炎支原体抗体检测试纸 |
CN201045615Y (zh) * | 2007-05-11 | 2008-04-09 | 杨致亭 | 一种肺炎支原体抗体试纸条 |
CN202149900U (zh) * | 2011-07-29 | 2012-02-22 | 北京中检安泰诊断科技有限公司 | 肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒 |
CN102928587A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
-
2013
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN2442272Y (zh) * | 2000-09-18 | 2001-08-08 | 王冰 | Torch病原体检测生物芯片 |
CN2831121Y (zh) * | 2005-09-20 | 2006-10-25 | 深圳市博卡生物技术有限公司 | 肺炎支原体抗体检测试纸 |
CN201045615Y (zh) * | 2007-05-11 | 2008-04-09 | 杨致亭 | 一种肺炎支原体抗体试纸条 |
CN202149900U (zh) * | 2011-07-29 | 2012-02-22 | 北京中检安泰诊断科技有限公司 | 肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒 |
CN102928587A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104316703A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-01-28 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种牛支原体检测试纸条及其制备方法 |
CN104316703B (zh) * | 2014-11-05 | 2016-06-01 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种牛支原体检测试纸条及其制备方法 |
CN105823875A (zh) * | 2016-03-15 | 2016-08-03 | 威尚生物技术(合肥)有限公司 | 肺炎支原体抗体免疫胶体金检测试纸条及其制备方法 |
CN106053802A (zh) * | 2016-06-03 | 2016-10-26 | 无锡市人民医院 | 一种肺炎支原体抗体双标记纳米时间分辨荧光免疫层析定量试纸及其制备方法 |
CN112763730A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-07 | 成都永安制药有限公司 | 一种胶体金免疫层析微量全血检测试纸及其检测方法 |
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