CN1865283B - 固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法 - Google Patents

固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法。本发明利用Fmoc-策略固相法制备鲑鱼降钙素的新工艺。包括以下步骤：a.Fmoc-Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂脱Fmoc-保护后按照固相合成的方法依次连接各种保护氨基酸得到保护三十二肽树脂；b.其间依次脱去Fmoc-保护基团；c.脱侧链保护基团及切肽同步进行，得还原型粗品；d.粗品经弱碱(pH7.5-10.0)空气氧化反应，并经反相HPLC分离纯化，制得鲑鱼降钙素精品。本发明具备规模生产能力，工艺简单，成本低，三废少，质量上乘(纯度≥98％)。接肽收率高(每步接肽收率为≥99％)。总收率约为：17.2％，便于工业化实施，具有较大的产业化前景。

Description

固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法
技术领域
本发明涉及一种鲑鱼降钙素的制备方法，尤其涉及一种固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法。
背景技术
鲑鱼降钙素，英文名：Calcitonin(Salmon)，商品名：Miacaicic，化学结构式：
分子式及分子量：C145H240N44O48S2 3431.9
鲑鱼降钙素临床上用于治疗骨质疏松。天然降钙素(CT)是由哺乳动物的甲状旁腺细胞或非哺乳类有脊椎动物的后腮体所分泌的一种生物活性多肽，它是生物体内钙代谢的主要调节因子，来自人、猪、鲑、鳗等的CT提取物或合成品已先后被开发成药品，其中鲑鱼降钙素(sCT)的临床作用强而持久，比人降钙素(hCT)活性高32倍，作用时间长5倍，目前sCT作为治疗骨质疏松症等代谢骨病的防止药已被栽人多国药典，并在多国行销。
鲑鱼降钙素由瑞士诺华制药公司研制开发，商品名为密钙息(英文名：Miacaicic)，1991年3月获得FDA批准上市。
美国专利(USP508,382)报道了一种固相法合成鲑鱼降钙素的制备方法：采用Bco策略合成鲑鱼降钙素的方法，该所述文献公开的方法使用剧毒、腐蚀性试剂，三废多，工艺复杂，成本高，工业化实施具有一定的难度，不能满足临床应用的需要。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法，以克服现有技术存在的缺陷，满足临床应用的需要。
本发明的方法包括如下步骤：
(1)以Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，以TBTU/HOBt或HBTU/HOBt为缩合剂，逐个接上氨基酸，获得保护三十二肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团；得还原型粗品；
(2)加入切肽试剂TFA/EDT/H2O/TIS进行切肽，并脱侧链保护基团，然后加入乙醚沉淀粗品，获得还原型鲑鱼降钙素粗品；
(3)在通空气氧化，过滤，获得氧化型鲑鱼降钙素粗品；
(4)在C18柱或C8中进行分离纯化，获得目标产物。
接肽总收率达93.4％；粗品收率为：86.1％，总收率约为：17.2％。
上述方法的工艺路线如下：
Rink Amide MBHA-树脂→Fmoc-Pro-树脂→
Fmoc-Thr(tBu)-Pro-树脂→Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
→Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)Pro-树脂
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Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
↓
Fmoc-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-
Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
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Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂
更为具体的方法包括如下步骤：
(1)将Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂用DMF浸泡，使树脂充分溶胀，氮气吹干，加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹滤去除六氢吡啶，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(A)；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(2)Fmoc-Pro-树脂的制备：
在步骤(1)的(A)中加入Fmoc-Pro-OH(MW337.4)，TBTU或HBTU(MW：321)，HOBT(MW：135.1)，NMM(MW＝101.2)和DMF，15～35℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(B)：Fmoc-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(A)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Pro-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(A)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为：5～20毫升/克；
(3)Fmoc-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(2)的(B)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH(MW：397.5)，TBTU或HBTU(MW：321)，HOBT(MW：135.1)，NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(C)：Fmoc-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(B)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(B)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(4)Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(3)的(C)中加入加Fmoc-Gly-OH(MW：297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(D)：Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(C)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(C)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(5)Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(4)的(D)中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(MW：383.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(E)：Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(D)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(D)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(6)Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(5)的(E)中加Fmoc-Gly-OH(297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(F)：Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(E)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(E)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(7)Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(6)的(F)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH(MW：397.5)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(G)：Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(F)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(F)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(8)Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(7)的(G)中加Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW：596.7)、TBTU或HBTU(MW：321)、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(H)：Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(G)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(G)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(9)Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(8)的(H)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH(MW：397.5)，TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(I)：Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(H)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(H)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(10)Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(9)的(I)中加Fmoc-Arg(Pbf)-OH(FW：648.8)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(J)：Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(I)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(I)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(11)Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(10)的(J)中加Fmoc-Pro-OH(FW：337.4)、TBTU或HBTU(MW：321)、HOBT(MW：135.1)、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(K)：Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(J)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Pro-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(J)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(12)Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(11)的(K)中加Fmoc-Tyr(tBu)-OH(FW：459.5)、TBTU或HBTU、HOBT、MM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(L)：Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(K)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Tyr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(K)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(13)Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(12)的(L)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH(FW：297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(M)：Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(L)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(L)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(14)Fmoc-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(13)的(M)中加Fmoc-Gln(Trt)-OH(FW：610.7)、TBTU或HBTU(MW：321)、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(N)：Fmoc-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(M)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(M)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(15)Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(14)的(N)中加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4)、TBTU或HBTU(MW：321)、HOBT(MW：135.1)、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(O)：Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(N)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(N)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(16)Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(15)的(O)中加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(P)：Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(O)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(O)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(17)Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(16)的(P)中加Fmoc-His(Trt)-OH(FW：619.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Q)：Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(P)的重量浓度为5～20％；Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(P)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(18)Fmoc-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(17)的(Q)中加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(R)：Fmoc-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Q)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Q)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(19)Fmoc-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(18)的(R)中加Fmoc-Glu(OtBu)-OH(FW：425.5)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(S)：Fmoc-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(R)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(R)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(20)Fmoc-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(19)的(S)中加Fmoc-Gln(Trt)-OH(FW：610.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(T)：Fmoc-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(S)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(S)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(21)Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(20)的(T)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4)28.5g，TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(U)：Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(T)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(T)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(22)Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(21)的(U)中加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(V)：Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(U)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(U)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(23)Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(22)的(V)中加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(X)：Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(V)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(V)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(24)Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(23)的(X)中加Fmoc-Gly-OH(FW：297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM1和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Y)：Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(X)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(X)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(25)Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(24)的(Y)中加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z)：Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Y)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Y)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(26)Fmoc-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
在步骤(25)的(Z)中加Fmoc-Val-OH(FW339.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z1)：Fmoc-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(27)Fmoc-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(27)的(Z1)中加Fmoc-Cys(Trt)-OH(FW：585.7)43.6g，TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z2)：Fmoc-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z1)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Cys(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z1)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(28)Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(27)的(Z2)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH(FW：397.5，)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z3)：Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z2)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z2)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(29)Fmoc-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(28)的(Z3)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z4)：Fmoc-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z3)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z3)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(30)Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(29)的(Z4)中加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4)、TBTU或HBTU(MW：321)、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z5)：Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z4)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z4)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(31)Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(31)的(Z5)中加Fmoc-Asn(Trt)-OH(FW：596.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z6)：Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z5)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z5)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(32)Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(31)的(Z6)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW383.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；获得(Z7)：Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z6)的重量浓度为5～20％Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z6)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(33)Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
在步骤(32)的(Z6)中加Fmoc-Cys(Trt)-OH(FW：585.7，)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃反应0.5～1.5小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
甲醇洗涤，抽干，干燥，获得保护的32肽树脂：Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂(MW＝3434)，接肽总收率约为93.4％。；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM与DMF的混合溶液中：
(Z6)的重量浓度为5～20％，Fmoc-Cys(Trt)-OH的摩尔比为树脂的2～5；TBTU或HBTU的摩尔比为树脂的2～5；HOBT的摩尔比为树脂的2～5；
所说的切肽包括如下步骤：
将所说的保护的32肽树脂加入切肽试剂：(TFA/TIS//EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/10ml)，25-30℃搅拌1～3小时，过滤，抽干，滤液加无水乙醚沉淀，过滤，收集沉淀获得还原型鲑鱼降钙素粗品；
保护的32肽树脂与切肽试剂的重量比例为：
保护的32肽树脂∶切肽试剂＝1∶5～20；
所说的氧化包括如下步骤：(二硫键的形成)
将鲑鱼降钙素还原型粗品溶于水(1mg粗品加0.5-1.5ml水)，加0.1～1.5mol/L的氨水调PH至7.5-10.0，反应温度30-35℃，通空气氧化20～40小时，过滤，收集滤液，获得氧化型鲑鱼降钙素粗品；
所说的纯化包括如下步骤：
将上述收集的滤液通过C18或C8柱纯化，流动相为：0.1MNH4CN∶乙腈(72∶28)；流速为：250～650ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，采用常规的方法去盐、除乙腈、冻干，获得目标产物，收率17.2％(以Rink AmideMBHA-树脂的18.7mmol计)，纯度≥98％。
去盐、除乙腈、冻干为一种常规的方法。
由上述公开的技术方案可见，本发明的方法，具备规模生产能力，工艺简单，成本低，三废少，质量上乘(纯度≥98％)。接肽收率高(每步接肽收率为≥99％)。采用弱碱性氧化(pH7.5-10.0)的方法，氧化收率高，反应时间短，生产成本低。采用C18柱进行分离纯化，流动相为：0.1MNH4Ac-乙腈的方法，避免使用三氟乙酸，减少三废。每步接肽收率均在99％以上；接肽总收率达93.4％；粗品收率为：86.1％，总收率约为：17.2％。
由此可见，本发明的方法便于工业化实施，具有较大的产业化前景。
具体实施方式
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
  No   品名   生产厂商
  1   Fmoc-Pro-OH   四川三高生化股份有限公司
  2   Fmoc-Thr(tBu)-OH   四川三高生化股份有限公司
  3   Fmoc-Gly-OH   四川三生化高股份有限公司
  4   Fmoc-Ser(tBu)-OH   四川三高生化股份有限公司
  5   Fmoc-Asn(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司
  6   Fmoc-Arg(Pbf)-OH   四川三高生化股份有限公司
  7   Fmoc-Tyr(tBu)-OH   四川三高生化股份有限公司
  8   Fmoc-Gln(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司
  9   Fmoc-Leu-OH   四川三高生化股份有限公司
  10   Fmoc-Lys(Boc)-OH   四川三高生化股份有限公司
  11   Fmoc-His(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司
  12   Fmoc-Glu(OtBu)-OH   四川三高生化股份有限公司
  13   Fmoc-Val-OH   四川三高生化股份有限公司
  14   Fmoc-Cys(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司
  15   Rink Amide树脂   天津和成科技有限公司
  16   1-羟基苯并三氮唑(HOBt)   四川三高生化股份有限公司
  17   TBTU或HBTU   四川三高生化股份有限公司
  18   三氟乙酸(TFA)   Merck公司
  19   三异丙基硅烷(TIS)   Merck公司
  20   乙二硫醇(EDT)   Merck公司
  21   N-甲基吗啡啉(NMM)   上海科帆公司
实施例1
称取Rink Amide MBHA树脂22克(100-200目，0.85mmol/g，18.7mmol)，用300mlDMF浸泡，使树脂充分溶胀，氮气吹干。加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹滤去六氢吡啶，用DMF、洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Pro-OH(MW337.4，74.4mmol)25.1g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Thr(tBu)-OH(MW：397.5，74.5mmol)29.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干
Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Gly-OH(MW：297.3，74.3mmol)22.1g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干
Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
Fmoc-Ser(tBu)-OH(MW：383.4，74.3mmol)28.5g，TBTU(MW：321，74.3mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Gly-OH(297.3，74.3mmol)22.1g、TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Thr(tBu)Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Thr(tBu)-OH(MW：397.5，74.5mmol)29.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW：596.7，74.4mmol)44.4g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDM F.将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Thr(tBu)-OH(397.5，74.4mmol)29.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Arg(Pbf)-OH(FW：648.8，74.4mmol)48.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Pro-OH(FW：337.4，74.4mmol)25.1g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备
加Fmoc-Tyr(tBu)-OH(FW：459.5，74.4mmol)34.2g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(FW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Thr(tBu)-OH(FW：297.3，74.4mmol)29.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Gln(Trt)-Thr(tBu)Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Gln(Trt)-OH(FW：610.7，74.4mmol)45.4g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，74.4mmol)26.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5，74.4mmol)34.9g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-His(Trt)-OH(FW：619.7，74.4mmol)46.1g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，74.4mmol)26.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Glu(OtBu)-OH(FW：425.5，74.4mmol)31.7g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Gln(Trt)-OH(FW：610.7，74.4mmol)45.4g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4，74.4mmol)28.5g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，74.4mmol)26.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5，74.4mmol)34.9g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-LeuGln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Gly-OH(FW：297.3，74.4mmol)22.1g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，74.4mmol)26.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Val-OH(FW339.4，74.4mmol)25.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Cys(Trt)-OH(FW：585.7，74.4mmol)43.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Thr(tBu)-OH(FW：397.5，74.4mmol)29.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4，74.4mmol)28.5g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Leu-OH(FW：353.4，74.4mmol)26.3g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6gNMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Asn(Trt)-OH(FW：596.7，74.4mmol)44.4g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW383.4，74.4mmol)28.5g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM 16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
Fmoc-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Val-Leu-Gly-Lys(Boc)-Leu-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Leu-His(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Pro-树脂的制备：
加Fmoc-Cys(Trt)-OH(FW：585.7，74.4mmol)43.6g，TBTU(MW：321，74.5mmol)23.9g，HOBT(MW：135.1，85.6mmol)11.6g，NMM16.5ml(MW＝101.2)，250mlDMF，将混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF洗涤三次，氮气吹干。
甲醇洗涤三次。抽干后，放入真空干燥器中干燥，称重，得保护的32肽树脂约80g(MW＝3434，17.47mmol)，接肽总收率约为：93.5％。
切肽：
取80g保护的32肽树脂转移到茄形瓶中，冷却下加入切肽试剂：(TFA/TIS//EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/10)，25-30℃搅拌2小时。过滤，抽干，滤液加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得约55g还原型鲑鱼降钙素粗品。粗品收率为86.1％。
氧化(二硫键的形成)
将55g鲑鱼降钙素粗品溶于55000ml水，在搅拌下缓慢加入加氨水调PH至7.5-10.0，反应温度30-35℃，氧化24小时，过滤。
纯化
滤液分批经C18柱(10×300mm)纯化，流动相：0.1MNH4Ac∶乙腈(72∶28)；流速为：300ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液。样品峰合并后去盐、除乙腈、冻干，约得11g白色疏松块状物成品。收率17.2％(以Rink AmideMBHA-树脂的18.7mmol计)。

Claims (6)

1.一种固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
第一步：
(1)将Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂用DMF浸泡，使树脂充分溶胀，氮气吹干，加入六氢吡啶的DMF溶液，反应10～50分钟，氮气吹滤去除六氢吡啶，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(A)；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为10～30％，Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide AM树脂与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(2)在步骤(1)的(A)中加入Fmoc-Pro-OH，TBTU或HBTU，HOBT，NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(B)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(A)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Pro-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(A)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(3)在步骤(2)的(B)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU或HBTU，HOB T，NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(C)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(B)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(B)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(4)在步骤(3)的(C)中加入Fmoc-Gly-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(D)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(C)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(C)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(5)在步骤(4)的(D)中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，15～35℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(E)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(D)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(D)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(6)在步骤(5)的(E)中加Fmoc-Gly-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(F)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(E)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(E)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(7)在步骤(6)的(F)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(G)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(F)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(F)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(8)在步骤(7)的(G)中加Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(H)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(G)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asn(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(G)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(9)在步骤(8)的(H)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU或HBTU、HOBT、NMM 16.5ml和250mlDMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(I)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(H)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(H)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(10)在步骤(9)的(I)中加Fmoc-Arg(Pbf)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(J)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(I)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Arg(Pbf)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(I)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(11)在步骤(10)的(J)中加Fmoc-Pro-OH、TBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(K)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(J)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Pro-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(J)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(12)在步骤(11)的(K)中加Fmoc-Tyr(tBu)-OH、TBTU、HOBT、MM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(L)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(K)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Tyr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(K)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(13)在步骤(12)的(L)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(M)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(L)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(L)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(14)在步骤(13)的(M)中加Fmoc-Gln(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(N)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(M)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gln(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(M)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(15)在步骤(14)的(N)中加Fmoc-Leu-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(O)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(N)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(N)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(16)在步骤(15)的(O)中加Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(P)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(O)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(O)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(17)在步骤(16)的(P)中加Fmoc-His(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Q)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(P)的重量浓度为5～20％；Fmoc-His(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(P)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(18)在步骤(17)的(Q)中加Fmoc-Leu-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(R)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Q)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Q)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(19)在步骤(18)的(R)中加Fmoc-Glu(OtBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(S)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(R)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(R)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(20)在步骤(19)的(S)中加Fmoc-Gln(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(T)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(S)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gln(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(S)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(21)在步骤(20)的(T)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH 28.5g，TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(U)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(T)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(T)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(22)在步骤(21)的(U)中加Fmoc-Leu-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(V)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(U)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(U)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(23)在步骤(22)的(V)中加Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(X)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(V)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(V)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～205毫升/克；
(24)在步骤(23)的(X)中加Fmoc-Gly-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Y)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(X)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Gly-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(X)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(25)在步骤(24)的(Y)中加Fmoc-Leu-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Y)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Y)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(26)在步骤(25)的(Z)中加Fmoc-Val-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z1)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(27)在步骤(26)的(Z1)中加Fmoc-Cys(Trt)-OH 43.6g，TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z2)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z1)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Cys(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z1)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(28)在步骤(27)的(Z2)中加Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z3)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z2)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z2)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(29)在步骤(28)的(Z3)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z4)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z3)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z3)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(30)在步骤(29)的(Z4)中加Fmoc-Leu-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z5)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z4)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z4)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(31)在步骤(30)的(Z5)中加Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干； 
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z6)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z5)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asn(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z5)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(32)在步骤(31)的(Z6)中加Fmoc-Ser(tBu)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z7)；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z6)的重量浓度为5～20％Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
六氢吡啶的DMF溶液中，六氢吡啶的重量浓度为15～35％，(Z6)与六氢吡啶的DMF溶液的重量体积浓度为5～20毫升/克；
(33)在步骤(32)的(Z7)中加Fmoc-Cys(Trt)-OH、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
甲醇洗涤，抽干，干燥，获得保护的32肽树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
含有NMM与DMF的混合溶液中：
(Z7)的重量浓度为5～20％，Fmoc-Cys(Trt)-OH与树脂的摩尔比为2～5∶1；TBTU或HBTU与树脂的摩尔比为2～5∶1；HOBT与树脂的摩尔比为2～5∶1；
第2步：
加入切肽试剂TFA/EDT/H2O/TIS进行切肽，并脱侧链保护基团，然后加入乙醚沉淀粗品，获得还原型鲑鱼降钙素粗品；
第3步：
通空气氧化，过滤，获得氧化型鲑鱼降钙素粗品； 
第4步：
在C18或C8柱中进行分离纯化，获得目标产物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，工艺路线如下：
Figure FSB00000256297500121
Figure FSB00000256297500131
Figure FSB00000256297500141
Figure FSB00000256297500151
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的切肽包括如下步骤：将所说的保护的32肽树脂加入切肽试剂：TFA/TIS/EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/10ml，25-30℃搅拌1～3小时，过滤，抽干，滤液加无水乙醚沉淀，过滤，收集沉淀获得还原型鲑鱼降钙素粗品。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，保护的32肽树脂与切肽试剂的重量比例为：
保护的32肽树脂∶切肽试剂＝1∶5～20。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的氧化包括如下步骤：
将鲑鱼降钙素还原型粗品溶于水，1mg粗品加0.5-1.5ml水，加0.1～1.5mol/L的氨水调PH至7.5-10.0，反应温度30-35℃，通空气氧化20～26小时，过滤，收集滤液，获得氧化型鲑鱼降钙素粗品。
6.根据权利要求1～5任一项所说的方法，其特征在于，所说的纯化包括如下步骤：
将上述收集的滤液通过C18或C8柱纯化，流动相为：0.1MNH4Ac∶乙腈为72∶28；流速为：250～650ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，采用常规的方法去盐、除乙腈、冻干，获得目标产物。 
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN101525368B (zh) * 2008-03-06 2012-05-30 海南建邦制药科技有限公司 一种多肽合成脱保护剂
CN101531699B (zh) * 2009-04-30 2012-02-15 昆明积大制药有限公司 一种多肽固相合成法
CN103254305B (zh) * 2013-05-31 2014-10-01 青岛国大生物制药股份有限公司 醋酸鲑降钙素的制备方法
CN104177490B (zh) * 2014-08-25 2017-02-08 兰州大学 片段缩合制备醋酸鲑鱼降钙素的方法
CN105111301B (zh) * 2015-09-17 2018-08-28 四川吉晟生物医药有限公司 一种鲑鱼降钙素的制备方法
CN111303273B (zh) * 2020-03-13 2020-12-22 广东赛法洛药业有限公司 一种鲑鱼降钙素的制备方法及其结合型制剂及结合型制剂在骨质疏松的药物中的用途
CN111793125B (zh) * 2020-06-08 2021-07-30 湖南甲骨文生物医药有限公司 一种纯固相合成鲑鱼降钙素的制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4062815A (en) * 1974-08-12 1977-12-13 Armour Pharmaceutical Company Resin peptides
CN1490330A (zh) * 2002-10-18 2004-04-21 上海子能高科股份有限公司 醋酸奥曲肽生产工艺
CN1552728A (zh) * 2003-05-29 2004-12-08 上海子能药物研究有限公司 一种生长抑素的合成方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4062815A (en) * 1974-08-12 1977-12-13 Armour Pharmaceutical Company Resin peptides
CN1490330A (zh) * 2002-10-18 2004-04-21 上海子能高科股份有限公司 醋酸奥曲肽生产工艺
CN1552728A (zh) * 2003-05-29 2004-12-08 上海子能药物研究有限公司 一种生长抑素的合成方法

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