CN105510593A - 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法 - Google Patents

一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105510593A
CN105510593A CN201510834618.2A CN201510834618A CN105510593A CN 105510593 A CN105510593 A CN 105510593A CN 201510834618 A CN201510834618 A CN 201510834618A CN 105510593 A CN105510593 A CN 105510593A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
kit
add
quality
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510834618.2A
Other languages
English (en)
Inventor
朱驰
王键
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING HOMA BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Original Assignee
BEIJING HOMA BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BEIJING HOMA BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd filed Critical BEIJING HOMA BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Priority to CN201510834618.2A priority Critical patent/CN105510593A/zh
Publication of CN105510593A publication Critical patent/CN105510593A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种甲状腺球蛋白(TG)的测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，本发明还公开了该试剂盒的制备方法。本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，与现有酶联免疫的技术相比，本发明具有更高的特异性，灵敏度，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠，大大降低了产品成本。

Description

一种甲状腺球蛋白(TG)测试试剂盒及其测试方法
技术领域
本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法。
背景技术
甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)，是甲状腺滤泡上皮分泌的660ku糖蛋白，每个TG约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的TG也释放入血，部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。血清TG的改变较多见于甲状腺部位的恶性肿瘤，如TG在甲状腺滤泡状癌、甲状腺乳头状癌和间变癌都可出现不同程度的升高；而甲状腺髓样癌血TG可正常或降低。前者主要是因为甲状腺的破坏以及肿瘤组织分泌一定量的TG，而致血中TG升高；后者的肿瘤组织来源于甲状腺C细胞，而非甲状腺上皮细胞，故其血清TG并不升高。甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲状腺疾病都可出现血中TG水平升高。从检测的角度上来说，目前临床上用于测定TG的方法主要放免法、ELISA法、化学发光法等。
过去以放免为代表的甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场；酶联免疫法(ELISA)作为定性检测的方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，其灵敏度、特异性均较好，且经济实惠，所以是应用得最广、最多的方法。化学发光法其灵敏度高，从化学角度和自动化程度看，化学发光法优于酶联免疫法。这些方法虽然都有很多优点，但在检测的灵敏度、特异性、稳定性、检测用时等方面还有待进一步提高。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果稳定可靠的甲状腺球蛋白(TG)的测试试剂盒及其测试方法。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂4％-6％，试剂R16％-8％，试剂R26％-8％，标准品4％-6％，质控品1％-3％，校准品2％-4％，清洗浓缩液15％-30％，稀释液10％-25％，发光底物25％-40％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％，试剂R16％，试剂R26％，标准品4％，质控品1％，校准品4％，清洗浓缩液15％，稀释液25％，发光底物35％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4.76％，试剂R17.14％，试剂R27.14％，标准品4.76％，质控品1.59％，校准品3.17％，清洗浓缩液23.82％，稀释液15.87％，发光底物31.75％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂6％，试剂R18％，试剂R28％，标准品6％，质控品3％，校准品2％，清洗浓缩液30％，稀释液10％，发光底物27％。
所述试剂盒中各组分按照如下制备方法制得：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间即符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、磁分离试剂的配制：
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的TG磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试剂盒中磁分离试剂。
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧瓶中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心大约20分钟，浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后立即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15MPH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除铵离子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1MMgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物稀释液以1：2000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步：试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于1L烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)1.8g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第四步：标准品、质控品和校准品的配制：
(1)甲状腺球蛋白(TG)定量测定试剂盒TG标准品原料配制成浓度点为0，2，10，100，250，500ng/ml；质控品配制的浓度点为6，250ng/ml，校准品的浓度点为10,250ng/ml；(2)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用0.2um滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第六步：稀释液配制过程：
(1)称取900g小牛血清于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取1ml倒入上述1L的容器中；
(3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第七步：发光底物配制
发光底物配制操作规程：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
一种甲状腺球蛋白的测试方法，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内校准品(选)进行曲线校正，并用质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加TG标准品、质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂R1至每一试管中；
(4)加试剂R2至每一试管中；
(5)加磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液对样品进行稀释。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，与现有技术相比，在出结果时间上较传统酶联免疫法少10-20分钟，同时抗体的用量降低了20％左右，在提高产品性能的同时，大大降低了产品成本。
(2)本发明公开了一种新的专用试剂R2，使得反应过程更加稳定可靠，具有更高的检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数。
(3)试剂盒中的磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液、稀释液以及发光底物的配比均是反应体系下的最优配方，给该试剂盒的使用有效期及检测性能提供了有力保障。
(4)本发明试剂盒的精确度、灵敏度以及稳定性均优于市场同类产品，并且成本低廉，操作简单，应用前景广阔。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1:
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂4％，试剂R16％，试剂R26％，标准品4％，质控品1％，校准品4％，清洗浓缩液15％，稀释液25％，发光底物35％。
本发明上述甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒的制备方法，其具体步骤如下：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：配方见表1，以配制1L为例：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间即符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
磁珠缓冲液(表1)
二、磁分离试剂的配制
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的TG磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试剂盒中磁分离试剂。
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：配方见表2，以配制1L为例：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧瓶中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R1稀释液(表2)
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)标记的小鼠抗人TG单克隆抗体)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心大约20分钟，浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后立即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15MPH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除铵离子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1MMgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物稀释液以1：2000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步：试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程：配方见(表3)，以配制1L为例：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于1L烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)1.8g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R2的配制(表3)
第四步：标准品、质控品和校准品的配制：
(1)最高点：最高浓度点为X，目标点浓度为A,B,C,D,E,F，配制V体积的溶液时，需加入原料的体积为分别为：(表4)
浓度 加入标准品稀释液体积 加入X体积
A V-A*V/X A*V/X
B V-B*V/X B*V/X
C V-C*V/X C*V/X
D V-D*V/X D*V/X
浓度 加入标准品稀释液体积 加入X体积
E V-E*V/X E*V/X
F V-F*V/X F*V/X
(2)甲状腺球蛋白(TG)定量测定试剂盒TG标准品原料配制成浓度点为0，2，10，100，250，500ng/ml；质控品配制的浓度点为6，250ng/ml，校准品的浓度点为10,250ng/ml；
(3)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：配方见(表5)，以配制1L为例：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用0.2um滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
清洗浓缩液的配制(表5)
第六步：稀释液配方见(表6)，以配制1L为例：
(1)称取900g小牛血清于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取1ml倒入上述1L的容器中；
(3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
稀释液的配制(表6)
第七步：发光底物配制操作规程：配方见(表7)，以配制1L为例：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
发光底物的配制(表7)
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内4μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂6μlR1至每一试管中；
(4)加试剂6μlR2至每一试管中；
(5)加4μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将15μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加35μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用25μl稀释液对样品进行稀释。
实施例2：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂4.76％，试剂R17.14％，试剂R27.14％，标准品4.76％，质控品1.59％，校准品3.17％，清洗浓缩液23.82％，稀释液15.87％，发光底物31.75％。
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内3.17μl校准品(选)进行曲线校正，并用X(X<1.59μl)质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4.76μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂7.14μlR1至每一试管中；
(4)加试剂7.14μlR2至每一试管中；
(5)加4.76μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将23.82μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加31.75μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用15.87μl稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
实施例3：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂6％，试剂R18％，试剂R28％，标准品6％，质控品3％，校准品2％，清洗浓缩液30％，稀释液10％，发光底物27％。
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内2μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl(X<3μl)质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加6μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂8μlR1至每一试管中；
(4)加试剂8μlR2至每一试管中；
(5)加6μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将30μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加27μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用10μl稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
临床试验：
1、检测数据
标本采自1000例正常体检、供血者。样本体检结果均无肝、脑、肾、消化道疾病，半年内无输血和大手术史，妇女不在妊娠期和哺乳期。将测值进行统计学分析，得出正常血清参考范围：2-50ng/ml；
本数据仅供参考，不同地区、不同个体以及采用不同方法进行检测，所测得的TG水平也会有所不同，建议各实验室建立自己的正常值范围。不可仅凭本方法得出的TG值作出诊断，仅作为中间数据参考作用，应结合临床其他资料分析结果，包括病人的具体情况和治疗状况。通过其他方法得到的样品中的TG浓度值与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。超出试剂盒测定范围的样本，系统将无法给出确切的数值。如欲测定其确切的结果，建议稀释后再进行测定。本试剂盒的检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据，为达到诊断目的，此检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。本品可用于血清样本的测定，用于其他体液样本中TG浓度测定的可靠性未得到充分确认。
2、本发明试剂盒性能指标
分析灵敏度定义为：对20次零标准品的测定，取其2倍的平均偏差，其在标准曲线上所对应的浓度即为分析灵敏度；分析灵敏度：0.5ng/ml；精密性：批内变异CV％≦10.0％；批间变异CV％≦15.0％；线性系数：r≥0.9900；线性范围：0.5-500ng/ml：
与主要类似物的交叉反应情况：
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
2.根据权利要求1所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％-6％，试剂R16％-8％，试剂R26％-8％，标准品4％-6％，质控品1％-3％，校准品2％-4％，清洗浓缩液15％-30％，稀释液10％-25％，发光底物25％-40％。
3.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％，试剂R16％，试剂R26％，标准品4％，质控品1％，校准品4％，清洗浓缩液15％，稀释液25％，发光底物35％。
4.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4.76％，试剂R17.14％，试剂R2,7.14％，标准品4.76％，质控品1.59％，校准品3.17％，清洗浓缩液23.82％，稀释液15.87％，发光底物31.75％。
5.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂6％，试剂R18％，试剂R28％，标准品6％，质控品3％，校准品2％，清洗浓缩液30％，稀释液10％，发光底物27％。
6.根据权利要求1-5所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中各组分按照如下制备方法制得：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间即符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、磁分离试剂的配制：
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的TG磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试剂盒中磁分离试剂。
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧瓶中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心大约20分钟，浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后立即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15MPH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除铵离子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1MMgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物稀释液以1：2000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步：试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于1L烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)1.8g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第四步：标准品、质控品和校准品的配制：
(1)甲状腺球蛋白(TG)定量测定试剂盒TG标准品原料配制成浓度点为0，2，10，100，250，500ng/ml；质控品配制的浓度点为6，250ng/ml，校准品的浓度点为10,250ng/ml；
(2)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用0.2um滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第六步：稀释液配制过程：
(1)称取900g小牛血清于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取1ml倒入上述1L的容器中；
(3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第七步：发光底物配制
发光底物配制操作规程：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存。
7.一种甲状腺球蛋白的测试方法，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内校准品(选)进行曲线校正，并用质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加TG标准品、质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂R1至每一试管中；
(4)加试剂R2至每一试管中；
(5)加磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液对样品进行稀释。
CN201510834618.2A 2015-11-26 2015-11-26 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法 Pending CN105510593A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510834618.2A CN105510593A (zh) 2015-11-26 2015-11-26 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510834618.2A CN105510593A (zh) 2015-11-26 2015-11-26 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105510593A true CN105510593A (zh) 2016-04-20

Family

ID=55718721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510834618.2A Pending CN105510593A (zh) 2015-11-26 2015-11-26 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105510593A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105973878A (zh) * 2016-05-17 2016-09-28 北京豪迈生物工程有限公司 一种层粘连蛋白（ln）测试试剂盒及其测试方法
CN106501504A (zh) * 2016-09-26 2017-03-15 王键 层粘连蛋白测试试剂盒及其制备方法
CN106501503A (zh) * 2016-09-26 2017-03-15 王键 透明质酸（ha）测试试剂盒及其制备方法
CN106706927A (zh) * 2017-01-13 2017-05-24 广州华弘生物科技有限公司 一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒
CN107870234A (zh) * 2017-10-19 2018-04-03 施康培医疗科技（武汉）有限公司 一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法
CN108226464A (zh) * 2018-02-05 2018-06-29 江苏泽成生物技术有限公司 一种测定甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102426249A (zh) * 2011-08-31 2012-04-25 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 促甲状腺激素(tsh)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102435754A (zh) * 2011-08-31 2012-05-02 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 游离三碘甲状腺原氨酸(ft3)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102901812A (zh) * 2012-11-13 2013-01-30 江阴泽成生物技术有限公司 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN104614535A (zh) * 2015-02-10 2015-05-13 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 甲状腺微粒体抗体检测试剂盒及其制备方法和应用
WO2015084867A1 (en) * 2013-12-02 2015-06-11 Brandeis University Multivalent glycopeptides that tightly bind to target proteins

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102426249A (zh) * 2011-08-31 2012-04-25 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 促甲状腺激素(tsh)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102435754A (zh) * 2011-08-31 2012-05-02 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 游离三碘甲状腺原氨酸(ft3)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102901812A (zh) * 2012-11-13 2013-01-30 江阴泽成生物技术有限公司 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
WO2015084867A1 (en) * 2013-12-02 2015-06-11 Brandeis University Multivalent glycopeptides that tightly bind to target proteins
CN104614535A (zh) * 2015-02-10 2015-05-13 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 甲状腺微粒体抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105973878A (zh) * 2016-05-17 2016-09-28 北京豪迈生物工程有限公司 一种层粘连蛋白（ln）测试试剂盒及其测试方法
CN106501504A (zh) * 2016-09-26 2017-03-15 王键 层粘连蛋白测试试剂盒及其制备方法
CN106501503A (zh) * 2016-09-26 2017-03-15 王键 透明质酸（ha）测试试剂盒及其制备方法
CN106706927A (zh) * 2017-01-13 2017-05-24 广州华弘生物科技有限公司 一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒
CN107870234A (zh) * 2017-10-19 2018-04-03 施康培医疗科技（武汉）有限公司 一种检测甲状腺球蛋白浓度的试纸条及其制备方法
CN108226464A (zh) * 2018-02-05 2018-06-29 江苏泽成生物技术有限公司 一种测定甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105510593A (zh) 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法
CN102435752B (zh) 人的肌红蛋白(Myoglobin)定量测定试剂盒
CN105510594A (zh) 一种降钙素原(pct)测试试剂盒及其测试方法
CN102227639B (zh) 人体液中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂c的测定方法
CN107543932A (zh) 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
CN106053826A (zh) Ⅲ型前胶原n端肽定量测定试剂盒及其制备方法
CN102323419B (zh) 地高辛(Digoxin)定量测定试剂盒及其检测方法
CN104034892A (zh) 一种肿瘤标志物afp磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN106501503A (zh) 透明质酸（ha）测试试剂盒及其制备方法
CN102323418A (zh) B型利钠肽原前体(proBNP)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102323417B (zh) 胃蛋白酶原i(pgi)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102426246A (zh) 人肌钙蛋白I(Troponin I)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102288767B (zh) 糖类抗原72-4(ca72-4)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102288766B (zh) 糖类抗原15-3(ca15-3)定量测定试剂盒及其检测方法
CN105277717A (zh) 一种甲状腺球蛋白的磁微粒分离化学发光免疫检测方法
CN105973878A (zh) 一种层粘连蛋白（ln）测试试剂盒及其测试方法
CN102426245A (zh) 细胞角质蛋白19片段(cyfra21-1)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102426236A (zh) 胃蛋白酶原ii(pgii)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102426255A (zh) 游离甲状腺素(ft4)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102426256A (zh) 糖类抗原19-9(ca19-9)定量测定试剂盒及其检测方法
CN103389375A (zh) 一种用于肺癌诊断的液相芯片试剂盒
CN102435751B (zh) C肽(c-p)定量测定试剂盒
CN105467137A (zh) 游离人绒毛膜性腺激素β亚单位测试试剂盒及其测试方法
CN102435755A (zh) 总三碘甲状腺原氨酸(tt3)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102435741A (zh) 人高敏c反应蛋白(hs-crp)定量测定试剂盒及其检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160420

RJ01 Rejection of invention patent application after publication