BR112018006170B1 - Método e composição para clareamento de pele usando um extrato de cultura celular de earliella scabrosa e seu uso - Google Patents
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Abstract
método e composição para clareamento de pele usando um extrato de cultura celular de earliella scabrosa. a presente invenção se refere a uma composição e um método para clareamento da pele que inclui a aplicação de uma composição para tratamento de pele incluindo extrato de cultura celular de earliella scabrosa. um método para cultivar earliella scabrosa que inclui usar um indutor, selecionar carboidratos e uma condição de processamento ideal produz propriedades de clareamento de pele aumentadas do extrato de cultura celular.
Description
[001] Este pedido reivindica o benefício do pedido provisório US n° 62/234.232, depositado em 29 de setembro de 2015; pedido provisório US 62/234.239; depositado em 29 de setembro de 2015; e pedido provisório US n° 62/234.247, depositado 29 de setembro de 2015. As descrições completas dos pedidos de patente US supracitados relacionados são por meio desta aqui incorporadas, a título de referência para todos os propósitos.
[002] A presente invenção refere-se a composições de uso tópico para melhorar a aparência da pele que inclui clareamento da pele, com o uso de uma quantidade eficaz de um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa.
[003] A modificação da melanina da superfície da pele é importante porque mais de 50% da melanina está situada nas camadas externas da pele, especialmente após a exposição a UV. A melanina que está sendo produzida por melanócitos é transferida dos melanócitos para os queratinócitos e contribuiu para a cor que é percebida na superfície da pele. Ao se modificar as propriedades ópticas da melanina da superfície da pele, pode-se modificar a aparência da cor da pele, clarear mais rapidamente o tom da pele e igualar variações no tom de pele.
[004] Sabe-se que fungos e bactérias podem atacar e liquefazer carvão de grau inferior ou baixa qualidade (também conhecido como lignita (ou linhita) ou carvão marrom). Esses micro-organismos podem utilizar carvão como seu substrato de crescimento quando eles o usam como sua fonte de carbono, o que leva à degradação do carvão através da secreção de enzimas como peroxidases, metabólitos e quelantes naturais que removem íons metálicos de formação de complexos da estrutura do carvão. Parte da composição do carvão é restos fossilizados de plantas que contêm principalmente lignina, um polímero complexo que compõe a parede celular de plantas que ajuda a dar sua resistência e rigidez à madeira.
[005] A Earliella é um gênero de macrofungos da família Polyporaceae que degradam a madeira. Este é um gênero monotípico, contendo a única espécie Earliella scabrosa. Bastante comum em regiões tropicais e subtropicais, a Earliella scabrosa e cresce em madeira morta de vários angiospermas. Essa espécie é variável em características e abrange, portanto, vários sinônimos (Sheng-Hua Wu, "Cultural Studies of Four Polypores (Basidiomycotina) Collected in Taiwan", Bulletine of National Museum of Natural Science, No. 8, pp. 65 a 72, 1996).
[006] A patente US 8.956.624 revela composições e métodos para tratamento da pele com extrato de Trametes versicolor. A patente US 8.691.194 revela métodos de produção de peroxidase de lignina derivada de Phanerochaete chrysosporium e seu uso para o clareamento da pele e dos cabelos. A patente US 7.291.340 revela um extrato de degradação de melanina derivado de Exophiala monsonii. A patente US 6.514.506 ensina composições branqueadoras que contêm enzimas de Aspergillus fumigatus. A patente US 5.578.296 revela a decomposição da melanina mediante o uso de uma cultura de Basidiomycetes.
[007] Há vários produtos cosméticos disponíveis comercialmente que foram vendidos nos Estados Unidos para corrigir manchas que incluem extratos de fundo ou levedura. Esses produtos incluem Lancome Blanc Expert Melanolyser III™ Integral Whiteness Spot Eraser (da Lancôme), Clinique Derma White Clinical Brightening Essence (da Clinique) e Estee Lauder Cyberwhite EX Advanced Performance Brightening Essence (da Estee Lauder).
[008] A presente invenção se refere à descoberta de uma classe de fungos conhecidos como fungos da podridão-branca, Earliella scabrosa, que podem secretar enzimas melanolíticas. Essas enzimas podem ser incorporadas em composições para o tratamento de pele usadas para clareamento da pele. Adicionalmente, a invenção refere-se a um método para cultivar os fungos para maximizar as propriedades de clareamento de pele da cultura.
[009] Para fornecer uma descrição mais concisa, algumas das expressões quantitativas aqui apresentadas não são qualificadas com o termo "cerca de". Deve-se compreender que quando o termo "cerca de" for usado, explicitamente ou não, toda e qualquer quantidade aqui apresentada destina-se a se referir ao valor real fornecido, destinando- se também a se referir à aproximação desse valor fornecido que seria razoavelmente inferida com base na técnica, incluindo aproximações devido às condições experimentais e/ou de medição para esse valor fornecido.
[010] Para fornecer uma descrição mais concisa, algumas das expressões quantitativas da presente invenção são referidas como uma faixa de aproximadamente uma quantidade X para aproximadamente uma quantidade Y. É entendido que, onde uma faixa é referida, a faixa não se limita aos limites superior e inferior referidos, mas sim inclui a faixa total de cerca da quantidade X até cerca da quantidade Y, ou qualquer quantidade ou faixa dentro disso.
[011] Todas as porcentagens aqui mencionadas, exceto onde especificado em contrário, são porcentagens em peso baseadas no peso total da composição.
[012] A presente invenção refere-se a um método de clareamento da pele pela aplicação à pele humana que precisa de clareamento de uma composição que inclui um veículo cosmeticamente aceitável e uma quantidade eficaz de um extrato de cultura de células de Earliella scabrosa de clareamento da pele. A pele humana precisando de clareamento de pele pode incluir pele escurecida por UV, pele com um tom de pele desigual, pele com uma ou mais manchas pigmentadas, manchas de melanina, manchas da idade, manchas de sol, lentigos senil, sardas, lentigos simples, queratose solar pigmentada, ceratose seborreica, melasma, marcas de acne, e combinações. A composição usada no método pode incluir cerca de 0,0001% a cerca de 40% ou 0,01% a cerca de 25% ou de cerca 0,1% a cerca de 10% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa. A composição usada no método pode estar na forma de uma solução, suspensão, loção, creme, sérum, gel, bastão, aspersão, pomada, loção líquida, sabonete em barra, xampu, condicionador de cabelos, pasta, espuma, talco, musse, creme de barbear, hidrogel, ou produto formador de filme.
[013] A etapa de aplicação da composição à pele pode incluir transferir a composição a partir de um substrato para a pele. O substrato pode ser um lenço ou máscara facial. A composição usada no método pode incluir um agente ativo de clareamento de pele adicional. O método de aplicação da composição à pele pode incluir a aplicação da composição com um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa uma ou duas vezes ao dia. As composições usadas podem ser duas ou mais composições diferentes compreendendo um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa. As duas ou mais composições diferentes podem ser independentemente loções, cremes de limpeza, máscaras, essência, lenços, cremes, séruns e géis.
[014] O extrato de cultura celular usado no presente método pode ter uma atividade de degradação de melanina de cerca de 500 a cerca de 2000 U/mL ou de cerca de 600 a cerca de 1800 U/mL ou de cerca de 1000 a cerca de 1800 U/mL.
[015] Um outro aspecto da presente invenção inclui um método de cultura de Earliella scabrosa em um meio de cultura líquido aquoso, que inclui as etapas de inoculação de um meio de cultura líquido com Earliella scabrosa e mistura do meio de cultura líquido com um indutor em uma quantidade de cerca de 10 g /mL a cerca de 2000 g/mL. O indutor pode incluir melanina sintética, melanina sépia, álcool 3,4 dimetoxibenzílico, lignina, álcool benzílico, ácido cinâmico, guaiacol, salicilato de metila, benzenodiol, benzoquinona, ácido gálico, ácido salicílico, eugenol, ácido cafeico, xilenol e misturas dos mesmos. O indutor pode ser usado em uma quantidade de cerca de 30 mg/mL a cerca de 1000 mg/mL, ou de cerca de 200 mg/mL a cerca de 400 mg/mL ou de cerca de 245 mg/mL a cerca de 350 mg/mL.
[016] O método de cultura pode também incluir a etapa de manutenção do pH do meio de cultura líquido entre cerca 5 a cerca de 6. Adicionalmente, o método de cultura pode incluir a adição de uma fonte de nitrogênio ao meio de cultura líquido. A fonte de nitrogênio pode ser selecionada do grupo que consiste em farelo de arroz, farelo de trigo, nitrato de amônio, extrato de levedura ou misturas dos mesmos. A fonte de nitrogênio é adicionada ao meio de cultura em uma quantidade de cerca de 0,1 g/L a cerca de 25 g/L, ou de cerca de 0,2 g/L a cerca de 20 g/L ou de cerca de 5 g/L a cerca de 20 g/L.
[017] O método de cultura pode também incluir a etapa de agitação do meio de cultura líquido a uma taxa de cerca de 100 rpm com um agitador incubador. O método pode também incluir a adição de uma fonte de carbono ao meio de cultura líquido. A fonte de carbono pode ser glicose, dextrose ou misturas dos mesmos. A quantidade da fonte de carbono adicionada ao meio de cultura líquido é de cerca de a cerca de 2,0 g/L a cerca de 20 g/L ou de cerca de 5,0 g/L a cerca de 15 g/L ou de cerca de 5 g/L a cerca de 10 g/L. O método de cultura pode incluir a etapa de filtração do meio de cultura líquido com uma tela de malha.
[018] Um outro aspecto da invenção é uma composição para tratamento de pele, que inclui um veículo cosmeticamente aceitável e um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa em uma quantidade eficaz para clarear a pele humana. A composição pode incluir de cerca 0,0001% a cerca 40% ou de cerca de 0,01% a cerca 25 ou de cerca 0,1% a cerca 10% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa. A composição para tratamento de pele pode incluir um segundo agente de clareamento da pele.
[019] A Figura 1 é uma fotografia de uma série de placas de ágar de melanina cultivadas com a cepa MY993 de Earliella scabrosa mostrando o efeito de descoloração da melanina.
[020] A Figura 2 é uma fotografia de uma série de placas de ágar de melanina cultivadas com cepas de fungos da podridão-branca que não descoloram melanina.
[021] A Figura 3 é uma fotografia de modelos 3D equivalentes de pele Melanoderm que mostra que o extrato de cultura Earliella scabrosa (MY993) reduziu a pigmentação.
[022] Como usado na presente invenção, "extrato de cultura de células" significa o material produzido a partir de uma cultura celular de um micro-organismo após o processo de cultura de células. O extrato pode ser produzido a partir de um meio líquido que é centrifugado. O sobrenadante é então filtrado. O material que passa através do filtro é o extrato de cultura celular. Isto também é conhecido como um filtrado de cultura celular.
[023] A presente invenção refere-se a um extrato de cultura celular produzido pela cultura de fungos. Mais particularmente, o extrato de cultura celular é produzido a partir de uma cultura de Earliella scabrosa. Ainda mais particularmente, o extrato de cultura celular é produzido a partir de uma cultura de MY993 ou MY261 de Earliella scabrosa. As cepas fúngicas MY993 e MY261 foram encontradas na Tailândia e foram isoladas primeiramente por pesquisadores do National Center for Genetic Engineering and Biotechnology (BIOTEC) em 2006. Consequentemente, ambos os fungos foram identificados como Earliella scabrosa por métodos morfológicos e foram subsequentemente depositados no centro Thailand Bioresource Research Center (TBRC) da Tailândia, Thailand Science Park, Phaholyothin Road, Klong 1, Klongluang, Pathumthani 12120, Tailândia, com a designação do TBRC no. 2014 e 2015, respectivamente. As cepas fúngicas MY993 (TRBC 2014) e MY261 (TBRC 2015) foram depositadas no DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH), Alemanha, de acordo com o tratado de Budapest, em 18 de agosto de 2016 e receberam os números DSM 32358 e DSM 32359, respectivamente.
[024] Os extratos de cultura celular de acordo com a presente invenção têm uma atividade de degradação de melanina de cerca de 500 a cerca de 2000 U/mL, mais particularmente de cerca de 600 a cerca de 1800 U/mL e ainda mais particularmente de cerca de 1000 a cerca de 1750 U/mL. U/mL significa unidade de enzima degradadora de melanina por ml de extrato conforme descrito no ensaio de degradação de melanina detalhado no Exemplo 3.
[025] A presente invenção refere-se a um método de clareamento de pele pela aplicação à pele que precisa de clareamento de uma composição que compreende um extrato de cultura celular de certos fungos. Mais particularmente, a presente invenção refere-se a um método de clareamento de pele pela aplicação à pele que precisa de clareamento de uma composição que inclui um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa.
[026] Conforme usado na presente invenção, o termo "clareamento da pele" refere-se em geral ao clareamento, iluminamento, branqueamento, e/ou equilíbrio do tom da pele, cor da pele, e/ou tonalidade da pele, e/ou para redução do amarelamento, e/ou para clareamento e/ou desaparecimento de marcas hiperpigmentadas e/ou lesões incluindo, mas não se limitando a, manchas pigmentadas, manchas de melanina, sinais da idade, manchas de sol, lentigo senil, sardas, lentigo simples, ceratose pigmentada solar, ceratose seborréica, melasma, marcas de acne, hiperpigmentação pós- inflamatória, lentigem, efélides, combinações de dois ou mais dos mesmos e similares. Em certas modalidades, "clareamento de pele" também refere-se ao aumento da radiância da pele, brilho, translucidez e/ou luminescência e/ou obtenção de uma aparência de tonalidade de pele mais radiante, brilhante, translúcida ou luminosa ou uma tonalidade da pele menos amarelada ou pálida. Em certas modalidades preferenciais, "clareamento da pele" refere-se ao clareamento e equilibro da tonalidade da pele, aumento da radiância da pele e/ou clareamento de sinais de idade.
[027] Como usado na presente invenção, o termo "pele que precisa de tratamento de clareamento de pele" se refere, em geral, à pele que exibe uma ou mais propriedades selecionadas do grupo consistindo em: pele tendo um valor de ângulo de tipologia individual (ITA) medido abaixo 41 conforme determinado pelas diretrizes da Colipa: Guideline For The Colorimetric Determination Of Pele Colour Typing And Prediction Of The Minimal Erythemal Dose (Med) Without Uv Exposure publicada em 2007, que é aqui incorporada, por referência, e descrita adicionalmente a seguir, pele escurecida e/ou amarelada, incluindo escurecida por UV, pele com tom de pele desigual, ou pele com uma ou mais marcas hiperpigmentadas e/ou lesões, incluindo, mas não se limitando a, manchas pigmentadas, manchas de melanina, sinais de idade, manchas de sol, lentigo senil, sardas, lentigo simples, ceratose pigmentada solar, ceratose seborreica, melasma, marcas de acne hiperpigmentação pós-inflamatória, lentigem, efélides, combinações de duas ou mais das mesmas e similares. Nas diretrizes da COLIPA, a cor da pele é função definida do valor de ATI como: pele muito clara >55; Pele clara 41 a 55, intermediário 28 a 41, e pele escura < 28. Em certas modalidades, a frase "pele com necessidade de clareamento de pele" refere-se a indivíduos com uma pele que tem um valor ATI menor que 41, como cerca de 40 ou menor, cerca de 35 ou menor, cerca de 30 ou menor, ou com mais preferência cerca de 28 ou menor. Em certas outras modalidades preferenciais, a presente invenção refere-se a composições e métodos para uso na pele com necessidade de tratamento de clareamento de pele selecionado dentre pele amarelada e/ou escurecida. Em certas outras modalidades, a presente invenção é direcionada a composições e métodos para uso na pele que precisa de tratamento de clareamento de pele selecionada a partir do grupo consistindo em sinais da idade, sardas, marcas de acne, e combinações de dois ou mais dos mesmos. Como usado aqui, "pele necessitada de melhoramento dos sinais de envelhecimento" significa uma pele que é, mas não se limita a, caída, flácida, descuidada, áspera, enrugada, delgada e desigual. O melhoramento dos sinais de envelhecimento significa melhorar a firmeza da pele, melhorar a textura da pele, melhorar a aparência de rugas na pele, melhorar a tonalidade da pele ou o tratamento de agressões externas na pele.
[028] Como usado, "melhorar o tom da pele" significa o clareamento da aparência da pele (por exemplo, clareamento de marcas ou lesões pigmentadas, redução do amarelamento da pele, e/ou uniformização da cor da pele).
[029] Como usado aqui, os termos "cosmeticamente/ dermatologicamente aceitáveis" significa que os ingredientes que o termo descreve são adequados para uso em contato com tecidos (por exemplo, a pele ou o cabelo) sem toxicidade, incompatibilidade, instabilidade, irritação, resposta alérgica indevidas, e similares.
[030] Como usado aqui, uma "quantidade segura e eficaz" significa uma quantidade do extrato ou da composição suficiente para induzir o efeito desejado, mas baixa o suficiente para evitar efeitos colaterais sérios, incluindo citotoxidade e similares. A quantidade segura e eficaz do composto, extrato ou composição variará de acordo com, por exemplo, a idade, saúde e exposição ambiental do usuário final, a duração e a natureza do tratamento, o extrato específico, ingrediente ou composição empregados, o veículo particular utilizado, e fatores similares.
[031] A quantidade segura e eficaz do composto, extrato ou composição variará de acordo com, por exemplo, a idade, saúde e exposição ambiental do usuário final, a duração e a natureza do tratamento, o extrato específico, ingrediente ou composição empregados, o veículo particular utilizado, e fatores similares.
[032] Para modalidades compreendendo usos da composição para clareamento de pele, uma "quantidade eficaz para clareamento de pele" significa uma quantidade de extrato que é eficaz para a obtenção de um valor de ΔL que é maior que zero no modelo de equivalentes epidérmicos para pele como o teste para clareamento de pele (ΔL), conforme descrito abaixo. Em certas modalidades preferenciais, a quantidade eficaz para clareamento de pele é uma quantidade eficaz para a obtenção de um valor de ΔL de cerca de 1 ou mais.
[033] A quantidade do extrato de cultura celular na composição para tratamento de pele usada no método de clareamento de pele irá variar de cerca de 0,001 a cerca 40 por cento em peso da composição para tratamento de pele. Mais particularmente, a quantidade será de cerca 0,01 a cerca 25 por cento em peso da composição para tratamento de pele. Ainda mais particularmente, a quantidade será de cerca 0,1 a cerca 10 por cento em peso da composição para tratamento de pele.
[034] A presente invenção se refere a uma composição para tratamento de pele contendo um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa e um veículo. O extrato de cultura celular de Earliella scabrosa está presente na composição para tratamento de pele em uma quantidade suficiente para clarear a pele. Qualquer veículo aceitável pode ser usado nas composições para tratamento de pele da presente invenção. De preferência, o veículo é um veículo cosmeticamente aceitável. Conforme será reconhecido pelos versados na técnica, os veículos cosmeticamente aceitáveis compreendem veículos que são adequados para uso em contato com o corpo, em particular a pele, para aplicações de clareamento de pele, sem toxicidade, incompatibilidade, instabilidade, irritação, resposta alérgica, e similares. Uma quantidade segura e eficaz de veículo é de cerca de 50% a cerca de 99,999%, de preferência cerca de 80% a cerca de 99,9%, com mais preferência, de cerca de 99,9% a cerca de 95% e, com a máxima preferência, de cerca de 98% a cerca de 99,8% em peso da composição.
[035] O veículo pode estar em uma ampla variedade de formas. Por exemplo, os veículos na forma de emulsões, incluindo, mas não se limitando a, óleo em água, água em óleo, água em óleo em água, e óleo em água em emulsões de silicone, são úteis na presente invenção. Essas emulsões podem cobrir uma ampla gama de viscosidades, por exemplo, de cerca 100 cps a cerca 200.000 cps.
[036] Exemplos de veículos cosmeticamente aceitáveis adequados incluem solventes cosmeticamente aceitáveis e materiais para soluções cosméticas, suspensões, loções, cremes, séruns, essências, géis, loções tônicas, bastões, aspersões, pomadas, loções líquidas e sabonetes em barra, xampus, condicionadores de cabelos, pastas, espumas, musses, talcos, cremes de barbear, lenço, emplastros, faixas, emplastros com pós, emplastros de microagulhas, bandagens, hidrogéis, produtos formadores de filme, máscaras faciais e corporais, maquiagem, gotas líquidas, filmes cosméticos e similares. Esses tipos de produtos podem conter vários tipos de veículos cosmeticamente aceitáveis incluindo, mas não se limitando a, soluções, suspensões, emulsões, como microemulsões e nanoemulsões, géis, sólidos, lipossomas, outras tecnologias de encapsulação e similares.
[037] Os seguintes são exemplos não limitadores de tais veículos. Outros veículos podem ser formulados pelos versados na técnica. Em uma modalidade, o veículo contém água. Em uma outra modalidade, o veículo pode também conter um ou mais solventes aquosos ou orgânicos. Exemplos de solventes orgânicos incluem, mas não se limitam a: dimetil isossorbida; isopropilmiristato; tensoativos de natureza catiônica, aniônica e não iônica; óleos vegetais; óleos minerais; ceras; gomas; agentes gelificantes sintéticos e naturais; alcanois; glicois; e poliois. Exemplos de glicois incluem, mas não se limitam a, glicerina, propilenoglicol, butilenoglicol, pentalenoglicol, hexilenoglicol, polietilenoglicol, polipropilenoglicol, dietilenoglicol, trietilenoglicol, caprilglicol, glicerol, butanodiol e hexanotriol e copolímeros ou misturas dos mesmos. Exemplos de alcanois incluem, mas não se limitam a, aqueles que têm de cerca de 2 átomos de carbono a cerca de 12 átomos de carbono (por exemplo, de cerca de 2 átomos de carbono a cerca de 4 átomos de carbono), como isopropanol e etanol. Exemplos de polióis incluem, mas não se limitam a, aqueles que têm cerca de 2 átomos de carbono a cerca de 15 átomos de carbono (por exemplo, de cerca de 2 átomos de carbono a cerca de 10 átomos de carbono), como propileno glicol. Os solventes orgânicos podem estar presentes no veículo em uma quantidade, com base no peso total do veículo, de cerca de 1 por cento a cerca de 99,99 por cento (por exemplo, de cerca de 20 por cento a cerca de 50 por cento). A água pode estar presente no veículo (antes do uso) em uma quantidade de, com base no peso total do veículo, cerca de 5 por cento a cerca de 95 por cento (por exemplo, de cerca de 50 por cento a cerca de 90 por cento). As soluções podem conter quaisquer quantidades adequadas de solvente, incluindo de cerca de 40 a cerca de 99,99%. Certas soluções preferenciais contém de cerca de 50 a cerca de 99,9%, de cerca de 60 a cerca de 99%, de cerca de 70 a cerca de 99%, de cerca de 80 a cerca de 99%, ou de cerca de 90 a 99% de solvente.
[038] Uma loção pode ser produzida a partir de uma solução. As loções contêm tipicamente ao menos um emoliente além de a um solvente. As loções podem compreender de cerca de 1% a cerca de 20% (por exemplo, de cerca de 5% a cerca de 10%) de emoliente(s) e de cerca de 50% a cerca de 90% (por exemplo, de cerca de 60% a cerca de 80%) de água.
[039] Outro tipo de produto que pode ser formulado a partir de uma solução é um creme. Um creme contém tipicamente de cerca de 5% a cerca de 50% (por exemplo, de cerca de 10% a cerca de 20%) de emoliente(s) e de cerca de 45% a cerca de 85% (por exemplo, de cerca de 50% a cerca de 75%) de água.
[040] Ainda um outro tipo de produto que pode ser formulado a partir de uma solução é uma pomada. Uma pomada pode conter uma base simples de óleos animais, vegetais ou sintéticos ou hidrocarbonetos 10 semi-sólidos. Uma pomada pode conter de cerca de 2% a cerca de 10% de emoliente(s) mais de cerca de 0,1% a cerca de 2% de agente(s) espessante(s).
[041] As composições úteis na presente invenção podem também ser formuladas como emulsões. Se o veículo for uma emulsão, de cerca de 1% a cerca de 10% (por exemplo, de cerca de 2% a cerca de 5%) do veículo contém emulsificante(s). Os emulsificantes podem ser não iônicos, aniônicos ou catiônicos.
[042] As loções e os cremes podem ser formulados como emulsões. Tipicamente, tais loções contêm de 0,5% a cerca de 5% de emulsificante(s), enquanto que tais cremes conteriam, tipicamente, de cerca de 1% a cerca de 20% (por exemplo, de cerca de 5% a cerca de 10%) de emoliente(s); de cerca de 20% a cerca de 80% (por exemplo, de 30% a cerca de 70%) de água; e de cerca de 1% a cerca de 10% (por exemplo, de cerca de 2% a cerca de 5%) de emulsificante(s).
[043] Preparações de emulsões simples para o tratamento da pele, como loções e cremes, do tipo óleo em água e água em óleo, são bem conhecidas na técnica cosmética, e são úteis na presente invenção. As composições de emulsão multifásicas, como do tipo água em óleo em água ou do tipo óleo em água em óleo, também são úteis na presente invenção. Em geral, tais emulsões mono ou multifásicas contêm água, emolientes e emulsificantes como ingredientes essenciais.
[044] As composições desta invenção podem também ser formuladas sob a forma de um gel (por exemplo, um gel aquoso, alcoólico, aquoso-alcoólico ou oleoso usando-se um ou mais agentes gelificantes adequados). Agentes gelificantes adequados para géis aquosos e/ou alcoólicos incluem, mas não se limitam a, gomas naturais, polímeros e copolímeros de ácido acrílico e acrilato, e derivados de celulose (por exemplo, hidroximetilcelulose e hidroxipropilcelulose). Agentes gelificantes adequados para óleos (como óleo mineral) incluem, mas não se limitam a, copolímero de butileno/etileno/estireno hidrogenado e copolímero de etileno/propileno/estireno hidrogenado. Esses géis contêm tipicamente entre cerca de 0,1% e 5%, em peso, de tais agentes gelificantes.
[045] As composições da presente invenção podem também ser formuladas em uma formulação sólida (por exemplo, um bastão à base de cera, uma composição de sabonete em barra, talco ou lenço). A composição da presente invenção pode também ser combinada com um substrato sólido, semissólido, ou dissolúvel (por exemplo, um lenço, máscara, bloco, luva, ou faixa).
[046] As composições da presente invenção podem compreender adicionalmente qualquer de uma variedade de agentes adicionais ativos cosmeticamente. Exemplos de agentes ativos adicionais adequados incluem: agentes de clareamento da pele, agentes de escurecimento, agentes antienvelhecimento adicionais, promotores de tropoelastina, promotores de colágeno, agentes antiacne, agentes controladores de brilho, agentes antimicrobianos, como agentes antileveduras, agentes antifúngicos e antibacterianos, agentes anti-inflamatórios, agentes antiparasitas, analgésicos externos, filtros solares, fotoprotetores, antioxidantes, agentes queratolíticos, detergentes/tensoativos, hidratantes, nutrientes, vitaminas, intensificadores de energia, agentes antiperspirantes, adstringentes, desodorantes, removedores de pelos, agentes estimulantes do crescimento de cabelos, agentes de retardo do crescimento de pelos, agentes firmadores, aceleradores de hidratação, aceleradores de eficácia, agentes anticalosidades, agentes para condicionamento da pele, agentes anticelulite, agentes de controle de odor, como mascaramento de odor, ou agentes modificadores de pH e similares.
[047] Exemplos de vários ativos cosmeticamente aceitáveis adicionais adequados incluem hidróxi-ácidos; peróxido benzoíla; d-pan- tenol; filtros UV como, mas não se limitando a avobenzona (Parsol 1789), bisdisulizol dissódico (Neo Heliopan AP), dietilamino-hidro- xibenzoilbenzoato de hexila (Uvinul A Plus), ecamsule (Mexoryl SX), antranilato de metila, ácido 4-aminobenzoico (PABA), cinoxato, etil- hexiltriazona (Uvinul T 150), homossalato, 4-metilbenzilideno-cânfora (Parsol 5000), metoxicinamato de octila (Octinoxato), salicilato de octila (Octissalato), padimato O (Escalol 507), ácido fenilbenzimidazolsulfônico (Ensulizol), polissilicone-15 (Parsol SLX), salicilato de trolamina, Bemotrizinol (Tinosorb S), benzofenonas 1-12, dioxibenzona, drometrizol-trissiloxano (Mexoryl XL), iscotrizinol (Uvasorb HEB), octocrileno, oxibenzona (Eusolex 4360), sulissobenzona, bisoctrizol (Tinosorb M), dióxido de titânio, óxido de zinco; carotenoides; sequestrantes de radicais livres; captadores de spin ("spin traps"); retinoides e precursores de retinoides como retinol 30, ácido retinoico e palmitato de retinila; ceramidas; ácidos graxos poliinsaturados; ácidos graxos essenciais; enzimas; inibidores de enzimas; mediadores enzimáticos como sal 2,2-azinobis-(3- etilbenzotiazolina-6-sulfonato) de diamônio (ABTS) e vanilina; minerais; hormônios, como estrogênios; esteroides, como hidrocortisona; 2- dimetil amino etanol; sais de cobre, como cloreto de cobre; peptídeos contendo cobre como Cu:Gly-His-Lys, coenzima Q10; aminoácidos, como uma prolina; vitaminas; ácido lactobiônico; acetil-coenzima A; niacina; riboflavina; tiamina; ribose; transportadores de elétrons, como NADH e FADH2; e outros extratos botânicos como aveia, aloe vera, matricária, soja, extratos de cogumelo Shiitake e derivados e misturas dos mesmos.
[048] Em certas modalidades preferenciais, as composições para tratamento de pele compreendem extratos de cultura celular de Earliella scabrosa e ao menos um agente ativo de hidratação da pele adicional. Exemplos de agentes de hidratação da pele adicionais incluem glicerina, propilenoglicol, butilenoglicol, pentalenoglicol, hexilenoglicol, polietilenoglicol, polipropilenoglicol, dietilenoglicol, trietilenoglicol, caprilglicol, glicerol, butanodiol e hexanotriol, ou misturas dos mesmos.
[049] Em certas modalidades preferenciais, as composições da presente invenção são composições para tratamento da pele que compreendem extratos de cultura celular de Earliella scabrosa e ao menos um agente adicional que melhora os sinais de envelhecimento. Exemplos de agentes de melhoramento dos sinais de envelhecimento adicionais adequados incluem, mas não se limitam a, promotores de tropoelastina, promotores de colágeno, retinoides, ácido hialurônico, dimetil amino etanol, N,N,N',N'-tetracis(2-hidróxi propil)etilenodiamina, ácidos alfa hidróxi, poli-hidroxiácidos e combinações de dois ou mais dos mesmos.
[050] "Promotores de tropoelastina", conforme usado na presente invenção, refere-se a uma classe de compostos que possuem a atividade biológica de aumentar a produção de tropoelastina. Os promotores de tropoelastina, de acordo com a presente invenção, incluem todos os compostos sintéticos ou naturais que são capazes de aumentar a produção de tropoelastina no corpo humano.
[051] Exemplos de promotores de tropoelastina adequados incluem, mas não se limitam a, extratos de amora preta, extratos de cotinus, extratos de matricária, extratos de Phyllanthus niruri e complexos bimetálicos que têm constituintes de cobre e/ou zinco. O complexo bimetálico que possui constituintes de cobre e/ou zinco pode ser, por exemplo, citrato de cobre-zinco, oxalato de cobre-zinco, tartarato de cobre-zinco, malato de cobre-zinco, succinato de cobre- zinco, malonato de cobre-zinco, maleato de cobre-zinco, aspartato de cobre-zinco, glutamato de cobre-zinco, glutarato de cobre-zinco, fumarato de cobre-zinco, glucarato de cobre-zinco, ácido poliacrílico de cobre-zinco, adipato de cobre-zinco, pimelato de cobre-zinco, suberato de cobre-zinco, azealato de cobre-zinco, sebacato de cobre-zinco, dodecanoato de cobre-zinco, ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade preferencial, o promotor de tropoelastina é selecionado dentre extratos de amora preta, extratos de cotinus, extratos de matricária e combinações dos mesmos. Em uma modalidade particularmente preferencial, o promotor de tropoelastina é selecionado dentre extratos de amora preta, extratos de matricária e combinações dos mesmos.
[052] O termo "extrato de cotinus," indica um extrato das folhas de "Cotinus coggygria", como um extrato aquoso do mesmo, disponível junto à Bilkokoop, de Sofia, Bulgária.
[053] O termo "extrato de amora preta" indica uma mistura de compostos isolados da planta do gênero Rubus e, de preferência, Rubus fruticosus. Em uma modalidade, os compostos são isolados das flores da planta. Em uma modalidade adicional, os compostos são isolados das flores secas da planta. Tais compostos podem ser isolados de uma ou mais partes da planta (por exemplo, planta inteira, flor, semente, raiz, rizoma, caule, fruto e/ou folha da planta). Em uma modalidade preferencial, o extrato de amora preta é um extrato da folha de amora preta. Um extrato de amora preta particularmente adequado é produzido pela extração das folhas de Rubus fruticosus com uma mistura de água e etanol composta, para uma atividade de cerca de 5% a cerca de 10%, com uma matriz de maltodextrina disponível comercialmente junto à Symrise Inc., de Teterboro, NJ, EUA, e é comercializada sob o nome "SymMatrix".
[054] Extratos de "Phyllanthus niruri" podem ser obtidos e usados como a planta inteira ou, opcionalmente, uma ou mais partes da planta (por exemplo, flor, semente, raiz, rizoma, caule, fruto e/ou folha da planta) pode ser usada. A planta Phyllanthus niruri ou partes da mesma podem ser finamente divididas, como por trituração ou moagem, a um pó. Uma forma moída adequada de Phyllanthus niruri está disponível comercialmente junto à Raintree Nutrition, Inc., de Carson City, Nevada, EUA. De preferência, é usada uma fração de baixo peso molecular de Phyllanthus niruri, por exemplo, uma fração de Phyllanthus niruri substancialmente isenta de espécie molecular, com um peso molecular maior que cerca de 100.000 Dáltons. De preferência, tal fração de baixo peso molecular é água passível de extração da planta Phyllanthus niruri.
[055] As composições da presente invenção podem incluir uma quantidade cosmeticamente eficaz de um ou mais promotores de tropoelastina como os descritos acima. As composições incluem, de preferência, com base nos componentes ativos, de cerca de 0,1% a cerca de 10% de promotores de tropoelastina, com mais preferência, de cerca de 0,5% a cerca de 5% de promotores de tropoelastina e, com a máxima preferência, de cerca de 0,5% a cerca de 2% de promotores de tropoelastina.
[056] "Promotor de colágeno," como usado aqui, se refere a compostos que possuem a atividade biológica de aumentar a produção de colágeno. "Promotores de colágeno não retinoide", de acordo com a presente invenção, incluem todos os compostos sintéticos ou naturais que não são retinoides ou derivados de retinoides e são capazes de acentuar a produção de colágeno no corpo humano.
[057] Exemplos de promotores de colágeno adequados incluem, mas não se limitam aos seguintes: Retinoides, incluindo retinol, retinaldeído e ácido retinoico, extratos de matricária (Tanacetum parthenium), extratos de Centella asiatica e extratos de Siegesbeckia orientalis; extratos de soja; peptídeos promotores de colágeno; ácido ursólico; e asiaticosida.
[058] Centella asiatica, também conhecida como Violette marronne em Reunion Island, Gotu Kola ou Indian pennywort na Índia, Centella repanda na América do Norte e Talapetraka em Madagascar, é uma planta polimorfa e pertence à família das Umbelliferae (Apiaceae), particularmente à subfamília Hydrocotyle. Ela cresce selvagem ao longo dos trópicos e prefere regiões úmidas e sombreadas em altitudes de cerca de 600 a 1.200 metros acima do nível do mar. A Centella asiatica tem três variedades: Typica, Abyssinica e Floridana. A erva é conhecida e usada por suas propriedades curativas, sedativas, analgésicas, antidepressivas, antivirais e antimicrobianas. A atividade biológica da erva parece ser decorrente da presença de moléculas de triterpeno na erva. Um extrato adequado de Centella asiatica está disponível como TECA junto à Bayer Consumer HealthCare, de Basileia, Suíça.
[059] "Extratos de Siegesbeckia orientalis" significa qualquer um dos vários extratos da planta Siegesbeckia orientalis, incluindo Darutosídeo, disponível junto à Sederma (Croda International Group, de Edison, NJ, EUA).
[060] Peptídeos promotores de colágeno adequados incluem os seguintes peptídeos de matricina (isto é, um peptídeo derivado da degradação de proteínas de matriz extracelular como colágeno, elastina ou proteoglicano), incluindo palmitol pentapeptídeos, em particular Pal- Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH disponível como MATRIXYL junto à Sederma (Croda International Group, de Edison, NJ, EUA); peptídeo de cobre GHK, disponível como PROCYTE junto à Photomedex, de Montgomeryville, PA, EUA; peptídeo GHK palmitoil, disponível como Biopoeptide CL, disponível junto à Sederma (Croda International Group, de Edison, NJ, EUA); tetrapeptídeos biomiméticos como aqueles disponíveis como Chronoline Tri Peptide junto à Unipex de Québec, Canadá; e Palmitoil tri-peptídeo disponível como Syn-Coll junto à DSM de Basel, Suíça.
[061] O ácido ursólico também é conhecido como ácido triterpenopentacíclico, Prunol, Malol, Urson, ácido beta-ursólico e ácido 3-beta-hidroxi-urs-12-en-28-oico. O mesmo está disponível comercialmente, por exemplo, junto à Sigma-Aldrich, de St Louis, MO, EUA.
[062] Asiaticosida, também conhecido quimicamente como: [6- [[3,4-di-hidróxi-6-(hidroximetil)--5-(3,4,5-tri-hidróxi-6-metiloxan-2-il)oxio- xan-2-il]oximetil]-3,4,5-tri-hidroxioxan-2-il]10,11-di-hidróxi-9-(hidroxime- til)-1,2,6a,6b,9,12a-hexametil--2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetra- deca-hidro-1H-piceno-4a-carboxilato), está disponível comercialmente, por exemplo, junto à Bayer Santé Familiale Division Serdex, 69, Boulevard Victor Hugo 93400 SAINT-OUEN, França.
[063] As composições da presente invenção podem incluir uma quantidade cosmeticamente eficaz de um ou mais promotores de colágeno. As composições incluem, de preferência, com base nos componentes ativos, de cerca de 0,1% a cerca de 10% dos promotores de colágeno, com mais preferência, de cerca de 0,5% a cerca de 5% de promotores de colágeno e, com a máxima preferência, de cerca de 0,5% a cerca de 2% de promotores de colágeno.
[064] As composições da presente invenção podem compreender adicionalmente ao menos um agente ativo de clareamento de pele. Exemplos de agentes ativos clareadores da pele adequados incluem, mas não se limitam a inibidores de tirosinase, agentes de degradação de melanina, agentes inibidores de transferência de melanossoma, incluindo antagonistas de PAR-2, esfoliantes, filtros solares, retinoides, antioxidantes, ácido tranexâmico, cloridrato de éster cetílico de ácido tranexâmico, agentes alvejantes da pele, ácido linoleico, sal dissódico de monofosfato de adenosina, extrato de camomila, alantoína, opacificantes, talcos e sílicas, sais de zinco, e similares, bem como outros agentes conforme descrito em Solano et al. Pigment Cell Res. 19 (550 a 571) e Ando et al. Int J Mol Sci 11 (2566 a 2575).
[065] Exemplos de inibidores da tirosinase adequados incluem, mas não se limitam a, vitamina C e seus derivados, vitamina E e seus derivados, ácido cójico, arbutina, resorcinóis, hidroquinona, flavonas como, por exemplo, flavonoides de alcaçuz, extrato de raiz de alcaçuz, extrato de raiz de amora, extrato de raiz de Dioscorea composita, extrato de Saxifraga e similares, ácido elágico, salicilatos e derivados, glicosamina e derivados, fulereno, hinokitiol, ácido dioico, acetil glicosamina, 5,5’-dipropil-bifenil-2,2’-diol (Magnolignan), 4-(4- hidroxifenil)-2-butanol (4-HPB), combinações de dois ou mais dos mesmos e similares. Os exemplos de derivados de vitamina C incluem, mas não se limitam a, ácido ascórbico e sais, ácido ascórbico-2- glicosídeo, ascorbil fosfato de sódio, ascorbil fosfato de magnésio e extrato natural enriquecido em vitamina C. Exemplos de derivados de vitamina E incluem, mas não se limitam a, alfa-tocoferol, beta, tocoferol, gama-tocoferol, delta-tocoferol, alfa-tocotrienol, beta- tocotrienol, gama- tocotrienol, delta-tocotrienoler misturas dos mesmos, acetato de tocoferol, fosfato de tocoferol e extratos naturais enriquecidos em derivados de vitamina E. Exemplos de derivados de resorcinol incluem, mas não se limitam a, resorcinol, resorcinóis 4-substituídos como 4- alquil-resorcinóis, tais como 4-butirresorcinol (rucinol), 4-hexilrresorcinol (Synovea HR, Sytheon), feniletil-resorcinol (Symwhite, Symrise), 1-(2,4- di-hidroxifenil)-3-(2,4-dimetóxi-3-metilfenil)-propano (nivitol, Unigen) e similares e extratos naturais enriquecidos com resorcinóis. Exemplos de salicilatos incluem, mas não se limitam a, 4-metóxi salicilato de potássio, ácido salicílico, ácido acetilsalicílico, ácido 4-metóxi salicílico e seus sais. Em certas modalidades preferenciais, os inibidores da tirosinase incluem um resorcinol 4-substituído, um derivado de vitamina C ou um derivado de vitamina E. Em modalidades mais preferenciais, o inibidor de tirosinase compreende feniletil resorcinol, 4-hexil resorcinol ou ascorbil-2-glicosídeo.
[066] Exemplos de agentes degradantes de melanina adequados incluem, mas não se limitam a, peróxidos e enzimas como peroxidases e ligninases. Em certas modalidades preferenciais, os agentes inibidores de melanina incluem um peróxido ou uma ligninase.
[067] Exemplos de agentes inibidores da transferência de melanossoma adequados incluem antagonistas de PAR-2, tais como inibidor de tripsina de soja ou inibidor de Bowman-Birk, vitamina B3 e derivados, como niacinamida, soja essencial, soja integral, extrato de soja. Em determinadas modalidades preferenciais, os agentes inibidores da transferência de melanossoma incluem um extrato de soja ou niacinamida.
[068] Exemplos de esfoliantes incluem, mas não se limitam a alfa- hidroxiácidos, como ácido láctico, ácido glicólico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico ou qualquer combinação de qualquer um dos anteriormente mencionados, beta-hidroxiácidos, como ácido lactobiônico e ácido glucônico, e esfoliação mecânica, como microdermoabrasão. Em certas modalidades preferenciais, os esfoliantes incluem ácido glicólico ou ácido salicílico.
[069] Exemplos de protetores solares incluem, mas não se limitam a, avobenzona (Parsol 1789), bisdisulizol dissódico (Neo Heliopan AP), dietilamino hidróxibenzoil hexil benzoato (Uvinul A Plus), ecamsule (Mexoryl SX), antranilato de metila, ácido 4-aminobenzoico (PABA), cinoxato, etil-hexil triazona (Uvinul T 150), homossalato, 4-metilben- zilideno cânfora (Parsol 5000), octil metóxicinamato (Octinoxato), octil salicilato (Octisalato), padimato O (Escalol 507), ácido sulfônico fenilbenzimidazólico (Ensulizol), polissilicone-15 (Parsol SLX), salicilato de trolamina, Bemotrizinol (Tinosorb S), benzofenonas 1-12, dioxibenzona, drometrizol trisiloxano (Mexoryl XL), iscotrizinol (Uvasorb HEB), octocrileno, oxibenzona (Eusolex 4360), sulisobenzona, bisoctrizol (Tinosorb M), dióxido de titânio, óxido de zinco e similares.
[070] Exemplos de retinoides incluem, mas não se limitam a, retinol (álcool de vitamina A), retinal (aldeído de vitamina A), acetato de retinila, proprionato de retinila, linoleato de retinila, ácido retinoico, palmitato de retinila, isotretinoina, tazaroteno, bexaroteno, adapaleno, combinações de dois ou mais dos mesmos e similares. Em determinadas modalidades preferenciais, o retinoide é selecionado do grupo que consiste em retinol, retinal, acetato de retinila, proprionato de retinila, linoleato de retinila e combinações de dois ou mais dos mesmos. Em certas modalidades preferenciais, o retinoide é o retinol.
[071] Exemplos de antioxidantes incluem, mas não se limitam a, antioxidantes solúveis em água, como compostos de sulfidrila e seus derivados (por exemplo, metabissulfito sódico e N-acetil-cisteína, glutationa), ácido lipoico e ácido diidrolipoico, estilbenoides, como resveratrol e derivados, lactoferrina, quelantes de ferro e cobre e ácido ascórbico e derivados de ácido ascórbico (por exemplo, ascorbil-2- glicosídeo, ascorbil palmitato e ascorbil polipeptídeo). Antioxidantes solúveis em óleo adequados para uso nas composições desta invenção incluem, mas não se limitam a hidroxitolueno butilado, retinoides (por exemplo, retinol e palmitato de retinila), tocoferois (por exemplo, acetato de tocoferol), tocotrienóis e ubiquinonas. Extratos naturais contendo antioxidantes adequados para uso nas composições desta invenção incluem, mas não se limitam a, extratos contendo flavonoides e isoflavonoides e seus derivados (por exemplo, genisteína e diadzeína), extratos contendo resveratrol e similares. Exemplos de tais extratos naturais incluem semente de uva, chá verde, chá preto, chá branco, casca de pinho, matricária, matricária livre de partenolida, extratos de aveia, extrato de amora preta, extrato de cotinus, extrato de soja, extrato de pomelo, extrato de germe de trigo, Hesperedina, extrato de uva, extrato de portulaca, Licocalcona, calcona, 2,2’-diidróxi calcona, extrato de Prímula, própolis e similares.
[072] O agente cosmeticamente ativo aceitável pode estar presente em uma composição em qualquer quantidade adequada, por exemplo, em uma quantidade de cerca de 0,0001% a cerca de 20%, em peso, da composição, por exemplo, cerca de 0,001 a cerca de 10%, como cerca de 0,01% a cerca de 5%. Em determinadas modalidades preferenciais, em uma quantidade de 0,1% a 5% e em outras modalidades preferenciais de 1% a 2%.
[073] As composições da presente invenção podem incluir uma quantidade cosmeticamente eficaz de um ou mais compostos antiinflamatórios. Exemplos de agentes anti-inflamatórios adequados incluem resorcinóis substituídos, (E)-3-(4-metilfenilssulfonil)-2-propeno nitrilo (como "Bay 11-7082", disponível comercialmente junto à Sigma- Aldrich, de St. Louis, Missouri, EUA), tetra-hidrocurcuminoides (como tetra-hidrocurcuminoide CG, disponível junto à Sabinsa Corporation de Piscataway, NJ, EUA), extratos e materiais derivados dos seguintes: Extrato de córtex de Phellodendron amurense (PCE), Soja não Desnaturada (Glycine max), Matricária (Tanacetum parthenium), Gengibre (Zingiber officinale), Ginko (Ginkgo biloba), Madecassosídeo (ingrediente do extrato de Centella asiatica), Cotinus (Cotinus coggygria), extrato de Petasites (Petasites hybridus), Goji (Lycium barbarum), extrato de Cardo Leitoso (Silybum marianum), Madressilva (Lonicera japonica), Bálsamo do Peru (Myroxylon pereirae), Sálvia (Salvia officinalis), extrato de Oxicoco (Vaccinium oxycoccos), óleo de Amaranto (Amaranthus cruentus), Romã (Punica granatum), Erva-Mate (Extrato de Folha de Ilex paraguariensis), extrato da flor de Lírio Branco (Lilium candidum), extrato da folha de Oliveira (Olea europaea), Floretina (extrato de maçã), farinha de Aveia (Aveena sativa), Extrato de Lifenol (lúpulos: Humulus lupulus), Bugrane P (Ononis spinosa), Licochalcona (Alcaçuz: ingrediente do extrato de Glycyrrhiza inflate), Symrelief (extrato de bisabolol e gengibre), combinações de dois ou mais dos mesmos e similares.
[074] Em uma modalidade, o agente anti-inflamatório é um resorcinol. Particularmente, resorcinóis substituídos adequados incluem 4-hexil resorcinol e 4-octil resorcinol, particularmente 4-hexil resorcinol. O 4-hexil resorcinol está disponível comercialmente como "SYNOVEA HR", junto à Sytheon, de Lincoln Park, NJ, EUA. O 4-octil resorcinol está disponível comercialmente junto à City Chemical LLC, de West Haven, Connecticut, EUA.
[075] Por "extratos de matricária," entende-se extratos da planta "Tanacetum parthenium", como pode ser produzido de acordo com os detalhes determinados para o Pedido de Patente US n° 2007/0196523, intitulado "PARTHENOLIDE FREE BIOACTIVE INGREDIENTS FROM FEVERFEW (TANACETUM PARTHENIUM) AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION". (Aqui incorporado por referência em sua totalidade). Um extrato de matricária particularmente adequado está disponível comercialmente como cerca de 20% de matricária ativa, junto à Integrated Botanical Technologies, de Ossining, NY, EUA.
[076] As composições da presente invenção podem também incluir extratos botânicos de certas espécies do gênero Paulownia. Esses extratos e seu uso em composições de pele, incluindo composições para clareamento de pele humana, são revelados nos pedidos de patente US 20120045490, 20120045491 e 20120045530 (incorporado em sua totalidade a título de referência).
[077] Uma variedade de outros materiais pode também estar presente nas composições da presente invenção. Em certas modalidades preferenciais, a composição compreende um ou mais ingredientes tópicos selecionados do grupo que consiste em tensoativos, agentes quelantes, emolientes, umectantes, condicionadores, conservantes, opacificantes, fragrâncias e similares.
[078] Entende-se por um emoliente um composto que ajuda a manter a aparência macia, lisa e maleável da pele (por exemplo, permanecendo sobre a superfície da pele ou no camada córnea para agir como um lubrificante). Exemplos de emolientes adequados incluem aqueles encontrados no Capítulo 35, páginas 399 a 415 (Skin Feel Agents, de G Zocchi), do Handbook of Cosmetic Science and Technology (editado por A. Barel, M. Paye e H. Maibach, publicado em 2001 por Marcel Dekker, Inc Nova York, NY, EUA) e incluem, mas não se limitam a, petrolato, estearato de hexildecila e planta, noz e óleos vegetais, como óleo de noz de macadâmia, óleo de farelo de arroz, óleo de semente de uva, óleo de babaçu, óleo de prímula, óleo de amendoim hidrogenado e óleo de abacate.
[079] Entende-se por umectante um composto destinado a aumentar o conteúdo de água nas camadas superiores da pele (por exemplo, compostos higroscópicos). Exemplos de umectantes adequados incluem aqueles encontrados no capítulo 35, páginas 399 a 415 (Skin Feel Agents, de G Zocchi), do Handbook of Cosmetic Science and Technology (editado por A. Barel, M. Paye e H. Maibach, publicado em 2001 por Marcel Dekker, Inc Nova York, NY, EUA) e incluem, mas não se limitam a, glicerina, sorbitol ou trealose (por exemplo, α,α- trealose, β,β-trealose, α,β-trealose) ou um sal ou éster dos mesmos (por exemplo, trealose 6-fosfato).
[080] Entende-se por um tensoativo um agente ativo de superfície destinado a limpar ou emulsificar. Exemplos de tensoativos adequados incluem aqueles encontrados no capítulo 37, páginas 431 a 450 (Classification of surfactants, de L. Oldenhove de Guertechin), no Handbook of Cosmetic Science and Technology (editado por A. Barel, M. Paye e H. Maibach, publicado em 2001 por Marcel Dekker, Inc. Nova York, NY, EUA) e incluem, mas não se limitam a, tensoativos aniônicos, como sulfatos, tensoativos catiônicos, como betaínas, tensoativos anfotéricos, como cocoil glicinato de sódio, tensoativos não iônicos como aquil poliglicosídeos.
[081] Exemplos de agentes quelantes adequados incluem aqueles que são capazes de proteger e conservar as composições desta invenção. De preferência, o agente quelante é o ácido etilenodiaminotetracético ("EDTA") e, com mais preferência, é o EDTA tetrassódico, disponível comercialmente junto à Dow Chemical Company, de Midland, Michigan, EUA, sob o nome comercial, "Versene 100XL".
[082] Conservantes adequados incluem, por exemplo, parabenos, espécies de amônio quaternário, fenoxietanol, benzoatos, hidantoína DMDM, ácidos orgânicos e estão presentes na composição em uma quantidade, com base no peso total da composição, de cerca de 0 a cerca de 1% ou de cerca de 0,05% a cerca de 0,5 %.
[083] Qualquer um dentre uma variedade de agentes perolizantes ou opacificantes disponíveis comercialmente são adequados ao uso na composição. Exemplos de agentes perolizantes ou opacificantes adequados incluem, mas não se limitam a, mono ou diésteres de (a) ácidos graxos, com de cerca de 16 a cerca de 22 átomos de carbono, e (b) etileno ou propileno glicol; mono ou diésteres de (a) ácidos graxos, com de cerca de 16 a cerca de 22 átomos de carbono e (b) um polialquileno glicol com a seguinte fórmula: HO-(JO)a-H, em que J é um grupo alquileno tendo de cerca de 2 a cerca de 3 átomos de carbono; e a é 2 ou 3; alcoóis graxos contendo cerca de 16 a cerca de 22 átomos de carbono; ésteres graxos com a seguinte fórmula: KCOOCH2L, sendo que K e L contêm independentemente de cerca de 15 a cerca de 21 átomos de carbono; sólidos inorgânicos insolúveis na composição de xampu e misturas dos mesmos.
[084] Quaisquer composições de fragrância adequadas para uso na pele podem ser usadas de acordo com a presente invenção.
[085] Em certas modalidades preferenciais, a presente invenção está na forma de um substrato que compreende uma composição da presente invenção. Qualquer substrato adequado pode ser usado. Exemplos de substratos adequados e materiais de substrato são revelados, por exemplo, nas US7452547 e US2009/0241242, os quais estão aqui incorporados a título de referência em sua totalidade.
[086] Em determinadas modalidades preferenciais, o substrato é um lenço, luva ou uma máscara facial. De preferência, tais modalidades compreendem um substrato insolúvel em água, como é definido nas referências citadas acima. Para certas modalidades, o substrato insolúvel em água pode ter um tamanho e formato de modo que cubra a face de um usuário humano para facilitar a aplicação do substrato insolúvel em água sobre a face do usuário, como por exemplo, um substrato de máscara. Por exemplo, o substrato de máscara insolúvel em água pode ter aberturas para a boca, nariz e/ou olhos do usuário. Alternativamente, o substrato insolúvel em água pode não ter essa abertura. Essa configuração sem aberturas pode ser útil para modalidades da invenção em que o objetivo do substrato insolúvel em água é cobrir uma extensão não facial de pele ou se o objetivo do substrato insolúvel em água for ser usado como um lenço. O substrato insolúvel em água pode ter vários formatos, como um formato angular (por exemplo, retangular) ou um formato arqueado como circular ou oval. Para determinadas modalidades, o substrato é uma luva, como descrito no pedido de patente US n° 2006/0141014, que está incorporado na presente invenção em sua totalidade. Em uma modalidade da invenção, o produto inclui uma pluralidade de substratos insolúveis em água de diferentes formatos.
[087] Qualquer método adequado de aplicação da composição à pele necessitada pode ser usado. Por exemplo, a composição pode ser aplicada diretamente de uma embalagem à pele que necessita de tratamento, levando as mãos à pele que necessita de tratamento, ou pode ser transferida de um substrato, como um lenço ou máscara ou uma combinação de dois ou mais dos mesmos. Em outras modalidades, a composição pode ser aplicada através de um conta-gotas, tubo, cilindro, borrifador e emplastro ou adicionada ao banho ou água a ser aplicada à pele de outro modo e similares. A composição pode ser aplicada de diversas maneiras ou formas, incluindo, mas não se limitando a, como um creme sem enxágue sobre a superfície de aplicação, máscara e/ou sérum.
[088] Em outras modalidades adicionais, os métodos da presente invenção compreendem a aplicação de ao menos duas composições ou produtos diferentes que compreendem os extratos de cultura celular de Earliella scabrosa à pele. Por exemplo, os métodos podem compreender a aplicação de uma primeira composição compreendendo os extratos de Earliella scabrosa à pele que necessita de melhora da função de barreira da pele e melhora da hidratação e umedecimento da pele, seguido de aplicação de uma segunda composição compreendendo os extratos de cultura celular de Earliella scabrosa que é diferente da primeira composição, à pele que necessita de tratamento. Em certas modalidades preferenciais, a primeira e a segunda composições podem ser selecionadas independentemente a partir do grupo que consiste em loções, cremes de limpeza, máscaras, lenços, cremes, séruns, géis e similares. Em certas modalidades preferenciais, pelo menos uma dentre a primeira e a segunda composições é um agente de limpeza, loção, creme, essência ou séruns, e a outra é uma máscara facial ou lenço. Em certas outras modalidades preferenciais, pelo menos uma dentre a primeira e a segunda composições é um agente de limpeza e a outra é uma loção ou creme.
[089] Um outro aspecto da presente invenção é um método para otimizar a cultura dos fungos. Os requerentes realizaram uma série de experimentos para modificar o meio de cultura, o pH e a agitação para produzir um extrato de cultura celular com propriedades de clareamento de pele inesperadamente otimizadas.
[090] Como usado aqui " modificar o meio de cultura ' significa alterar o tipo e quantidades dos ingredientes usados na cultura. Por exemplo, a fonte de amônia usada na cultura celular pode ser nitrato de amônio, farelo de arroz, farelo de trigo, extrato de levedura ou misturas dos mesmos. Fontes de nitrogênio orgânicas como extrato de carne bovina, triptona, peptona, soytona, palha de trigo e fonte de nitrogênio inorgânico como tartarato de amônio, sulfato de amônio, cloreto de amônio ou misturas dos mesmos também podem ser usadas como fontes de amônia no processo de cultura celular. A quantidade de fonte de nitrogênio no meio de cultura pode ser de cerca de 0,1 g/L a cerca de 25 g/L, ou de cerca de 0,2 g/L a cerca de 20 g/L ou de cerca de 5 g/L a cerca de 20 g/L. A quantidade de fonte de carbono no meio também pode ser modificada. A quantidade de carbono pode estar na faixa de cerca de 2 a cerca de 20 g/L ou de cerca de 5 a cerca de 15 g/L ou de cerca de 5 a cerca de 10 g/L. A fonte de carbono pode ser selecionada do grupo que consiste em glicose ou dextrose ou misturas das mesmas.
[091] O pH do meio de cultura pode ser modificado pela adição de um sistema de tamponagem. Um sistema é uma combinação de hidróxido de sódio e ácido clorídrico. Outros sistemas de tamponagem conhecidos na técnica podem ser usados para modificar o PH.
[092] O método de cultura do meio pode ser modificado mediante a alteração da agitação. Um agitador de incubadora conhecido pelos versados na técnica pode ser usado para agitar os meios durante a cultura. O agitador pode ser ajustado em cerca de uma faixa de cerca 100 a cerca 200 rpm.
[093] Uma forma adicional para modificar o meio de cultura é a adição de um indutor. Um indutor é uma substância que aumenta a produção de enzima de degradação de melanina do fungo sendo cultivado. Exemplos de indutores incluem melanina sintética, melanina de sépia, álcool veratrílico, lignina, compostos orgânicos que contêm um ou mais anéis heterocíclicos equivalentes, álcool benzílico, ácido cinâmico, guaiacol, salicilato de metila, benzenodiol, benzoquinona, ácido gálico, ácido salicílico, eugenol, ácido cafeico, xilenol.
[094] ou misturas dos mesmos. A quantidade de indutor adicionada à composição de meio pode estar na faixa de cerca de 10 mg/L a cerca de 2000 mg/L ou de cerca de 30 mg/L a cerca de 1000 mg/L ou de cerca de 200 mg/L a cerca de 400 mg/L ou de cerca de 245 mg/L a cerca de 350 mg/L.
[095] Embora a descrição e os desenhos anteriormente mencionados representem modalidades exemplificadoras da presente invenção, será entendido que várias adições, modificações e substituições podem ser feitas sem que se desvie do espírito e escopo da presente invenção. Em particular, ficará aparente aos versados na técnica que a presente invenção pode ser executada em outras formas, estruturas, disposições, proporções, e com outros elementos, materiais e componentes, sem desviar-se do espírito ou características essenciais da mesma. O versado na técnica entenderá que a invenção pode ser usada com muitas modificações de estrutura, disposição, proporções, materiais e componentes ou de outro modo, usados na prática da invenção, que são particularmente adaptados a ambientes específicos e requisitos operacionais, sem desviar-se dos princípios da presente invenção. As modalidades aqui descritas devem, portanto, ser consideradas em todos os respeitos como ilustrativas e não como restritivas, o escopo da presente invenção sendo indicado pelas reivindicações anexas, e não limitado pela descrição anterior. Será entendido que nas reivindicações, o termo "compreende/que compreende" não exclui a presença de outros elementos ou etapas. Além disso, referências no singular não excluem uma pluralidade. Os termos "um", "uma", "primeiro", "segundo", etc., não impedem uma pluralidade.
[096] A cultura estoque de Earliella scabrosa foi cultivada e mantida em meio Batata Dextrose Ágar (BDA), pH 6,0. Partindo da cultura estoque, pequenos blocos de ágar contendo micélio fúngico foram cortados com o uso de um perfurador de cortiça com um diâmetro de 0,7 cm, que foram então subcultivados em ágar sólido para estudos subsequentes. Todas as placas de cultura foram incubadas por 3 a 5 dias a 30°C até que o crescimento fúngico ser observado. Para a subcultura em caldo de meio líquido, o ágar da cultura estoque contendo micélio fúngico foi primeiro cortada em cubos de 1,5 cm x 3,0 cm então adicionalmente cortadas em pedaços menores antes de inoculadas em 50 ml de caldo de meio líquido e incubadas por 7 a 9 dias a 30°C. O filtrado de cultura de Earliella scabrosa foi obtido a partir de caldo de meio cultivado para estudos subsequentes descritos nos exemplos abaixo.
[097] A cepa MY993 de Earliella scabrosa foi cultivada em uma placa de ágar de melanina e incubada por 9 dias. A composição de ágar de melanina usada é mostrada na Tabela 1. Tabela 1
[098] O meio de ágar de melanina foi preparado a partir da composição mostrada na Tabela 1. Todos os ingredientes foram adicionados a 1 L de água e autoclavados a 121°C por 15 minutos. Após a autoclave, o meio de ágar foi dispensado em placas de petri (20 ml por placa) e deixado para solidificar.
[099] Partindo da cultura estoque de fungos, pequenos blocos de ágar contendo micélio fúngico foram cortados com o uso de um perfurador de cortiça com um diâmetro de 0,7 cm, que foram então subcultivados colocando-se o bloco fúngico no centro de uma placa de ágar fresca e incubados por 9 dias a 30°C.
[0100] Foi observado que a cepa de número MY993 (Earliella scabrosa) descolora a melanina em ágar durante os nove dias durante os quais alguma descoloração é mostrada no dia 5 e aumento da descoloração nos dias 7 e 9. A Figura 1 mostra fotografias das placas de ágar nos dias 3, 5, 7 e 9.
[0101] Em contrapartida, outras cepas de fungos de podridão- branca como Ganoderma sp. (TDR 0003), Lentinus sp. (TDR 0008) e Amauroderma sp. (TRD 0023) foram cultivadas no mesmo meio e não mostraram sinais de qualquer descolorização da melanina durante 9 dias. A Figura 2 mostra as placas de ágar para os controles nos dias 3, 5, 7 e 9.
[0102] Earliella scabrosa foi cultivada em um caldo de meio liquid com o uso de um litro de água com a composição mostrada na Tabela 2. Tabela 2
[0103] Partindo da cultura estoque de Earliella scabrosa, pequenos blocos de ágar contendo o micélio fúngico foram primeiro cortados em seções de 1,5 cm x 3,0 cm e então adicionalmente cortados em pedaços menores antes de serem inoculados em 50 ml de caldo de meio e incubados por 9 dias a 30°C com o uso de um agitador incubador com velocidade de agitação de 100 rpm. Após a centrifugação, o sobrenadante foi então filtrado através de um filtro 0,22 μm antes do teste em um ensaio de atividade de degradação de melanina. O filtrado de cultura de Earliella scabrosa foi coletado nos dias 3, 5, 7 e 9 por centrifugação a 12.396 g por 5 minutos.
[0104] O ensaio de degradação de melanina foi conduzido em uma placa de 96 poços onde cada mistura de reação (volume total 250 μL) compreendia 90 μL de melanina sintética (250 mg/L, pH 6,0), 110 μL de água destilada e 50 μL de filtrado de cultura de Earliella scabrosa. A mistura de reação foi então incubada a 37°C por 1 hora e a absorbância medida a 540 nm com um espectrofotômetro. Uma unidade de atividade de enzima de degradação de melanina (U/mL) foi definida como a quantidade de enzima que diminui a absorbância a 540 nm em 0,001 durante 1 hora a 37°C.
[0105] As cepas selecionadas de E. scabrosa exibiram altas atividades de degradação de melanina no filtrado de cultura de 3, 5, 7 e 9 dias e a atividade atingiu o pico no dia 7 conforme mostrado na Tabela 3. Tabela 3
[0106] Os fungos de podridão-branca são conhecidos por secretarem a enzima lacase. A atividade da lacase de cepas selecionadas de E. scabrosa foi medida. A atividade da lacase foi medida usando-se o ensaio ABTS (ácido 2,2-zino-bis-(3- etilbenzotiazolina-6-sulfônico) (ABTS) e calculada usando a seguinte equação:
[0107] Atividade = (ΔE x DF x Vt) / (Δt x Vs x d x ε420)
[0108] O pH de 50 μL do filtrado de cultura de E. scabrosa (Vs) foi ajustado para 5,5 com 150 μL de 80 mM de tampão de ácido acético e acetato de sódio, pH 5,5. Todas as amostras foram diluídas até uma diluição adequada (fator de diluição = DF). Após a adição de 50 μL de 5 mM de solução ABTS, a alteração da absorbância (ΔE) foi medida durante 5 minutos (Δt) a 420 nm e 37°C. A atividade da lacase foi calculada usando-se um coeficiente de extinção de ε420 = 0.04321 L μmol-1 cm-1, uma altura de camada d = 0.63 cm e um volume líquido total de Vt = 250 μL. O ensaio foi realizado em espectrofotômetro. A atividade enzimática da lacase (U) é definida como a quantidade de enzima que catalisa a oxidação de 1 μmol de ABTS por minuto a 37°C e pH 5,5.
[0109] Conforme mostrado na Tabela 4, verificou-se que a atividade da lacase não se correlaciona com atividade de degradação de melanina. Isso sugere que a lacase não é a principal fator para a atividade de degradação de melanina de Earliella scabrosa. Tabela 4
[0110] Culturas celulares de dois tamanhos foram comparadas para examinar o efeito da alteração de vários dos componentes da cultura. A Tabela 5 mostra os componentes de duas culturas de caldo líquido de 1 litro, antes e depois da otimização. Então dois segmentos separados, antes e depois, foram feitos para testar a atividade de degradação de melanina das composições de caldo antes e depois. O Exemplo 5 é uma cultura de células de 50 ml e o Exemplo 5A é para cinco litros de cultura celular. Ambos os Exemplos 5 e 5A usaram os mesmos ingredientes nas mesmas proporções para ambos antes e após a otimização. A fórmula otimizada incluiu a remoção de extrato de levedura, adição de farelo de trigo e álcool veratrílico e aumento do pH para 6 e ajuste da taxa de aeração para fermentação de 0,6 vvm para 1,0 vvm. Cada cultura foi usada para o crescimento de MY993 de E. scabrosa. Após a centrifugação, o sobrenadante foi então filtrado através de um filtro 0,22 μm antes do teste no ensaio de atividade de degradação de melanina usado no Exemplo 3.
[0111] Foi mostrado que a atividade de degradação da melanina do extrato de E. scabrosa aumenta em 23% após a otimização de condições de crescimento em escala de laboratório de 50 ml e em 778% após uma batelada de meio otimizado de 5 litros conforme mostrado na Tabela 6. Tabela 5 Tabela 6
[0112] O meio de caldo líquido foi modificado mediante adição de um indutor. Um indutor é adicionado a um meio de caldo de um promotor de alta titulação para melhorar a produção de enzima de degradação de melanina E. scabrosa.
[0114] Caldos separados foram feitos com o uso da fórmula na Tabela 7 com o uso de um litro de água e os indutores foram adicionados conforme mostrado na Tabela 8. Tabela 8
[0115] MY993 de E. scabrosa foi cultivada em meio suplementado com os diferentes indutores nas várias concentrações mostradas na Tabela 8 e incubados a 30°C com uma velocidade de agitação de 100 rpm com o uso de um agitador incubador.
[0116] Partindo da cultura estoque de MY993 de Earliella scabrosa, pequenos blocos de ágar contendo o micélio fúngico foram primeiro cortados em pedaços menores de 1,5 cm x 3,0 cm e então adicionalmente cortados em pedaços menores antes de serem inoculados em 50 ml de caldo de meio suplementado com os diferentes indutores nas várias concentrações mostradas na tabela e incubados por 9 dias a 30°C com o uso de um agitador incubador com velocidade de agitação de 100 rpm. O filtrado da cultura de E. scabrosa foi coletado nos dias 1, 3, 5 e 7 por centrifugação a 12.396 g, 5 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi então filtrado através de filtro de 0,22 μm antes do teste no ensaio de atividade de degradação de melanina usado no Exemplo 3.
[0117] Os resultados estão resumidos na Tabela 9. Foi mostrado que 245 mg/L de álcool veratrílico é o melhor indutor para melhorar a produção de enzima degradadora de melanina em extrato de MY993 de E. scabrosa no filtrado da cultura no dia 7.
[0118] Tabela 9 Atividade de degradação de melanina de MY993 de E. scabrosa, filtrados de cultura de 1, 3, 5 e 7 dias. Tabela 9
[0119] Culturas de caldo líquido de um litro foram feitas para testar o efeito da fonte de nitrogênio e pH na atividade de degradação de melanina do extrato de cultura celular. O caldo usado está mostrado na Tabela 10. Tabela 10
[0121] MY993 de E. scabrosa foi cultivada em meio separado suplementado com as fontes de nitrogênio e em diferentes pH de 4 a 7 e incubados a 30°C com velocidade de agitação de 100 rpm com um agitador de incubação. Filtrado de cultura de MY9993 de E. scabrosa de diferentes condições foi colhido nos dias 1, 3, 5 e 7. O filtrado da cultura foi então filtrado através de filtro de 0,22 μm antes do teste no ensaio de atividade de degradação de melanina que é descrito no Exemplo 3.
[0122] Foi mostrado que o farelo de arroz e o farelo de trigo são melhores intensificadores do que o nitrato de amônio. O farelo de trigo sendo um melhor candidato para substituir o extrato de levedura (Tabela 12) para melhorar a produção de enzima de degradação de melanina. As culturas com o uso de farelo de arroz e farelo de trigo foram feitas em pH de 4, 5, 5,5, 6 e 7. O ajuste de pH foi feito com o uso de hidróxido de sódio e ácido clorídrico. Os resultados são mostrados na Tabela 13. No dia 7, o farelo de arroz e o farelo de trigo produziram, ambos, elevada atividade de degradação de melanina em um pH de 5 a 6.
[0123] Tabela 12 Atividade de degradação de melanina de MY993 de E. scabrosa MY993, filtrados de cultura dos dias 1, 3, 5 e 7 colhidos a partir de meios suplementados (pH 5,5) com diferentes fontes de nitrogênio. Tabela 12
[0124] Tabela 13 Atividade de degradação de melanina de MY993 de E. scabrosa MY993, filtrados de cultura dos dias 1, 3, 5 e 7 colhidos a partir de meios suplementados com farelo de arroz e farelo de trigo em diferentes pH.
[0125] MY993 de E. scabrosa foi cultivada em meio suplementado com farelo de trigo em pH 6,0 e incubada a 30°C com velocidade de agitação de 100 rpm, 200 rpm com um agitador incubador e condição estática.
[0126] Os filtrados de cultura de MY993 de E. scabrosa de diferentes condições foram colhidos nos dias 1, 3, 5 e 7. O filtrado cultivado foi então filtrado através de um filtro de 0,22 μm antes do teste no ensaio de atividade de degradação de melanina que é descrito no Exemplo 2 acima.
[0127] Foi observado que a velocidade de agitação de 100 rpm é a condição ótima para aumentar a produção de enzima de degradação de melanina de E. scabrosa (Tabela 14).
[0128] Tabela 14 Atividade de degradação de melanina de MY993 de E. scabrosa, filtrados de cultura dos dias 1, 3, 5 e 7 colhidos a partir de diferentes condições de agitação. Tabela 14
[0129] MY993 de E. scabrosa foi cultivada em meio suplementado com diferentes concentrações de farelo de trigo de 0,2, 1, 2, 5, 10 e 20 g/L e diferentes de concentrações de glicose de 2,5, 5 e 10 g/L. As culturas foram incubadas a 30°C com velocidade de agitação de 100 rpm com um agitador incubador. Os filtrados de cultura de E. scabrosa de diferentes condições foram colhidos nos dias 1, 3, 5 e 7. O filtrado de cultura foi então filtrado através de um filtro 0,22 μm antes do teste no ensaio de atividade de degradação de melanina descrito acima.
[0130] Foi mostrado que 10 g/L de glicose é a condição ótima para aumentar a produção da enzima de degradação de melanina a partir de MY993 de E. scabrosa (Tabela 15).
[0131] Foi mostrado que 20 g/L de farelo de trigo é a condição ótima para aumentar a produção da enzima de degradação de melanina a partir de MY993 de E. scabrosa MY993 (Tabela 15). Na concentração de 20 g/L, as culturas tendem a ter um crescimento excessivo, dessa forma não sendo adequadas para serem usadas em fermentação com aumento de escala, em vez disso 10 g/L de farelo de trigo foi escolhido como a concentração final para produção de grande escala (5L).
[0132] Tabela 15: Atividade de degradação de melanina de MY993 de E. scabrosa, filtrados de cultura dos dias 1, 3, 5 e 7 colhidos a partir de meios suplementados com diferentes concentrações de glicose. Tabela 15
[0133] Tabela 16 Melanina atividade de degradação de E. scabrosa MY993 dia 1, 3, 5 e 7 de cultura filtrado coletado a partir de meios suplementados com diferentes concentrações de farelo de trigo. Tabela 16
[0134] Tecidos epidérmicos equivalentes pigmentados disponíveis comercialmente ou modelo Melanoderm™ da MatTek Corp foram usados para os testes a seguir. O modelo Melanoderm™ consiste em queratinócitos epidérmicos normais derivados de seres humanos (NHEK) e melanócitos epidérmicos derivados de seres humanos (NHM) que foram cultivados para formar um modelo multicamadas, altamente diferenciado da epiderme humana. Especificamente, os tecidos MEL- 300-B, cada um com 9 mm de diâmetro foram usados nos seguintes testes. Filtrados de cultura de E. scabrosa foram aplicados topicamente ao modelo Melanoderm™ diariamente e o experimento durou 8 dias. Uma medição foi tomada no dia 9. O pontos finais de escurecimento de tecido macroscópicos e microscópicos foram medidos por fotografias com uma câmera digital. O Grau de Luminosidade da cada tecido (Valor L) foi medido com o uso de um espectrofotômetro (Konica Minolta CM- 2600d). O ΔL (grau de luminosidade em comparação ao controle) para cada amostra de teste foi calculado com o uso da seguinte fórmula: ΔL = valor L de amostra tratada - valor L de amostra de controle.
[0135] Quatro amostras foram testadas - não tratadas (o modelo de pele sem nenhuma adição), meio em branco (um meio de cultura celular com nenhum fungo), MY993 (1x - não diluído) e MY993 (0,5x - diluído a 50% com meio de cultura celular). Os resultados são mostrados na Tabela 17 e as fotografias das placas de ágar dos meios e meio e do modelo Melancoderm são mostradas na Figura 3. Tanto o ΔL quanto o modelo Meloderm mostram que os extratos de acordo com a presente invenção reduziram a pigmentação. Portanto, estima-se que os extratos de cultura celular de E. scabrosa fornecem benefícios de clareamento de pele quando aplicados à pele. Tabela 17
[0136] Uma composição de acordo com a invenção é preparada pela mistura dos ingredientes da Tabela 18. Tabela 18
[0137] A composição mostrada na Tabela 18 é preparada conforme se segue: água é adicionada a um vaso de processamento. A misturação começa e hidroxietilcelulose é adicionada e a misturação prossegue até a dissolução de hidroxietilcelulose. Calor é aplicado e a misturação prossegue até se atingir a temperatura de 85°C. Glicerina é adicionada enquanto se continua a misturar, mantendo-se a temperatura a 85°C. GENAMIN BTLF e Tego Amid S18 são adicionados, e então Brij 721 e Lanette C18 98-100 MY, Savonol 82, e Dow Corning AP 8087. A composição é misturada a 85°C por outros 10 a 15 minutos. A composição é então removida do calo sob misturação contínua e resfriada para 40°C.
Claims (16)
1. Método de clareamento da pele, caracterizado pelo fato de que compreende aplicar à pele humana que precisa de clareamento uma composição que inclui um veículo cosmeticamente aceitável e uma quantidade eficaz de um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa para clareamento da pele.
2. Método de clareamento da pele, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita pele humana que precisa de clareamento a pele é selecionada do grupo que consiste em pele escurecida por UV, pele com um tom de pele desigual, pele tendo uma ou mais manchas pigmentadas, manchas de melanina, manchas da idade, manchas de sol, lentigos senil, sardas, lentigos simples, ceratose solar pigmentada, ceratose seborreica, melasma, marcas de acne, e combinações de duas ou mais das mesmas; preferivelmente em que a dita pele humana que precisa de tratamento de clareamento de pele é selecionada do grupo que consiste em pele tendo uma ou mais manchas pigmentadas, manchas de melanina, manchas de idade, manchas solares, sardas, marcas de acne, e combinações de duas ou mais das mesmas.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita composição compreende de 0,0001% a 40% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa; preferivelmente em que a dita composição compreende de 0,01% a 25% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa; ainda mais preferivelmente em que a dita composição compreende de 0,1% a 10% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita composição está na forma de uma solução, suspensão, loção, creme, soro, gel, bastão, aspersão, pomada, loção líquida, sabonete em barra, xampu, condicionador de cabelos, pasta, espuma, talco, musse, creme de barbear, hidrogel, ou produto formador de filme.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de aplicação compreende a transferência da dita composição a partir de um substrato para a pele.
6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o dito substrato compreende um lenço ou máscara facial.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de aplicação compreende aplicar uma composição que compreende um extrato celular de Earliella scabrosa e um agente ativo de clareamento de pele adicional à pele.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de aplicação compreende transferir a dita composição a partir de um substrato à pele.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o dito substrato compreende um lenço ou máscara facial.
10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de aplicar à pele que precisa de clareamento de pele uma composição que compreende um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa uma ou duas vezes ao dia.
11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender aplicar duas ou mais composições diferentes compreendendo um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa à pele que precisa de clareamento de pele; preferivelmente em que as ditas duas ou mais composições diferentes compreendendo um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa são independentemente selecionadas do grupo que consiste em loções, cremes de limpeza, máscaras, essência, lenços, cremes, soros, e géis; mais preferivelmente em que uma das ditas duas ou mais composições diferentes é um creme de limpeza e a outra das ditas duas ou mais composições diferentes é uma loção ou um creme.
12. Composição para tratamento de pele, caracterizada pelo fato de que compreende um veículo cosmeticamente aceitável, um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa em uma quantidade eficaz para clarear a pele humana, e um segundo agente de clareamento da pele, em que o segundo agente de clareamento da pele é selecionado de: inibidores de tirosinase, agentes de degradação de melanina, agentes inibidores de transferência de melanossoma, incluindo antagonistas de PAR-2, esfoliantes, filtros solares, retinoides, antioxidantes, ácido tranexâmico, cloridrato de éster cetílico de ácido tranexâmico, agentes alvejantes da pele, ácido linoleico, sal dissódico de monofosfato de adenosina, extrato de camomila, alantoína, opacificantes, talcos e sílicas, sais de zinco, e similares; em que os inibidores da tirosinase adequados incluem, mas não se limitam a, vitamina C e seus derivados, vitamina E e seus derivados, ácido cójico, arbutina, resorcinóis, hidroquinona, flavonas como, por exemplo, flavonoides de alcaçuz, extrato de raiz de alcaçuz, extrato de raiz de amora, extrato de raiz de Dioscorea composita, extrato de Saxifraga e similares, ácido elágico, salicilatos e derivados, glicosamina e derivados, fulereno, hinokitiol, ácido dioico, acetil glicosamina, 5,5’-dipropil-bifenil-2,2’-diol (Magnolignan), 4-(4- hidroxifenil)-2-butanol (4-HPB), combinações de dois ou mais dos mesmos e similares; os exemplos de derivados de vitamina C incluem, mas não se limitam a, ácido ascórbico e sais, ácido ascórbico-2- glicosídeo, ascorbil fosfato de sódio, ascorbil fosfato de magnésio e extrato natural enriquecido em vitamina C; os exemplos de derivados de vitamina E incluem, mas não se limitam a, alfa-tocoferol, beta, tocoferol, gama-tocoferol, delta-tocoferol, alfa-tocotrienol, beta- tocotrienol, gama- tocotrienol, delta-tocotrienoler misturas dos mesmos, acetato de tocoferol, fosfato de tocoferol e extratos naturais enriquecidos em derivados de vitamina E; os exemplos de derivados de resorcinol incluem, mas não se limitam a, resorcinol, resorcinóis 4-substituídos como 4-alquil-resorcinóis, tais como 4-butirresorcinol, 4-hexilrresorcinol, feniletil-resorcinol, 1-(2,4-di-hidroxifenil)-3-(2,4-dimetóxi-3-metilfenil)- propano e similares e extratos naturais enriquecidos com resorcinóis; os exemplos de salicilatos incluem, mas não se limitam a, 4-metóxi salicilato de potássio, ácido salicílico, ácido acetilsalicílico, ácido 4- metóxi salicílico e seus sais; os exemplos de agentes degradantes de melanina adequados incluem, mas não se limitam a, peróxidos e enzimas como peroxidases e ligninases; os exemplos de agentes inibidores da transferência de melanossoma adequados incluem antagonistas de PAR-2, tais como inibidor de tripsina de soja ou inibidor de Bowman-Birk, vitamina B3 e derivados, como niacinamida, soja essencial, soja integral, extrato de soja; os exemplos de esfoliantes incluem, mas não se limitam a alfa-hidroxiácidos, como ácido láctico, ácido glicólico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico ou qualquer combinação de qualquer um dos anteriormente mencionados, beta-hidroxiácidos, como ácido lactobiônico e ácido glucônico, e esfoliação mecânica, como microdermoabrasão; os exemplos de protetores solares incluem, mas não se limitam a, avobenzona, bisdisulizol dissódico, dietilamino hidróxibenzoil hexil benzoato, ecamsule, antranilato de metila, ácido 4- aminobenzoico (PABA), cinoxato, etil-hexil triazona, homossalato, 4- metilbenzilideno cânfora, octil metóxicinamato, octil salicilato, padimato O, ácido sulfônico fenilbenzimidazólico, polissilicone-15, salicilato de trolamina, Bemotrizinol, benzofenonas 1-12, dioxibenzona, drometrizol trisiloxano, iscotrizinol, octocrileno, oxibenzona, sulisobenzona, bisoctrizol (Tinosorb M), dióxido de titânio, óxido de zinco e similares; os exemplos de retinoides incluem, mas não se limitam a, retinol (álcool de vitamina A), retinal (aldeído de vitamina A), acetato de retinila, proprionato de retinila, linoleato de retinila, ácido retinoico, palmitato de retinila, isotretinoina, tazaroteno, bexaroteno, adapaleno, combinações de dois ou mais dos mesmos e similares; os exemplos de antioxidantes incluem, mas não se limitam a, antioxidantes solúveis em água, como compostos de sulfidrila e seus derivados (por exemplo, metabissulfito sódico e N-acetil-cisteína, glutationa), ácido lipoico e ácido diidrolipoico, estilbenoides, como resveratrol e derivados, lactoferrina, quelantes de ferro e cobre e ácido ascórbico e derivados de ácido ascórbico (por exemplo, ascorbil-2- glicosídeo, ascorbil palmitato e ascorbil polipeptídeo), Antioxidantes solúveis em óleo incluem, mas não se limitam a hidroxitolueno butilado, retinoides (por exemplo, retinol e palmitato de retinila), tocoferois (por exemplo, acetato de tocoferol), tocotrienóis e ubiquinonas; Extratos naturais incluem, mas não se limitam a, extratos contendo flavonoides e isoflavonoides e seus derivados (por exemplo, genisteína e diadzeína), extratos contendo resveratrol e similares; Exemplos de tais extratos naturais incluem semente de uva, chá verde, chá preto, chá branco, casca de pinho, matricária, matricária livre de partenolida, extratos de aveia, extrato de amora preta, extrato de cotinus, extrato de soja, extrato de pomelo, extrato de germe de trigo, Hesperedina, extrato de uva, extrato de portulaca, Licocalcona, calcona, 2,2’-diidróxi calcona, extrato de Prímula, própolis e similares.
13. Composição para tratamento de pele, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que compreende de 0,0001% a 40% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa; preferivelmente em que compreende de 0,01% a 25% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa; ainda mais preferivelmente em que compreende de 0,1% a 10% em peso do extrato de cultura celular de Earliella scabrosa.
14. Composição para tratamento de pele, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de a composição para tratamento da pele estar em uma forma selecionada do grupo que consiste em uma solução, suspensão, loção, creme, soro, essência, toner, bastão, aspersão, pomada, líquido de lavagem, pasta, espuma, musse, pó, creme para barbear, lenço, emplastro, tira, hidrogel, produtos formadores de filme, máscaras faciais e máscara para a pele.
15. Composição para tratamento de pele, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o segundo agente de clareamento da pele é selecionado do grupo que consiste em inibidores da tirosinase, agentes de degradação da melanina, antagonistas de PAT-2, esfoliantes, filtros solares, retinoides, antioxidantes, ácido tranexâmico, cloridrato de éster cetílico de ácido tranexâmico, agentes clareadores da pele, ácido linoleico, sal dissódico de adenosina monofosfato, extrato camomila, alantoína, opacificantes, talcos, sílicas, sais de zinco e misturas dos mesmos.
16. Uso de um extrato de cultura celular de Earliella scabrosa, caracterizado pelo fato de ser para preparação de uma composição ou produto para clareamento da pele.
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