CN109730309A - 健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ‑氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，复合B族维生素1份，水苏糖1份。本发明还公开了健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素的制备方法及应用。本发明产品具有更强的生物活性，提高人体基础代谢，能够对健脑益智、宁心安神、缓解压力作用产生积极的影响。

Description

健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素及制备方法

技术领域

本发明涉及营养功能性食品与生物发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素及制备方法。

背景技术

青少年属于一个特殊的年龄阶段，身体发育和心智发育都尚未健全，现今社会，青少年面对学习和生活的多重压力，成为“嗷嗷待哺”的高压群体。由于个体差异性的存在，部分性格闭塞或者叛逆的青少年无法或拒绝用倾诉的方式排解压力和坏情绪。青少年通过食补食疗的方式是有效的疏解方式。我国传统的炒、煎、炸等烹饪方式会导致食品中的钙元素的大量流失。因此，在合理膳食的基础上，适当补充一些营养补品，提高饮食营养程度，并且不增加胃部和消化系统的负担，提高人体基础代谢，改善因年龄、压力造成的各种症状，是非常有必要的。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素及制备方法，其具有更强的生物活性，提高人体基础代谢，能够对健脑益智、宁心安神、缓解压力作用产生积极的影响。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，复合B族维生素1份，水苏糖1份。

优选的是，所述发酵全蛋粉的制备方法为：

步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。

优选的是，步骤一中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

优选的是，复合B族维生素为维生素B1、B12、B3和/或B6。

健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素的制备方法，包括：

步骤a、将上述重量份数的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加入5倍总重量的70wt.％乙醇，回流提取2h，过滤，得第一药渣和第一药液，将第一药液离心分离，得到第一上清液，向第一药渣中加入4倍总重量的80wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第二药渣和第二药液，将第二药液离心分离，得到第二上清液，向第二药渣中加入3倍总重量的90wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第三药渣和第三药液，将第三药液离心分离，得到第三上清液，合并第一上清液、第二上清液、第三上清液，减压浓缩至相对密度为1.5，干燥，粉碎，喷涂紫苏籽油，过筛，将筛上物置于-20℃环境中冷冻1h，将筛下物置于0℃环境中冷藏1h，再次混合，喷涂紫苏籽油，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、人参发酵粉、茶氨酸、发酵全蛋粉、复合B族维生素、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备改善睡眠、缓解压力作用的产品中的应用。

健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备益智的产品中的应用。

健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备提高骨密度、改善骨质疏松的产品中的应用。

本发明至少包括以下有益效果：

本发明的产品针对青少年群体，提高饮食营养程度，不增加胃部和消化系统的负担，提高人体基础代谢，改善因年龄、压力造成的各种症状，精选中药配方用浓度梯度上升、用量梯度减小的醇液进行药渣的多重醇提，能够进一步将细胞壁和细胞膜破碎或溶解，提高药物有效成分从基体中分离，复配添加各营养物质，其中通过酸水解和双重酶水解和发酵及包埋等方法不仅提高了全蛋(蛋壳、壳膜、蛋清和蛋黄液)营养素的释放，经生物降解和转化后提高了吸收利用率，而且脱除了原蛋液蛋粉的蛋腥味及过高胆固醇，产品富含多种有机钙，磷脂型多肽寡肽及内源活性酶等活性物质，通过与优选配方复配制备具有改善睡眠、缓解压力、益智、安神、提高骨密度、改善骨质疏松等多种生物活性，可广泛应用于营养功能性食品、特膳特医食品、保健食品等，也可进一步分离提纯相关营养功能性物质，应用于生物医药领域和食品领域的非医药用途方面。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

<实例1>

益智安神的益智仁复合多肽营养素，、包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，维生素B1和B12 1份，水苏糖1份。

制备方法包括：

步骤a、将上述重量份数的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加入5倍总重量的70wt.％乙醇，回流提取2h，过滤，得第一药渣和第一药液，将第一药液离心分离，得到第一上清液，向第一药渣中加入4倍总重量的80wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第二药渣和第二药液，将第二药液离心分离，得到第二上清液，向第二药渣中加入3倍总重量的90wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第三药渣和第三药液，将第三药液离心分离，得到第三上清液，合并第一上清液、第二上清液、第三上清液，减压浓缩至相对密度为1.5，干燥，粉碎，喷涂紫苏籽油，过筛，将筛上物置于-20℃环境中冷冻1h，将筛下物置于0℃环境中冷藏1h，再次混合，喷涂紫苏籽油，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、茶氨酸、人参发酵粉、发酵全蛋粉、复合B族维生素B1和B12、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

人参发酵粉的制备方法：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。

<实例2>

益智安神的益智仁复合多肽营养素，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，维生素B3和B6 1份，水苏糖1份。

制备方法包括：

步骤a、将上述重量份数的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加入5倍总重量的70wt.％乙醇，回流提取2h，过滤，得第一药渣和第一药液，将第一药液离心分离，得到第一上清液，向第一药渣中加入4倍总重量的80wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第二药渣和第二药液，将第二药液离心分离，得到第二上清液，向第二药渣中加入3倍总重量的90wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第三药渣和第三药液，将第三药液离心分离，得到第三上清液，合并第一上清液、第二上清液、第三上清液，减压浓缩至相对密度为1.5，干燥，粉碎，喷涂紫苏籽油，过筛，将筛上物置于-20℃环境中冷冻1h，将筛下物置于0℃环境中冷藏1h，再次混合，喷涂紫苏籽油，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、茶氨酸、人参发酵粉、发酵全蛋粉、复合B族维生素B3和B6、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

所述发酵全蛋粉的制备方法为：

步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。

人参发酵粉的制备方法：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。

<中药原料的预处理功效评价试验>

将大肠杆菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)、鸡沙门氏菌(Salmonella gullinarum)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)接种于琼脂斜面培养基上，37℃培养24h使其活化，接种于2mL无菌新鲜肉汤中，37℃培养18h，经比浊法测定活菌，配制成10⁶CFU/mL的菌液备用。取实例1、对比例1、对比例2的产品用1倍量的水定容，对以上供试菌株进行体外药物敏感试验，测量抑菌圈大小。

<对比例1>

益智安神的益智仁复合多肽营养素，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，维生素B3和B6 1份，水苏糖1份。

制备方法包括：

步骤a、将上述重量份数的的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加入80％乙醇溶液浸泡1h，回流1h，功率，加入80％乙醇溶液回流1h，合并滤液，蒸馏回收至乙醇蒸干，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、茶氨酸、人参发酵粉、发酵全蛋粉(取市面上出售或自制产品)、维生素B3和B6、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

人参发酵粉的制备方法：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。

<对比例2>

益智安神的益智仁复合多肽营养素，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，维生素B3和B6 1份，水苏糖1份。

制备方法包括：

步骤a、将上述重量份数的的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加蒸馏水浸泡，用中火微波处理5min，冷却，重复微波处理一次，离心，取上清液，水浴浓缩，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、茶氨酸、人参发酵粉、发酵全蛋粉(取市面上出售或自制产品)、维生素B3和B6、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

人参发酵粉的制备方法：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。

表1

试验结果表明，实例1的抑菌效果相对于对比例1、对比例2有所提升，这是因为用浓度梯度上升、用量梯度减小的醇液进行药渣的多重醇提，能够进一步将细胞壁和细胞膜破碎或溶解，提高药物有效成分从基体中分离。

<食用米醋的预处理功效评价试验>

1、食用米醋的预处理对蛋膜角蛋白的提取的影响

将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，去除蛋黄和蛋清，留下蛋膜，清洗，干燥，称重，得蛋膜初始质量，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中。

以蛋膜刚好完全溶解，没有肉眼明显的碎片为终点，计算蛋膜溶解时间，将溶液在室温下下浓缩至100mL，调节pH至等电点使角蛋白沉淀分离，静置30min，离心分离，将不溶物复提1次，将下层角蛋白转入直径25mm、截留分子量8000-14 000D、再生纤维素材质透析袋透析3d，每4h换1次水。透析完成后，将经纯化的角蛋白在真空压力15Pa、温度-45℃条件下真空冷冻干燥，得到角蛋白，称重，得角蛋白质量，计算角蛋白得率＝角蛋白质量/蛋膜初始质量×100％。

<对比例3>

食用米醋为室温下的食用米醋。

<对比例4>

食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

表2

试验结果表明，对比例4的蛋膜溶解时间显著少于对比例3，而角蛋白得率显著高于对比例3，这是因为食用米醋为经过冷冻-解冻预处理，能够以较快的速度将蛋膜溶胀，破坏蛋膜表层的氢键和盐式键，将包埋在蛋膜中的角蛋白释放。

2、食用米醋的预处理对蛋白的氨基酸提取的影响

将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌，将全蛋体发酵液过滤、均质。采用GB/T 5009.124-2003法测定氨基酸含量mg/100mL。

<对比例5>

食用米醋为室温下的食用米醋。

<对比例6>

食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

表3

试验结果表明，对比例6检测出18种氨基酸，对比例5检测出14种氨基酸，这是因为食用米米醋经过冷冻-解冻预处理，能够蛋膜中的角蛋白释放，增强生物活性和生物利用度。

<复合多肽营养素功效评价试验>

1、改善睡眠试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、乙醇提取组、微波提取组、复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，乙醇提取组灌胃对比例1制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，微波提取组灌胃对比例2制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，复合多肽营养素组灌胃实例1制备的复合多肽营养素，剂量分别为150mg/(kg·d)，优选复合多肽营养素组灌胃实例2制备的优选复合多肽营养素，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d。

1.1、巴比妥钠阈下剂量催眠实验和睡眠潜伏期试验

末次灌胃30min后，按阈下剂量300mg/(kg·BW)腹腔注射巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，观察受试物对注射阈下巴比妥钠的小鼠入睡率的影响，末次灌胃30min后，按300mg/(kg·BW)腹腔注射巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，观察受试物对巴比妥钠对小鼠睡眠潜伏期的影响。结果如表4所示：

表4

试验结果分析：复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组与空白对照组比较、乙醇提取组和微波提取组比较，可显著改善受试小鼠的睡眠状况，增加注射阈下剂量巴比妥钠小鼠的入睡率，显著缩短注射阈下剂量巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期。

1.2、戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验

末次灌胃30min后，腹腔注射300mg/(kg·d)戊巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，以翻正反射消失为指标，记录入睡数量和睡眠时间，结果如表5所示。

表5

试验结果分析：复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组、乙醇提取组、微波提取组与空白对照组比较，睡眠时间显著延长，延长率高达103.7％；复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组与乙醇提取组和微波提取组比较，小鼠睡眠时间显著延长。

1.3人员观察

选取具有睡眠障碍的40人，随机分为成空白对照组、复合多肽营养素组，每组20人。

空白对照组不服用任何疗失眠的药物，复合多肽营养素组服用实例1制备的产品，剂量为5.5g/d，每天服用1次，连续服用60d。

在第90d，填写匹兹堡睡眠质量指数评价表，结果如表6所示。

表6

备注：评分等级：0-5分，睡眠质量很好；6-10分，睡眠质量还行；11-15分，睡眠质量一般；16-21分，睡眠质量很差。

实验结果分析：复合多肽营养素组与空白对照组比较，睡眠质量显著改善。

2、益智试验

2.1避暗试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、乙醇提取组、微波提取组、复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，乙醇提取组灌胃对比例1制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，微波提取组灌胃对比例2制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，复合多肽营养素组灌胃实例1制备的复合多肽营养素，剂量分别为150mg/(kg·d)，优选复合多肽营养素组灌胃实例2制备的优选复合多肽营养素，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d，第31d开始训练，训练期间继续以相同的剂量灌胃，每天1次，试验时将动物面部背向洞口放入明室，同时启动计时器，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每只动物从明室进入暗室避电击所需时间，此即潜伏期。24h或48h后重作试验，记录每只动物10min进入暗室次数，即错误次数，结果如表7所示。

表7

试验结果分析：复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组、乙醇提取组、微波提取组与空白对照组比较，进入暗室次数，即小鼠错误次数明显减少；

复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组与乙醇提取组和微波提取组比较，小鼠错误次数显著减少。

2.2水迷宫试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、乙醇提取组、微波提取组、复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，乙醇提取组灌胃对比例1制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，微波提取组灌胃对比例2制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，复合多肽营养素组灌胃实例1制备的复合多肽营养素，剂量分别为150mg/(kg·d)，优选复合多肽营养素组灌胃实例2制备的优选复合多肽营养素，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d，第31d开始训练，训练期间继续以相同的剂量灌胃，每天1次。迷宫泳道水深15cm，水温25℃，时间限定为120s，在120s内未到终点的动物均记为120s。试验时，将动物放于泳道起点处，同时按下启动键，记录动物到达终点时间和到达终点的动物数，结果如表8所示。

表8

试验结果分析：

复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组、乙醇提取组、微波提取组与空白对照组比较，小鼠出迷宫时间明显减少；

复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组与乙醇提取组和微波提取组比较，小鼠出迷宫时间显著减少。

3、缓解压力和抗抑郁试验

3.1动物试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠30只，饲养一周后，随机分成空白对照组、复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组，每组10只。

空白对照组每日灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，复合多肽营养素组每日灌胃150mg/(kg·d)的实例1制备的复合多肽营养素，优选复合多肽营养素组每日灌胃150mg/(kg·d)的实例2制备的复合多肽营养素，每天灌胃1次，连续处理7天。

3.1、小鼠强迫游泳试验

末次灌胃1h后，将小鼠放入直径20cm，水深20cm的玻璃缸中，水温23-25℃，从小鼠入水后计时，记录后4min内累计不动时间(s)，所谓不动是指小鼠在水中停止挣扎.或动物呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面。

3.2、小鼠悬尾试验

末次灌胃1h后，将小鼠尾部距末端约2cm处，用胶布固定在水平尺上，并倒悬于一敞口箱，头部与箱底保持5cm距离。悬挂计时6min，记录后4min内累计不动时间。

鼠强迫游泳和悬尾试验结果如表9所示。

表9

试验结果分析：

小鼠在强迫游泳模型和悬尾模型中出现的不动状态反映了动物的绝望行为，可模拟人类因受压力而引发的抑郁状态。复合多肽营养素组和优选复合多肽营养素组可显著的缩短小鼠强迫游泳不动和悬尾不动时间；与空白对照组差异显著，证明益智仁复合多肽营养素具有缓解压力和抗抑郁作用。

4、改善骨质疏松、对生长骨骼代谢和骨密度的影响实验

4.1对生长骨骼代谢和骨密度的影响实验

选用出生4周左右的雄性昆明小鼠60只，随机分成空白对照组、乙醇提取组、微波提取组、复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组、钙饲料组，每组10只。空白对照组饲喂基础饲料，乙醇提取组灌胃对比例1制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，微波提取组灌胃对比例2制备的产品，剂量为150mg/(kg·d)，复合多肽营养素组灌胃实例1制备的复合多肽营养素，剂量分别为150mg/(kg·d)，优选复合多肽营养素组灌胃实例2制备的优选复合多肽营养素，剂量为150mg/(kg·d)，钙饲料组饲喂含500mg/100g饲料的钙饲料，空白对照组不灌胃去离子水，其它组灌胃去离子水，饲养90d。

喂养期间定期称重，喂养90d后处死，剥离出右侧股骨，测量股骨长度，于105℃烘箱中烤至恒重，称量骨干重。用骨密度仪测量股骨中点及股骨远心端骨密度。用原子吸收法测量受试动物的骨钙含量，结果如表10、11、12所示。

表10

表11

表12

实验结果分析：

由表10-12可知，复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组、乙醇提取组、微波提取组与空白对照组比较，小鼠体重增加，骨钙含量显著增加，股骨中心点密度和骨远心端密度均明显提高；

复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组与乙醇提取组、微波提取组相比，小鼠体重增幅大，骨钙含量增幅大，股骨中心点密度和骨远心端密度增幅大。

4.2改善青少年骨矿含量和骨密度实验

选取312名12-14岁之间青少年学生为试验对象，平均年龄13.2±0.5岁，其中男生162名，女生150名。分为优选复合多肽营养素组、复合多肽营养素组和空白对照组，每组各104人。优选复合多肽营养素组每天补充实例2制备的优选复合多肽营养素1次，每次100g，复合多肽营养素组每天补充实例1制备的复合多肽营养素1次，每次100g，空白对照组保持正常饮食，连续服用1.5年后，采用双能X线吸收仪(DEXA)测定全身的全身骨矿含量(BMC)和骨矿密度(BMD)值，并观察其变化，结果如表14所示。

实验结果分析：由表14中可知，复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组男生试验后全身骨密度较试验前分别增加0.071g/cm²和0.078g/cm²，全身骨矿含量较试验前分别增加416.68g和421.31g，与空白对照组增加量相比均有所提高；复合多肽营养素组、优选复合多肽营养素组女生试验后全身骨密度较试验前分别增加0.068g/cm²和0.081g/cm²，全身骨矿含量较试验前分别增加285.03g和316.39g，与空白对照组增加量相比也均有所提高。由此可知，通过1.5年补充复合多肽营养素对男、女青少年骨量、骨密度增长具有一定促进作用。

这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。

Claims (8)

1.健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，其特征在于，包括以下重量份的原料：益智仁10份，磷脂酰丝氨酸15份，核桃肽15份，燕窝酸15份，DHA粉15份，花生四烯酸15份，γ-氨基丁酸15份，茶氨酸15份，人参发酵粉15份，发酵全蛋粉60份，酸枣仁10份，龙眼10份，薏苡仁10份，复合B族维生素1份，水苏糖1份。

2.如权利要求1所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，其特征在于，所述发酵全蛋粉的制备方法为：

步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。

3.如权利要求2所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，其特征在于，步骤一中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

4.如权利要求1所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素，其特征在于，复合B族维生素为维生素B1、B12、B3和/或B6。

5.如权利要求1-4任一项所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素的制备方法，其特征在于，包括：

步骤a、将上述重量份数的益智仁、酸枣仁、龙眼、薏苡仁混合，粉碎，加入5倍总重量的70wt.％乙醇，回流提取2h，过滤，得第一药渣和第一药液，将第一药液离心分离，得到第一上清液，向第一药渣中加入4倍总重量的80wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第二药渣和第二药液，将第二药液离心分离，得到第二上清液，向第二药渣中加入3倍总重量的90wt.％乙醇，回流提取，过滤，得第三药渣和第三药液，将第三药液离心分离，得到第三上清液，合并第一上清液、第二上清液、第三上清液，减压浓缩至相对密度为1.5，干燥，粉碎，喷涂紫苏籽油，过筛，将筛上物置于-20℃环境中冷冻1h，将筛下物置于0℃环境中冷藏1h，再次混合，喷涂紫苏籽油，干燥，粉碎，得中药提取物粉末；

步骤b、将上述重量份数的磷脂酰丝氨酸、核桃肽、燕窝酸、DHA粉、花生四烯酸、γ-氨基丁酸、人参发酵粉、茶氨酸、发酵全蛋粉、复合B族维生素、水苏糖混合，加入步骤a制备的中药提取物粉末，干燥，粉碎，过筛，即得。

6.如权利要求1-4任一项所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备改善睡眠、缓解压力作用的产品中的应用。

7.如权利要求1-4任一项所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备益智的产品中的应用。

8.如权利要求1-4任一项所述的健脑益智安神缓解压力益智仁复合多肽营养素在制备提高骨密度、改善骨质疏松的产品中的应用。