JP4223410B2 - 化粧料 - Google Patents
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Landscapes
- Cosmetics (AREA)
Description
ostreatus (Jacq.:Fr.)Kummer)、タモギタケ(Pleurotus cornucopiae (Paulet)Rolland
var. citrinopileatus(Sing.)Ohira)、トキイロヒラタケ(Pleurotus salmoneostramineus L. Vass.)、ウスヒラタケ(Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quel.)等が挙げられる。
Imai)、ハナガサタケ(Pholiota flammans (Fr.)Kummer)、スギタケ(Pholiota squarrosa (Mull Fr.)Kummer)、スギタケモドキ(Pholiota squarrosoides (Peck)Sacc.)、チャナメツムタケ(Pholiota lubrica (Pers. Fr.)Sing.)等が挙げられる。
edodes (Berk.) Sing.)、マツオウジ(Lentinus Fr. em Sing.)等が挙げられる。
auricula (Hook.)Underw.)、アラゲキクラゲ(Auricularia
polytricha (Mont.)Sacc.)、ヒダキクラゲAuricularia mesenterica (Dick.)Pers.)等が挙げられる。
nebularis (Batsch:Fr.)Kummer)、アオイヌシメジ(Clitocybe odora (Bull:Fr.)Kummer)、ホテイシメジ(Clitocybe clavipes (Pers:Fr.)Kummer)、カヤタケ(Clitocybe gibba (Pers:Fr.)Kummer)等が挙げられる。
本発明の化粧料における分解されたメラニンの配合量は、乾燥重量で0.001〜100.0重量%が配合可能であり、好ましくは0.01〜50.0重量%、更に好ましくは0.05〜20.0重量%、特に0.1〜10.0重量%の範囲が最適である。
精製水50mlにイカスミメラニン(グリコ栄養食品社製)500mgを分散させ、過酸化水素(30%溶液)1.15ml、FeCl2・4H2O(10mM)水溶液5mlを加え、37℃の水浴中で4時間反応させる。反応後、加熱により過酸化水素を分解させ、未反応のメラニンをろ過により除去し、分解されたメラニンを得た。
この分解されたメラニンを、「SPECTRAPOR membrane tubing 3」(SPECTRUM MEDICAL INDUSTRIES、INC)の透析チューブ(分子量3,500)を用い、5℃にて一昼夜透析を行い、3.5キロダルトン以下の分子量を持つ物質を除去した。さらに、Sephadex G−75(Pharmacia)をカラムに充填し、Blue Dextran 2000 をマーカーとして2,000キロダルトン以下の分子量を持つ物質を分画した。以上の方法で分画されたメラニン分解物は黄褐色〜褐色を呈し、PH2.0−11.0の範囲で溶解した。また、分光光度計での測定によりUV-B域に吸収を認めた。図1には上記反応時間が1時間のものを示した。反応時間が長くなると共に分解が進み、280−400nmの紫外部の吸収が大きくなり、UV−AおよびUV−B域の紫外線を吸収することがわかった。
担子菌としては、財団法人発酵研究所より購入したヒラタケ(IFO:No.30776)菌株を用いた。
培地は酵母エキス3.0g、ポリペプトン3.0g、麦芽エキス3.0g、サッカロース1.0gを精製水1Lに溶解した酵母培地を用いた。培養は、200mlの三角フラスコに培養液100mlを添加し、滅菌後、菌糸を植え付け、24℃、150rpmで10日間、回転培養を行った。培養液1000mlに硫酸アンモニウム580gを加え、溶解させる。4℃で1昼夜放置し、沈殿を生じさせる。3,000rpm、10分間遠心分離により、沈殿を回収し、乾燥して粗酵素粉末を得る。この粉末を精製水10mlに溶解し、酵素溶液とする。調製した酵素溶液10mlに、10mM FeCl2溶液、0.1g/mlイカスミメラニン(グリコ栄養食品社製)分散水溶液を表1に記載した量添加し、1Mコハク酸水溶液でPHを調製し、室温で3日間放置した。その後、8,000rpmで遠心分離を行い、上清を除去する。沈殿物に2N―NaOH 1mlを添加して、メラニンを溶解し分解されたメラニンを得た。さらに、分解されたメラニンは、実施例1の場合と同じようにして透析チューブ(分子量3,500)、およびSephadex G-75により処理を行い、分子量3.5〜2,000キロダルトンの分子量を持つ物質を分画した。得られた分解されたメラニンの量は、10倍希釈を行い400nmの吸光度を測定することにより求め、表1に示した。図2には実施例2−2の分解物の吸収チャートを示した。分解されたメラニンは、表1の実施例2−1、2−2、2−3、2−4に示したように、10mM FeCl2溶液の添加量が増加するとともに分解が進み、400nmの吸光度値が増加した。また系のPHが4.5と酸性側のほうが、PH6.2と比較して分解が進み、400nmの吸光度値が増加した。さらに、水溶液は黄褐色〜褐色を呈するとともに、PH2.0−11.0の広いPH域で溶解した。
イカスミメラニン(グリコ栄養食品社製)500mgをHorseradish製のパーオキシダーゼ(和光純薬工業)水溶液100unit/mlに分散させ、37℃にて2日間放置する。その後、8,000rpmで遠心分離を行い、上清を除去する。沈殿物に2N―NaOH 1mlを添加して、メラニンを溶解し分解されたメラニンを得た。この分解されたメラニンを、実施例 2で示した処理によって3.5〜2,000キロダルトンの分子量を持つ物質を分画した。この方法で分画されたメラニン分解物は黄褐色〜褐色を呈し、PH2.0−11.0の範囲で溶解し、分光光度計での測定によりUV-B域に吸収を認めた。酵素処理時間が長くなると共に分解が進み、280−400nmの紫外部の吸収が大きくなり、UV−AおよびUV−B域の紫外線を吸収することがわかった。紫外部の吸収は、図3に示した。
培養液は、牛胎児血清5.0%を加えたダルベッコMEM(D−MEM)培地を用いた。細胞は、マウスメラノーマB−16
F−10を直径12wellのシャーレに植え付けた。 植え付け量は4×103/cm2とした。植え付けの翌日、実施例1で調製した試料を表2の濃度になるよう添加を行い、添加後3日後に試験を終了した。
メラニン量の測定は培養後、細胞を2N−NaOHに溶解し400nmの吸光度を測定した。また、細胞増殖度は2N−NaOHに溶解した細胞溶解液の一部を Bio-Rad 社のプロテインアッセイキットにより600nmの吸光度で測定し、タンパク量に換算した。メラニン産生度は、単位タンパク量あたりのメラニン量の割合で計算した。また、美白効果の陽性対照物質としてβ-アルブチンを用いた。
β-アルブチンは細胞増殖に阻害がかからない濃度である50ppm添加により実験を実施した。β−アルブチン50ppm添加においては、細胞増殖度が103%で、メラニン産生度は81.9%であった。一方、実施例1に示した分解されたメラニンを1000ppm添加したものは細胞増殖度が102%を示し、メラニン産生度が83.5%であった。同じく500ppm添加したものは、細胞増殖度が105%を示し、メラニン産生度が90.4%であった。また、実施例2に示した分解されたメラニンを1000ppm添加したものは細胞増殖度が109%を示し、メラニン産生度が81.7%であった。同じく500ppm添加したものは、細胞増殖度が112%を示し、メラニン産生度が89.2%であった。さらに、実施例3に示した分解されたメラニンを1000ppm添加したものは細胞増殖度が101%を示し、メラニン産生度が84.7%であった。同じく500ppm添加したものは、細胞増殖度が103%を示し、メラニン産生度が88.3%であった。以上のように、実施例1、2、3に示した分解されたメラニンは1000ppmという高濃度を添加しても細胞増殖に阻害がかからず、かつメラニン産生を強く抑制することが判明した。
(1)化粧用クリーム(重量%)
a)ミツロウ・・・・・・2.0
b)ステアリルアルコール・・・・・・5.0
c)ステアリン酸 ・・・・・・8.0
d)スクワラン・・・・・・10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・・・・3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)・・・・・・1.0
g)分解されたメラニン・・・・・・0.5
h)1,3-ブチレングリコール・・・・・・5.0
i)水酸化カリウム・・・・・・0.3
j)防腐剤・酸化防止剤・・・・・・適量
k)精製水・・・・・・残部
製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜k)までを加熱溶解し、80℃に保ち、混合溶解したa)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
a)ミツロウ・・・・・・0.5
b)ワセリン・・・・・・2.0
c)スクワラン・・・・・・8.0
d)ソルビタンセスキオレエート・・・・・・0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)・・・・・・1.2
f)分解されたメラニン・・・・・・0.1
g)1,3-ブチレングリコール・・・・・・7.0
h)カルボキシビニルポリマー・・・・・・0.2
i)水酸化カリウム・・・・・・0.1
j)精製水・・・・・・残部
k)防腐剤・酸化防止剤・・・・・・適量
l)エタノール・・・・・・7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜k)までを加熱溶解し、80℃に保ち、混合溶解したa)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でl)を添加し、40℃まで攪拌、冷却する。
a)分解されたメラニン・・・・・・10.0
b)グリセリン・・・・・・5.0
c)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)・・・1.0
d)エタノール・・・・・・6.0
e)香料・・・・・・適量
f)防腐剤・酸化防止剤・・・・・・適量
g)精製水・・・・・・残部
製法 a)、b)、g)を均一に混合する。c)〜f)を均一に混合し、a)、b)、g)混合物に加える。
a)分解されたメラニン・・・・・・0.01
b)タルク・・・・・・残部
c)セルロース・・・・・・20.0
d)ミリスチン酸カリウム・・・・・・30.0
e)ラウリルリン酸ナトリウム・・・・・・10.0
f)香料・・・・・・適量
g)防腐剤・・・・・・適量
製法 a)〜g)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
被験者として、20〜50歳の女性15名に1日2回(朝、夜)連続2ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、試験品として処方例で示した乳液を用い、対照品には左記乳液から分解されたメラニンを除いた乳液を作成し、その使用による効果について調べた。 本発明の有効成分を配合した化粧料を毎日使用しながら肌のクスミおよび美白効果を塗布開始前及び2ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。 結果は表4に示す。表中の数字は、人数を示している。表4からも明らかなように、試験品では、くすみが全く無くなった人が1名、くすみが無くなった人が6名いたのに対し、対照品では0名であった。対照品では変わらないが12名であったことから、明らかに分解されたメラニンを配合してなる試験品には高いくすみ改善効果が認められた。
Claims (1)
- 活性酸素又はパーオキシダーゼにより分解された不溶性メラニンの分解産物を有効成分とするメラニン産生抑制剤。
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