CN111944039A - 一种索玛鲁肽的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种索玛鲁肽的固相合成方法，该方法包括：固相合成索玛鲁肽S1‑S4片段树脂，经裂解、纯化作为第一片段；合成索玛鲁肽S20带侧链基团的赖氨酸，作为第二片段；按照索玛鲁肽肽序，依次偶联氨基酸或肽片段，得到索玛鲁肽树脂，然后裂解、纯化得到索玛鲁肽。本发明采用片段和逐步合成相结合的固相合成法，简化了工艺流程步骤，有利于工业化大生产；通过制备索玛鲁肽全保护1‑4片段，作为关键起始物料应用于索玛鲁肽固相合成中，降低了D‑His消旋杂质、+Gly杂质的产生，显著降低了粗品纯化的难度，大大提高了索玛鲁肽的纯度和收率，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及多肽固相合成领域，特别涉及一种索玛鲁肽的固相合成方法。
技术背景
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是由人肠道L细胞分泌的一种肽类激素，能够促进胰岛素的分泌、抑制胰高血糖素的分泌，具有降低血糖浓度的功效，被用于II型糖尿病的治疗。然而天然GLP-1在体内不稳定，易被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)快速降解。
索玛鲁肽，英文名称为Semaglutide，是由丹麦诺和诺德公司开发生产的一种新型长效胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于治疗II型糖尿病。索玛鲁肽具有降血糖、减肥和保护心血管的功效，已于2017年12月获得FDA批准上市。索玛鲁肽的Lys侧链经PEG、Glu和十八碳二羧酸修饰后，亲水性大大提高、与白蛋白的结合力增强；同时N端第2位的Ala突变为Aib后，有效的避免了被DPP-IV酶解而失活，半衰期达到40h，患者每周只需注射一次，目前该药物的口服剂型也正在研制当中。索玛鲁肽的CAS号为910463-68-2，分子式为C187H291N45O59，分子量为4113.64g/mol，肽序列为：
H-1His-2Aib-3Glu-4Gly-5Thr-6Phe-7Thr-8Ser-9Asp-10Val-11Ser-12Ser-13Tyr-14Leu-15Glu-16Gly-17Gln-18Ala-19Ala-20Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG-PEG)-21Glu-22Phe-23Ile-24Ala-25Trp-26Leu-27Val-28Arg-29Gly-30Arg-31Gly-OH。
目前已报道的索玛鲁肽的制备方法大致分为两类：一类是把含有侧链的Lys作为片段直接接入索玛鲁肽主链完成合成，专利CN104356224A公开了一种采用液相法在Lys的ε-N H2上接上侧链，随后在树脂上逐步缩合氨基酸制备索玛鲁肽的方法。另一类是分别逐个完成索玛鲁肽主链和侧链的偶联，专利CN 201511027176公开了在固相逐步合成索玛鲁肽直链肽，合成侧链修饰基团，脱去Lys的保护基，并偶联侧链修饰基团，最终裂解得到该多肽产物。由于索玛鲁肽的序列较长且有较多的疏水氨基酸，采用氨基酸逐步缩合的方法合成时，易形成折叠，导致树脂收缩严重，延长反应时间，进而粗肽中产生较多与产品性质极为接近的杂质，如D-His的消旋杂质：
H-D-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG-PEG)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；
+Gly杂质：
H-His-Aib-Glu-Gly-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG-PEG)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；
D-Thr的消旋杂质：
H-His-Aib-Glu-Gly-D-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG-PEG)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；
D-Phe的消旋杂质：
H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-D-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG-PEG)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；D-His消旋杂质与索玛鲁肽的理化性质相近，极大增加了索玛鲁肽产品的分离纯化难度，导致产品收率大大降低。因此，迫切需要一种纯度和收率高，合成成本低的索玛鲁肽的合成方法。
发明内容
为了解决现有索玛鲁肽合成过程中所存在的D-His消旋杂质难控制，纯度和收率低，不利于工业化生产的问题，本发明提供了一种片段和逐步合成相结合的制备索玛鲁肽的方法。该方法能有效减少D-His消旋杂质、+Gly杂质提高索玛鲁肽的纯度及收率，有利于索玛鲁肽的大批量生产。
为了实现本发明的目的，本发明提供以下技术方案：
一种索玛鲁肽的固相合成方法，包括以下步骤：
步骤1：将树脂固相载体和Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂1；
步骤2：取步骤1所得的Fmoc-Gly-树脂1偶联氨基酸，固相合成索玛鲁肽全保护S1-S4片段树脂，经裂解、纯化作为第一片段；
步骤3：合成索玛鲁肽S20位带侧链基团的赖氨酸，得到Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH，作为第二片段；
步骤4：将树脂固相载体和Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂2；
步骤5：按照索玛鲁肽的肽序，取步骤4所得的Fmoc-Gly-树脂2依次偶联氨基酸，其中S20采用第二片段,S1-S4采用第一片段，得到索玛鲁肽树脂，然后裂解得到索玛鲁肽。
需要指出的是，在本申请文件中，S1为索玛鲁肽肽序中N端第一位的氨基酸，同理S2、S3、S4分别为N端第2、第3、第4位的氨基酸，以此类推。
作为优选，步骤1所述树脂为2-CTC树脂。在裂解CTC肽树脂时，为使得固相合成的S1-S4位的肽片段中的侧链保护基团能够保留，所述Fmoc-Gly-树脂1的替代度优选为0.8～1.2mmol/g。
优选地，步骤2所述制备第一片段的组氨酸为Boc-His(π-MBom)-OH。π-MBom保护基团能进一步抑制组氨酸分子内催化引起的消旋。
作为优选，步骤2所述制备第一片段的裂解液为TFE与DCM的混合液，TFE与DCM的体积比为1:6～1:2。
作为优选，步骤3所述制备第二片段的固相合成方法为：以2-CTC树脂为起始树脂，依次偶联Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu、十八烷二酸单叔丁酯，得到Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-CCT树脂，经裂解纯化得到Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-OH，经PFP/DIC处理后偶联Fmoc-Lys-OH，得到Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH。
优选地，步骤4所述树脂为2-CTC树脂或Wang-树脂，所述Fmoc-Gly-树脂2的替代度为0.3～0.6mmol/g。
步骤1和步骤4所述偶联CTC树脂时，是在活化剂存在的条件进行的。活化剂能够与偶联过程中产生的酸性物质(HCl)形成复合物，从而促进偶联反应的发生。作为优选，所用的活化剂选自DIEA、TFA、DBU。
优选地，步骤2、步骤3和步骤5所述偶联的缩合剂选自DIC/Cl-HOBt、TBTU/HOBt/DIEA、TBTU/Cl-HOBt/DIEA、TBTU/HOAt/DIEA、TBTU/DIEA、PyBop/DIEA、PyAop/DIEA、COMU/DIEA；所述偶联的溶剂选自DMF、DCM、NMP或DMSO中的一种或多种。
优选地，索玛鲁肽的合成采用全保护S5-S6片段为原料。更优选地，所述的全保护S5-S6片段为Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH。
采用全保护S5-S6的二肽片段Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH能有效减少D-The杂质、D-Phe杂质的产生。
作为优选，步骤5所述制备索玛鲁肽的具体固相合成方法为：取Fmoc-Gly-树脂2，通过固相合成法，按索玛鲁肽肽链从C端至N端肽序，依次偶联Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH和Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH，得到索玛鲁肽树脂，然后裂解得到索玛鲁肽。
优选地，步骤5所述制备索玛鲁肽的裂解液为TFA、EDT、DMS、苯甲硫醚、TIS的混合液，所述TFA、EDT、DMS、苯甲硫醚、TIS的体积比为80～90:1～5:1～5:2～5:2～6:1～5。
本发明采用片段和逐步合成相结合的固相合成法，简化了工艺流程步骤，有利于工业化大生产；制备索玛鲁肽全保护1-4位肽片段，并且将其作为关键起始物料应用于索玛鲁肽固相合成中，降低了D-His消旋杂质、+Gly杂质的产生，显著降低了粗品纯化的难度，大大提高了索玛鲁肽的纯度和收率，降低了生产成本。
附图说明
图1为实施例4制备的索玛鲁肽1-4位肽片段的HPLC色谱图
图2为实施例16制备的索玛鲁肽粗品的HPLC色谱图
图3为实施例19纯化的索玛鲁肽精肽的HPLC色谱图
图4为实施例19制备的索玛鲁肽主峰质谱图
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
本发明中所使用的缩写的含义列于下表中：
实施例1替代度为0.8mmol/g的Fmoc-Gly-CTC树脂的制备
A.将10g(13mmol)替代度为1.3mmol/g的2-CTC树脂加入反应釜中，加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入100ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取9.81g的Fmoc-Gly-OH和5.35g的HOBT于烧杯中，加入100mlDMF和5.46ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得CTC树脂中，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，加入100mlDMF,滤除DMF。加入4ml甲醇和5.46ml的DIEA，继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到12.5g的Fmoc-Gly-CTC树脂，经紫外检测替代度为0.8mmol/g。
实施例2替代度为1.2mmol/g的Fmoc-Gly-CTC树脂的制备
A.将10g(18mmol)替代度为1.8mmol/g的2-CTC树脂加入反应釜中，加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入100ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取9.81g的Fmoc-Gly-OH和5.35g的HOBT于烧杯中，加入100mlDMF和5.46ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得CTC树脂中，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，加入100mlDMF,滤除DMF。加入4ml甲醇和5.46ml的DIEA，继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到12g的Fmoc-Gly-CTC树脂，经紫外检测替代度为1.2mmol/g。
实施例3索玛鲁肽S1-S4位肽树脂Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂的制备
A.将实施例1中得到的Fmoc-Gly-CTC树脂全部倒入反应釜中，用100ml DCM溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤8次，每次100ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用PH试纸检测滤液，结果显示PH在6.5-7.0为合格。
B.依次称取8.50g的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、3.03gDIC和2.7g HOBT于干净的1L烧杯中，加入体积比为1:1的DMF/DCM溶液100ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤6次，每次100ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂。
C.按如上A的去保护方法和B的偶联方法，依先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸，即：Fmoc-Aib-OH和Boc-His(π-MBom)-OH的偶联。最后用二氯甲烷洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂21g。
实施例4索玛鲁肽S1-S4位肽片段Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的制备裂解液配比为TFE:DCM＝1:4(体积比)，于15℃条件下，向200mL裂解液中加入实施例3步骤C中所得的CTC树脂的全保护肽树脂21g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用40mL的DCM洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的1L异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚200mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品9g。全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品经过纯化后，样品中D-His消旋杂质的含量为0.34％。
实施例5索玛鲁肽S1-S4位肽片段Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的制备
裂解液配比为TFE:DCM＝1:6(体积比)，于15℃条件下，向100mL裂解液中加入全保护肽树脂10g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用30mL的DCM洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的500mL异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚100mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品5g。全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品经过纯化后，样品中D-His消旋杂质的含量为0.45％。
实施例6索玛鲁肽S1-S4位肽片段Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的制备
裂解液配比为TFE:DCM＝1:2(体积比)，于15℃条件下，向300mL裂解液中加入全保护肽树脂30g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用100mL的DCM洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的1.5L异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚300mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品17g。全保护四肽Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品经过纯化后，样品中D-His消旋杂质的含量为0.29％。
实施例7Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butylester)-OH的合成
A.将150.05g(153.05mmol)替代度为1.02mmol/g的2-CTC树脂加入反应釜中，加入160ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入160ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入160ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取117.97g的Fmoc-AEEA-OH于烧杯中，加入160mlDMF和74ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得CTC树脂中，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，滤除DMF。加入25ml甲醇和100ml DMF的混合溶液，35ml DIEA和100ml DMF的混合溶液至树脂中,继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次160ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次160ml；再用二氯甲烷洗2次，每次160ml；最后用甲醇洗3次，每次160ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到141.6mmol的Fmoc-AEEA-CTC树脂，经检测替代度为0.71mmol/g。
D.将步骤C得到的Fmoc-AEEA-CTC树脂全部倒入反应釜中，用160ml DCM溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液160ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入DMF160ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液160ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入DMF160ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤8次，每次160ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用PH试纸检测滤液，结果显示PH在6.5-7.0为合格。
E.依次称取109.53g的Fmoc-AEEA-OH、35.90g DIC和40.12gHOBT于干净的1L烧杯中，加入体积比为1:1的DMF/DCM溶液160ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入DMF160ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤6次，每次160ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到Fmoc-AEEA-AEEA-CTC树脂。
F.按如上步骤D的去保护方法和步骤E的偶联方法，依先后顺序，依次分别偶联氨基酸Fmoc-Glu(OH)-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯。最后用二氯甲烷洗5次，每次160ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次160ml；再用二氯甲烷洗2次，每次160ml；最后用醇3次，每次160ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-CTC树脂243.48g。
G.裂解液配比为TFE:DCM＝1:4(体积比)，于15℃条件下，向300mL裂解液中加入步骤F中所得的CTC树脂的全保护肽树脂243.48g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用40mL的DCM洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的2L异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚500mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-OH粗品108.96g。
H.将步骤G得到的Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-OH粗品10g，溶解于20mL DCM中，加入4.4g五氟苯酚。称取4.8g DCC，溶于20mL DCM中,将DCC溶液缓慢滴加到反应溶液中，搅拌反应1.0h，TLC检测反应完全后，过滤。滤液用饱和食盐水洗涤一次，用水洗涤一次，再用无水硫酸钠干燥DCM溶液，浓缩至干燥，溶于适量的乙腈中。另外，称取12.15g Fmoc-Lys-OH.HCl溶解于乙腈/水中(乙腈/水＝1/2)，加入15mL DIEA，搅拌15分钟获得Fmoc-Lys-OH溶液。将以上的反应溶液缓慢滴加到Fmoc-Lys-OH溶液中，搅拌反应1.5h。加入稀盐酸调pH值约为6，加入少量的DCM萃取。经纯化得到Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butylester)-OH 3.56g。
实施例8制备替代度为0.3mmol/g的Fmoc-Gly-Wang树脂的制备
A.将10g(9mmol)替代度为0.9mmol/g的Wang树脂加入反应釜中，加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入100ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取8.03g的Fmoc-Gly-OH和4.38g的HOBT于烧杯中，加入100mlDMF和4.46ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得Wang树脂中，加入0.16g的DMAP，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，加入醋酸酐8.5ml，继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到13g的Fmoc-Gly-Wang树脂，经紫外检测替代度为0.3mmol/g。
实施例9制备替代度为0.6mmol/g的Fmoc-Gly-Wang树脂的制备
A.将10g(12mmol)替代度为1.2mmol/g的Wang树脂加入反应釜中，加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入100ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取10.70g的Fmoc-Gly-OH和5.84g的HOBT于烧杯中，加入100mlDMF和5.95ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得Wang树脂中，加入0.22g的DMAP，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，加入醋酸酐11.32ml，继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到12.5g的Fmoc-Gly-Wang树脂，经检测替代度为0.6mmol/g。
实施例10制备替代度为0.45mmol/g的Fmoc-Gly-CTC树脂的制备
A.将10g(11mmol)替代度为1.1mmol/g的CTC树脂加入反应釜中，加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入100ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入100ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
B.称取9.81g的Fmoc-Gly-OH和5.35g的HOBT于烧杯中，加入100mlDMF和5.45ml的DIEA，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤A所得CTC树脂中，于20-25℃条件下混合4h。待反应结束后，滤除DMF。加入5ml甲醇和50ml DMF的混合溶液，6ml DIEA和50ml DMF的混合溶液至树脂中,继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用DMF洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。
C.将步骤B所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到13.5g的Fmoc-Gly-CTC树脂，经检测替代度为0.45mmol/g。
实施例11全保护S5-S6片段为Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH的制备
A.Fmoc-Thr(tBu)-OH活泼酯的制备
将100ml的单口瓶放置在低温恒温搅拌反应器中，加入3.98g Fmoc-Thr(tBu)-OH和25ml DCM溶剂，再加入2.2g五氟苯酚。在0℃下搅拌溶解澄清后，滴加溶于10mlDCM中的2.68gDCC溶液。10min滴加完毕后升温至25℃反应3h。用TLC监测反应(石油醚:乙酸乙酯＝1:1,额外加入2滴醋酸)。反应完成后，抽滤，加入5mlDCM洗涤，合并滤液并旋蒸除去溶剂获得粘稠物体5.05g。
B.Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH的制备
将25ml的单口瓶放置低温恒温搅拌反应器中，加入0.38g H-Gly-OH、3mL的0.087g/mL的碳酸钠水溶液和6ml(v/v＝1:1)的THF/H2O混合溶液，降温至0℃。称取0.68g步骤A获得的Fmoc-Thr(tBu)-OH活泼酯溶于3mlTHF中并滴加到单口瓶中。5min滴加完毕后升温至25℃反应4h，用TLC监测反应(石油醚:乙酸乙酯＝1:1,额外加入2滴醋酸)。反应完成后，加入柠檬酸水溶液调节PH＝5，分别用EA萃取2次，每次10ml。收集有机相用柠檬酸水溶液洗涤2次，每次20ml。用20ml饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥后旋蒸除去溶剂获得粘稠固体。加入4ml(v/v＝1:1)的石油醚/异丙醚混合溶剂打浆30min，抽滤获得黄色粘稠物0.51g。
实施例12全保护索玛鲁肽肽树脂的制备
A.将实施例8中得到的10g Fmoc-Gly-Wang树脂倒入反应釜中，用100ml DCM溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤8次，每次100ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用PH试纸检测滤液，结果显示PH在6.5-7.0为合格。
B.依次称取3.89g的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、1.16gTBTU和0.49g HOBT于干净的1L烧杯中，加入体积比为1:1的DMF/DCM溶液100ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，加入0.50mL DIEA，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤6次，每次100ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到Fmoc-Arg-Gly-Wang树脂。
C.按如上步骤A的去保护方法和步骤B的偶联方法，依主链氨基酸先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸或肽片段，即：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、实施例7所得的Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、实施例11所得的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH和实施例4所得的Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的偶联。其中，偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH时采用DIC/Cl-HOBt偶联体系和DMF溶剂；偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH时采用TBTU/HOBt/DIEA偶联体系和DCM溶剂；偶联Fmoc-Glu(OtBu)-OH时采用TBTU/Cl-HOBt/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Phe-OH时采用TBTU/HOAt/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Ala-OH时采用TBTU/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH时采用PyBop/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Thr(tBu)-OH时采用PyAop/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioicacid mono-tert-butyl ester)-OH时采用COMU/DIEA偶联体系和NMP/DMSO＝1:1的混合溶剂。最后用二氯甲烷洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到索玛鲁肽肽树脂22.5g。
实施例13索玛鲁肽S1-S4位肽树脂Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂的制备
A.将6g替代度为0.8mmol/g的Fmoc-Gly-CTC树脂倒入反应釜中，用100ml DCM溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤8次，每次100ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用PH试纸检测滤液，结果显示PH在6.5-7.0为合格。
B.依次称取4.25g的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、1.51gDIC和1.35g HOBT于干净的1L烧杯中，加入体积比为1:1的DMF/DCM溶液100ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤6次，每次100ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂。
C.按如上A的去保护方法和B的偶联方法，依先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸，即：Fmoc-Aib-OH和Fmoc-His(Trt)-OH的偶联。最后用二氯甲烷洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用甲醇3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到全保护四肽Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-CTC树脂11.5g。
实施例14索玛鲁肽S1-S4片段Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的制备
裂解液配比为TFE:DCM＝1:4(体积比)，于15℃条件下，向200mL裂解液中加入实施例13步骤C中所得的CTC树脂的全保护肽树脂11.5g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用40mL的DCM洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的1L异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚200mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得全保护四肽Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品5.3g。全保护四肽Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH粗品经过纯化后，样品中D-His消旋杂质的含量为2.05％。
实施例15全保护索玛鲁肽肽树脂的制备
A.将20g替代度为0.3mmol/g的Fmoc-Gly-Wang树脂倒入反应釜中，用100ml DCM溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/DMF溶液100ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤8次，每次100ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用PH试纸检测滤液，结果显示PH在6.5-7.0为合格。
B.依次称取7.78g的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、2.32gTBTU和0.98g HOBT于干净的1L烧杯中，加入体积比为1:1的DMF/DCM溶液100ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，加入1mL DIEA，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入DMF100ml，混合5min后，抽干。重复用DMF洗涤6次，每次100ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到Fmoc-Arg-Gly-Wang树脂。
C.按如上步骤A的去保护方法和步骤B的偶联方法，依主链氨基酸先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸或肽片段，即：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、实施例7所得的Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、实施例11所得的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH和实施例14所得的Fmoc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH的偶联。其中，偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH时采用DIC/Cl-HOBt偶联体系和DMF溶剂；偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH时采用TBTU/HOBt/DIEA偶联体系和DCM溶剂；偶联Fmoc-Glu(OtBu)-OH时采用TBTU/Cl-HOBt/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH时采用TBTU/HOAt/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Ala-OH时采用TBTU/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH时采用PyBop/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Thr(tBu)-OH时采用PyAop/DIEA偶联体系；偶联Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acidmono-tert-butyl ester)-OH时采用COMU/DIEA偶联体系和NMP/DMSO＝1:1的混合溶剂。最后用二氯甲烷洗5次，每次100ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次100ml；再用二氯甲烷洗2次，每次100ml；最后用醇洗3次，每次100ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到索玛鲁肽肽树脂44.8g。
实施例16索玛鲁肽粗品的制备
裂解液配比为TFA:EDT:DMS:苯甲硫醚:Tis:H2O＝80:4:4:4:4:4(体积比)，于15℃条件下，向100mL裂解液中加入实施例12中所得的Wang树脂的全保护肽树脂10g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用30mL的TFA洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的300mL异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚200mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得索玛鲁肽粗品6.1g，HPLC纯度为70.5％，HPLC色谱图如图2所示。
实施例17索玛鲁肽粗品的制备
裂解液配比为TFA:EDT:DMS:苯甲硫醚:Tis:H2O＝85:5:3:2:4:1(体积比)，于15℃条件下，向100mL裂解液中加入实施例15所得的全保护肽树脂10g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用30mL的TFA洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的300mL异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚200mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得索玛鲁肽粗品5.1g，HPLC纯度为64.7％，HPLC色谱图与图1相似。
实施例18索玛鲁肽粗品的制备
裂解液配比为TFA:EDT:DMS:苯甲硫醚:Tis:H2O＝90:2:2:2:2:2(体积比)，于15℃条件下，向100mL裂解液中加入实施例15所得的全保护肽树脂10g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用30mL的TFA洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的300mL异丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用异丁基醚200mL，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得索玛鲁肽粗品6.7g，HPLC纯度为67.2％，HPLC色谱图与图1相似。
实施例19索玛鲁肽精肽的制备
取实施例16所得的6.20g索玛鲁肽粗品溶于乙腈水溶液，以十八烷基键合硅胶为固定相、以NaClO4盐溶液和乙腈为流动相对索玛鲁肽粗肽溶液进行HPLC梯度洗脱，收集索玛鲁肽馏分，用旋转蒸发仪旋蒸去除部分乙腈，获得索玛鲁肽的一次纯化溶液。索玛鲁肽的一次纯化液以十八烷基键合硅胶为固定相、用TFA水溶液和乙腈为流动相进行HPLC线性洗脱，收集索玛鲁肽馏分，用旋转蒸发仪旋蒸去除乙腈和大部分水，冷冻干燥，获得索玛鲁肽精肽2.74g,HPLC纯度为99.8％，HPLC色谱图如图3所示,纯化收率为62.8％。
Claims (14)
1.一种索玛鲁肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将树脂固相载体和Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂1；
步骤2：取步骤1所得的Fmoc-Gly-树脂1偶联氨基酸，固相合成索玛鲁肽全保护S1-S4片段树脂，经裂解、纯化作为第一片段；
步骤3：合成索玛鲁肽S20带侧链基团的赖氨酸，得到Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH,作为第二片段；
步骤4：将树脂固相载体和Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂2；
步骤5：按照索玛鲁肽肽序，取步骤4所得的Fmoc-Gly-树脂2依次偶联氨基酸或肽片段，其中S20采用第二片段,S1-S4采用第一片段，得到索玛鲁肽树脂，经裂解、纯化得到索玛鲁肽。
2.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤1所述树脂为2-CTC树脂。
3.根据权利要求1或2所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤1所述Fmoc-Gly-树脂1的替代度为0.8～1.2mmol/g。
4.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤2所述制备第一片段的组氨酸为Boc-His(π-MBom)-OH。
5.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤2所述制备第一片段的裂解液为TFE与DCM的混合液，所述TFE与所述DCM的体积比为1:6～1:2。
6.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤3所述制备第二片段的方法为：以2-CTC树脂为起始树脂，依次偶联Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu、十八烷二酸单叔丁酯，得到Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-CTC树脂，经裂解纯化得到Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester-γ-Glu(OtBu)-AEEA-AEEA-OH，经PFP/DIC处理后偶联Fmoc-Lys-OH，得到Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH。
7.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤4所述树脂选自2-CTC树脂、Wang-树脂。
8.根据权利要求1或7所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤4所述Fmoc-Gly-树脂2的替代度为0.3～0.6mmol/g。
9.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤1和步骤4所用的活化剂选自DIEA、TFA、DBU。
10.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤2、步骤3和步骤5所述偶联的缩合剂选自DIC/Cl-HOBt、TBTU/HOBt/DIEA、TBTU/Cl-HOBt/DIEA、TBTU/HOAt/DIEA、TBTU/DIEA、PyBop/DIEA、PyAop/DIEA、COMU/DIEA；所述偶联的溶剂选自DMF、DCM、NMP或DMSO中的一种或多种。
11.根据权利要求1所述的索玛鲁肽合成方法，其特征在于：步骤5所述索玛鲁肽的合成采用全保护S5-S6片段为原料。
12.根据权利要求11所述的索玛鲁肽合成方法，其特征在于：所述的全保护S5-S6片段为Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH。
13.根据权利要求4或12所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤5所述制备索玛鲁肽的具体固相合成方法为：取Fmoc-Gly-树脂2，通过固相合成法，按索玛鲁肽肽链从C端至N端肽序，依次偶联Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic acid mono-tert-butyl ester)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-Phe-OH和Boc-His(π-MBom)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH，得到索玛鲁肽树脂，然后裂解得到索玛鲁肽。
14.根据权利要求1所述的索玛鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤5所述制备索玛鲁肽的裂解液为TFA、EDT、DMS、苯甲硫醚、TIS的混合液，所述TFA、EDT、DMS、苯甲硫醚、TIS的体积比为80～90:1～5:1～5:2～5:2～6:1～5。
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