CN107870234A - 一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法,所述试纸条包括横向水平设置的条形的硝酸纤维素膜,所述醋酸纤维膜上纵向间隔且相互平行的分别设置有一个条形的检测线和质控线,其中所述硝酸纤维素膜靠近质控线一端抵接有一横向水平设置的条形的吸水垫,所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端抵接有一横向水平设置的条形的胶体金垫,所述胶体金垫远离硝酸纤维素膜的一端抵接有一横向水平设置的条形的样品垫;所述胶体金垫内含有胶体金标记配对的抗人甲状腺球蛋白抗体,所述检测线包被有可与抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的检测抗体,质控线包被有可与游离的抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的质控抗体。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言,本发明涉及一种检测人体体液中甲状腺球蛋白的免疫层析检测试纸的制备方法及应用,一种应用双抗夹心法原理的胶体金免疫层析法。
背景技术
甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)是由甲状腺滤泡上皮细胞合成的一种大分子碘化糖蛋白,是甲状腺滤泡内胶质的主要成分,由甲状腺滤泡上皮合成的甲状腺激素(T4)与TG相结合,成为结合型甲状腺素,以该种形式储存在滤泡腔中,成为甲状腺素库,该形式的甲状腺素没有生物活性,只有在蛋白水解酶的作用下,将甲状腺素从TG上水解下来成为游离型甲状腺素(FT4)才有生物活性。在正常情况下,只有极微量的TG进入血液循环,为同源二聚体,分子质量约660kDa。人的构成此种蛋白质的亚基由2767个氨基酸残基组成。甲状腺球蛋白是人体内碘在甲状腺腺体的贮存形式,经水解可生成甲状腺素和3,5,3′-三碘甲腺原氨酸。
甲状腺球蛋白在血液中的正常值为11.4-20.2mg/L,凡是导致甲状腺滤泡细胞破坏的病理状况均可使血清中TG升高,如分化型甲状腺癌(乳头状癌及滤泡状癌)、结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤囊性变、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等,异常结果常见于:(1)血清TG的改变较多见于甲状腺部位的恶性肿瘤,如TG在甲状腺滤泡状癌、甲状腺乳头状癌和间变癌患者的血清中都可出现不同程度的升高;而甲状腺髓样癌血TG可正常或降低,前者主要是因为甲状腺的破坏以及肿瘤组织分泌一定量的TG,而致血中TG升高;后者的肿瘤组织来源于甲状腺C细胞,而非甲状腺上皮细胞,故其血清TG并不升高。(2)甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲状腺疾病都可出现血中TG水平升高。由于分化型甲状腺癌(differentiatedthyroid carcinoma,DTC)的分化程度较高,故其癌细胞可以合成TG。因此,当DTC患者行甲状腺全切除及/行131I清甲治疗后,血清中不应该检测出TG,或TG的浓度很低,如果发现血清中TG浓度升高,说明有DTC的复发转移。同理,如果淋巴结内有DTC转移,其组织液中的TG浓度也要升高。
因此目前国内外有关甲状腺癌的诊疗指南均推荐对DTC患者在接受甲状腺全切除以及/131I清甲治疗后的随访中,主要依靠检测血清中TG浓度和超声等其他影像学检查来判断是否有甲状腺癌的复发转移。临床医生可通过血清中的TG浓度进行持续动态监测,了解上述患者的疾病发展和肿瘤负荷情况。研究已证实,上述DTC患者在TSH刺激后(TSH>30mIU/L)且无抗甲状腺球蛋白自身抗体(TgAb)干扰的前提下,血清TG对判断DTC残留或复发的诊断敏感性与特异性最高。指南并推荐,可以通过对怀疑有颈淋巴结转移的DTC患者在超声引导下对目标淋巴结行细针穿刺涂片细胞学检查+洗脱液TG浓度检测。近年研究发现,FNA洗脱液TG浓度检测对诊断DTC淋巴结转移的准确性高于细胞学检查。
免疫层析法(Immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带,当干燥的纤维素一端浸入样品(组织液或血液)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,如果样品中含有相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等,其中纳米金应用最为广泛,纳米金也称为胶体金。
以胶体金作为示踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术(Immunecolloidal gold technique,GICT)。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗环血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团型成牢固结合,由于这种结合式静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其他生物大分子结合,如SPA、PHA、ConA。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、型状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
与现有血凝法、放免法(RIA)、免放法(IMA)以及法学发光法检测相比,免疫层析法检测的优点主要包括:
(1)使用方便快速,便于基层使用和现场使用,所有反应能在20分钟内完成;
(2)成本低,不需要特殊的仪器设备;
(3)应用范围广,可适应多种检测条件;
(4)可以进行多项检测,弱阳性样本比较难获得,多项检测可以减省样品,降低成本;
(5)标记物稳定,标记样品在4℃储存两年以上,无信号衰减现;(6)胶体金本身为红色,不需要加入发色试剂,省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤,对人体无毒害。
在自体免疫性疾病诊断方面,已出现较多的免疫层析试纸,但基于甲状腺球蛋白检测的免疫层析试纸在国内外市场上仍没有问市。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明的目的之一在于提供一种能快速对通过对导致甲状腺滤泡细胞破坏的疾病患者的全血或体液中TG含量进行定量分析试纸条,其灵敏度高,可为临床手术方案的制定提供参考指标。
为实现上述技术方案,本发明的技术方案是:一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,包括横向水平设置的条形的硝酸纤维素膜,所述醋酸纤维膜上纵向间隔且相互平行的分别设置有一个条形的检测线和一个条形的质控线,所述检测线和质控线的两端分别与所述硝酸纤维素膜的两侧边平齐,其中所述硝酸纤维素膜靠近质控线一端抵接有一横向水平设置的条形的吸水垫,所述硝酸纤维素膜靠近检测线的一端抵接有一横向水平设置的条形的胶体金垫,所述胶体金垫远离硝酸纤维素膜的一端抵接有一横向水平设置的条形的样品垫,所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫的两侧边均平齐;
所述胶体金垫内含有胶体金标记配对的抗人甲状腺球蛋白抗体,所述检测线包被有可与抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的检测抗体,质控线包被有可与游离的抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的质控抗体。
上述技术方案的有益效果在于,采用胶体金配对的抗人甲状腺球蛋白与样品中的甲状腺球蛋白之间发生免疫反应生成胶体金-抗人甲状腺球蛋白抗体-甲状腺球蛋白的复合体,并在虹吸的作用向吸水垫一侧移动,到达检测线时甲状腺球蛋白的另一位点与TG抗体发生免疫反应结合,形成胶体金-抗人甲状腺球蛋白抗体-甲状腺球蛋白-Tg抗体的复合体,而游离的胶体金-抗人甲状腺球蛋白抗体则继续向前移动至质控区与质控区的羊抗鼠IgG发生免疫反应形成胶体金-抗人甲状腺球蛋白-羊抗鼠IgG的复合体,而胶体金本身带有橘红色,会在检测线和质控线上形成橘红色的线条,且线条的颜色深度与胶体金的含量成正比。
上述技术方案中所述样品垫是由处理液处理的玻璃纤维膜于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到的,其中所述处理液包括0.01M PBS、0.1wt%Tween-20、1wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖。
上述技术方案的有益效果在于,所述样品垫适用于体液中甲状腺球蛋白的检测。
上述技术方案中所述样品垫包括经红细胞单抗处理后的纤维玻纤膜和滤血膜,所述滤血膜压覆在所述纤维玻纤膜下端,用以对全血样品中的血细胞进行过滤;其中,纤维玻纤膜和滤血膜的边缘有2-4mm重叠,将所述纤维玻纤膜和滤血膜制得的样品垫置于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到。
上述技术方案的有益效果在于,所述样品垫适用于全血样品中甲状腺球蛋白的检测,其中红细胞单抗处理后的纤维玻纤膜和滤血膜能将全血中的红细胞、血小板等成分截留。
上述技术方案中,所述吸水垫为吸水纸。
上述技术方案的要有益效果在于,获得容易,吸水效果好。
上述技术方案中所述检测抗为TG抗体;所述质控抗体为羊抗鼠IgG。
上述技术方案的有益效果在于,获得容易,特异性强。
上述技术方案中还包括一个条形的底板,所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫沿底板长度方向依次铺设在所述底板上端。
上述技术方案的有益效果在于,使得试纸条方便拿放且在使用时不易受到污染,同时还使得各部分结构稳定。
本发明的目的之二在于提供一种制备上述试纸条的方法,步骤如下:
将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次沿底板长度方向粘附在所述底板上端,且样品垫与胶体金垫相互靠近一侧相互抵接,所述胶体金垫与硝酸纤维素膜相互靠近一端相互抵接,所述硝酸纤维素膜与吸水垫相互靠近的一端的相互抵接。
上述技术方案的有益效果在于,使得样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按顺序的抵接在所述底板上,其安装简单。
上述技术方案中所述硝酸纤维素膜的TG抗体用浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.5-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜上进行划线作为检测线,同时将羊抗鼠IgG用浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为1-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜上进行划线作为质控线,将涂有TG抗体和羊抗鼠IgG抗体的硝酸纤维素膜置于室温且相对湿度湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存备用。
上述技术方案的有益效果在于,将检测抗体和质控抗体划设在硝酸纤维素膜上。
上述技术方案中所述胶体金垫的制备:取胶体金原液用浓度为0.2M的K2C03溶液调至pH6.5-8.0,再加入标记用的抗人甲状腺球蛋白抗体,其中,标记用的抗人甲状腺球蛋白抗体的用量与胶体金原液的用量之比为1-4ug:20mL,室温搅拌1小时,用酪蛋白或者牛血清蛋白封闭,12000-13000r/min离心30分钟,弃上清液,用胶体金工作液复溶沉淀物至胶体金原液体积用量的70%,然后用喷金机均匀地喷涂在聚酯膜上,并将喷涂后的聚酯膜置于室温且相对湿度15-30%的条件下干燥并密封保存备用。
上述技术方案的有益效果在于:制备方法简单且抗人甲状腺球蛋白的抗体浓度适中。
上述技术方案中所述胶体金液为采用氯金酸一柠檬酸三钠法制备的直径30±5nm的胶体金溶液;所述胶体金工作液包括1wt%牛血清白蛋白、0.1M Tris-HCL缓冲液和20wt%蔗糖且pH为8.0。
上述技术方案的有益效果在于制备方法简单。
附图说明
图1为本发明所述试纸条的结构简图。
图中:1样品垫,2胶体金垫,3硝酸纤维素膜垫,4检测线,5质控线,6吸水垫,7底板。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
如图1所示,一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,包括横向水平设置的条形的硝酸纤维素膜3,所述醋酸纤维膜3上纵向间隔且相互平行的分别设置有一个条形的检测线4和一个条形的质控线5,所述检测线4和质控线5的两端分别与所述硝酸纤维素膜3的两侧边平齐,其中所述硝酸纤维素膜3靠近质控线5一端抵接有一横向水平设置的条形的吸水垫6,所述硝酸纤维素膜3靠近检测线4的一端抵接有一横向水平设置的条形的胶体金垫2,所述胶体金垫2远离硝酸纤维素膜3的一端抵接有一横向水平设置的条形的样品垫1,所述样品垫1、胶体金垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫6的两侧边均平齐;
所述胶体金垫2内含有胶体金标记配对的抗人甲状腺球蛋白抗体,所述检测线4包被有可与抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的检测抗体,质控线5包被有可与游离的抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的质控抗体。
其中,体液型试纸条的样品垫是由处理液处理的玻璃纤维膜于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到的,其中所述处理液包括0.01M PBS、0.1wt%Tween-20、1wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖;全血型试纸条的样品垫包括经红细胞单抗处理后的纤维玻纤膜和滤血膜组成,所述滤血膜压覆在所述纤维玻纤膜下端,用以对全血样品中的血细胞进行过滤;其中,纤维玻纤膜和滤血膜的边缘有2-4mm重叠,并将所得的样品垫于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到。
所述检测抗体为TG抗体;所述质控抗体为羊抗鼠IgG。
还包括一个条形的底板,所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫沿底板长度方向依次铺设在所述底板上端,且样品垫1与胶体金垫2相互靠近一侧相互抵接,所述胶体金垫2与硝酸纤维素膜3相互靠近一端相互抵接,所述硝酸纤维素膜3与吸水垫6相互靠近的一端的相互抵接,且所述吸水垫6为吸水纸。
上述试纸条的制备使用的主要材料
1.1、TG抗体和抗人甲状腺球蛋白抗体均从美国GENETEX公司购买;羊抗鼠IgG自制;氯金酸:Sigma公司产品;硝酸纤维素膜:Sartorius公司产品;牛血清白蛋白(BSA),聚乙二醇PEG20000均为Sigma公司产品,其它常用试剂均为分析纯试剂。
1.2临床样本由公司在相关医院获得,共300份,其中确诊为甲状腺癌病人淋巴结组织穿刺样本、血清样本、血浆样本和全血样本各30份,TG检测值为20-300mg/L;正常人血清样本、淋巴组织穿刺样本和血清样本各60份,TG值<20mg/L。
1.3免疫层析结果结判读记录仪:型号:RH001,马鞍山瑞恒科技有限公司广品。
实施例1
胶体金垫的制备
所述胶体金垫的制备:取100mL胶体金原液用浓度为0.2M的K2C03溶液调至pH6.5-8.0,再加入5-20ug标记用的抗人甲状腺球蛋白抗体,室温搅拌1小时,用酪蛋白或者牛血清蛋白封闭,12000-13000r/min离心30分钟,弃上清液,用胶体金工作液复溶至70mL,然后用喷金机均匀地喷涂在聚酯膜上,将所得的聚酯膜于室温相对湿度15-30%的条件下干燥并密封保存备用;所述胶体金原液为采用氯金酸-柠檬酸三钠法制备的直径30±5nm的胶体金溶液;所述胶体金工作液包括1wt%牛血清白蛋白、0.1M Tris-HCL缓冲液和20wt%蔗糖且pH为8.0,具体见表1。
表1为四种不同配比的胶体金垫制备参数具体数值
实施例2
硝酸纤维素膜的制备
所述硝酸纤维素膜的TG抗体用浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.5-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜上进行划线作为检测线,同时将羊抗鼠IgG用含1%的浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为1-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜上进行划线作为质控线,将所得的硝酸纤维素膜于室温相对湿度湿度为15-30%的条件下干燥,密封保存备用,具体见表2。
表2为三种不同配比的硝酸纤维素膜制备参数具体数值
实施例4
样品垫的制备
体液型样品垫:所述样品垫是由处理液处理的玻璃纤维膜于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥,密封保存而得到的,其中所述处理液包括0.01M PBS、0.1wt%Tween-20、1wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖。
体液型样品垫C1于室温在相对湿度为15%的条件下干燥,C2于室温在相对湿度为22%的条件下干燥,C3于室温在相对湿度为30%的条件下干燥。
全血型样品垫:所述样品垫包括经红细胞单抗处理后的纤维玻纤膜和滤血膜组成,所述滤血膜压覆在所述纤维玻纤膜下端,用以对全血样品中的血细胞进行过滤;其中,纤维玻纤膜和滤血膜的边缘有2-4mm重叠,将所得到的样品垫于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到。
全血型样品垫C4于室温在相对湿度为15%的条件下干燥,C5于室温在相对湿度为22%的条件下干燥,C6于室温在相对湿度为30%的条件下干燥。
实施例5
试纸条的制备
将实施例2-4中分别所得胶体金垫、硝酸纤维素膜和样品垫分别与吸水垫(吸水纸)组合成不同的试纸条,其中每个试纸条的吸水垫规格均一致,故吸水垫不做改变,分别组合成体液型试纸条A1B1C1、A2B2C2、A3B3C3和A4B2C3;全血型试纸条A1B1C4、A2B2C5、A3B3C6和A4B2C5。
实施例6
将实施例5中所得的六种类型的试纸条分别使用0.5、10、50、100、200、300mg/L的TG标准品进行测定,对于每种不同的试纸条,不同浓度的标准品显示出不同强度色带,但相同浓度的标准品显示出相同强度色带。可见本发明各实施例所述的各样品垫、胶体金垫和硝酸纤维素膜的均一性强。
实施例7
临床样本的获得与分类,临床样本由公司在相关医院获得,共240份,其中确诊为甲状腺癌病人淋巴结组织穿刺样本、血清样本、血浆样本、全血样本各30份,TG检测值为20-300mg/L;正常人血清样本、组织穿刺样本各60份,TG值<20mg/L。
检测方法,将检测试剂及样本平衡至室温,取出试纸条,平放;检测体液样品中的TG时,分别精确吸取50-120ul的被检样本如血清、血浆,或者取直径为3-6mm活检穿刺组织,剪碎后加入到配有lmL样品稀释液(0.01M PBS PH.4;或0.9%NaCl PH7.4)中,混匀,然后在体液型试纸条的样品垫中加入100ul血清、血浆样品或者稀释好的样本,15-20分钟内用免疫层析结果判读记录定量判定结果;检测全血样品中TG时,分别精确吸取100-150ul的被检全血样本加在全血型试纸条的样品垫上,15-20分钟内用免疫层析结果判读记录定量判定结果。
结果
1、试纸参数确定根据小样的检测结果,确定了TG抗体标记pH值为6.5-8.0;TG抗体最佳标记量为5-20ug/ml胶体金溶液;最佳的胶体金工作液为pH8.0,包括1%牛血清白蛋白、0.lMTr is-HCl缓冲液、20%蔗糖;最佳包抗原的浓度为TG为1.0mg/mL。检测结果的最佳判定时间为15-20分钟。
2、临床样本检测对120份临床样本进行检测,检测均为阳性的为57例,均为阴性的为58例,和临床相比,阳性、阴性预期值均为100%。另5例为可疑结果。综合结果的一致率为95.8%。和单独检测相比,一致率相当,但阳性、阴性预期值明显上升。在定量检测方面,相关系数r均大于0.95,t检验p>0.05,不一致的检测离群值〈2%。定量检测效果较好。通过以上结果可以判定检测装置的性能良好,具有操作简便、反应快速、结果准确、可信、适合现场检测等优点,适合临床对更为准确、简便检测的需要。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,包括横向水平设置的条形的硝酸纤维素膜(3),所述醋酸纤维膜(3)上纵向间隔且相互平行的分别设置有一个条形的检测线(4)和一个条形的质控线(5),所述检测线(4)和质控线(5)的两端分别与所述硝酸纤维素膜(3)的两侧边平齐,其中所述硝酸纤维素膜(3)靠近质控线(5)一端抵接有一横向水平设置的条形的吸水垫(6),所述硝酸纤维素膜(3)靠近检测线(4)的一端抵接有一横向水平设置的条形的胶体金垫(2),所述胶体金垫(2)远离硝酸纤维素膜(3)的一端抵接有一横向水平设置的条形的样品垫(1),所述样品垫(1)、胶体金垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水垫(6)的两侧边均平齐;
所述胶体金垫(2)内含有胶体金标记配对的抗人甲状腺球蛋白抗体,所述检测线(4)包被有可与抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的检测抗体,质控线(5)包被有可与游离的抗人甲状腺球蛋白抗体特异性结合的质控抗体。
2.根据权利要求1所述的检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,所述样品垫(1)是由处理液处理的玻璃纤维膜于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到的,其中所述处理液包括0.01M PBS、0.1wt%Tween-20、1wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖。
3.根据权利要求1所述的检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,所述样品垫(1)包括经红细胞单抗处理后的纤维玻纤膜和滤血膜,所述滤血膜压覆在所述纤维玻纤膜下端,用以对全血样品中的血细胞进行过滤;其中,纤维玻纤膜和滤血膜的边缘有2-4mm重叠,将所述纤维玻纤膜和滤血膜制得的样品垫(1)置于室温相对湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存而得到。
4.根据权利要求1所述的检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,所述吸水垫为吸水纸。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,所述检测抗体为TG抗体;所述质控抗体为羊抗鼠IgG。
6.根据权利要求5所述的检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条,其特征在于,还包括一个条形的底板(7),所述样品垫(1)、胶体金垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水垫(6)沿底板(7)长度方向依次铺设在所述底板(7)上端。
7.一种如权利要求6所述的试纸条的制备方法,其特征在于,步骤如下:
将样品垫(1)、胶体金垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水垫(6)依次沿底板(7)长度方向粘附在所述底板(7)上端,且样品垫(1)与胶体金垫(2)相互靠近一侧相互抵接,所述胶体金垫(2)与硝酸纤维素膜(3)相互靠近一端相互抵接,所述硝酸纤维素膜(3)与吸水垫(6)相互靠近的一端的相互抵接。
8.根据权利要求7所述的试纸条的制备方法,其特征在于,所述硝酸纤维素膜(3)的TG抗体用浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为0.5-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜(3)上进行划线作为检测线(4),同时将羊抗鼠IgG用浓度为0.01M且pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制成浓度为1-2mg/mL的抗体溶液,将其以1.0-2.0uL/cm的喷涂量用喷膜仪在硝酸纤维素膜(3)上进行划线作为质控线(5),将涂有TG抗体和羊抗鼠IgG抗体的硝酸纤维素膜(3)置于室温且相对湿度湿度为15-30%的条件下干燥并密封保存备用。
9.根据权利要求7所述的试纸条的制备方法,其特征在于,所述胶体金垫(2)的制备:取胶体金原液用浓度为0.2M的K2C03溶液调至pH6.5-8.0,再加入标记用的抗人甲状腺球蛋白抗体,其中,标记用的抗人甲状腺球蛋白抗体的用量与胶体金原液的用量之比为1-4ug:20mL,室温搅拌1小时,用酪蛋白或者牛血清蛋白封闭,12000-13000r/min离心30分钟,弃上清液,用胶体金工作液复溶沉淀物至胶体金原液体积用量的70%,然后用喷金机均匀地喷涂在聚酯膜上,并将喷涂后的聚酯膜置于室温且相对湿度15-30%的条件下干燥并密封保存备用。
10.根据权利要求9所述的试纸条的制备方法,其特征在于,所述胶体金原液为采用氯金酸-柠檬酸三钠法制备的直径30±5nm的胶体金溶液;所述胶体金工作液包括1wt%牛血清白蛋白、0.1M Tris-HCL缓冲液和20wt%蔗糖,且pH为8.0。
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