CN109369798A - 一种合成索玛鲁肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种合成索玛鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。本发明的方法包括如下步骤：以Fmoc‑Gly王树脂为固相合成起始载体，通过使用新型缩合剂T3P(1‑丙基磷酸酐)进行索玛鲁肽主链30个氨基酸的活化偶联，然后脱除主链Lys26侧链保护基团，通过缩合剂T3P依次活化偶联Fmoc‑AEEA‑AEEA﹑Fmoc‑Glu‑OtBu﹑Oct‑Otbu进行缩合，得到索玛鲁肽全保护肽，经裂解沉淀，得到索玛鲁肽。本发明方法提升了氨基酸偶联效率，极大降低了索玛鲁肽合成过程中产生的消旋肽和缺失肽杂质，尤其是有效抑制或减少了与产品性质极为相近的缺失杂质(Lys26侧链AEEA缺失)的产生，提高了粗品的纯度，降低了纯化的难度，利于进行工业化放大生产。

Description

一种合成索玛鲁肽的方法
技术领域
本发明涉及一种合成索玛鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。
背景技术
索玛鲁肽，英文名Semeglutide，为丹麦诺和诺德公司自主研发的第二代长效GLP-1类似物(第一代为利拉鲁肽Liraglutide)，用于II型糖尿病的治疗，一周仅需注射一次；同时，索玛鲁肽还能通过控制食欲和减少食物摄入量，诱导减肥。从结构上看，Semeglutide是GLP-1(7-37)链上8位的Aib取代了Ala，34位的Arg取代了Lys，26位的Lys接上十八烷酸脂肪链。与Liraglutide相比，Semeglutide的脂肪链更长，疏水性增加，但是Semeglutide经过短链的PEG修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。索玛鲁肽具有降低血糖、减轻体重、促进胰岛细胞再生以及心血管系统保护等多种效应，临床应用前景广阔。
目前已报道的索玛鲁肽的合成方法主要采用固相合成，主要分为常规法和片段法，都有一定程度上的缺陷：比如中国专利CN106928343A中用到了Fmoc-Lys(Alloc)-OH，在最后的脱除中用到了重金属钯，后续重金属很难去除干净影响产品的品质；中国专利CN104356224A将修饰后的Lys接入主链，由于侧链基团大活性低，容易偶联不完全，且对于后续氨基酸的偶联也造成一定程度上的困难，产生大量的缺失肽和消旋肽等杂质肽，影响下游纯化；中国专利CN106749613A把肽链分为三个片段进行偶联，该方法浪费原料，且对于中间体片段需进行质量控制，步骤繁琐又增加了成本，得不偿失。
因此，急需一种简单而高效的索玛鲁肽的合成方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种索玛鲁肽的制备方法，本发明的方法采用缩合剂T3P，提升了偶联效率，减少了杂质的产生，提高了粗肽的纯度和收率，降低合成成本；且本发明采用Fmoc-AEEA-AEEA做原料，减少杂质的产生，进一步提高了粗品的纯度和收率。
本发明的第一个目的是提供一种合成索玛鲁肽的方法，包括如下步骤：
(1)通过固相合成法，按索玛鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂偶联体系进行氨基酸的活化偶联，得到索玛鲁肽主链肽树脂；其中，Lys26采用Fmoc-Lys(R)-OH为原料，其中R为Dde或ivDde；
(2)取固相载体树脂，采用缩合剂偶联体系依次将Fmoc-AEEA和Fmoc-AEEA活化偶联得到Fmoc-AEEA-AEEA-树脂；
(3)将步骤(2)得到的Fmoc-AEEA-AEEA-树脂进行全保护裂解，得到Fmoc-AEEA-AEEA；
(4)脱除步骤(1)得到的索玛鲁肽主链肽树脂中Lys26的保护基，然后采用缩合剂偶联体系依次偶联二肽片段Fmoc-AEEA-AEEA、Fmoc-Glu-OtBu和Oct-OtBu，得到索玛鲁肽全保护肽树脂；
(5)索玛鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到索玛鲁肽。
进一步地，所述的缩合剂为1-丙基磷酸酐。
进一步地，所述的缩合剂偶联体系为1-丙基磷酸酐与碱的混合体系，所述的碱为N,N-二异丙基乙胺(DIEA)或N-甲基吗啡啉(NMM)。
进一步地，所述的1-丙基磷酸酐和碱用量分别为氨基酸1～2倍和2～4倍摩尔量。优选1-丙基磷酸酐和碱用量分别为氨基酸1.2倍和3倍摩尔量。
进一步地，在步骤(1)中，采用替代度为0.2～0.35mmol/g的Fmoc-GlyWang树脂作为固相载体树脂。
进一步地，在步骤(2)中，固相载体树脂为2-Cl-CTC树脂。
进一步地，在步骤(3)中，Fmoc-AEEA-AEEA-树脂的裂解试剂为20～30％体积浓度TFE/DCM溶液。
进一步地，所述Lys侧链保护基的脱除条件为采用1～5％体积浓度的水合肼/DMF或水合肼/DCM溶液处理15～30min，重复2～3次。
进一步地，在步骤(5)中，所述裂解的裂解液按体积含量为90％～95％TFA、1％～5％TIS、1％～5％EDT和1～5％水，裂解液的加入量为10～12ml/g索玛鲁肽全保护肽树脂。
进一步地，在步骤(5)中，所述的裂解是在20～30℃反应2-3h。
进一步地，所述的方法还包括索玛鲁肽纯化、脱盐和冻干步骤。
进一步地，一种合成索玛鲁肽的方法，具体包括如下步骤：
(1)采用15～30％哌啶/DMF去保护液脱除Fmoc-Gly-王树脂上的Fmoc保护基，得到H-Gly-王树脂；
(2)通过固相偶联合成法，按索玛鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂1-丙基磷酸酐(T3P)依次将Fmoc-Arg(Pbf)-OH﹑Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH﹑Fmoc-Leu-OH﹑Fmoc-Trp(Boc)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ile-OH﹑Fmoc-Phe-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Lys(R)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH和Boc-His(Trt)-OH的氨基酸活化偶联，依次将氨基酸接到步骤(1)H-Gly-王树脂中，得到索玛鲁肽主链肽树脂；其中R为Dde或ivDde；
(3)取2-Cl-CTC树脂，采用缩合剂1-丙基磷酸酐依次将Fmoc-AEEA和Fmoc-AEEA活化偶联得到Fmoc-AEEA-AEEA-树脂；
(4)将(3)得到的Fmoc-AEEA-AEEA-树脂进行全保护裂解，重结晶得到Fmoc-AEEA-AEEA；
(5)脱除步骤(2)得到的索玛鲁肽主链肽树脂中Lys的保护基，然后采用缩合剂1-丙基磷酸酐依次偶联二肽片段Fmoc-AEEA-AEEA、Fmoc-Glu-OtBu和Oct-OtBu，得到索玛鲁肽全保护肽树脂；
(6)索玛鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到索玛鲁肽粗品；
(7)步骤(6)的索玛鲁肽粗品经反向高效液相色谱纯化、脱盐，冻干后得到索玛鲁肽。
进一步地，所述反相高效液相色谱法纯化条件为：
流动相：A相为0.1％TFA/纯化水溶液，B相为ACN；
色谱填料：纳微C18填料；
检测波长：220nm；
洗脱条件为A相和B相的混合液，其中B相的体积百分比为在40min内由20％升至50％。
进一步地，所述脱盐条件为：
流动相：A相纯化水；流动相B相为ACN；
色谱填料：纳微C4聚合物填料
检测波长：220nm；
洗脱条件：A相和B相的混合液，其中B相的体积百分比为在40min内由10％升至50％。
本发明的有益效果是：
(1)本发明在侧链偶联中采用了Fmoc-AEEA-AEEA做原料，减少难分离杂质(缺AEEA)杂质的产生，提高了粗品的纯度，提高了纯化的收率；
(2)本发明采用高效新型缩合剂T3P，提升偶联效率，减少了杂质的产生，提高了粗肽的纯度和收率，降低了合成成本；
(3)采用本发明合成的索玛鲁肽经HPLC纯化精制后，纯度达到99.69％，总收率达到38.7％，较以往报道的方法有明显提高。
附图说明
图1为索玛鲁肽合成工艺路线图；
图2为索玛鲁肽产品的HPLC图；
图3为索玛鲁肽产品的MS图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
表1本发明相关名词解释
Fmoc 9-芴甲氧羰基
2-Cl CTC Resin 2-氯三苯基氯树脂
T3P 1-丙基磷酸酐
Pbf 2，2，4，6，7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
Trt 三苯甲基
tBu 叔丁基
OtBu 叔丁氧基
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DCM 二氯甲烷
DIEA N，N-二异丙基乙胺
NMM N-甲基吗啡啉
TFA 三氟乙酸
TIS 三异丙基硅烷
EDT 1，2-乙二硫醇
Alloc 烯丙氧羰基
Dde 1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己亚基)乙基
ivDde 1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代环亚己基)-3-甲基丁基
Boc 叔丁氧羰基
ACN 乙腈
实施例1：Fmoc-AEEA-AEEA二肽片段的合成
A.将180g替代度为1.0mmol/g的2-Cl CTC Resin树脂加入反应釜中，加入600mlDCM溶胀30min后，抽干。称取69.37g Fmoc-AEEA置于1L烧杯中，加入600ml DMF溶液，置于冰水浴条件下用磁力搅拌器搅拌，待氨基酸全部溶解后，加入DIEA 31.43ml，继续搅拌活化5min。将以上活化液缓慢加入到反应釜中，15min后补加62.87ml，常温下反应2h，抽干反应液，加入DMF 600ml洗涤1次，重复DMF洗涤2次，加入封闭液600ml(体积比DCM：MeOH：DIEA＝17：2：1)封闭10min后，抽干，重复封闭1次。加入DMF 600ml洗涤1min后，抽干，重复DMF洗涤2次，即得到Fmoc-AEEA-CTC Resin。
B.加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液300ml，混合15min后，抽干。加入DMF 300ml洗涤1min后抽干，重复DMF洗涤4次。取少量树脂进行Kaiser法(茚三酮)检测，显阳性，即脱Fmoc脱除完成。
C.称取104.06g Fmoc-AEEA于干净的1L烧杯，加入DMF600mlDMF溶液，置于冰水浴条件下用磁力搅拌器搅拌，待氨基酸全部溶解后，依次加入T3P96.45ml，DIEA 141.48ml，继续搅拌活化5min。将以上活化液缓慢加入到反应釜中，常温下反应2h，取少量树脂进行Kaiser法检测，显阴性，即偶联完全。反应结束后，抽干反应液，加入DMF600ml洗涤1min后，抽干，重复DMF洗涤2次.加入MeOH 600ml收缩10min后，抽干，重复MeOH收缩2次，抽干后即得到Fmoc-AEEA-AEEA-CTC Resin。
D.将肽树脂Fmoc-AEEA-AEEA-CTC Resin加入到3000ml体积浓度为20～30％TFE/DCM中，反应2h。收集滤液，滤液进行真空旋干。DCM洗涤旋蒸3次，即得到Fmoc-AEEA-AEEA。
实施例2：索玛鲁肽主链全保护肽合成
本实施例索玛鲁肽主链全保护肽指的是：Boc-His(Trt)7-Aib8-Glu(OtBu)9-Gly10-Thr(tBu)11-Phe12-Thr(tBu)13-Ser(tBu)14-Asp(OtBu)15-Val16-Ser(tBu)17-Ser(tBu)18-Tyr(tBu)19-Leu20-Glu(OtBu)21-Gly22-Gln(Trt)23-Ala24-Ala25-Lys(R)26-Glu(OtBu)27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp(Boc)31-Leu32-Val33-Arg(Pbf)34-Gly35-Arg(Pbf)36-Gly37-Wang Resin，R为Dde或ivDde。
A.将100g(30mmol)替代度为0.3mmol/g的Fmoc-Gly-Wang Resin加入反应柱中，加入400mml二氯甲烷溶胀30min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液300ml，混合5min后，抽干，加入DMF 300ml洗涤1min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液300ml，混合15min后，抽干。加入DMF 300ml洗涤1min后抽干，重复DMF洗涤4次。取少量树脂进行Kaiser法(茚三酮)检测，显阳性，即脱Fmoc脱除完成。
B.称取58.39g Fmoc-Arg(Pbf)-OH于干净的1L烧杯，加入DMF300mlDMF溶液，置于冰水浴条件下用磁力搅拌器搅拌，待氨基酸全部溶解后，依次加入T3P 32.15ml，DIEA47.16ml，继续搅拌活化5min。将以上活化液缓慢加入到反应釜中，常温下反应2h，取少量树脂进行Kaiser法检测，显阴性，即偶联完全。反应结束后，抽干反应液，加入DMF 300ml洗涤1min后，抽干，重复DMF洗涤2次，即得到Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resin。
C.按如上A的脱保护方法和B的偶联方法，按主链35～7的先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸，即：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH﹑Fmoc-Leu-OH﹑Fmoc-Trp(Boc)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ile-OH﹑Fmoc-Phe-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Lys(Dde)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH和Boc-His(Trt)-OH的偶联。
实施例3：索玛鲁肽全保护肽的合成
本实施例中索玛鲁肽直链全保护肽指的是：Boc-His(Trt)7-Aib8-Glu(OtBu)9-Gly10-Thr(tBu)11-Phe12-Thr(tBu)13-Ser(tBu)14-Asp(OtBu)15-Val16-Ser(tBu)17-Ser(tBu)18-Tyr(tBu)19-Leu20-Glu(OtBu)21-Gly22-Gln(Trt)23-Ala24-Ala25-Lys[AEEA-AEEA-Glu(Oct-OtBu)-OtBu]26-Glu(OtBu)27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp(Boc)31-Leu32-Val33-Arg(Pbf)34-Gly35-Arg(Pbf)36-Gly37-Wang Resin。
A.向实例2得到的全保护主链肽树脂中加入600ml体积浓度为1～5％水合肼/DMF或水合肼/DCM溶液，脱除保护基团15～30min后，抽干，重复水合肼/DMF或水合肼/DCM溶液脱除1次。加入600ml DMF洗涤1次，重复DMF洗涤4次，即得到
Boc-His(Trt)7-Aib8-Glu(OtBu)9-Gly10-Thr(tBu)11-Phe12-Thr(tBu)13-Ser(tBu)14-Asp(OtBu)15-Val16-Ser(tBu)17-Ser(tBu)18-Tyr(tBu)19-Leu20-Glu(OtBu)21-Gly22-Gln(Trt)23-Ala24-Ala25-Lys26-Glu(OtBu)27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp(Boc)31-Leu32-Val33-Arg(Pbf)34-Gly35-Arg(Pbf)36-Gly37-Wang Resin。
B.称取95.73gFmoc-AEEA-AEEA于干净的1L烧杯，加入DMF300mlDMF溶液，置于冰水浴条件下用磁力搅拌器搅拌，待氨基酸全部溶解后，依次加入T3P 32.15ml，DIEA 47.16ml，继续搅拌活化5min。将以上活化液缓慢加入到反应釜中，常温下反应2h，取少量树脂进行Kaiser法检测，显阴性，即偶联完全。反应结束后，抽干反应液，加入DMF 300ml洗涤1min后，抽干，重复DMF洗涤2次，即得到
Boc-His(Trt)7-Aib8-Glu(OtBu)9-Gly10-Thr(tBu)11-Phe12-Thr(tBu)13-Ser(tBu)14-Asp(OtBu)15-Val16-Ser(tBu)17-Ser(tBu)18-Tyr(tBu)19-Leu20-Glu(OtBu)21-Gly22-Gln(Trt)23-Ala24-Ala25-Lys(AEEA-AEEA-Fmoc)26-Glu(OtBu)27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp(Boc)31-Leu32-Val33-Arg(Pbf)34-Gly35-Arg(Pbf)36-Gly37-Wang Resin。
C.加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液300ml，混合5min后，抽干，加入DMF 300ml洗涤1min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液300ml，混合15min后，抽干。加入DMF300ml洗涤1min后抽干，重复DMF洗涤4次。取少量树脂进行Kaiser法(茚三酮)检测，显阳性，即脱Fmoc脱除完成。
D.按如上B的偶联方法和C的脱保护方法，依次分别偶联剩余氨基酸，即：Fmoc-Glu-OtBu、Oct-OtBu的偶联。最后加入DMF洗涤5次，每次300ml；洗毕，用甲醇收缩3次，每次300ml，收缩10min，抽干树脂，得到索玛鲁肽直链全保护肽树脂。
实施例4：索玛鲁肽粗品的制备
向实施例3中得到的索玛鲁肽全保护肽树脂中加入2500ml裂解液，配比为TFA：90％～95％、TIS：1％～5％、EDT：1％～5％、纯化水：1～5％，室温下裂解2～3h，抽滤，将滤液加入10倍体积预冷的甲基叔丁基醚中沉淀，离心，再用乙醚将沉淀洗涤3次，真空干燥，得到索玛鲁肽粗肽。
实施例5：索玛鲁肽粗肽的纯化
用反相高效液相色谱对粗肽进行两步纯化：第一步纯化，流动相A为体积分数0.1％的TFA/纯化水溶液，流动相B为ACN；第二步为纯化对纯品的脱盐，流动相A为纯化水，流动相B为ACN；两步纯化均为梯度洗脱，洗脱梯度：第一步为流动相B相20％～50％，纳微C18填料；第二步纯化脱盐为B相10％～50％，纳微C4聚合物填料，洗脱时间均为40min，紫外检测波长220nm。经浓缩冻干得到索玛鲁肽纯品。经检测索玛鲁肽纯品纯度99.69％，总收率38.7％。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.一种合成索玛鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)通过固相合成法，按索玛鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂偶联体系进行氨基酸的活化偶联，得到索玛鲁肽主链肽树脂；其中，Lys26采用Fmoc-Lys(R)-OH为原料，其中R为Dde或ivDde；
(2)取固相载体树脂，采用缩合剂偶联体系依次将Fmoc-AEEA和Fmoc-AEEA活化偶联得到Fmoc-AEEA-AEEA-树脂；
(3)将步骤(2)得到的Fmoc-AEEA-AEEA-树脂进行全保护裂解，得到Fmoc-AEEA-AEEA；
(4)脱除步骤(1)得到的索玛鲁肽主链肽树脂中Lys26的保护基，然后采用缩合剂偶联体系依次偶联二肽片段Fmoc-AEEA-AEEA、Fmoc-Glu-OtBu和Oct-OtBu，得到索玛鲁肽全保护肽树脂；
(5)索玛鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到索玛鲁肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缩合剂为1-丙基磷酸酐。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缩合剂偶联体系为1-丙基磷酸酐与碱的混合体系，所述的碱为N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啡啉。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，采用替代度为0.2～0.35mmol/g的Fmoc-Gly Wang树脂作为固相载体树脂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，固相载体树脂为2-Cl-CTC树脂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，Fmoc-AEEA-AEEA-树脂的裂解试剂为20～30％体积浓度TFE/DCM溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Lys侧链保护基的脱除条件为采用1～5％体积浓度的水合肼/DMF或水合肼/DCM溶液处理15～30min，重复2～3次。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述裂解的裂解液按体积含量为90％～95％TFA、1％～5％TIS、1％～5％EDT和1～5％水，裂解液的加入量为10～12ml/g索玛鲁肽全保护肽树脂。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述的裂解是在20～30℃反应2-3h。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括索玛鲁肽纯化、脱盐和冻干步骤。
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Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110078644A (zh) * 2019-05-29 2019-08-02 深圳市茵诺圣生物科技有限公司 一种[2-[1-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸的制备方法
WO2020199461A1 (zh) * 2019-03-29 2020-10-08 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN111944039A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111944037A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN112010961A (zh) * 2019-05-31 2020-12-01 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的固液合成方法
CN112111002A (zh) * 2020-09-28 2020-12-22 深圳深创生物药业有限公司 一种司美格鲁肽制备方法
CN112125971A (zh) * 2020-09-25 2020-12-25 深圳深创生物药业有限公司 一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法
CN112285217A (zh) * 2019-07-27 2021-01-29 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的超高效液相色谱分析方法
CN112679602A (zh) * 2019-10-18 2021-04-20 苏州特瑞药业有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN113135991A (zh) * 2020-01-19 2021-07-20 深圳市健元医药科技有限公司 一种制备索玛鲁肽的方法
CN113461801A (zh) * 2020-12-31 2021-10-01 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种索马鲁肽侧链中间体的固相合成方法
CN113583106A (zh) * 2021-08-03 2021-11-02 中肽生化有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法
CN113754753A (zh) * 2021-09-30 2021-12-07 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
WO2021252829A1 (en) * 2020-06-12 2021-12-16 Eli Lilly And Company Process for preparing a glp-1/glucagon dual agonist
CN114685645A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030125243A1 (en) * 2000-07-20 2003-07-03 Jun Liu Synthesis of cyclic peptides
CN102648182A (zh) * 2009-10-23 2012-08-22 沃泰克斯药物股份有限公司 用于制备囊性纤维化跨膜传导调节因子的调节剂的方法
WO2013029279A1 (zh) * 2011-09-03 2013-03-07 深圳市健元医药科技有限公司 新的glp-ⅰ类似物及其制备方法和用途
CN103848910A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 深圳翰宇药业股份有限公司 一种萨摩鲁泰的固相合成方法
CN108203462A (zh) * 2016-12-20 2018-06-26 上海脉凯生物科技有限公司 一种制备索马鲁肽的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030125243A1 (en) * 2000-07-20 2003-07-03 Jun Liu Synthesis of cyclic peptides
CN102648182A (zh) * 2009-10-23 2012-08-22 沃泰克斯药物股份有限公司 用于制备囊性纤维化跨膜传导调节因子的调节剂的方法
WO2013029279A1 (zh) * 2011-09-03 2013-03-07 深圳市健元医药科技有限公司 新的glp-ⅰ类似物及其制备方法和用途
CN103848910A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 深圳翰宇药业股份有限公司 一种萨摩鲁泰的固相合成方法
CN108203462A (zh) * 2016-12-20 2018-06-26 上海脉凯生物科技有限公司 一种制备索马鲁肽的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOSHUA R. DUNETZ ET AL.: "Large-Scale Applications of Amide Coupling Reagents for the Synthesis of Pharmaceuticals", 《ORG. PROCESS RES. DEV.》 *

Cited By (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020199461A1 (zh) * 2019-03-29 2020-10-08 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN111748019A (zh) * 2019-03-29 2020-10-09 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN111944039A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111944037A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111944037B (zh) * 2019-04-30 2023-06-13 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN110078644A (zh) * 2019-05-29 2019-08-02 深圳市茵诺圣生物科技有限公司 一种[2-[1-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸的制备方法
CN112010961A (zh) * 2019-05-31 2020-12-01 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的固液合成方法
CN112285217A (zh) * 2019-07-27 2021-01-29 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的超高效液相色谱分析方法
CN112285217B (zh) * 2019-07-27 2022-11-01 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的超高效液相色谱分析方法
CN112679602A (zh) * 2019-10-18 2021-04-20 苏州特瑞药业有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN112679602B (zh) * 2019-10-18 2023-09-22 苏州特瑞药业股份有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN113135991A (zh) * 2020-01-19 2021-07-20 深圳市健元医药科技有限公司 一种制备索玛鲁肽的方法
CN113135991B (zh) * 2020-01-19 2023-04-07 深圳市健元医药科技有限公司 一种制备索玛鲁肽的方法
WO2021252829A1 (en) * 2020-06-12 2021-12-16 Eli Lilly And Company Process for preparing a glp-1/glucagon dual agonist
CN112125971A (zh) * 2020-09-25 2020-12-25 深圳深创生物药业有限公司 一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法
CN112125971B (zh) * 2020-09-25 2021-07-16 深圳深创生物药业有限公司 一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法
CN112111002B (zh) * 2020-09-28 2021-07-13 深圳深创生物药业有限公司 一种司美格鲁肽制备方法
CN112111002A (zh) * 2020-09-28 2020-12-22 深圳深创生物药业有限公司 一种司美格鲁肽制备方法
CN114685645A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN113461801A (zh) * 2020-12-31 2021-10-01 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种索马鲁肽侧链中间体的固相合成方法
CN113583106A (zh) * 2021-08-03 2021-11-02 中肽生化有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法
CN113754753A (zh) * 2021-09-30 2021-12-07 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法

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