本专利申请要求以下专利的权益:2015年9月29日提交的美国临时申请62/234,232、2015年9月29日提交的美国临时申请62/234,239和2015年9月29日提交的美国临时申请62/234,247。前述相关美国专利申请的全部公开内容据此以引用方式并入本文用于所有目的。
具体实施方式
细胞培养物提取物
如本文所用,“细胞培养物提取物”是指在细胞培养过程之后由微生物的细胞培养物制备的材料。提取物可以由离心的液体培养基制成。然后过滤上清液。通过过滤器后的材料是细胞培养物提取物。这也被称为细胞培养物滤液。
本发明涉及一种通过培养真菌制备的细胞培养物提取物。更具体地讲,细胞培养物提取物由粗硬春孔菌的培养物制成。甚至更具体地讲,细胞培养物提取物由粗硬春孔菌MY993或MY261的培养物制成。真菌菌株MY993和MY261发现于泰国,并且2006年首次由泰国基因工程及生物技术国家中心(BIOTEC)的研究人员分离出来。因此,通过基于形态学的方法将这两种真菌鉴定为粗硬春孔菌,并且随后将其保藏在Thailand Science Park,Phaholyothin Road,Klong 1,Klongluang,Pathumthani 12120,Thailand的泰国生物资源研究中心(TBRC),并分别命名为TBRC no.2014和2015。真菌菌株MY993(TRBC 2014)和MY261(TBRC 2015)由Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)Germany于2016年8月18日根据布达佩斯条约进行保藏,并且分别编号为DSM 32358和DSM 32359。
根据本发明的细胞培养物提取物具有约500U/ml至约2000U/ml、更具体地讲约600U/ml至约1800U/ml、并且甚至更具体地讲约1000U/ml至约1750U/ml的黑色素降解活性。U/ml是指如实施例3详述的黑色素降解测定中所述的每毫升提取物的黑色素降解酶单位数。
亮肤方法
本发明涉及一种通过将包含某种真菌的细胞培养物提取物的组合物施用于需要增亮的皮肤来增亮皮肤的方法。更具体地讲,本发明涉及一种通过将包含粗硬春孔菌的细胞培养物提取物的组合物施用于需要增亮的皮肤来增亮皮肤的方法。
如本文所用,术语“增亮皮肤”通常指使皮肤色调、皮肤颜色和/或皮肤色度变淡、变亮、变白和/或均匀,和/或指祛黄,和/或指色素沉着斑痕和/或病损(包括但不限于色素斑、黑色素斑、老年斑、日晒斑、老年性雀斑、雀斑(freckles)、单纯性雀斑样痣、色素型日光性角化病、脂溢性角化病、黑斑病、痤疮斑痕、发炎后色素沉着过度、小痣、雀斑(ephelides)、它们中两种或更多种的组合等)的淡化和/或褪色。在某些实施方案中,“增亮皮肤”还指增加的皮肤光彩、光泽度、半透明度和/或发光和/或获得更多光彩、光泽、半透明的或发光的皮肤色调外观或较低的黄色或灰黄色皮肤色调。在某些优选的实施方案中,“增亮皮肤”指使皮肤色调增亮和均匀、增加皮肤光彩和/或淡化老年斑。
如本文所用,术语“需要亮肤处理的皮肤”一般指表现出一种或多种选自如下特性的皮肤:具有低于41的个体类型角(ITA)测量值(根据2007年公布的Colipa Guideline:Guideline For The Colorimetric Determination Of Skin Colour Typing AndPrediction Of The Minimal Erythemal Dose(Med)Without Uv Exposure(COLIPA指南:用于皮肤颜色分型的比色测定和无紫外线暴露的最小红斑量(MED)预测的指南)测定的,该文献以引用的方式并入本文,并还在下文描述)的皮肤,发暗和/或灰黄的皮肤,包括因UV而颜色变深的皮肤,具有不均匀皮肤色调的皮肤,或具有一处或多处色素沉着的斑痕和/或病损(包括但不限于色素斑、黑色素斑、老年斑、日晒斑、老年性雀斑、雀斑、单纯性雀斑样痣、色素型日光性角化病、脂溢性角化病、黑斑病、痤疮斑痕、发炎后色素沉着过度、小痣、雀斑、它们的两种或更多种的组合等)的皮肤。在COLIPA指导手册中,肤色被定义为ITA值的函数:非常浅色的皮肤>55;浅色皮肤41-55、中等色皮肤28-41和棕褐色皮肤<28。在某些优选的实施方案中,“需要亮肤的皮肤”指具有皮肤具有低于41的的ITA值诸如约40或更低、约35或更低、约30或更低、或更优选约28或更低的个体。在某些其他优选的实施方案中,本发明涉及用于选自灰黄和/或颜色变深皮肤的需要亮肤处理的皮肤上的组合物和方法。在某些其他优选的实施方案中,本发明涉及用在需要亮肤处理的皮肤上的组合物和方法,所述需要亮肤处理的皮肤选自老年斑、雀斑、痤疮后留下的斑痕以及它们中两种或更多种的组合。如本文所用,“需要改善老化迹象的皮肤”是指为(但不限于)松垂、松弛、松散、粗糙、有皱纹、变薄和不平的皮肤。改善老化迹象是指改善皮肤紧实度、改善皮肤肌理、改善皮肤上皱纹的出现、改善皮肤色调或治疗皮肤中的外部侵害。
如本文所用,“改善皮肤色调”是指增亮皮肤的外观(例如,增亮色素沉着的斑痕或病损、减少皮肤灰黄和/或均匀皮肤的颜色)。
如本文所用,“美容上/皮肤病学可接受的”是指适合与组织(例如,皮肤或毛发)接触使用,而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性应答等等。
如本文所用,“安全且有效量”是指多至足以产生预期效果但少至足以避免严重副作用(包括毒性等)的提取物或组合物的量。化合物、提取物或组合物的安全且有效量将随着例如最终使用者的年龄、健康状态和环境暴露,治疗的持续时间和性质,所采用的具体提取物、成分或组合物,所利用的特定药学上可接受的载体和类似因素而变化。
化合物、提取物或组合物的安全且有效量将随着例如最终使用者的年龄、健康状态和环境暴露,治疗的持续时间和性质,所采用的具体提取物、成分或组合物,以及所利用的特定药学上可接受的载体和类似因素而变化。
对于包括所述组合物的亮肤用途的实施方案而言,“亮肤有效量”是指在作为亮肤测试(ΔL)的皮肤表皮等同物模型中有效达到高于零的ΔL值的提取物的量,如下文所述。在某些优选的实施方案中,亮肤有效量为有效达到约1或更高的ΔL的量。
在增亮皮肤的方法中使用的护肤组合物中的细胞培养物提取物的量将在护肤组合物的约0.001重量%至约40重量%之间变化。更具体地讲,该量将为护肤组合物的约0.01重量%至约25重量%。甚至更具体地讲,该量将为护肤组合物的约0.1重量%至约10重量%。
护肤组合物
本发明涉及一种护肤组合物,其含有粗硬春孔菌细胞培养物提取物和载体。粗硬春孔菌细胞培养物提取物以足以使皮肤增亮的量存在于护肤组合物中。任何合适的载体均可用于根据本发明的护肤组合物中。优选地,所述载体是美容上可接受的载体。如本领域的技术人员将认识到,美容上可接受的载体包括适于与身体,具体地皮肤接触使用的载体,而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性应答等等。安全且有效量的载体是约50重量%至约99.999重量%、优选约80重量%至约99.9重量%、更优选约99.9重量%至约95重量%、最优选约98重量%至约99.8重量%的组合物。
载体可以广泛多样的形式存在。例如,为乳液形式的载体,包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳液可用于本文中。这些乳液可涵盖范围较宽的粘度,例如约100cps至约200,000cps。
合适的美容上可接受的载体的示例包括用于化妆品溶液、悬浮液、洗剂、霜膏、精华素、精华液、凝胶、调色剂、棒剂、喷剂、软膏剂、洗液和皂条、洗发剂、毛发调理剂、糊剂、泡沫、摩丝、粉末、剃须膏、擦拭物、贴片、带、强力贴片、微针贴片、绷带、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤贴膜、化妆品、液滴、美容膜等的美容上可接受的溶剂和材料。这些产品类型可含有若干类型的美容上可接受的载体,包括但不限于溶液、悬浮液、乳液诸如微乳液和纳米乳液、凝胶、固体、脂质体、其他包封技术等。
下面是所述载体的非限制性示例。其它载体可由本领域的普通技术人员进行配制。在一个实施方案中,载体含有水。在另一个实施方案中,载体还可含有一种或多种水性溶剂或有机溶剂。有机溶剂的示例包括但不限于:二甲基异山梨醇;肉豆蔻酸异丙酯;阳离子、阴离子和非离子性质的表面活性剂;植物油;矿物油;蜡;树胶;合成和天然的胶凝剂;链烷醇;二醇;和多元醇。二醇的示例包括但不限于甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二乙二醇、三乙二醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己三醇以及它们的共聚物或混合物。链烷醇的例子包括但不限于具有约2个碳原子至约12个碳原子(例如,约2个碳原子至约4个碳原子)的那些,诸如异丙醇和乙醇。多元醇的例子包括但不限于那些具有约2个碳原子至约15个碳原子(例如,约2个碳原子至约10个碳原子)的那些,诸如丙二醇。基于载体的总重量计,有机溶剂可以约1%至约99.99%(例如,约20%至约50%)的量存在于载体中。基于载体的总重量计,水可以约5%至约95%(例如,约50%至约90%)的量存在于载体中(使用前)。溶液可含有任何合适量的溶剂,包括约40%至约99.99%。某些优选的溶液含有约50%至约99.9%、约60%至约99%、约70%至约99%、约80%至约99%、或约90%至99%的溶剂。
可由此类溶液制成洗剂。除了溶剂之外,洗剂通常含有至少一种润肤剂。洗剂可包含约1%至约20%(例如,约5%至约10%)的润肤剂和约50%至约90%(例如,约60%至约80%)的水。
可由溶液配制的另一类产品是霜膏。霜膏通常含有约5%至约50%(例如,约10%至约20%)的润肤剂和约45%至约85%(例如,约50%至约75%)的水。
还可由溶液配制的另一类产品是软膏剂。软膏剂可含有动物油、植物油或合成油或半固态10烃类的简单基料。软膏剂可含有约2%至约10%的一种或多种润肤剂加上约0.1%至约2%的一种或多种增稠剂。
可用于本发明的组合物还可作为乳液配制。如果载体是乳液,则约1%至约10%(例如,约2%至约5%)的载体含有乳化剂。乳化剂可为非离子、阴离子或阳离子的。
洗剂和霜膏可被配制为乳液。通常此类洗剂含有0.5%至约5%的乳化剂,而此类霜膏通常将含有约1%至约20%(例如,约5%至约10%)的润肤剂;约20%至约80%(例如30%至约70%)的水;以及约1%至约10%(例如,约2%至约5%)的乳化剂。
水包油型和油包水型单相乳液护肤制剂(诸如洗剂和霜膏)是本领域所熟知的,并且可用于本主题发明。多相乳液组合物,诸如水包油包水型或油包水包油型,也可用于本主题发明。通常,此类单乳液或多相乳液含有水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。
本发明的组合物还可作为凝胶(例如,使用合适的胶凝剂的水性凝胶、醇凝胶、醇/水型凝胶或油凝胶)配制。用于水性凝胶和/或醇凝胶的合适胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如,羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。适用于油(诸如矿物油)的胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常含有约0.1重量%和5重量%的此类胶凝剂。
本发明的组合物还可配制成固体制剂(例如,基于蜡的棒剂、皂条组合物、粉末或擦拭物)。本发明的组合物还可与固体、半固体或可溶解的基材(例如,擦拭物、贴膜、垫、手套或带)组合。
本发明的组合物还可包含多种另外的美容活性剂中的任一种。合适的另外的活性剂的示例包括:亮肤剂、颜色加深剂、另外的抗衰老剂、原弹性蛋白促进剂、胶原促进剂、抗痤疮剂、控油光剂、抗微生物剂诸如抗酵母剂、抗真菌剂和抗细菌剂、抗炎剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光照保护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、洗涤剂/表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、能量增强剂、止汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长增强剂、毛发生长延缓剂、固化剂、补水剂、增效剂、抗硬结剂、皮肤调理剂、抗蜂窝炎剂、气味控制剂诸如气味遮盖剂或pH改变剂等等。
各种合适的另外的美容上可接受的活性物质的示例包括羟基酸;过氧化苯甲酰;D-泛醇;UV过滤剂,诸如包括但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol 5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(Parsol SLX)、三乙醇胺水杨酸、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(TinosorbS)、二苯酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex 4360)、舒利苯酮、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌;类胡萝卜素;自由基清除剂;自旋捕捉剂;类视色素和类视色素前体,诸如30视黄醇、视黄酸和视黄醇棕榈酸酯;神经酰胺;多不饱和脂肪酸;必需脂肪酸;酶;酶抑制剂;酶介质,诸如2,2-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和香草醛;矿物质;激素,诸如雌激素;类固醇,例如氢化可的松;2-二甲基氨乙醇;铜盐,诸如氯化铜;含铜的肽,诸如Cu:Gly-His-Lys、辅酶Q10;氨基酸,诸如脯氨酸;维生素;乳糖酸;乙酰辅酶A;烟酸;核黄素;硫胺;核糖;电子传递体,诸如NADH和FADH2;以及其他植物提取物,诸如燕麦、芦荟、小白菊、大豆、香菇提取物以及它们的衍生物和混合物。
在某些优选的实施方案中,护肤组合物包含粗硬春孔菌的细胞培养物提取物和至少一种另外的皮肤保湿活性剂。另外的皮肤保湿剂的示例包括甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二乙二醇、三乙二醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己三醇以及它们的混合物。
在某些优选的实施方案中,本发明的组合物为包含粗硬春孔菌的细胞培养物提取物和至少一种另外的改善老化迹象的药剂的护肤组合物。合适的另外的改善老化迹象的药剂的示例包括但不限于弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、类视色素、透明质酸、二甲基氨乙醇、N,N,N',N'-四(2-羟基丙基)乙二胺、α-羟基酸、多羟基酸,以及它们中两种或更多种的组合。
如本文所用,“弹性蛋白原促进剂”是指具有增强弹性蛋白原产生的生物活性的一类化合物。根据本发明,弹性蛋白原促进剂包括所有能够增强人体中弹性蛋白原的产生的天然或合成化合物。
合适的原弹性蛋白促进剂的例子包括但不限于黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物、珠子草提取物以及具有铜和/或锌组分的双金属络合物。具有铜和/或锌组分的双金属络合物可为,例如,柠檬酸铜-锌、草酸铜-锌、酒石酸铜-锌、苹果酸铜-锌、琥珀酸铜-锌、丙二酸铜-锌、马来酸铜-锌、天冬氨酸铜-锌、谷氨酸铜-锌、戊二酸铜-锌、富马酸铜-锌、葡糖二酸铜-锌、聚丙烯酸铜-锌、已二酸铜-锌、庚二酸铜-锌、辛二酸铜-锌、壬二酸铜-锌、癸二酸铜-锌、十二酸铜-锌或它们的组合。在一个优选的实施方案中,弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物以及它们的组合。在一个特别优选的实施方案中,弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、小白菊提取物以及它们的组合。
所谓“黄栌提取物”是指“黄栌(Cotinus coggygria)”叶的提取物,诸如其水提取物,购自Bilkokoop of Sofia(Bulgaria)。
所谓“黑莓提取物”是指从悬钩子(Rubus)属植物且优选地越南悬钩子(Rubusfruticosus)分离的化合物的共混物。在一个实施方案中,化合物分离自该植物的花。在另一个实施方案中,化合物分离自该植物的干燥花。此类化合物可分离自植物的一个或多个部分(例如,整株植物、植物的花、种子、根、根茎、茎、果实和/或叶)。在一个优选的实施方案中,黑莓提取物是黑莓叶提取物。一种特别合适的黑莓提取物通过用配混成约5%至约10%的活度的水和乙醇的混合物提取黑莓叶,用可从Symrise Inc.(Teterboro,NJ)商购获得并且以名称“SymMatrix”销售的麦芽糖糊精基体来制备。
可采集“珠子草”的提取物并可作为整株植物使用,或任选地可使用植物的一个或多个部分(例如,植物的花、种子、根、根茎、茎、果实和/或叶)。可将珠子草植株或其部分细分成粉末,诸如通过碾磨或研磨。珠子草的合适研磨形式可从Raintree Nutrition,Inc.(Carson City,Nevada)商购获得。优选地,使用珠子草的低分子量级分,例如基本上不含分子量大于约100,000道尔顿的分子种类的珠子草级分。优选地,此类低分子量级分可水提取自珠子草植株。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种弹性蛋白原促进剂,诸如上文所述的那些。基于活性物质计,组合物优选包含约0.1%至约10%的弹性蛋白原促进剂,更优选地约0.5%至约5%的弹性蛋白原促进剂,并且最优选地约0.5%至约2%的弹性蛋白原促进剂。
如本文所用,“胶原促进剂”是指具有增强胶原产生的生物活性的化合物。根据本发明,“非类视色素胶原促进剂”包括不是类视色素或来源于类视色素,并且能够增强人体中胶原产生的所有天然或合成化合物。
合适的胶原促进剂的示例包括但不限于下述:类视色素(包括视黄醇、视黄醛和视黄酸)、小白菊(野甘菊(Tanacetum parthenium))提取物、积雪草(Centella asiatica)提取物和豨莶(Siegesbeckia orientalis)提取物;大豆的提取物;胶原促进肽;乌索酸;和积雪草苷。
积雪草,在留尼汪岛上也称为紫箩(Violette marronne),在印度称为购土可乐(Gotu Kola)或印度天胡葵(Indian pennywort),在北美称为积雪草R.(Centellarepanda),而在马达加斯加称为他乐婆(Talapetraka),是多形态草药,属于伞形科(Umbelliferae,Apiaceae),具体地属于天胡荽(Hydrocotyle)亚科。其在整个热带野生生长,并且喜好海拔高度约600米至1200米的潮湿阴暗区域。积雪草具有三个品种:迪比卡型、阿比西尼亚型和佛罗里达型。该草药是已知的并因其愈合、镇静、止痛、抗抑郁、抗病毒和抗微生物特性而被使用。该草药的生物活性看起来是由于该草药中存在三萜烯分子。合适的积雪草提取物以TECA购自Bayer Consumer HealthCare(Basel,Switzerland)。
所谓“豨莶草提取物”是指植物豨莶草的各种提取物中的任一种,包括购自Sederma公司(Croda International Group,Edison,NJ)的豨莶苷。
合适的胶原促进肽包括下述马曲金汰肽(即,来源于细胞外基质蛋白-胶原、弹性蛋白或蛋白聚糖的降解的肽),包括棕榈酰五肽,具体地讲以MATRIXYL购自Sederma(CrodaInternational Group of Edison,NJ)的Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH;以PROCYTE购自Photomedex of Montgomeryville(PA)的GHK铜肽;以Biopoeptide CL购自Sederma(CrodaInternational Group of Edison,NJ)的棕榈酰GHK肽;仿生四肽,诸如以Chronoline TriPeptide购自Unipex of Québec,Canada的那些;以及以Syn-Coll购自DSM of Basel,Switzerland的棕榈酰三肽。
乌索酸也称为五环三萜酸、乌苏酸、熊果酸、乌索酸(Urson)、β-乌索酸和3-β-羟基-乌索-12-烯-28-酸。其可例如从Sigma-Aldrich公司(Sigma-Aldrich of St.Louis,MO)商购获得。
积雪草苷,在化学上也称为:[6-[[3,4-二羟基-6-(羟甲基)-5-(3,4,5-三羟基-6-甲基四氢吡喃-2-基)氧基四氢吡喃-2-基]氧基甲基]-3,4,5-三羟基四氢吡喃-2-基]10,11-二羟基-9-(羟甲基)-1,2,6a,6b,9,12a-六甲基-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-十四氢-1H-苉-4a-甲酸酯),可例如从Bayer Sant é Familiale Division Serdex,69,Boulevard Victor Hugo 93400 SAINT-OUEN France商购获得。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种胶原促进剂。基于活性物质计,组合物优选包含约0.1%至约10%的胶原促进剂,更优选地约0.5%至约5%的胶原促进剂,并且最优选地约0.5%至约2%的胶原促进剂。
本发明的组合物还可包含至少一种另外的亮肤活性剂。合适的亮肤活性剂的示例包括但不限于酪氨酸酶抑制剂、黑色素降解剂、包括PAR-2拮抗剂的黑色素体转移抑制剂、剥脱剂、防晒剂、类视色素、抗氧化剂、氨甲环酸、氨甲环酸十六烷基酯盐酸盐、皮肤漂白剂、亚油酸、腺苷单磷酸二钠盐、母菊提取物、尿囊素、遮光剂、滑石和二氧化硅、锌盐等,以及如在Solano等人在色素细胞研究(Pigment Cell Res.)第19期(第550-571页)和Ando等人,国际分子科学杂志(Int J Mol Sci)第11期(第2566-2575页)中所述的其它试剂。
合适的酪氨酸酶抑制剂的示例包括但不限于维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物、曲酸、熊果苷、间苯二酚、对苯二酚、黄酮例如甘草类黄酮、甘草根提取物、桑树根提取物、菊叶薯蓣根提取物、虎耳草提取物等、鞣花酸、水杨酸盐及衍生物、葡糖胺及衍生物、富勒烯、扁柏酚、双酸、乙酰葡糖胺、5,5'-二丙基-联苯-2,2'-二醇(厚朴木酚素)、4-(4-羟基苯基)-2-丁醇(4-HPB)以及它们中的两种或更多种的组合等。维生素C衍生物的例子包括但不限于抗坏血酸和盐、抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸磷酸钠、抗坏血酸磷酸镁以及富含维生素C的天然提取物。维生素E衍生物的示例包括但不限于α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚以及它们的混合物、生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯以及富含维生素E衍生物的天然提取物。间苯二酚衍生物的示例包括但不限于间苯二酚、4-取代的间苯二酚,如4-烷基间苯二酚,诸如4-丁基间苯二酚(噜忻喏)、4-己基间苯二酚(Synovea HR,Sytheon公司)、苯乙基间苯二酚(Symwhite,Symrise公司)、1-(2,4-二羟苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲基苯基)-丙烷(nivitol,Unigen公司)等,以及富含间苯二酚的天然提取物。水杨酸盐的示例包括但不限于4-甲氧基水杨酸钾、水杨酸、乙酰水杨酸、4-甲氧基水杨酸以及它们的盐。在某些优选的实施方案中,酪氨酸酶抑制剂包括4-取代的间苯二酚、维生素C衍生物或维生素E衍生物。在更优选的实施方案中,酪氨酸酶抑制剂包含苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚或抗坏血酸-2-葡糖苷。
合适的黑色素降解剂的示例包括但不限于过氧化物和酶,诸如过氧化物酶和木质素酶。在某些优选的实施方案中,黑色素抑制剂包括过氧化物或木质素酶。
合适的黑色素体转移抑制剂的示例包括PAR-2拮抗剂诸如大豆胰蛋白酶抑制剂或Bowman-Birk抑制剂、维生素B3及衍生物诸如烟酰胺、大豆精华、全大豆、大豆提取物。在某些优选的实施方案中,黑素体转移抑制剂包括大豆提取物或烟酰胺。
剥脱剂的示例包括但不限于α-羟基酸诸如乳酸、乙醇酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或任何前述物质的任何组合、β-羟基酸诸如水杨酸、多羟基酸诸如乳糖酸和葡糖酸,以及机械剥落诸如微晶换肤术。在某些优选的实施方案中,剥脱剂包括乙醇酸或水杨酸。
防晒剂的例子包括但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol 5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(TinosorbS)、二苯酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex 4360)、舒利苯酮、亚甲基二苯并三唑四甲基丁酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌等等。
类视色素的示例包括但不限于视黄醇(维生素A醇)、视黄醛(维生素A醛)、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯、视黄酸、视黄醇棕榈酸酯、异维甲酸、他佐罗汀、蓓萨罗丁、阿达帕林、它们中的两种或更多种的组合等。在某些优选的实施方案中,类视色素选自:视黄醇、视黄醛、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯、以及它们中的两种或更多种的组合。在某些更优选的实施方案中,类视色素为视黄醇。
抗氧化剂的例子包括但不限于水溶性抗氧化剂诸如巯基化合物及它们的衍生物(例如,焦亚硫酸钠和N-乙酰基半胱氨酸、谷胱甘肽)、硫辛酸和二氢硫辛酸、茋类化合物诸如白藜芦醇和衍生物、乳铁蛋白、铁和铜螯合剂以及抗坏血酸和抗坏血酸衍生物(例如,抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明组合物的油溶性抗氧化剂包括但不限于丁基化羟基甲苯、类视色素(例如,视黄醇和视黄醇棕榈酸酯)、生育酚(例如,生育酚乙酸酯)、生育三烯酚和泛醌。含有适用于本发明的组合物的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于:含有类黄酮和异黄酮以及它们的衍生物(例如,染料木黄酮和木质素异黄酮(diadzein))的提取物、含有白藜芦醇的提取物等等。此类天然提取物的示例包括葡萄籽、绿茶、红茶、白茶、松树树皮、小白菊、不含小白菊内酯的小白菊、燕麦提取物、黑莓提取物、黄栌提取物、大豆提取物、柚提取物、麦芽精提取物、橙皮素、葡萄提取物、马齿苋提取物、甘草查耳酮、查耳酮、2,2'-二羟查耳酮、报春花提取物、蜂胶等。
另外的美容活性剂可以任何合适的量存在于组合物中,例如以约0.0001重量%至约20重量%,例如约0.001重量%至约10重量%诸如约0.01重量%至约5重量%的量存在于组合物中。在某些优选的实施方案中,该量为0.1%至5%,而在其它优选的实施方案中,该量为1%至2%。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种抗炎剂化合物。合适的抗炎剂的示例包括取代的间苯二酚、(E)-3-(4-甲基苯基磺酰基)-2-丙烯腈(诸如从美国密苏里州圣路易的西格玛奥德里奇公司商购获得的“Bay 11-7082”)、四氢姜黄素(诸如四氢姜黄素CG,得自新泽西州皮斯卡特维的萨宾莎公司(Sabinsa Corporation of Piscataway,NJ)),来源于下述的提取物和材料:黄檗(Phellodendron amurense)树皮提取物(PCE)、非变性大豆(黄豆(Glycine max))、小白菊(野甘菊(Tanacetum parthenium))、姜(生姜(Zingiberofficinale))、银杏(银杏(Ginkgo biloba))、羟基积雪草苷(积雪草提取物成分)、黄栌(黄栌(Cotinus coggygria))、蜂斗菜提取物(紫蜂斗菜(Petasites hybridus))、枸杞(宁夏枸杞(Lycium barbarum))、奶蓟提取物(水飞蓟(Silybum marianum))、忍冬(金银花(Lonicera japonica))、秘鲁香脂(秘鲁香树(Myroxylon pereirae))、鼠尾草(药用鼠尾草(Salvia officinalis))、酸果蔓提取物(红莓苔子(Vaccinium oxycoccos))、苋菜油(籽粒苋(Amaranthus cruentus))、石榴(石榴(Punica granatum))、马黛茶(巴拉圭茶(Ilexparaguariensis)叶提取物)、白百合花提取物(圣母百合(Lilium candidum))、橄榄叶提取物(橄榄(Olea europaea))、根皮素(苹果提取物)、燕麦粉(燕麦(Aveena sativa))、Lifenol(蛇麻草:啤酒花(Humulus lupulus)提取物)、芒柄花P(红芒柄花(Ononisspinosa))、甘草查耳酮(甘草:胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)提取物成分)、馨敏舒(红没药醇和姜提取物)、它们中两种或更多种的组合等。
在一个实施方案中,抗炎剂是间苯二酚。特别合适的取代的间苯二酚包括4-己基间苯二酚和4-辛基间苯二酚,特别是4-己基间苯二酚。4-己基间苯二酚可以“SYNOVEA HR”从Sytheon(Lincoln Park,NJ)商购获得。4-辛基间苯二酚可从City Chemical LLC(WestHaven,Connecticut)商购获得。
所谓“小白菊的提取物”,其是指植物“小白菊”植株的提取物,诸如可根据标题为“PARTHENOLIDE FREE BIOACTIVE INGREDIENTS FROM FEVERFEW(TANACETUM PARTHENIUM)AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION”的美国专利申请公布No.2007/0196523列出的详细内容制备(全文以引用方式并入本文)。一种特别合适的小白菊提取物可以约20%活性小白菊从Integrated Botanical Technologies公司(Ossining,NY)商购获得。
本发明的组合物还可包含来自泡桐(Paulownia)属的某些物种的植物提取物。这些提取物及其在皮肤组合物(包括用于增亮人类皮肤的组合物)中的用途公开于美国专利申请20120045490、20120045491和20120045530(全文以引用方式并入本文)中。
许多其他物质也可存在于本发明的组合物中。在某些优选的实施方案中,组合物包含一种或多种选自以下的局部用成分:表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂等。
润肤剂是指帮助维持皮肤的柔软、光滑和柔韧外观的化合物(例如,通过保留在皮肤表面上或角质层中以充当润滑剂)。合适的润肤剂的示例包括在Handbook of CosmeticScience and Technology(由A.Barel,M.Paye和H.Maibach编辑,由Marcel Dekker,Inc(New York,NY)于2001年出版)中的第35章,第399-415页(由G Zocchi的Skin Feel Agent)中所见的润肤剂,并且包括但不限于凡士林、己基癸醇硬脂酸酯以及植物、坚果和植物油,诸如澳洲坚果油、米糠油、葡萄籽油、棕榈油、月见草油、氢化花生油和鳄梨油。
湿润剂是指旨在增加皮肤顶层的水含量的化合物(例如,吸湿化合物)。合适的湿润剂的示例包括在Handbook of Cosmetic Science and Technology(由A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑,由Marcel Dekker,Inc New York,NY于2001年出版)中的第35章,第399-415页(G Zocchi的Skin Feel Agent)中所见的那些,并且包括但不限于甘油、山梨糖醇或海藻糖(例如,α,α-海藻糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖)或它们的盐或酯(例如,海藻糖6-磷酸酯)。
表面活性剂是指旨在进行清洗或乳化的表面活性剂。合适的表面活性剂的例子包括存在于Handbook of Cosmetic Science and Technology(由A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑,2001年由Marcel Dekker,Inc.(New York,NY)出版)中第37章,第431-450页(L.Oldenhove de Guertechin编辑的Classification of surfactants)中的那些,并且包括但不限于阴离子表面活性剂诸如硫酸酯、阳离子表面活性剂诸如甜菜碱、两性表面活性剂诸如椰油酰甘氨酸钠、非离子表面活性剂诸如烷基多苷。
合适的螯合剂的示例包括能够保护和保留本发明组合物的那些。优选地,所述螯合剂是乙二胺四乙酸(“EDTA”),还更优选地是乙二胺四乙酸四钠,其可以商品名“Versene100XL”从Dow Chemical Company(Midland,Michigan)商购获得。
合适的防腐剂包括例如,对羟基苯甲酸酯、季铵类物质、苯氧基乙醇、苯甲酸盐、DMDM乙内酰脲、有机酸,并且基于组合物的总重量,以约0%至约1%,或约0.05%至约0.5%的量存在于组合物中。
多种可商购获得的珠光剂或遮光剂中的任一种适用于组合物。适用的珠光剂或遮光剂的例子包括但不限于(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)乙烯或丙二醇的单酯或二酯;(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)式HO-(JO)a-H的聚亚烷基二醇的单酯或二酯,其中J为具有约2至约3个碳原子的亚烷基基团;并且a为2或3;脂肪醇含有约16至约22个碳原子;式KCOOCH2L的脂肪酯,其中K和L独立地含有约15至约21个碳原子;不溶于洗发剂组合物的无机固体、以及它们的混合物。
适于在皮肤上使用的任何芳香剂组合物均可用于根据本发明的组合物中。
在某些优选的实施方案中,本发明为包含本发明组合物的基材的形式。可使用任何合适的基材。合适的基材和基材材料的示例公开于例如在US7452547和US2009/0241242中,所述专利全文以引用方式并入本文。
在某些优选的实施方案中,基材为擦拭物、手套或面膜。优选地,此类实施方案包含水不溶性基材,此类基材如上文引用的文献中所定义。对于某些实施方案,水不溶性基材可具有一定的尺寸和形状,使得它覆盖人类使用者的面部,从而有利于将水不溶性基材作为贴膜基材围绕使用者的面部放置。例如,水不溶性贴膜基材可具有针对使用者的嘴部、鼻部和/或眼睛的开口。另选地,水不溶性基材可不具此类开口。这种无开口的构造可用于本发明的实施方案,其中水不溶性基材旨在覆盖在皮肤的非面部的大片区域或如果水不溶性基材旨在用作擦拭物。水不溶性基材可具有各种形状,诸如有角形状(例如矩形)或弧形形状诸如圆形或椭圆形。对于某些实施方案,基材是手套,诸如描述于美国已公布的专利申请号2006/0141014的手套,其全文以引用的方式并入本文中。在本发明的一个实施方案中,产品包括多个具有不同形状的水不溶性基材。
可使用将组合物施用于有需要的皮肤的任何合适方法。例如,可通过用手将组合物从包装直接施用于有需要的皮肤而施用于有需要的皮肤,或可从基材诸如擦拭物或贴膜处转移,或它们中的两种或更多种的组合。在其它的实施方案中,组合物可经由点滴器、管、滚筒、喷雾器和贴片来施用,或添加到浴缸中或者以其它方式添加到水中以施用于皮肤等。组合物可以多种方式或形式施用,包括但不限于作为免洗型霜膏、贴膜和/或精华素。
在其它另外的优选的实施方案中,本发明的方法包括将包含粗硬春孔菌的细胞培养物提取物的至少两种不同的组合物或产品施用于皮肤。例如,该方法可包括将包含粗硬春孔菌提取物的第一组合物施用于需要改善皮肤屏障功能并改善皮肤水合和保湿的皮肤,随后将不同于第一组合物的包含粗硬春孔菌的细胞培养物提取物的第二组合物施用于需要处理的皮肤。在某些优选实施方案中,第一组合物和第二组合物可独立地选自洗剂、清洁剂、贴膜、擦拭物、霜膏、精华素、凝胶等。在某些优选的实施方案中,第一组合物和第二组合物中的至少一者为清洁剂、洗剂、霜膏、美容膜、精华液或精华素,而另一种为面膜或擦拭物。在某些其他优选的实施方案中,第一组合物和第二组合物中的至少一者为清洁剂,而另一种为洗剂或霜膏。
培养方法
本发明的另一方面是一种优化真菌的培养的方法。申请人进行了一系列实验来改变培养基、pH值和搅拌,以制备具有出乎意料地改善的亮肤特性的细胞培养物提取物。
如本文所用,“改变培养基”是指改变培养物中使用的成分的类型和量。例如,细胞培养中使用的氨的来源可以是硝酸铵、米糠、麦麸、酵母提取物或它们的混合物。有机氮源诸如牛肉膏、胰蛋白胨、蛋白胨、大豆、麦秆和无机氮源诸如酒石酸铵、硫酸铵、氯化铵或它们的混合物也可用作细胞培养过程中的氨源。培养基中氮源的量可为约0.1g/L至约25g/L、或约0.2g/L至约20g/L、或约5g/L至约20g/L。培养基中碳源的量也可以改变。碳的量可在约2g/L至约20g/L、或约5g/L至约15g/L、或约5g/L至约10g/L的范围内。碳的来源可以选自葡萄糖或右旋糖或它们的混合物。
培养基的pH值可通过添加缓冲体系来改变。一个系统是氢氧化钠和盐酸的组合。可使用本领域已知的其他缓冲体系来改变pH值。
培养培养基的方法可通过改变搅拌来改变。本领域技术人员已知的培养摇动器可用于在培养期间搅拌培养基。振动器可以设定为约100rpm至约200rpm的范围。
改变培养基的另一种方式是添加诱导剂。诱导剂是增强所培养的真菌的黑色素降解酶制备的物质。诱导剂的示例包括合成黑色素、乌贼墨黑色素、藜芦醇、木质素、含有一个或多个苯或等价杂环的有机化合物、苄醇、肉桂酸、愈疮木酚、水杨酸甲酯、苯二酚、苯醌、没食子酸、水杨酸、丁子香酚、咖啡酸、二甲苯酚或它们的混合物。添加培养基组合物中的诱导剂的量可以在约10mg/L至约2000mg/L、或约30mg/L至约1000mg/L、或约200mg/L至约400mg/L、或约245mg/L到约350mg/L的范围内。
虽然前述说明书和附图表示本发明的示例性实施方案,但应当理解,在不脱离本发明的实质和范围的情况下,可对本发明做各种添加、修改和替换。具体地,本领域的技术人员应该清楚的是,不脱离本发明的实质或本质特征,本发明可以以其他具体形式、结构、布置、比例,以及用其他要素、材料和部件来实施。本领域的技术人员应当理解,本发明可与在本发明的实践中使用的结构、布置、比例、材料和部件等的许多修改使用,这些修改尤其能够适用于具体环境和操作要求,而不脱离本发明的原理。因此,当前公开的实施方案在各方面被认为是例示性的而非限制性的,本发明的范围由所附权利要求书指出,且不受前述描述的限制。应当理解在权利要求中,术语“包括/包括的”不排除其他要素或步骤。此外,单数形式的引用不排除复数。术语“一个”、“一种”“第一”、“第二”等不排除复数。